CN103602608B - 短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 - Google Patents
短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103602608B CN103602608B CN201310333935.7A CN201310333935A CN103602608B CN 103602608 B CN103602608 B CN 103602608B CN 201310333935 A CN201310333935 A CN 201310333935A CN 103602608 B CN103602608 B CN 103602608B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bacillus pumilus
- prawn
- preparation
- bacillus
- cfu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000194103 Bacillus pumilus Species 0.000 title claims abstract description 125
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 title claims abstract description 49
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 26
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 10
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 3
- 241000607598 Vibrio Species 0.000 abstract description 40
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 abstract description 27
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 abstract description 19
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 abstract description 17
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 239000007952 growth promoter Substances 0.000 abstract 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 abstract 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 abstract 1
- 239000002344 surface layer Substances 0.000 abstract 1
- 206010047400 Vibrio infections Diseases 0.000 description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 16
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 15
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 13
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 241000238553 Litopenaeus vannamei Species 0.000 description 11
- 101150044726 pyrE gene Proteins 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 8
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 8
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 8
- 101150040872 aroE gene Proteins 0.000 description 7
- 101150013736 gyrB gene Proteins 0.000 description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 7
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 6
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 6
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 6
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 description 6
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000219095 Vitis Species 0.000 description 6
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 description 6
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 description 6
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 description 6
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 6
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 6
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 6
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 6
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 6
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 5
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 5
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 5
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 5
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 5
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 5
- 238000004809 thin layer chromatography Methods 0.000 description 5
- 241001451492 Bacillus pumilus ATCC 7061 Species 0.000 description 4
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 4
- 108090001060 Lipase Proteins 0.000 description 4
- 102000004882 Lipase Human genes 0.000 description 4
- 239000004367 Lipase Substances 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 4
- 241000607618 Vibrio harveyi Species 0.000 description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 4
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 description 4
- 235000019421 lipase Nutrition 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 4
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 4
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 3
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 3
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 description 3
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 3
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 3
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 3
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 6-methoxy-1,2,3,4-tetrahydroquinoline Chemical compound N1CCCC2=CC(OC)=CC=C21 FRXSZNDVFUDTIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 101100163490 Alkalihalobacillus halodurans (strain ATCC BAA-125 / DSM 18197 / FERM 7344 / JCM 9153 / C-125) aroA1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 102000004400 Aminopeptidases Human genes 0.000 description 2
- 108090000915 Aminopeptidases Proteins 0.000 description 2
- 101000588395 Bacillus subtilis (strain 168) Beta-hexosaminidase Proteins 0.000 description 2
- 238000009631 Broth culture Methods 0.000 description 2
- 241000726221 Gemma Species 0.000 description 2
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- 102000002704 Leucyl aminopeptidase Human genes 0.000 description 2
- 108010004098 Leucyl aminopeptidase Proteins 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 241000607365 Vibrio natriegens Species 0.000 description 2
- 241000607272 Vibrio parahaemolyticus Species 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 229910021536 Zeolite Inorganic materials 0.000 description 2
- KIPLYOUQVMMOHB-MXWBXKMOSA-L [Ca++].CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O.CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O Chemical compound [Ca++].CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O.CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O KIPLYOUQVMMOHB-MXWBXKMOSA-L 0.000 description 2
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 description 2
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 description 2
- 102000019199 alpha-Mannosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010012864 alpha-Mannosidase Proteins 0.000 description 2
- 108010027597 alpha-chymotrypsin Proteins 0.000 description 2
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 2
- 101150037081 aroA gene Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 description 2
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 2
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N dioxosilane;oxo(oxoalumanyloxy)alumane Chemical compound O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O HNPSIPDUKPIQMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001952 enzyme assay Methods 0.000 description 2
- 230000001408 fungistatic effect Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 2
- 108010090785 inulinase Proteins 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 235000019626 lipase activity Nutrition 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 2
- 101150012629 parE gene Proteins 0.000 description 2
- 229940049547 paraxin Drugs 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 239000003206 sterilizing agent Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 229940063650 terramycin Drugs 0.000 description 2
- -1 trypsinase Proteins 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- 239000010457 zeolite Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000607528 Aeromonas hydrophila Species 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 239000005632 Capric acid (CAS 334-48-5) Substances 0.000 description 1
- 102100035882 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 206010013654 Drug abuse Diseases 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 101710089384 Extracellular protease Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 239000001828 Gelatine Substances 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000191938 Micrococcus luteus Species 0.000 description 1
- 206010027982 Morphoea Diseases 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000927735 Penaeus Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 241000544286 Vibrio anguillarum Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-KVTDHHQDSA-N aldehydo-D-mannose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 102000038379 digestive enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108091007734 digestive enzymes Proteins 0.000 description 1
- 210000002249 digestive system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003640 drug residue Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- PLHJDBGFXBMTGZ-WEVVVXLNSA-N furazolidone Chemical compound O1C([N+](=O)[O-])=CC=C1\C=N\N1C(=O)OCC1 PLHJDBGFXBMTGZ-WEVVVXLNSA-N 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004519 grease Substances 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000009654 indole test Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 206010025482 malaise Diseases 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000013081 phylogenetic analysis Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 238000012882 sequential analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 208000011117 substance-related disease Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用，涉及水产养殖。所述短小芽孢杆菌为Bacillus pumilus1A05490和Bacillus pumilus1A08151，分离自中国黄海表层沉积物和印度洋深海沉积物，可在制备短小芽孢杆菌制剂等中应用，所述短小芽孢杆菌制剂包括致病性弧菌抑菌制剂、对虾生长促进剂、对虾饲料添加剂、对虾养殖水质改良剂等中的一种。所制得的短小芽孢杆菌制剂包含的活菌数不低于1×109CFU/mL，最高可达到1×1010CFU/mL以上。所述短小芽孢杆菌制剂按对虾饲料重量的0.5%～5%添加，所述短小芽孢杆菌制剂在养殖水体中的接种浓度可为103～104cfu/mL。
Description
技术领域
本发明涉及水产养殖，尤其是涉及一种短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用。
背景技术
集约化、高密度水产养殖的迅猛发展，使养殖生态环境遭到严重破坏，水产养殖病害越来越复杂，发病率越来越高，危害越来越严重，抗生素饲料添加剂的使用量日益增加。2010年，全国水产养殖面积764万公顷，其中有24万公顷遭受病害，产量损失近30万吨。在95%养殖面积中，为了防止疾病发生，生产中盲目、大规模地投放各类抗生素，如氯霉素、土霉素、呋喃唑酮等。氯霉素直接加入水中，土霉素拌饲料投喂或直接泼洒养殖水体。2000年抗生素用量约为16200吨，约70%用于畜牧业和水产养殖业。由于药物滥用、药物残留和细菌耐药性等问题日趋严重，引发了人们对食品和环境安全的关注。寻找一种新型、安全、绿色的抗生素替代品成为当前水产研究的热点之一，其中益生菌因其具有抑菌、促生长、提高免疫等作用日益受到重视。微生态制剂是通过“以菌治菌”达到防治水产养殖动物病害的目地。一方面，通过有益微生物产生代谢产物和生理活性物质来抑制或者杀灭病原菌，同时在养殖水体和养殖动物肠道中与病原菌竞争营养，占据生态位，形成优势菌群，达到防治病害的目的。另一方面，有益微生物通过产生多种消化酶，帮助蛋白质、碳水化合物、脂肪的代谢，提高饲料的利用率和转化率，达到减少资源消耗和增产的目的。
中国专利CN101773672A公开一种防治对虾白斑病的口服生物制剂，该制剂的组分和重量含量为：1％～10％表达VP28的重组枯草芽孢杆菌和5％～50％壳聚糖，其余为作为载体的玉米淀粉。该制剂使用安全，且能有效防治对虾白斑综合症。中国专利CN102309527A公开一种防治南美白对虾死底症的药物，按重量%由以下成分混合制备而成：枯草芽孢杆菌粉20%～30%，反硝化菌粉10～20%，纳豆芽孢杆菌粉10%～20%，乳酸菌粉1%～5%，沸石粉10%～20%，淀粉5%～49%。制备步骤如下：按重量％称取下述各成分：枯草芽孢杆菌粉20%～30%，反硝化菌粉10%～20%，纳豆芽孢杆菌粉10%～20%，乳酸菌粉1%～5%，沸石粉10%～20%，淀粉5%～49%；然后进行混合，搅拌均匀，过20～80目筛，分装，500g/袋。中国专利CN102586144A公开一种短小芽孢杆菌、益生菌制剂及其制备方法和应用。该短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LV149于2011年11月23日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号：CCTCC NO：M2011411。该发明的短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LV149具有强的胞外蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性，对弧菌具有广泛的抑制性，且不具有溶血活性。以此菌作为发酵菌株，经固态发酵、干燥粉碎制得以短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)LV149作为活性成分的短小芽孢杆菌益生菌制剂，将其添加到对虾饲料中，饲喂对虾。
发明内容
本发明的目的在于提供一种短小芽孢杆菌。
本发明的另一目的在于提供一种短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用。
所述短小芽孢杆菌为Bacillus pumilus1A05490和Bacillus pumilus1A08151，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏地址：中国，武汉，武汉大学；保藏日期：2013年06月25日；保藏编号分别为：CCTCC NO：M2013288和CCTCC NO：M2013291。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A05490CCTCC NO：M2013288，是从中国黄海表层沉积物分离获得；短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A08151CCTCC NO：M2013291，是从印度洋深海沉积物分离获得。
短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A05490CCTCC NO：M2013288和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A08151CCTCC NO：M2013291具有下述特征：
1、形态特征：短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A05490CCTCC NO：M2013288和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A08151CCTCC NO：M2013291为杆状，大小为（1.5～1.7）μm×（2.5～3.0）μm，革兰氏阳性，能运动，有侧生鞭毛，产芽孢。在2216E固体培养基上28℃培养48h，菌落呈灰白色、表面干燥、扁平、边缘规则、不凸起、不透明，菌落直径大小约为2～3mm。
2、生理生化特征：菌株生长盐度范围为0～15%，18%以上不生长，最适范围为0～9%；生长pH范围为5～12，最适范围为6～8。氧化酶（+），接触酶（+），硝酸盐还原（-），吲哚试验（-），不能发酵D-葡萄糖产酸，明胶液化（+），尿素酶（-），β-葡萄糖苷酶（+），β-半乳糖苷酶（+），能利用D-葡萄糖、L-阿拉伯糖、D-甘露糖、D-甘露醇、N-乙酰-葡萄糖胺、苹果酸、柠檬酸，不能利用麦芽糖、癸酸、己二酸、苯乙酸。
API ZYM结果显示，菌株1A05490和1A08151具有碱性磷酸酶、酯酶、类脂酯酶、α-胰凝乳蛋白酶、酸性磷酸酶、β-葡(萄)糖苷酶，不具有脂肪酶、亮氨酸氨肽酶、缬氨酸氨肽酶、胰蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡(萄)糖苷酸酶、α-葡(萄)糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶等酶活性。
3、多基因序列分析：按照常规方法抽提短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A05490和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A08151的基因组DNA，并对16S rRNA、gyrB、aroE和pyrE基因序列进行测定，其中短小芽孢杆菌1A05490的16S rDNA和pyrE基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；短小芽孢杆菌1A08151的16S rDNA和pyrE基因序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。
经BLAST比对分析，短小芽孢杆菌1A05490和短小芽孢杆菌1A08151与Bacillus pumilusATCC7061(T)的16S rDNA序列同源性分别为99.67%和100%，与B.altitudini41KF2b(T)的16S rDNA序列同源性分别为99.93%和99.6%，与B.safensisFO-036b(T)的16S rDNA序列同源性分别为99.54%和99.87%。16S rDNA、gyrB、aroE和pyrE四个基因的MLSA（multilocussequence analysis）分析结果表明，1A05490与B.pumilus ATCC7061(T)、B.altitudini41KF2b(T)和B.safensisFO-036b(T)三株模式种的同源性分别为97.44%、93.06%和94.37%；1A08151与上述三株模式种的同源性分别为97.55%、92.93%和94.53%。
综合菌株的形态特征、生理生化特性以及16S rDNA、gyrB、aroE和pyrE基因的MLSA序列分析结果，本发明的菌株1A05490和1A08151鉴定为短小芽孢杆菌，具体为短小芽孢杆菌1A05490（CCTCC NO：M2013288）和短小芽孢杆菌1A08151（CCTCC NO：M2013291）。
所述短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A05490和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A08151能产生酯酶、蛋白酶和纤维素酶等，且具有较强的活性，对致病性弧菌有显著的抑菌效果，对对虾生长有明显的促进作用，因此短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A05490和短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)1A08151可在制备短小芽孢杆菌制剂等中应用，短小芽孢杆菌制剂包括致病性弧菌抑菌制剂、对虾生长促进剂、对虾饲料添加剂、对虾养殖水质改良剂等中的一种。
所述短小芽孢杆菌制剂的制备方法的具体步骤为：将短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）1A05490和短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）1A08151按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养，斜面和种子培养基为常规的营养琼脂培养基或肉汤培养基；发酵培养基配方（W/V）：豆饼粉3%，淀粉1.5%，玉米浆1%，葡萄糖0.5%，(NH4)2SO41%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%，NaH2PO40.5%,MgSO40.05%，MnSO40.05%。
所制得的短小芽孢杆菌制剂包含的活菌数不低于1×109CFU/mL，最高可达到1×1010CFU/mL以上。所述短小芽孢杆菌制剂按对虾饲料重量的0.5%～5%添加，所述短小芽孢杆菌制剂在养殖水体中的接种浓度可为103～104cfu/mL。
本发明的短小芽孢杆菌1A05490和1A08151对哈维氏弧菌SF1、坎贝氏弧菌VH1、鳗弧菌W1、副溶血弧菌1937、欧文氏弧菌VH2、需钠弧菌FS-1等对虾致病性弧菌具有广泛的抑制性。1A05490和1A08151发酵上清液用乙酸乙酯萃取，蒸发浓缩后，对粗提物进行薄层层析（TLC）检测，产物经茚三酮显色剂显色后呈紫红色，初步判定菌株产生的是脂肽类活性物质，该活性物质对致病性弧菌具有强的抑制性。
以短小芽孢杆菌1A05490或1A08151发酵液作为活菌制剂，泼洒到养殖水体/添加到饲料中饲喂对虾，可以起到抑制养殖水体中病原弧菌的繁殖，提高对虾消化道酶活，促进对虾生长，提高对虾抗病力，减少对虾病害发生，特别是对于对虾弧菌病害的防治和对虾产量的增加具有很好的效果。
本发明的短小芽孢杆菌1A05490和短小芽孢杆菌1A08151在提高对虾抗病力、促进对虾生长方面有显著效果。在用致病性坎贝氏弧菌VH1浸浴感染对虾的实验中发现，添加短小芽孢杆菌1A05490和1A08151的实验组对虾存活率显著高于对照组，分别提高了35%和30%。将短小芽孢杆菌1A05490和1A08151进行液体发酵，以107cfu/g（每克饲料的活菌含量）的浓度添加至饲料中投喂南美白对虾，同时以105cfu/mL（每毫升海水的活菌含量）的浓度泼洒至养殖水体中，结果发现，经过30天的饲养，投喂添加了短小芽孢杆菌益生菌1A05490和1A08151的饲料的实验组与不添加益生菌的对照组相比，对虾平均体重增长率分别提高了33.3%和25.4%，益生菌1A05490和1A08151实验组的对虾肠道胰蛋白酶和淀粉酶均显著高于对照组（P<0.05）。弧菌含量动态监测结果表明，1A05490和1A08151实验组的养殖海水中弧菌含量低于对照组；菌株1A05490和1A08151均能在养殖海水和对虾肠道中存活，养殖海水中检测到的活菌含量在104cfu/mL以上，对虾肠道中芽孢杆菌含量在104cfu/g以上。现场实验结果表明，短小芽孢杆菌1A05490和1A08151能将养殖水体亚硝酸盐和弧菌含量控制在较低水平。
附图说明
图1为短小芽孢杆菌1A05490的酶活性检测图。1、蛋白酶；2、酯酶；3、纤维素酶。
图2为短小芽孢杆菌1A05490和1A08151抑菌活性检测图。1、菌株1A05490；2、菌株1A08151（指示菌为坎贝氏弧菌VH1）。
图3为短小芽孢杆菌1A05490和1A08151的16S rDNA、gyrB、aroE和pyrE基因的MLSA分析。
图4为短小芽孢杆菌1A05490和1A08151发酵上清液对坎贝氏弧菌VH1生长的抑制。在图4中，标记◆为对照：VH1，■为处理：VH1+1A08151，▲为处理：VH1+1A05490。
图5为短小芽孢杆菌1A05490和1A08151抑菌活性物质TLC初步分析。
图6为实验室条件下养殖水体中弧菌含量的动态监测。在图6中，标记◆实验组：1A05490，■为实验组：1A08151，▲为对照组。
图7：现场实验中水体亚硝酸盐含量的动态监测。在图7中，标记◆1A05490，■为1A08151，▲为对照组。
图8：现场实验中水体弧菌含量的动态监测。在图8中，标记◆1A05490，■为1A08151，▲为对照组。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步的说明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下述的实施例中的方法，如无特别说明，均为常规方法。
实施例1短小芽孢杆菌的筛选和鉴定
1、酶活筛选：从中国海洋微生物菌种保藏管理中心（MCCC）选取299株芽孢杆菌，进行蛋白酶活性、淀粉酶活性、脂肪酶活性和纤维素酶活性检测。结果发现，具有蛋白酶、淀粉酶、油脂酶活性和纤维素酶活性的菌株分别有147株、130株、38株和58株。
2、抑菌活性筛选：采用琼脂平板扩散法对上述获得的具有较高产酶活性的芽孢杆菌进行抑菌活性筛选。所用培养基为海水216L培养基，指示菌为致病性哈维氏弧菌SF1和坎贝氏弧菌VH1。指示菌和受试菌分别在216L培养基中过夜培养，取适量指示菌用无菌生理盐水稀释至107cfu/ml,吸取100μL涂布216L平板，在平板上打孔，在孔中加入受试菌发酵液50ul，30℃培养24小时，观察结果，对抑菌圈进行测量。结果表明，299株细菌中有47株对哈维氏弧菌SF1有一定的抑制作用，有26株能抑制坎贝氏弧菌VH1。其中，5株芽孢杆菌对两株弧菌均有较强的抑制作用。进一步对这5株芽孢杆菌的抑菌谱进行测定，结果发现5株菌对不同病原菌均有不同程度的抑制作用。产酶和抑菌结果分别如表1和表2所示。
表15株短小芽孢杆菌的产酶活性
注：表格中数值代表培养72h后水解圈(mm)与菌落直径(mm)的比值，比值越大，酶活性越高。-，表示观察不到水解圈。
表25株短小芽孢杆菌的抑菌活性
注：1、哈维氏弧菌SF1；2、坎贝氏弧菌VH1；3、副溶血弧菌1937；4、欧文氏弧菌VH2；5、需钠弧菌FS-1；6、藤黄微球菌CGMCC1.2299；7、金黄色葡萄球菌FDA209；8、大肠杆菌CGMCC1.2389；9、白假丝酵母CGMCC2.2086；10、嗜水气单胞菌SHI。表格中数值代表抑菌圈直径（mm），数值越大，抑菌效果越强。-，表示观察不到抑菌圈
3、菌株的分子鉴定和生理生化特征
分子鉴定：按照常规方法抽提5株芽孢杆菌的基因组DNA，并对16S rRNA、gyrB、aroE和pyrE基因序列进行分子测定。经BLAST比对分析，5株菌与Bacillus pumilusATCC7061(T)、B.altitudini41KF2b(T)和B.safensisFO-036b(T)三株模式种的16S rDNA序列同源性最高，为99.54%～100%。结合16S rDNA、gyrB、aroE和pyrE四个基因进行MLSA（multilocus sequenceanalysis）分析，结果表明，5株菌与B.pumilus ATCC7061(T)、B.altitudini41KF2b(T)和B.safensisFO-036b(T)序列同源性分别为97.44%～97.55%、92.93%～93.06%、94.37%～94.53%。系统进化分析如图3所示。因此分子鉴定5株菌为短小芽孢杆菌。其中，菌株1A08151、1A08152、1A08153和1A08154四个基因序列一致，为同一株菌，因此选取1A08151和1A05490作为代表菌株。
短小芽孢杆菌1A05490和1A08151酶活性检测图和抑菌活性见图1和2。
形态特征：短小芽孢杆菌1A08151和1A05490均为杆状，大小为（1.5～1.7）μm×（2.5～3.0）μm，革兰氏阳性，能运动，产芽孢。在2216E固体培养基上28℃培养48h，菌落呈灰白色、表面干燥、扁平、边缘规则、不凸起、不透明，菌落直径大小约为2～3mm。
生理生化特征：短小芽孢杆菌1A05490和1A08151部分生理生化特性如表3所示。APIZYM结果显示，短小芽孢杆菌1A05490和1A08151具有碱性磷酸酶、酯酶、类脂酯酶、α-胰凝乳蛋白酶、酸性磷酸酶、β-葡(萄)糖苷酶，不具有脂肪酶、亮氨酸氨肽酶、缬氨酸氨肽酶、胰蛋白酶、α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、β-葡(萄)糖苷酸酶、α-葡(萄)糖苷酶、N-乙酰-葡萄糖胺酶、α-甘露糖苷酶、α-岩藻糖苷酶等酶活性。
表3短小芽孢杆菌1A05490和1A08151的生理生化特性
注：“+”，表示阳性反应或可利用；“-”，表示阴性反应或不可利用
综合菌株的形态特征、生理生化特性以及16S rDNA、gyrB、aroE和pyrE基因的MLSA多序列分析结果，本发明的菌株1A05490和1A08151鉴定为短小芽孢杆菌，保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号分别为CCTCC NO：M2013288和CCTCC NO：M2013291。短小芽孢杆菌1A05490的16S rDNA和pyrE基因序列如SEQ ID NO.1和SEQ IDNO.2；短小芽孢杆菌1A08151的16S rDNA和pyrE基因序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。
实施例2短小芽孢杆菌1A05490和1A08151发酵上清液对弧菌生长的抑制
将短小芽孢杆菌1A05490和1A08151以及指示菌坎贝氏VH1在216L液体培养基中28℃下培养24h。然后取1A05490和1A08151发酵液用0.22um滤膜过滤除菌，分别在4mL新鲜的216L培养基中加入1mL的短小芽孢杆菌1A05490和1A08151的过滤上清液，再在试管中接种50μl的指示菌VH1。同时接种指示菌VH1（50μl）至5mL216L液体培养基中作为对照。每组试验三个平行。分别在4，8，12，16，20，24h取样测定指示菌VH1的生长（以OD600表示）。实验结果如图4所示，添加1A08151和1A05490发酵上清液的指示菌VH1生长明显弱于对照组，说明1A08151和1A05490对弧菌VH1生长有抑制作用。
实施例3短小芽孢杆菌1A05490和1A08151对南美白对虾抗病性的生物测定
将短小芽孢杆菌1A05490和1A08151以及指示菌坎贝氏弧菌VH1在216L液体培养基中28℃下培养24h。取各菌发酵液5000rpm下离心5min，去掉上清液，收集菌体，制备成无菌生理盐水悬浮液，测定菌体量（OD600），按照实验用量加入养殖水体中。
实验在30L水族缸中开展，每个水族缸中放入10L新鲜海水和50尾南美白对虾幼苗PL-40（体重约为0.1g左右），保证足够充气。实验设置空白组（养殖水体中不加任何菌），对照组（养殖水体中接种106cfu/ml的坎贝氏弧菌VH1）和实验组（养殖水体中同时接种106cfu/ml等浓度的短小芽孢杆菌和坎贝氏弧菌VH1）。实验期间不换水，每日统计对虾死亡情况。结果如表4所示，经过7天的观察，结果表明，短小芽孢杆菌1A05490和1A08151能提高对虾存活率，保护对虾免于弧菌感染。
表4短小芽孢杆菌对坎贝氏弧菌VH1感染对虾的保护作用
实施例4短小芽孢杆菌1A05490和1A08151抑菌活性物质的初步分析
取短小芽孢杆菌1A05490和1A08151发酵上清液500mL，用乙酸乙酯萃取后，旋转蒸发浓缩，取粗提物进行薄层层析（TLC）检测，在硅胶板上点样，产物经茚三酮显色剂显色后呈紫红色，初步判定判定菌株1A05490和1A08151产生的是脂肽类活性物质（如图5）。该活性物质对致病性弧菌具有强的抑制作用。
实施例5短小芽孢杆菌1A05490和1A08151对南美白对虾生长的影响
短小芽孢杆菌的培养：将出发菌株短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus1A05490）保藏编号CCTCC NO：M2013288和短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus1A08151）保藏编号CCTCC NO：M2013291按斜面、液体种子、液体发酵的顺序培养，斜面和种子培养基为常规的营养琼脂培养基或肉汤培养基；发酵培养基配方（W/V）：豆饼粉3%，淀粉1.5%，玉米浆1%，葡萄糖0.5%，(NH4)2SO41%,NH4Cl0.1%,KH2PO40.05%，NaH2PO40.5%,MgSO40.05%，MnSO40.05%。将上述获得的短小芽孢杆菌发酵液5000rpm离心5min，收集菌体，制备成无菌生理盐水悬浮液，梯度稀释后取100ul涂布MA平板，28℃培养24小时，计算活菌数。
南美白对虾苗购买自厦门厦金龙育苗场，体长0.8cm左右，在实验室暂养至体长在4cm左右，体重在1.3g左右即转移至养殖池进行实验。养殖池体积为500L，有效水体为375L，每个养殖池放养对虾100尾。实验分为对照组和实验组，每组三个平行。实验组对虾每日投喂添加有短小芽孢杆菌制剂的对虾商品饲料（“福星”牌南美白对虾2号饲料），对照组仅投喂不加菌的上述对虾商品饲料；同时每7天往实验组水体中加入5×105cfu/mL浓度的短小芽孢杆菌。实验组对虾饲料制备方法：取上述短小芽孢杆菌生理盐水悬浮液，按一定比例加入饲料中，搅拌均匀，保证饲料中活菌浓度在1×107cfu/g。实验为期30天，每日换水20%。30天后统计对虾体重增长量，测定肠道蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶活性，检测水体和肠道芽孢杆菌数目、弧菌数目等。
表5短小芽孢杆菌1A05490和1A08151对南美白对虾生长的影响
注：*相对体重增长率=（最终体重-初始体重）/初始体重。
表6短小芽孢杆菌1A05490和1A08151对南美白对虾肠道消化酶活性的影响
由表5和表6可知，经过30天的实验结果表明，短小芽孢杆菌1A05490和短小芽孢杆菌1A08151能显著提高对虾的平均体重增长量，分别比对照组提高了33%和25.4%。另外，1A05490和1A08151益生菌处理组的对虾肠道胰蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶显著高于对照组（P<0.05）。此外，1A05490和1A08151实验组水体中芽孢杆菌含量在104cfu/mL以上，对虾肠道芽孢杆菌数在104cfu/g以上。水体弧菌含量动态监测结果表明（图6），实验组养殖水体中弧菌含量远低于对照组，说明短小芽孢杆菌1A05490和1A08151具有抑制水体弧菌繁殖的作用。综上，短小芽孢杆菌1A05490和1A08151具有促进对虾生长、抑制弧菌的作用。
实施例6短小芽孢杆菌1A05490和1A08151对南美白对虾养殖场水质的调控作用
短小芽孢杆菌1A05490和1A08151菌液的制备如实施例5所述。选择漳浦某南美白对虾养殖场作为试验场所，3口养殖池面积均在1亩左右，水深1.5m，每口池子养殖密度在30万尾左右。选择投苗40d～110d期间开展试验，实验设置对照组和试验组。试验池每5天往养殖水体中泼洒5L短小芽孢杆菌发酵液，对照池定期使用常规消毒剂消毒。实验期间定期测定水体弧菌含量和亚硝酸盐浓度。试验初期，水体亚硝酸盐浓度均维持在较低水平，随着养殖时间的延长，对照组亚硝酸盐浓度呈明显上升趋势，到110d时高达1ug/mL，而试验组1A05490和1A08151仍在0.2ug/mL左右（如图7）。水体弧菌含量动态监测结果表明，试验组1A05490和1A08151水体弧菌含量较对照组低，且弧菌含量维持较稳定，而对照组在用消毒剂反复多次消毒后才能将弧菌含量控制在一定水平（图8），说明菌株1A05490和1A08151在抑制弧菌方面可以达到和消毒剂相同的效果。
Claims (2)
1.短小芽孢杆菌，其特征在于为Bacillus pumilus 1A05490和Bacillus pumilus 1A08151，保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2013年06月25日；保藏编号分别为：CCTCC NO：M 2013288和CCTCC NO：M 2013291。
2.如权利要求1所述短小芽孢杆菌在制备短小芽孢杆菌制剂中应用，所述短小芽孢杆菌为Bacillus pumilus 1A05490和Bacillus pumilus 1A08151，所述短小芽孢杆菌制剂为对虾养殖水质改良剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310333935.7A CN103602608B (zh) | 2013-08-02 | 2013-08-02 | 短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310333935.7A CN103602608B (zh) | 2013-08-02 | 2013-08-02 | 短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103602608A CN103602608A (zh) | 2014-02-26 |
| CN103602608B true CN103602608B (zh) | 2015-07-01 |
Family
ID=50120878
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310333935.7A Active CN103602608B (zh) | 2013-08-02 | 2013-08-02 | 短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103602608B (zh) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104087529B (zh) * | 2014-06-29 | 2016-08-31 | 新疆农业科学院微生物应用研究所 | 短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）JY2及其应用 |
| CN104726359B (zh) * | 2014-08-26 | 2018-06-05 | 汕头大学 | 一株短小芽孢杆菌bp及其用途 |
| CN104388338B (zh) * | 2014-10-27 | 2015-06-24 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种复合菌制剂及其应用 |
| CN104431524A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-03-25 | 苏州埃瑞特生物技术有限公司 | 南美白对虾孵化专用保护液体制剂的研制 |
| CN104522359A (zh) * | 2014-12-10 | 2015-04-22 | 苏州埃瑞特生物技术有限公司 | 南美白对虾孵化专用营养液体制剂的制备方法 |
| CN105861389B (zh) * | 2016-05-30 | 2019-06-28 | 天津师范大学 | 用于提高水产动物生长性能的芽孢杆菌菌株及其筛选方法与应用 |
| CN108060096A (zh) * | 2017-12-12 | 2018-05-22 | 中国水产科学研究院黄海水产研究所 | 一种益生菌组合及其在凡纳滨对虾苗种培育中的应用 |
| CN108977387B (zh) * | 2018-08-08 | 2022-04-15 | 广东绿百多生物开发有限公司 | 一种用于发酵饲料的菌株 |
| CN113215043B (zh) * | 2021-05-12 | 2023-03-24 | 宁波浮田生物技术有限公司 | 短小芽孢杆菌及应用 |
| CN115927121A (zh) * | 2023-01-10 | 2023-04-07 | 西南民族大学 | 一株短小芽孢杆菌及其应用 |
| CN117305163A (zh) * | 2023-09-26 | 2023-12-29 | 中国科学院兰州化学物理研究所 | 具有植物生长调节活性的短小芽孢杆菌及其制备和应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101869118A (zh) * | 2009-04-21 | 2010-10-27 | 中国科学院微生物研究所 | 短小芽孢杆菌h2在预防和/或杀灭养殖水体弧菌中的应用 |
| CN102586144A (zh) * | 2012-02-09 | 2012-07-18 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种短小芽孢杆菌、益生菌制剂及其制备方法和应用 |
| CN102994417A (zh) * | 2012-10-17 | 2013-03-27 | 苏州市水生动物疫病预防控制中心 | 短小芽孢杆菌及其在防控水产霍乱弧菌中的应用 |
-
2013
- 2013-08-02 CN CN201310333935.7A patent/CN103602608B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101869118A (zh) * | 2009-04-21 | 2010-10-27 | 中国科学院微生物研究所 | 短小芽孢杆菌h2在预防和/或杀灭养殖水体弧菌中的应用 |
| CN102586144A (zh) * | 2012-02-09 | 2012-07-18 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种短小芽孢杆菌、益生菌制剂及其制备方法和应用 |
| CN102994417A (zh) * | 2012-10-17 | 2013-03-27 | 苏州市水生动物疫病预防控制中心 | 短小芽孢杆菌及其在防控水产霍乱弧菌中的应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103602608A (zh) | 2014-02-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103602608B (zh) | 短小芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 | |
| CN103387948B (zh) | 沙福芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 | |
| CN108865953B (zh) | 一株广谱抑制水产病原性弧菌的芽孢杆菌及其复合菌制剂 | |
| CN103497906B (zh) | 一种微生态制剂及其制备方法与应用 | |
| CN105238722B (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌菌株及其菌粉制剂的制备方法和应用 | |
| Zhou et al. | Role and functions of beneficial microorganisms in sustainable aquaculture | |
| CN102719383B (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其菌剂和应用 | |
| CN101333499B (zh) | 复合型活菌生物净水剂及其制备方法 | |
| CN110699300B (zh) | 一种具有水产病原菌拮抗特性的复合微生物底质改良剂的制备方法及其应用 | |
| CN103497907B (zh) | 高空芽孢杆菌在对虾养殖中的应用 | |
| CN111690558B (zh) | 一株枯草芽孢杆菌菌株及其在水产养殖中的应用 | |
| CN111671000B (zh) | 一种包含粪肠球菌的微生态复合预混合饲料及其在水产养殖中的应用 | |
| CN106754551A (zh) | 一种高菌量乳酸菌制剂及其制备方法与应用 | |
| CN106867933A (zh) | 对凡纳滨对虾养殖中水质净化的微生态制剂及制备与应用 | |
| CN106834174A (zh) | 对凡纳滨对虾养殖中抑制弧菌的微生态制剂及制备与应用 | |
| CN111676154B (zh) | 一株粪肠球菌及其在水质改良和水产养殖中的应用 | |
| CN105524855B (zh) | 一种具有水产病原菌拮抗特性的凝结芽孢杆菌及其应用 | |
| CN111172058B (zh) | 一株解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN102146347B (zh) | 一种不动杆菌及其复合菌剂的应用 | |
| CN108004182A (zh) | 一株副干酪乳杆菌及其在水产养殖中的应用 | |
| JP6129294B2 (ja) | 新たに分離したバチルス・リケニフォルミス及びこれを利用したプロバイオティクス | |
| CN113151035A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌、筛选方法、鉴定方法及应用 | |
| CN106591206A (zh) | 一株蜡样芽孢杆菌及其复合菌制剂和制备方法 | |
| CN106479915A (zh) | 一种卡拉白鱼养殖用复合微生态制剂的制备方法及其应用 | |
| Manam | Probiotics in aquatic ecosystem–a review |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant |