CN111537642A - 利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法 - Google Patents

利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及α‑维生素E测定方法，旨在提供一种利用固相萃取‑液相色谱法测定饮料中α‑维生素E的方法。通过利用C18固相萃取小柱把饮料中的α‑维生素E醋酸酯等脂溶性成分选择性萃取保留，其他水溶性干扰基质则不被保留。再用甲醇洗脱后，浓缩富集，用高效液相色谱—紫外分光光度法对α‑维生素E醋酸酯进行分离、测定，外标法定量；最后根据α‑维生素E和α‑维生素E醋酸酯之间的比值关系，直接计算得到α‑维生素E的含量。本发明无须强碱溶液皂化、无须大量有毒有机溶剂萃取，操作简单、效率高、成本低、环境友好；无须将α‑维生素E醋酸酯转化为α‑维生素E，结果不受水解转化率的影响，目标物的回收率高、检测结果稳定。

Description

利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法
技术领域
本发明涉及α-维生素E测定方法，具体涉及利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法。
背景技术
α-维生素E(即α-生育酚)(分子式：C29H50O2；CAS号：59-02-9)是自然界中活性最高的维生素E形式，是人体不可或缺的营养物质，在人体生理功能上发挥极其重要的作用。α-维生素E是饮料常用的营养补充剂，但由于α-维生素E不稳定，饮料生产过程中通常添加α-维生素E醋酸酯(分子式：C31H52O3；CAS号：7695-91-2)进行替代。
关于饮料中α-维生素E的测定方法，根据国家标准GB 5009.82—2016《食品安全国家标准食品中维生素A、D、E的测定》，是通过强碱溶液皂化水解的方法对样品进行皂化将脂肪类物质转化为水溶性的脂肪酸盐物质，同时也将α-维生素E醋酸酯水解成α-维生素E，再采用石油醚等有机溶剂对α-维生素E进行萃取，浓缩后再采用色谱法对α-维生素E进行测定。
目前，文献中报道的有关α-维生素E的方法涉及的样品主要为婴幼儿配方食品、食用油等，前处理上一般也采用强碱溶液皂化的方法，对水解产生的α-维生素E采用石油醚等有机溶剂进行萃取、浓缩后再进行测定，而非直接提取添加的α-维生素E醋酸酯进行测定。
采用皂化法处理样品测定α-维生素E的方法，主要是基于两点考虑：(1)α-维生素E在紫外分光光度计上的响应比α-维生素E醋酸酯灵敏得多；(2)通过强碱溶液皂化可以将样品中的脂肪等有机干扰物转化为水溶性的脂肪酸，并采用液液萃取得以分离去除。
皂化法处理样品中α-维生素E的方法存在的主要不足是：(1)α-维生素E醋酸酯转化为α-维生素E的转化效率受反应条件影响较大，因此生成的α-维生素E的含量的重现性较不稳定，不利于产品质量控制；(2)前处理过程操作复杂，耗时长，需要大量的萃取用有机溶剂，对操作人员要求高，经济性较差且不够环保。
综上，对于饮料中α-维生素E醋酸酯直接测定需要解决的问题主要有以下两点：
(1)饮料基质十分复杂，含有大量的糖类、纤维素、有机酸、水溶性维生素、无机元素、蛋白质、脂肪等成分，还添加有大量稳定剂、乳化剂、增稠剂等食品添加剂，上述成分对α-维生素E醋酸酯的测定带来严重干扰，影响仪器的灵敏度和结果的稳定性。
(2)由于饮料中α-维生素E醋酸酯的含量比较低，且α-维生素E醋酸酯在紫外检测器上的响应远不如α-维生素E灵敏，客观上直接测定饮料中α-维生素E醋酸酯在技术上存在一定困难。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，克服现有技术中的不足，提供一种利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法。
为解决技术问题，本发明的解决方案是：
提供一种利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法，包括以下步骤：
(1)制备α-维生素E醋酸酯标准储备液，利用液相色谱-紫外分光光度仪测试以获取标准谱图和标准曲线；
(2)样品处理
(2.1)固相萃取小柱活化：
分别用3mL去离子水、3mL甲醇淋洗C18固相萃取小柱，待用；
(2.2)取5mL待检测饮料，加入活化好的固相萃取小柱中，自然流干；再加入3mL水淋洗柱子，重复2次，最后用洗耳球吹干柱子中的溶液；用10mL甲醇淋洗固相萃取小柱，用玻璃试管接取流出液，并用洗耳球挤干；
(2.3)将玻璃试管中溶液在50℃下用氮气吹干，最后用2mL甲醇溶解残渣，过尼龙有机滤膜后于进样瓶中，待测；
(2.4)利用液相色谱-紫外分光光度仪，在步骤(1)相同的液相色谱条件下将待检测试样上机测试，得到试样色谱图；
(3)计算α-维生素E的含量
在待检测试样中，α-维生素E的含量按式(1)计算：
Figure BDA0002500820790000021
式中：
X为样品中α-维生素E的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；c为由标准曲线和试样色谱图得到的试样溶液中α-维生素E醋酸酯的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；V为定容体积，单位为毫升(mL)；m为样品质量，单位为克(g)；
Figure BDA0002500820790000031
为α-维生素E和α-维生素E醋酸酯的换算系数。
本发明中，所述步骤(1)具体包括：
(1.1)制备α-维生素E醋酸酯标准储备液
准确称取α-维生素E醋酸酯0.010g，加入100mL容量瓶中；以甲醇定容、混匀，得到100mg/L的α-维生素E醋酸酯标准储备液；
(1.2)制备α-维生素E醋酸酯标准使用液
分别移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0mL的α-维生素E醋酸酯标准液，用甲醇定容于10mL容量瓶中，浓度分别为1、2、5、10、20、50mg/L，作为α-维生素E醋酸酯标准使用液；
(1.3)获取标准曲线
利用液相色谱-紫外分光光度仪，以α-维生素E醋酸酯标准使用液上机测试，得到标准色谱图，根据标准色谱图绘制标准曲线。
本发明中，在利用液相色谱-紫外分光光度仪测试时，液相色谱的条件为：
色谱柱：ODS C18柱，250mm×4.6mm，5μm；
流动相：甲醇；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；
检测器：二极管阵列检测器，检测波长284nm；
进样体积：20μL。
发明原理描述：
本发明利用C18固相萃取小柱把饮料中的α-维生素E醋酸酯等脂溶性成分选择性萃取保留，其他水溶性干扰基质则不被保留，使得目标物得以萃取富集、净化。再用甲醇洗脱后，浓缩富集，用高效液相色谱—紫外分光光度法在284nm下对α-维生素E醋酸酯进行分离、测定，外标法定量；最后根据α-维生素E和α-维生素E醋酸酯之间的比值关系，直接计算得到α-维生素E的含量。
目前常规的方法，因受样品中基质影响，以及α-维生素E醋酸酯紫外分光光度法直接测定灵敏度较低的情况，主要采用强碱溶液皂化处理饮料，将α-维生素E醋酸酯水解转化为α-维生素E后再进行测定，测定结果受基质及皂化水解反应过程影响明显，具有不稳定性。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明的工艺无须强碱溶液皂化、无须大量有毒有机溶剂萃取，操作简单、效率高、成本低、环境友好；
2、本发明无须将α-维生素E醋酸酯转化为α-维生素E，结果不受水解转化率的影响，目标物的回收率高、检测结果稳定。
附图说明
图1为α-维生素E醋酸酯的标准色谱图；
图2为样品的色谱图。
具体实施方式
下面结合具体示例，对本发明的技术方案进行描述。
1、试剂与材料：
甲醇(色谱纯)；α-维生素E醋酸酯标准品：纯度≥99％；均为市购商品。
2、α-维生素E醋酸酯标准储备液的制备：
准确称取α-维生素E醋酸酯0.010g(精确至0.0001)于100mL容量瓶中，甲醇定容，混匀。即得100mg/L的α-维生素E醋酸酯标准储备液。
3、α-维生素E醋酸酯标准使用液
分别移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0mLα-维生素E醋酸酯标准液，用甲醇定容于10mL容量瓶中，浓度分别为1、2、5、10、20、50mg/L，作为α-维生素E醋酸酯标准使用液。
4、在液相色谱-紫外分光光度仪上，使用α-维生素E醋酸酯标准使用液上机测试，得到标准色谱图(见图1)；根据标准色谱图绘制标准曲线。
液相色谱参考条件：
色谱柱：ODS C18柱，250mm×4.6mm,5μm。
流动相：甲醇；流速：1.0mL/min；柱温：35℃
检测器：二极管阵列检测器，检测波长：284nm
进样体积：20μL。
样品的色谱图见图2。
5、样品处理
固相萃取小柱活化：分别用3mL去离子水、3mL甲醇淋洗C18固相萃取小柱，待用。
取5mL饮料加入活化好的固相萃取小柱中，自然流干，再加入3mL水淋洗柱子，重复2次，最后用洗耳球吹干柱子中的溶液。再用10mL甲醇淋洗固相萃取小柱，用玻璃试管接取流出液，并用洗耳球挤干。
将接取的溶液在50℃下用氮气吹干，最后用2mL甲醇溶解残渣，过尼龙有机滤膜后于进样瓶中，待测。
6、在液相色谱-紫外分光光度仪上，在相同的液相色谱条件下使用待检测试样上机测试，得到试样色谱图。
7、结果计算
样品中α-维生素E的含量按式(1)计算：
Figure BDA0002500820790000051
式中：
X——样品中α-维生素E的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；
c——由标准曲线和试样色谱图得到试样溶液中α-维生素E醋酸酯的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；
V——定容体积，单位为毫升(mL)；
m——样品质量，单位为克(g)；
Figure BDA0002500820790000052
——为α-维生素E和α-维生素E醋酸酯的换算系数。
计算结果保留三位有效数字。
8、精密度
在重复性条件下，获得的α-维生素E的两次独立测试结果的绝对差值不大于其算术平均值的10％。
本发明，采用固相萃取技术，直接对果汁中的α-维生素E醋酸酯进行萃取富集、净化，浓缩后直接用液相色谱法对α-维生素E醋酸酯含量进行测定，再根据α-维生素E与α-维生素E醋酸酯之间分子量的比值直接计算得到α-维生素E的量，方法简单，快速高效，无须皂化及大量有机萃取溶剂，大大提高检测效率和结果的准确性，节约了成本，降低能耗，切实保护环境。

Claims (3)

1.一种利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)制备α-维生素E醋酸酯标准储备液，利用液相色谱-紫外分光光度仪测试以获取标准谱图和标准曲线；
(2)样品处理
(2.1)固相萃取小柱活化：
分别用3mL去离子水、3mL甲醇淋洗C18固相萃取小柱，待用；
(2.2)取5mL待检测饮料，加入活化好的固相萃取小柱中，自然流干；再加入3mL水淋洗柱子，重复2次，最后用洗耳球吹干柱子中的溶液；用10mL甲醇淋洗固相萃取小柱，用玻璃试管接取流出液，并用洗耳球挤干；
(2.3)将玻璃试管中溶液在50℃下用氮气吹干，最后用2mL甲醇溶解残渣，过尼龙有机滤膜后于进样瓶中，待测；
(2.4)利用液相色谱-紫外分光光度仪，在步骤(1)相同的液相色谱条件下将待检测试样上机测试，得到试样色谱图；
(3)计算α-维生素E的含量
在待检测试样中，α-维生素E的含量按式(1)计算：
Figure FDA0002500820780000011
式中：
X为样品中α-维生素E的含量，单位为毫克每千克(mg/kg)；c为由标准曲线和试样色谱图得到的试样溶液中α-维生素E醋酸酯的浓度，单位为毫克每升(mg/L)；V为定容体积，单位为毫升(mL)；m为样品质量，单位为克(g)；
Figure FDA0002500820780000012
为α-维生素E和α-维生素E醋酸酯的换算系数。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)具体包括：
(1.1)制备α-维生素E醋酸酯标准储备液
准确称取α-维生素E醋酸酯0.010g，加入100mL容量瓶中；以甲醇定容、混匀，得到100mg/L的α-维生素E醋酸酯标准储备液；
(1.2)制备α-维生素E醋酸酯标准使用液
分别移取0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0mL的α-维生素E醋酸酯标准液，用甲醇定容于10mL容量瓶中，浓度分别为1、2、5、10、20、50mg/L，作为α-维生素E醋酸酯标准使用液；
(1.3)获取标准曲线
利用液相色谱-紫外分光光度仪，以α-维生素E醋酸酯标准使用液上机测试，得到标准色谱图，根据标准色谱图绘制标准曲线。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在利用液相色谱-紫外分光光度仪测试时，液相色谱的条件为：
色谱柱：ODS C18柱，250mm×4.6mm，5μm；
流动相：甲醇；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；
检测器：二极管阵列检测器，检测波长284nm；
进样体积：20μL。
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