CN113005051A - 一种副干酪乳杆菌及其用途 - Google Patents

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班世栋
王晓丹
罗小叶
周鸿翔
邱树毅
李君怡
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/54—Acetic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/56—Lactic acid

Abstract

本发明公开了一种副干酪乳杆菌及其用途。此乳酸菌从贵州苗族白酸汤中分离获得，其特征在于：将菌落在MRS固体平板上，37℃，培养2 d，菌落直径2～3 mm，菌落圆形微凸，颜色乳白色，表面光滑，菌落边缘整齐，液体培养总酸产量可达到15g/L。

Description

一种副干酪乳杆菌及其用途
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体来说涉及一种副干酪乳杆菌FBKL1.3028，同时还涉及该副干酪乳杆菌FBKL1.3028在产酸中的用途。
背景技术
贵州酸汤，作为苗侗人民千百年来独有“酸食文化”的传统养生文化结晶，不仅富营养、低脂肪，具有调味、添色、增香、去腥膻、解油腻、开胃健脾、增进食欲等独特功能，而且因发酵作用形成多种生理活性物质，有抗疲劳、防衰老、调节人体肠道微生态平衡、预防消化道疾病等保健功效等。这些保健功效主要是来自酸汤发酵过程的益生菌代谢，其中乳杆菌为一类益生菌，特别是副干酪乳杆菌是白酸汤发酵过程的优势菌。
副干酪乳杆菌是革兰氏阳性菌，兼性厌氧，在发酵蔬菜、乳制品、人体肠道等都有发现。副干酪乳杆菌具有抵抗胃酸和胆盐的能力，能够顺利进入婴儿肠道，成为人体中的益生菌，具有降低人体胆固醇、脂肪能力，并有抗高血压和抗肿瘤的保健功效。此外，副干酪乳杆菌用于发酵乳制品，发现发酵产物中有细菌素，具有抗菌活性，可控制引起奶酪中引起变质微生物的生长，且在发酵过程中产乳酸、乙酸等有机酸，降低发酵环境的pH，抑制其它杂菌的生长，提升发酵产品的口感。本发明是从白酸汤中分离副干酪乳杆菌，检测产酸能力，应用到蔬菜、乳制品、酸汤、酵素等生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种产乳酸的副干酪乳杆菌FBKL1.3028。自然环境条件的适应范围广，对低温的耐受力强，容易培养和保存及工业化生产。
本发明的另一目的在于提供副干酪乳杆菌FBKL1.3028在产酸中的用途。
一种副干酪乳杆菌，其形态特征：该菌株在MRS固体培养基上，37℃培养2 d，菌落直径2～3 mm，菌落圆形微凸，颜色乳白色，质地呈奶油状，透明度低。
该菌种已于2020年5月29日保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCC NO: M2020156，名称为：副干酪乳杆菌FBKL1.3028（Lactobacillus paracasei FBKL1.3028）。
本发明的一种副干酪乳杆菌FBKL1.3028（Lactobacillus paracasei FBKL1.3028）的分离方法，包括以下步骤：
（一）对副干酪乳杆菌FBKL1.3028（Lactobacillus paracasei FBKL1.3028）的分离：
贵州某酸汤企业白酸汤，取白酸汤10 mL加入90ml无菌水中，震荡均匀，取1ml样品悬液进行10倍梯度稀释分别由10-4、10-5、10-6和10-7稀释度的样品悬液中各取100 μL涂布于MRS固体培养基，分别在好氧培养箱和厌氧培养箱37℃倒置培养2-7 d，挑取单菌落纯化，并进一步在MRS-Ca固体培养基上透明圈筛选，并在斜面培养基上保藏。
（二）培养：
副干酪乳杆菌FBKL1.3028（Lactobacillus paracasei FBKL1.3028）采用的培养基：
MRS固体培养基：蛋白胨 10.0g、牛肉浸取物 10.0g、酵母提取液 5.0g、葡萄糖20.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸二胺 2.0g、吐温-80 1.0g、磷酸氢二钾 0.4、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.29g、琼脂18g，水1000 mL, 搅拌均匀，115℃灭菌20min。
MRS-Ca固体培养基：蛋白胨 10.0g、牛肉浸取物 10.0g、酵母提取液 5.0g、葡萄糖20.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸二胺 2.0g、吐温-80 1.0g、磷酸氢二钾 0.4、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.29g、碳酸钙10.0g、琼脂18g，水1000 mL,搅拌均匀，115℃灭菌20min。
保藏培养基：
MRS固体培养基：蛋白胨 10.0g、牛肉浸取物 10.0g、酵母提取液 5.0g、葡萄糖20.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸二胺 2.0g、吐温-80 1.0g、磷酸氢二钾 0.4、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.29g、琼脂18g，水1000 mL, 搅拌均匀，115℃灭菌20min。
（三）菌种的保种和传代：
1、菌种保藏培养基：
MRS固体培养基：蛋白胨 10.0g、牛肉浸取物 10.0g、酵母提取液 5.0g、葡萄糖20.0g、乙酸钠 5.0g、柠檬酸二胺 2.0g、吐温-80 1.0g、磷酸氢二钾 0.4、硫酸镁0.58g、硫酸锰0.29g、琼脂18g，水1000 mL, 搅拌均匀，115℃灭菌20min；
2、保存方法有3种：
①传代培养细菌菌种保存法：将细菌接种于MRS固体培养基上，置温箱18-24h培养后，将棉塞换成橡胶塞用灭菌固体石蜡熔封，移至4℃冰箱保存；
②砂土管细菌菌种保存法：取清洁的海砂，用1mol/L的氢氧化钠溶液清洗，然后再用1mol/L的盐酸溶液清洗，在后用流水冲洗。分装试管，约2-3厘米深，干热灭菌，加入细菌培养液1mL左右与砂土混匀，置真空干燥管内干燥，待完全干燥后熔封保存；
③甘油保存法：将待保存的对数后期细菌悬液悬浮在25 %甘油中，-80℃保藏。
（四）菌种的生态特征：
该菌形成的菌落在MRS固体平板上，37℃，培养2 d，菌落直径2～3 mm，菌落圆形微凸，颜色乳白色，表面光滑，菌落边缘整齐；细胞呈短杆状，无芽孢，细胞宽0.7～1.2μm，长3.0～6.5μm。
（五）菌种的培养特性
（1）培养温度15℃～40℃，最适温度35℃～37℃；
（2）培养pH 5～8；最佳范围为6.6～7.2。
细胞为杆状，细胞宽0.7～1.2μm，长3.0～6.5μm。根据16S rDNA测序，并在NCBI数据库BLAST比对，鉴定该菌株为副干酪乳杆菌FBKL1.3028（Lactobacillus paracasei FBKL1.3028）。
本发明的一种副干酪乳杆菌在产酸中的用途。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本发明的副干酪乳杆菌FBKL1.3028对温度、pH等自然环境条件的适应范围广，对不良环境的耐受力强，容易培养和保存及工业化生产，生产成本低，不污染环境，不破坏生态平衡。
具体实施方式
一种副干酪乳杆菌FBKL1.3028（Lactobacillus paracasei FBKL1.3028）的分离方法，包括以下步骤：
取贵州某酸汤企业白酸汤10 mL加入90ml无菌水中，震荡均匀，取1ml样品悬液进行10倍梯度稀释分别由10-4、10-5、10-6和10-7稀释度的样品悬液中各取100 μL涂布于MRS固体培养基，分别在好氧培养箱和厌氧培养箱37℃倒置培养2-7 d，挑取单菌落纯化，并进一步在MRS-Ca固体培养基上透明圈筛选，并在斜面培养基上保藏。
该菌形成的菌落在MRS固体平板上，37℃，培养2d，菌落直径2～3 mm，菌落圆形微凸，颜色乳白色，表面光滑，菌落边缘整齐；细胞呈短杆状，细胞宽0.7～1.2μm，长3.0～6.5μm。
试验例：
产酸能力测定：将菌株在MRS固体培养基上，37℃培养活化3次，挑取单菌落接种到MRS液体培养基中，37℃条件下150rpm/min摇床培养，利用国标食品中总酸测定GB/T12456-2008检测培养过程中培养基中的酸度变化，总酸含量可达到15 g/L。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。

Claims (2)

1.一种副干酪乳杆菌FBKL1.3028（Lactobacillus paracasei FBKL1.3028），其特征在于菌落在MRS固体平板上，37℃，培养2 d，菌落直径2～3 mm，菌落圆形微凸，颜色乳白色，表面光滑，菌落边缘整齐，所述菌种已于2020年5月29日保藏在中国典型培养物保藏中心（地址：中国武汉武汉大学），保藏号：CCTCC NO: M2020156。
2.如权利要求1所述的副干酪乳杆菌在产酸中的应用。
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