CN111575223B - 一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法 - Google Patents

一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，属于微生物技术领域。本发明提供了一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，此方法可显著降低鼠李糖乳杆菌表面物质的分泌量，进而降低鼠李糖乳杆菌培养液中鼠李糖乳杆菌菌体的收集难度；利用此方法将鼠李糖乳杆菌接种至成分包含阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和Tween‑80的培养基中进行培养获得的鼠李糖乳杆菌菌体表面的荚膜多糖分泌量仅有1.15×10‑12mg/CFU，表面蛋白的分泌量仅有1.90×10‑10mg/CFU。

Description

一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法
技术领域
本发明涉及一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，属于微生物技术领域。
背景技术
鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)多存在于人和动物的肠道内，属于乳杆菌属，鼠李糖亚种，是厌氧耐酸、不产芽孢的一种革兰氏阳性益生菌。鼠李糖乳杆菌不能利用乳糖，可发酵多种单糖，大多数菌株能产生少量的可溶性氨，但不产生吲哚和硫化氢。
鼠李糖乳杆菌在耐胃酸和胆汁方面的性能非常突出，可以活体进入人体肠道，而其他大部分益生菌种在进入肠道前就已经因胃酸和胆汁的作用而死亡。鼠李糖乳杆菌在人体肠道环境中定殖和繁殖后，可依附于宿主的肠上皮细胞，进而成为肠道粘膜的一层生物屏障，最终达到提升宿主肠道粘膜屏障能力。并且，鼠李糖乳杆菌能对宿主肠道内的微生态系群落结构和功能进行调节，并使之达到平衡状态，进而达到改善宿主肠道系统功能的目的。
除提升宿主肠道粘膜屏障能力以及到改善宿主肠道系统功能以外，鼠李糖乳杆菌还具有增强人体免疫、预防和治疗腹泻等功能。由于具有显著的益生功效，鼠李糖乳杆菌越来越成为人们研究、开发、生产的重点。
鼠李糖乳杆菌菌粉是市场上最常见的鼠李糖乳杆菌产品，其主要是通过将鼠李糖乳杆菌菌体进行干燥获得的。冷冻干燥是目前鼠李糖乳杆菌菌粉生产中最常用的干燥方法。虽然，冷冻干燥对鼠李糖乳杆菌的损伤较小，但是，由于冷冻干燥过程中，鼠李糖乳杆菌易发生低温胁迫、冻结应力损伤等导致的细胞膜通透性改变、蛋白质变性失活、pH动态平衡被破坏等状况，而这些状况都会导致鼠李糖乳杆菌的活性降低，因此，在冷冻干燥前，需要在鼠李糖乳杆菌菌体中加入特定的冻干保护剂，例如水苏糖、海藻糖、菊粉和/或低聚异麦芽糖等。
并且，由于鼠李糖乳杆菌在生长代谢过程中会产生表面物质(主要包括荚膜多糖及表面蛋白)，而表面物质的存在会降低鼠李糖乳杆菌菌体在冷冻干燥过程中的冻干存活率(具体可见参考文献：吴晟,崔树茂,毛丙永,唐鑫,赵建新,张灏,陈卫.鼠李糖乳杆菌的表面物质对其冻干存活率的影响[J/OL].食品与发酵工业:1-9)，并且，表面物质的存在会降低会单位质量鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌数，另外，表面物质含有多羟基结构，多羟基结构易与水分子结合，进而导致鼠李糖乳杆菌培养液中鼠李糖乳杆菌菌体收集难度增加，因此，在冷冻干燥前，也需要尽可能的降低鼠李糖乳杆菌的表面物质分泌量。
然而，现阶段并没有很好的降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，因此，急需找到一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法以提高鼠李糖乳杆菌菌体在冷冻干燥过程中的冻干存活率，提高单位质量鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌数，以及，降低鼠李糖乳杆菌培养液中鼠李糖乳杆菌菌体的收集难度。
发明内容
[技术问题]
本发明要解决的技术问题是提供一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法。
[技术方案]
为解决本发明的技术问题，本发明提供了一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，其特征在于，所述方法为将鼠李糖乳杆菌接种至培养基中进行培养；所述培养基的成分包含阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:1～4:5。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:5。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含10～40g/L阿拉伯糖、10～40g/L酵母浸粉、0.1～1g/L硫酸镁、0.1～0.5g/L硫酸锰和0.5～1g/L Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含20g/L阿拉伯糖、25g/L酵母浸粉、 0.58g/L硫酸镁、0.25g/L硫酸锰和1g/L Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为30～37℃、时间为8～12h、pH为5～6。
在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为37℃、时间为12h、pH为5。
本发明还提供了一种制备鼠李糖乳杆菌菌粉的方法，其特征在于，所述方法为将鼠李糖乳杆菌接种至培养基中进行培养，得到菌液；将菌液离心，收集菌体；将菌体进行干燥，得到鼠李糖乳杆菌菌粉；所述培养基的成分包含阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:1～4:5。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:5。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含10～40g/L阿拉伯糖、10～40g/L酵母浸粉、0.1～1g/L硫酸镁、0.1～0.5g/L硫酸锰和0.5～1g/L Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含20g/L阿拉伯糖、25g/L酵母浸粉、 0.58g/L硫酸镁、0.25g/L硫酸锰和1g/L Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为30～37℃、时间为8～12h、pH为5～6。
在本发明的一种实施方式中，所述培养的温度为37℃、时间为12h、pH为5。
在本发明的一种实施方式中，所述干燥为冷冻干燥。
在本发明的一种实施方式中，所述方法为将鼠李糖乳杆菌接种至培养基中进行培养，得到菌液；将菌液离心，收集菌体；将菌体重悬于冷冻保护剂中，得到重悬液；将重悬液进行冷冻干燥，得到鼠李糖乳杆菌菌粉。
在本发明的一种实施方式中，所述冷冻保护剂为水苏糖溶液。
在本发明的一种实施方式中，所述水苏糖溶液浓度为200g/L。
本发明还提供了一种培养基，所述培养基的成分包含阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:1～4:5。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的碳氮比为4:5。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含10～40g/L阿拉伯糖、10～40g/L酵母浸粉、0.1～1g/L硫酸镁、0.1～0.5g/L硫酸锰和0.5～1g/L Tween-80。
在本发明的一种实施方式中，所述培养基的成分包含20g/L阿拉伯糖、25g/L酵母浸粉、 0.58g/L硫酸镁、0.25g/L硫酸锰和1g/L Tween-80。
本发明还提供了上述降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法或上述制备鼠李糖乳杆菌菌粉的方法或上述培养基在制备鼠李糖乳杆菌菌粉中的应用。
[有益效果]
(1)本发明提供了一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，此方法可显著降低鼠李糖乳杆菌表面物质的分泌量，进而降低鼠李糖乳杆菌培养液中鼠李糖乳杆菌菌体的收集难度；利用此方法将鼠李糖乳杆菌接种至成分包含阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和 Tween-80的培养基中进行培养获得的鼠李糖乳杆菌菌体表面的荚膜多糖分泌量仅有 1.15×10-12mg/CFU，表面蛋白的分泌量仅有1.90×10-10mg/CFU。
(2)本发明提供了一种制备鼠李糖乳杆菌菌粉的方法，此方法为先将鼠李糖乳杆菌接种至成分包含阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和Tween-80的培养基中培养，得到鼠李糖乳杆菌菌体，然后将鼠李糖乳杆菌菌体在冻干保护剂的保护下进行冷冻干燥，得到鼠李糖乳杆菌菌粉；利用此方法制备得到的鼠李糖乳杆菌菌粉冻干存活率高且单位质量鼠李糖乳杆菌菌粉的活菌数高，其中，鼠李糖乳杆菌冻干存活率高达79.28％，单位质量鼠李糖乳杆菌活菌数高达3.8×1011CFU/g。
(3)本发明提供了一种培养基，此培养基可显著降低鼠李糖乳杆菌表面物质的分泌量，进而降低鼠李糖乳杆菌培养液中鼠李糖乳杆菌菌体的收集难度；将鼠李糖乳杆菌接种至此培养基中进行培养获得的鼠李糖乳杆菌菌体表面的荚膜多糖分泌量仅有1.15×10-12mg/CFU，表面蛋白的分泌量仅有1.90×10-10mg/CFU。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的阐述。
下述实施例中涉及的阿拉伯糖购自国药集团；下述实施例中涉及的酵母浸粉FM528购自安琪酵母股份有限公司；下述实施例中涉及的鼠李糖乳杆菌CCFM1060、鼠李糖乳杆菌 CCFM1064、鼠李糖乳杆菌CCFM1068、鼠李糖乳杆菌CCFM1070购自均购自广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号分别为GDMCC No.60705、GDMCC No.60708、GDMCC No.60718、GDMCC No.60744。
下述实施例中涉及的培养基如下：
MRS固体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温801mL/L、琼脂20g/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
MRS液体培养基：蛋白胨10g/L、牛肉膏10g/L、葡萄糖20g/L、乙酸钠2g/L、酵母粉5g/L、柠檬酸氢二铵2g/L、K2PO4·3H2O 2.6g/L、MgSO4·7H2O 0.1g/L、MnSO4 0.05g/L、吐温801mL/L、半胱氨酸氨酸盐0.5g/L。
下述实施例中涉及的检测方法如下：
鼠李糖乳杆菌活菌数的检测方法：采用国标《GB 4789.35-2016食品安全国家标准食品微生物学检测乳酸菌检测》。
鼠李糖乳杆菌菌体表面的表面蛋白含量的测定方法：采用凯氏定氮法测定，具体可见参考文献：林艺华.硫酸蒽酮法测定风柜斗草粗多糖含量[J].福建分析测试,2017,26(06): 52-55.。
鼠李糖乳杆菌菌体表面的荚膜多糖含量的测定方法：采用硫酸-蒽酮比色法进行测定，具体可见参考文献：丁立人.凯氏定氮仪测定饲料中粗蛋白含量误差因素分析[J].农业与技术, 2018,38(21):17-19.。
实施例1：鼠李糖乳杆菌菌粉的制备
具体步骤如下：
用接种环蘸取保菌管中的鼠李糖乳杆菌CCFM1060菌液在MRS固体培养基上划线，于 37℃恒温培养36h，得到单菌落；挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，37℃恒温培养12h，得到种子液；将种子液按2％(v/v)的接种量接种至培养基A中，37℃、pH为5的条件下分别恒温培养6h、9h、12h，得到培养液1～3；将培养液1～3离心，收集菌体1～3；
其中，培养基A的成分为：阿拉伯糖20g/L、酵母浸粉FM52825g/L、硫酸镁0.58g/L、硫酸锰0.25g/L和Tween-801g/L。
取部分菌体1～3并检测菌体1～3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表1)。
取1g菌体1～3分别重悬于1mL浓度为200g/L的水苏糖溶液中，得到重悬液1～3；将重悬液1～3冻干，得到鼠李糖乳杆菌菌粉1～3；
其中，冻干工艺：将重悬液1～3置于-50℃环境，维持4h；一次干燥，-30℃及200μbar，保持30h；二次干燥，25℃及0μbar，保持20h。
检测鼠李糖乳杆菌菌粉1～3中鼠李糖乳杆菌的活菌数，并且，计算鼠李糖乳杆菌菌粉1～3 中鼠李糖乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表2)；
其中，冻干存活率的计算公式为：
冻干存活率＝(冻干后活菌数/冻干前活菌数)×100％。
由表1～2可知，菌体1～3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量均较低，并且，鼠李糖乳杆菌菌粉1～3中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率均很高。
表1菌体1～3表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量
组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
菌体1 2.23×10<sup>-10</sup>mg/CFU 7.28×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体2 2.03×10<sup>-10</sup>mg/CFU 7.25×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体3 1.90×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.15×10<sup>-12</sup>mg/CFU
表2鼠李糖乳杆菌菌粉1～3中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率
组别 活菌数 冻干存活率
鼠李糖乳杆菌菌粉1 3.3×10<sup>11</sup>CFU/g 71.43±6.48％
鼠李糖乳杆菌菌粉2 3.5×10<sup>11</sup>CFU/g 78.04±5.32％
鼠李糖乳杆菌菌粉3 3.8×10<sup>11</sup>CFU/g 79.28±6.86％
实施例2：鼠李糖乳杆菌菌粉的制备
具体步骤如下：
在实施例1的基础上，将鼠李糖乳杆菌CCFM1060分别替换为鼠李糖乳杆菌CCFM1064、鼠李糖乳杆菌CCFM1068、鼠李糖乳杆菌CCFM1070，得到菌体4～12和鼠李糖乳杆菌菌粉 4～12。
检测菌体4～12表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表3)，检测鼠李糖乳杆菌菌粉4～12中鼠李糖乳杆菌的活菌数，并且，计算鼠李糖乳杆菌菌粉4～12中鼠李糖乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表4)。
由表3～4可知，培养9h及以上时，菌体4～12表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量均较低，并且，鼠李糖乳杆菌菌粉4～12中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率均很高。
表3菌体4～12表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量
组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
菌体4 2.90×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.11×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体5 2.11×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.45×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体6 1.38×10<sup>-10</sup>mg/CFU 2.06×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体7 4.58×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.84×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体8 3.95×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.95×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体9 2.35×10<sup>-10</sup>mg/CFU 2.07×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体10 4.18×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.11×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体11 4.25×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.48×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体12 2.54×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.96×10<sup>-12</sup>mg/CFU
表4鼠李糖乳杆菌菌粉4～12中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率
组别 活菌数 冻干存活率
鼠李糖乳杆菌菌粉4 1.8×10<sup>11</sup>CFU/g 21.72±8.24％
鼠李糖乳杆菌菌粉5 3.3×10<sup>11</sup>CFU/g 68.18±6.78％
鼠李糖乳杆菌菌粉6 3.8×10<sup>11</sup>CFU/g 88.14±4.32％
鼠李糖乳杆菌菌粉7 1.6×10<sup>11</sup>CFU/g 28.72±2.42％
鼠李糖乳杆菌菌粉8 2.9×10<sup>11</sup>CFU/g 58.14±6.51％
鼠李糖乳杆菌菌粉9 3.3×10<sup>11</sup>CFU/g 89.35±4.85％
鼠李糖乳杆菌菌粉10 1.6×10<sup>11</sup>CFU/g 31.35±2.58％
鼠李糖乳杆菌菌粉11 2.8×10<sup>11</sup>CFU/g 63.27±4.56％
鼠李糖乳杆菌菌粉12 3.8×10<sup>11</sup>CFU/g 83.94±3.22％
实施例3：鼠李糖乳杆菌菌粉的制备
具体步骤如下：
在实施例1的基础上，将培养基A中的碳源分别替换为葡萄糖、半乳糖、葡果糖或蔗糖，得到菌体13～16和鼠李糖乳杆菌菌粉13～16。
检测菌体13～16表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表5)，检测鼠李糖乳杆菌菌粉13～16中鼠李糖乳杆菌的活菌数，并且，计算鼠李糖乳杆菌菌粉13～16中鼠李糖乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表6)。
由表1～2和表5～6可知，碳源的选择对菌体表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量，以及，鼠李糖乳杆菌菌粉中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率很重要，使用实施例1中的阿拉伯糖效果最佳。
表5菌体13～16表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量
组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
菌体13 4.05×10<sup>-10</sup>mg/CFU 2.93×10<sup>-11</sup>mg/CFU
菌体14 3.92×10<sup>-10</sup>mg/CFU 3.51×10<sup>-11</sup>mg/CFU
菌体15 3.38×10<sup>-10</sup>mg/CFU 3.25×10<sup>-11</sup>mg/CFU
菌体16 3.25×10<sup>-10</sup>mg/CFU 2.35×10<sup>-11</sup>mg/CFU
表6鼠李糖乳杆菌菌粉13～16中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率
组别 活菌数 冻干存活率
鼠李糖乳杆菌菌粉13 1.8×10<sup>11</sup>CFU/g 51.35±6.74％
鼠李糖乳杆菌菌粉14 1.8×10<sup>11</sup>CFU/g 43.91±3.58％
鼠李糖乳杆菌菌粉15 1.9×10<sup>11</sup>CFU/g 46.57±9.12％
鼠李糖乳杆菌菌粉16 1.2×10<sup>11</sup>CFU/g 38.47±2.56％
实施例4：鼠李糖乳杆菌菌粉的制备
具体步骤如下：
在实施例1的基础上，将培养基A中的酵母浸粉FM528分别替换为牛肉膏(购自国药集团公司)、胰蛋白胨(购自OXOID公司)或大豆蛋白胨(购自安琪酵母有限公司)，得到菌体17～19和鼠李糖乳杆菌菌粉17～19。
检测菌体17～19表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表7)，检测鼠李糖乳杆菌菌粉17～19中鼠李糖乳杆菌的活菌数，并且，计算鼠李糖乳杆菌菌粉17～19中鼠李糖乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表8)。
由表1～2和表7～8可知，氮源的选择对菌体表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量，以及，鼠李糖乳杆菌菌粉中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率影响很大，使用实施例1中的酵母浸粉FM528效果最佳。
表7菌体17～19表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量
组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
菌体17 2.54×10<sup>-10</sup>mg/CFU 5.82×10<sup>-11</sup>mg/CFU
菌体18 3.98×10<sup>-10</sup>mg/CFU 8.93×10<sup>-11</sup>mg/CFU
菌体19 1.86×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.58×10<sup>-11</sup>mg/CFU
表8鼠李糖乳杆菌菌粉17～19中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率
组别 活菌数 冻干存活率
鼠李糖乳杆菌菌粉17 2.0×10<sup>11</sup>CFU/g 50.05±1.49％
鼠李糖乳杆菌菌粉18 1.5×10<sup>11</sup>CFU/g 35.25±2.35％
鼠李糖乳杆菌菌粉19 2.5×10<sup>11</sup>CFU/g 59.32±4.33％
实施例5：鼠李糖乳杆菌菌粉的制备
具体步骤如下：
在实施例1的基础上，将培养基A的碳氮比分别替换为4:1(阿拉伯糖100g/L、酵母浸粉FM52825g/L)、4:3(阿拉伯糖33.3g/L、酵母浸粉FM52825g/L)、4:5(阿拉伯糖20g/L、酵母浸粉FM52825g/L)，得到菌体20～22和鼠李糖乳杆菌菌粉20～22。
检测菌体20～22表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表9)，检测鼠李糖乳杆菌菌粉20～22中鼠李糖乳杆菌的活菌数，并且，计算鼠李糖乳杆菌菌粉20～22中鼠李糖乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表10)。
由表1～2和表9～10可知，碳氮比对菌体表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量，以及，鼠李糖乳杆菌菌粉中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率影响很大，使用实施例1中的碳氮比效果最佳。
表9菌体20～22表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量
组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
菌体20 3.83×10<sup>-10</sup>mg/CFU 9.28×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体21 2.03×10<sup>-10</sup>mg/CFU 4.25×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体22 1.90×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.15×10<sup>-12</sup>mg/CFU
表10鼠李糖乳杆菌菌粉20～22中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率
Figure RE-GDA0002547256670000081
Figure RE-GDA0002547256670000091
实施例6：鼠李糖乳杆菌菌粉的制备
具体步骤如下：
在实施例1的基础上，将在培养基A中培养的pH分别替换为6、6.5、7.5，得到菌体23～25 和鼠李糖乳杆菌菌粉23～25。
检测菌体23～25表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量(检测结果见表11)，检测鼠李糖乳杆菌菌粉23～25中鼠李糖乳杆菌的活菌数，并且，计算鼠李糖乳杆菌菌粉23～25中鼠李糖乳杆菌的冻干存活率(检测结果见表12)。
由表1～2和表11～12可知，pH对菌体表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量，以及，鼠李糖乳杆菌菌粉中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率影响很大，使用实施例1中的pH效果最佳。
表11菌体23～25表面的表面蛋白含量和荚膜多糖含量
组别 表面蛋白含量 荚膜多糖含量
菌体23 3.58×10<sup>-10</sup>mg/CFU 4.22×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体24 5.66×10<sup>-10</sup>mg/CFU 3.57×10<sup>-12</sup>mg/CFU
菌体25 7.38×10<sup>-10</sup>mg/CFU 1.35×10<sup>-11</sup>mg/CFU
表12鼠李糖乳杆菌菌粉23～25中鼠李糖乳杆菌的活菌数和冻干存活率
组别 活菌数 冻干存活率
鼠李糖乳杆菌菌粉23 1.8×10<sup>11</sup>CFU/g 50.11±2.12％
鼠李糖乳杆菌菌粉24 1.5×10<sup>11</sup>CFU/g 30.94±5.84％
鼠李糖乳杆菌菌粉25 1.2×10<sup>11</sup>CFU/g 20.17±8.25％
虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，其特征在于，所述方法为将鼠李糖乳杆菌接种至培养基中进行培养；所述培养基的成分包含阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和Tween-80。
2.如权利要求1所述的一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，其特征在于，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。
3.如权利要求1或2所述的一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，其特征在于，所述培养基的碳氮比为4:1~4:5。
4.如权利要求3所述的一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，其特征在于，所述培养基的成分包含10~40 g/L阿拉伯糖、10~40 g/L酵母浸粉、0.1~1 g/L硫酸镁、0.1~0.5g/L硫酸锰和0.5~1 g/L Tween-80。
5.如权利要求4所述的一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法，其特征在于，所述培养的温度为30~37℃、时间为8~12 h、pH为5~6。
6.一种制备鼠李糖乳杆菌菌粉的方法，其特征在于，所述方法为将鼠李糖乳杆菌接种至培养基中进行培养，得到菌液；将菌液离心，收集菌体；将菌体进行干燥，得到鼠李糖乳杆菌菌粉；所述培养基的成分为阿拉伯糖、酵母浸粉、硫酸镁、硫酸锰和Tween-80。
7.如权利要求6所述的一种制备鼠李糖乳杆菌菌粉的方法，其特征在于，所述酵母浸粉为酵母浸粉FM528。
8.如权利要求6或7所述的一种制备鼠李糖乳杆菌菌粉的方法，其特征在于，所述培养基的碳氮比为4:1~4:5。
9.一种培养基，其特征在于，所述培养基的成分为10~40 g/L阿拉伯糖、10~40 g/L酵母浸粉FM528、0.1~1 g/L硫酸镁、0.1~0.5 g/L硫酸锰和0.5~1 g/L Tween-80。
10.权利要求1-5任一所述的一种降低鼠李糖乳杆菌表面物质分泌量的方法或权利要求6-8任一所述的一种制备鼠李糖乳杆菌菌粉的方法或权利要求9所述的一种培养基在制备鼠李糖乳杆菌菌粉中的应用。
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