CN111533803B - 一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法 - Google Patents
一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111533803B CN111533803B CN201910953027.5A CN201910953027A CN111533803B CN 111533803 B CN111533803 B CN 111533803B CN 201910953027 A CN201910953027 A CN 201910953027A CN 111533803 B CN111533803 B CN 111533803B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- type3
- adenovirus type
- duck adenovirus
- muscovy duck
- yolk
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000272834 Cairina moschata Species 0.000 title claims abstract description 68
- 210000002969 egg yolk Anatomy 0.000 title claims abstract description 58
- 241000701109 Human adenovirus 2 Species 0.000 title claims abstract description 56
- 241000193096 Human adenovirus B3 Species 0.000 title claims abstract description 55
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 title claims abstract description 29
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 title claims abstract description 29
- 235000013345 egg yolk Nutrition 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 claims abstract description 31
- 241000272525 Anas platyrhynchos Species 0.000 claims abstract description 24
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 22
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims abstract description 15
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 11
- 230000020477 pH reduction Effects 0.000 claims abstract description 11
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims abstract description 10
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims abstract description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims description 22
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 15
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 13
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 12
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 12
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 11
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 9
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 7
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 6
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 229960002446 octanoic acid Drugs 0.000 claims description 5
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 5
- 230000000521 hyperimmunizing effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 4
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 4
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 4
- 238000005070 sampling Methods 0.000 claims description 4
- 206010049244 Ankyloglossia congenital Diseases 0.000 claims description 3
- 208000002979 Influenza in Birds Diseases 0.000 claims description 3
- 206010064097 avian influenza Diseases 0.000 claims description 3
- 238000010009 beating Methods 0.000 claims description 3
- 229960002233 benzalkonium bromide Drugs 0.000 claims description 3
- KHSLHYAUZSPBIU-UHFFFAOYSA-M benzododecinium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 KHSLHYAUZSPBIU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 210000001172 blastoderm Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000000861 blow drying Methods 0.000 claims description 3
- 210000003278 egg shell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 5,5-dimethyl-2,4-dioxo-1,3-oxazolidine-3-carboxamide Chemical compound CC1(C)OC(=O)N(C(N)=O)C1=O QCVGEOXPDFCNHA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 claims description 2
- 239000005635 Caprylic acid (CAS 124-07-2) Substances 0.000 claims description 2
- 206010028470 Mycoplasma infections Diseases 0.000 claims description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 2
- 238000007605 air drying Methods 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 claims description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims description 2
- 210000000969 egg white Anatomy 0.000 claims description 2
- 235000014103 egg white Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 claims 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 abstract description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 6
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 abstract description 2
- 230000029219 regulation of pH Effects 0.000 abstract 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 18
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 8
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 7
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 7
- 231100000319 bleeding Toxicity 0.000 description 7
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 4
- 241000701792 avian adenovirus Species 0.000 description 4
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 4
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 4
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 4
- 241000886675 Duck atadenovirus A Species 0.000 description 3
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 3
- 241000204022 Mycoplasma gallisepticum Species 0.000 description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 3
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 3
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 3
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 2
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 241000886677 Duck adenovirus 1 Species 0.000 description 2
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 241000272814 Anser sp. Species 0.000 description 1
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 description 1
- 241000701802 Aviadenovirus Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 241000701149 Human adenovirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000521257 Hydrops Species 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 206010052535 Small intestinal haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010041660 Splenomegaly Diseases 0.000 description 1
- 208000037386 Typhoid Diseases 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000001165 anti-coccidial effect Effects 0.000 description 1
- 229940124350 antibacterial drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000026555 breast adenosis Diseases 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000000645 desinfectant Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 208000026500 emaciation Diseases 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011841 epidemiological investigation Methods 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 244000144992 flock Species 0.000 description 1
- 210000000232 gallbladder Anatomy 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 238000012165 high-throughput sequencing Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000030175 lameness Diseases 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 1
- -1 ll Species 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011076 safety test Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 201000008297 typhoid fever Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/02—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from eggs
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法，其方法为：用鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗免疫健康产蛋鸡，当所产鸡蛋卵黄中番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价≥1:32时收集高免鸡蛋；从高免鸡蛋中分离卵黄并进行第一次灭活；将第一次灭活的卵黄液加入到酸化反应罐酸化提取，将酸化提取液离心分离后取上清液加入辛酸进行第二次灭活，之后经深滤后向过滤液中加入甲醛溶液进行第三次灭活；经浓度调节、pH调节和除菌过滤后制得番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体。利用该方法制备的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体免疫番鸭后，通过番鸭腺病毒2型和3型的攻毒试验，对雏鸭鸭腺病毒2型、3型均能有效较好的保护效果。
Description
技术领域
本发明涉及兽用生物制品技术领域，尤其涉及一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法。
背景技术
禽腺病毒(avian adenovirus)是家禽常见的传染病病原之一，可引起鸡、鸭、鹅等多种家禽或野禽的临床和病理症候群，包括心包积水、肝炎、再生障碍性贫血、出血、轻度呼吸道疾病等多种禽类的病症。
鸭(Anasplatyrhynchosdomestica)源腺病毒包括富AT腺病毒属的鸭源腺病毒A型(Duck atadenovirus A,DAdV-A)和禽腺病毒属的鸭源腺病毒B型(DAdV-B)。DAdV-A即鸭腺病毒1型(Duck adenovirus type 1，DAdV-1)，又称为产蛋下降综合征病毒(Egg dropsyndrome virus,EDSV)，与产蛋下降综合症相关，要引起蛋鸭产蛋量下降。DAdV-B又称为鸭腺病毒2型(DAdV-2)，1977年从法国番鸭爆发的大规模疾病中分离获得，2011年被命名，感染该病毒的番鸭(Cairnamoschata)主要临床表现为消瘦、跛行，直到2014年才利用高通量测序技术获得全基因组序列，随后ICTV将其科学命名为DAdV-B。
近年来，广东、福建、安徽、浙江等番鸭饲养区流行一种以肝脏肿大、表面出血以及颜色变淡为特征的新发疫病，俗称番鸭“白肝病”。经病原的分离鉴定及病毒人工感染试验，初步表明该病病原为DAdV-2和另一种新型番鸭腺病毒，有专家将这种新型腺病毒命名为鸭腺病毒3型(Duck adenovirus type3，DAdV-3)，但该命名尚未被国际病毒分类委员会(ICTV)接受。通过对该新型番鸭腺病毒的流行病学调查，发现该病在我国几乎在所有番鸭养殖区域都有流行，给番鸭养殖业造成较大的经济损失。目前，国内外尚无有效预防和治疗番鸭腺病毒2型和新型腺病的商品化疫苗(或抗体)，研制安全有效的疫苗和抗体迫在眉睫。
发明内容
针对上述问题，本发明的目的在于提供番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法，从而弥补现有技术的不足。
本发明技术方案如下：
一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，按以下步骤进行：
用预先制备的鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗免疫健康产蛋鸡，当所产鸡蛋卵黄中番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价≥1:32时收集高免鸡蛋；
从高免鸡蛋中分离卵黄并进行第一次灭活；
将第一次灭活的卵黄液加入到酸化反应罐进行酸化提取，将酸化提取液离心分离后取上清液加入辛酸进行第二次灭活，之后经深层过滤后向过滤液中加入甲醛溶液进行第三次灭活；
超滤膜过滤后加入吐温-80调节浓度，并调节pH值为6.5-7.0后进行除菌过滤，制得番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，所述鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗采用鸭腺病毒DAdV-2-GD株和鸭腺病毒DAdV-3-GDMM株作为灭活抗原制备得到，其中，鸭腺病毒DAdV-2-GD株和鸭腺病毒DAdV-3-GD MM株均属于腺病毒科(Adenoviridae)，禽腺病毒属(Aviadenovirus)，DAdV-2-GD株于2016年已保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：V201633，DAdV-3-GD MM株于2019年7月30日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：V201952。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，健康产蛋鸡日龄100-150日龄，其中无禽白血病和禽流感感染，鸡白痢和鸡支原体感染阳性率应≤0.1％。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，用预先制备的鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗免疫健康产蛋鸡具体步骤如下：
基础免疫：每只鸡胸部肌肉注射鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗0.5ml；
二次免疫：在基础免疫后14日进行第2次接种，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml；
三次免疫：在二次免疫后14日进行第3次接种，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml；
维持免疫：当卵黄中番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价1:64时，维持接种1次，每只鸡胸部肌肉注射疫苗1.0ml；
收蛋：三次强化免疫后10日，抽样取蛋，分离卵黄，提取抗体，番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价≥1:32时，收集高免鸡蛋。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，高免鸡蛋分离卵黄前需要进行蛋壳消毒，具体步骤如下：将高免鸡蛋浸入42℃的0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15min，随后鸡蛋浸入95℃以上的水浴中消毒5秒钟，取出后晾干或吹干备用。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，从高免鸡蛋中分离卵黄并进行第一次灭活具体为：
手工或机械打蛋，充分除去蛋清、胚盘和系带，收集卵黄，将卵黄液加入巴氏灭菌罐中，加入生理盐水搅拌混匀后，加热至65℃，保温灭活15min，灭活结束后，水浴冷却至30℃以下。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，将第一次灭活的卵黄液加入到酸化反应罐进行酸化提取具体为：于酸化反应罐中加入相当于原卵黄体积4倍的生理盐水，用1mol/L HCL溶液调节pH值至4.2，并将水温降至2-4℃，然后，将第一次灭活的卵黄液加入，边加边搅拌，4～8℃保温静置4小时。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，将酸化萃取液冷冻离心，去沉淀，取上清液并向其中加入辛酸至终浓度0.02％，搅拌混匀，室温静置4h，之后采用K型多层板框实现深层过滤澄清，按终浓度0.05％加入甲醛溶液，充分搅拌混匀，密封60min。
所述的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备方法，其中，用截留分子量为1000KD的超滤膜过滤，加入吐温-80至终浓度0.02％，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值6.8，再用0.22um微孔滤膜过滤，制得番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体。
一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体，其中，采用如上所述的方法制备而成。
有益效果
本发明提供一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法。本发明基于番鸭腺病毒2型、3型二联疫苗实现番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的制备，利用该方法制备的番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体免疫番鸭后，通过番鸭腺病毒2型和3型的攻毒试验证明，利用本发明方法制备的鸭腺病毒2型、3型二联抗体对雏鸭鸭腺病毒2型、3型均有较好的治疗效果
附图说明
图1为本发明实施例3中免疫攻毒法效力检验结果。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
除非另有定义，本说明书所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本说明书中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是用于限制本发明。本说明书所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。此外，下面所描述的本发明不同实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互结合。
下面结合实施例对本发明进行详细的描述。
实施例1
1高免鸡蛋的生产
1.1产蛋鸡应具有商品蛋鸡的生产性能。
1.1.1无禽白血病和禽流感感染按鸡群0.5％抽样采血，应全部为阴性。
1.1.2鸡白痢和鸡支原体按NY/T536-2002《鸡伤寒和鸡白痢诊断技术》和NY/T553-2002《禽支原体病诊断技术》进行检测，鸡白痢和鸡支原体感染阳性率应≤0.1％。
1.1.3产蛋鸡的饲养管理鸡场建设必须符合兽医卫生防疫规范要求。鸡场应离交通要道500米以上，进、出口道路应分开。场内料、粪道路分开。鸡场进出口应设有消毒池。育雏舍与成鸡舍应设隔离带。此外，鸡场应具备粪污处理设施，实施全进全出制，鸡场饮水应达到卫生标准，饲养人员应卫生健康。
1.1.4鸡的疫病防治根据当地疫病发生的实际情况，按科学免疫程序适时接种相关疫苗，根据情况需要，按常规在饲料中添加抗菌药物防治细菌感染及添加抗球虫药预防球虫感染等。
1.1.5鸡的日龄100～150日龄。
1.2番鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗免疫
基础免疫每只鸡胸部肌肉注射疫苗0.5ml；
二次免疫在基础免疫后14日进行第2次接种，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml；
三次免疫在二次免疫后14日进行第3次接种，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml；
维持免疫：当卵黄中番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价均达到1:64时，维持接种1次，每只鸡胸部肌肉注射疫苗1.0ml。
收蛋三次强化免疫后10日，抽样取蛋，分离卵黄，提取抗体，番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价≥1:32为合格，收集高免鸡蛋，4～8℃贮存，应不超过10日。
实施例2：番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体制备
2.1蛋壳消毒
将高免蛋浸入42℃的0.1％新洁尔灭水溶液中消毒15分钟，蛋壳污染严重的，事先选出，单独消毒并用清水冲洗干净后，再浸泡消毒一次。随后，鸡蛋浸入95℃以上的水浴中消毒5秒钟，取出后晾干或吹干备用。
2.2分离蛋黄手工或机械打蛋，充分除去蛋清(白)、胚盘和系带，收集蛋黄。
2.3灭活I
将蛋黄液加入巴氏灭菌罐中，加入适量的注射用水，搅拌混匀后，加热至65℃，保温灭活15分钟，灭活结束后，水浴冷却至30℃以下。
2.4酸化提取
于酸化反应罐中加入相当于原蛋黄体积4倍的注射用水，用1mol/L HCL溶液调节pH值至4.2，并将水温降至2～4℃，然后，将灭活I的蛋黄液加入，边加边搅拌，4～8℃保温静置4小时。
2.5离心分离将酸化萃取液冷冻离心，去沉淀，取上清液备用。
2.6灭活II加入辛酸至终浓度0.02％，搅拌混匀，室温放置4小时。
2.7深滤用K型多层板框过滤澄清。
2.8灭活III按终浓度0.05％加入甲醛溶液，充分搅拌混匀，密封60分钟。
2.9超滤除病毒用截留分子量为1000KD的超滤膜过滤除病毒。
2.10调配总混加入吐温-80至终浓度0.02％，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值6.8。
2.11除菌过滤将调配合格的抗体用0.22um微孔滤膜进行过滤除菌，无菌分装，100ml/瓶，即为新型番鸭腺病毒精致卵黄抗体。
实施例3：抗体检验
3.1纯净性按照现行《中华人民共和国兽药典》进行检测，无细菌、支原体和外源病毒污染。
3.2辛酸及甲醛残留分别按照现行《中华人民共和国兽药典》进行检测，结果符合规定。
3.3安全性检验5日龄健康雏番鸭10只，每只皮下注射1.0ml，观察14日，全部健活。
3.4效力检验
3.4.1抗体琼扩效价检测按照现行《中华人民共和国兽药典》进行检测抗体琼扩抗体效价，记录抗体结果。
3.4.2免疫攻毒法用1～3日龄雏番鸭40只，随机分成5组，每组10只，1组和3组为接种抗体组，每只皮下注射抗体1.0ml，2组和4组为生理盐水免疫DAdV-2-GD和DAdV-3-GD MM攻毒对照组，5组为为生理盐水免疫对照组，每只皮下注射生理盐水1.0ml，接种抗体后24小时进行攻毒，1组和2组每只番鸭肌肉注射DAdV-2-GD株0.5ml/只，3组和4组每只番鸭肌肉注射DAdV-3-GD MM株0.5ml/只，连续观察10日，比较每组雏番鸭发病死亡情况。
如图1所示，3批番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价均不低于1:32，1日龄雏番鸭接种抗体后，3批抗体接种组攻毒后，1组和3组抗体免疫组均能提供9/10以上的保护，而2组DAdV-2-GD攻毒对照组雏番鸭全部发病，3批攻毒试验每次鸭子死亡3-5只，死亡番鸭以及攻毒后10天存活番鸭剖检均可见肝脏肿大、有出血点或出血斑、肝脏颜色变浅，部分黄染，脾脏肿大出血，肾脏充血肿大。4组DAdV-3-GD MM攻毒对照组雏番鸭全部发病，3批攻毒试验每次鸭子死亡8-10只，死亡番鸭以及攻毒后10天存活番鸭剖检均可见肝脏肿大，有不同程度的出血点或出血斑，十二指肠出血，脾脏肿大出血，胆囊肿大，肾脏充血肿大等典型病变。
综上，本发明制备的鸭腺病毒2型、3型二联抗体免疫番鸭后，通过番鸭腺病毒2型和3型的攻毒试验证明，利用本发明方法制备的鸭腺病毒2型、3型二联抗体对雏鸭鸭腺病毒2型、3型均有较好的治疗效果。
可以理解的是，对本领域普通技术人员来说，可以根据本发明的技术方案及本发明构思加以等同替换或改变，而所有这些改变或替换都应属于本发明所附的权利要求的保护范围。
Claims (1)
1.一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体，其特征在于，所述番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体由鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗免疫蛋鸡并分离提取免疫鸡蛋中的卵黄抗体制备获得，所述鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗采用鸭腺病毒DAdV-2-GD株和鸭腺病毒DAdV-3-GD MM株作为灭活抗原制备得到，其中，DAdV-2-GD株于2016年保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：V201633，DAdV-3-GD MM株于2019年7月30日保藏在武汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：V201952，所述番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体的具体制备方法为：
（1）高免鸡蛋的生产，选用健康产蛋鸡日龄 100-150日龄，其中无禽白血病和禽流感感染，鸡白痢和鸡支原体感染阳性率应≤0.1％；
（2）番鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗免疫，疫苗具体免疫方法如下，
基础免疫：每只鸡胸部肌肉注射鸭腺病毒2型、3型二联灭活疫苗0.5ml；
二次免疫：在基础免疫后14日进行第2次接种，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml；
三次免疫：在二次免疫后14日进行第3次接种，每只鸡胸部肌肉注射1.0ml；
维持免疫：当卵黄中番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价1:64时，维持接种1次，每只鸡胸部肌肉注射疫苗1.0ml；
收蛋：三次强化免疫后10日，抽样取蛋，分离卵黄，提取抗体，番鸭腺病毒2型、3型琼扩抗体效价≥1:32时，收集高免鸡蛋；
（3）蛋壳消毒，将高免鸡蛋浸入42℃的0.1%新洁尔灭水溶液中消毒15 min，随后鸡蛋浸入95℃以上的水浴中消毒5秒钟，取出后晾干或吹干备用；
（4）蛋黄分离并进行第一次消毒，从高免鸡蛋中分离卵黄，手工或机械打蛋，充分除去蛋清、胚盘和系带，收集卵黄，将卵黄液加入巴氏灭菌罐中，加入生理盐水搅拌混匀后，加热至65℃，保温灭活15min，灭活结束后，水浴冷却至30℃以下；
（5）酸化提取，于酸化反应罐中加入相当于原卵黄体积4倍的生理盐水，用1mol/L HCL溶液调节pH值至4.2，并将水温降至2-4℃，然后，将第一次灭活的卵黄液加入，边加边搅拌，4~8℃保温静置4小时；
（6）将酸化萃取液冷冻离心，去沉淀，取上清液并向其中加入辛酸至终浓度0.02%，搅拌混匀，室温静置4h进行第二次灭活，之后采用K型多层板框实现深层过滤澄清，按终浓度0.05%加入甲醛溶液，充分搅拌混匀，密封60 min进行第三次灭活；
（7）用截留分子量为1000KD的超滤膜过滤，加入吐温-80至终浓度0.02%，用1mol/L氢氧化钠溶液调节pH值6.5-7.0，再用0.22um微孔滤膜过滤，制得番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910953027.5A CN111533803B (zh) | 2019-09-30 | 2019-09-30 | 一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910953027.5A CN111533803B (zh) | 2019-09-30 | 2019-09-30 | 一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111533803A CN111533803A (zh) | 2020-08-14 |
| CN111533803B true CN111533803B (zh) | 2021-09-28 |
Family
ID=71951985
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910953027.5A Active CN111533803B (zh) | 2019-09-30 | 2019-09-30 | 一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111533803B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113278595B (zh) * | 2021-04-28 | 2023-05-09 | 重庆永健生物技术有限责任公司 | 一种鸭腺病毒3型菌株、鸭腺病毒卵黄抗体及其制备方法和应用 |
| CN113198011B (zh) * | 2021-04-28 | 2023-05-09 | 重庆永健生物技术有限责任公司 | 一种鸭腺病毒3型菌株灭活疫苗及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4550019A (en) * | 1978-03-22 | 1985-10-29 | South Africa Inventions Development Corporation | Manufacture and use of fowl egg antibodies |
| CN107365382A (zh) * | 2017-07-26 | 2017-11-21 | 山东信得科技股份有限公司 | 一种鸭2型腺病毒病的卵黄抗体及制备方法 |
| CN110117576A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-08-13 | 广东迈科特生物科技有限公司 | 一种鸭腺病毒3型病毒株及其卵黄抗体制备和应用 |
-
2019
- 2019-09-30 CN CN201910953027.5A patent/CN111533803B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4550019A (en) * | 1978-03-22 | 1985-10-29 | South Africa Inventions Development Corporation | Manufacture and use of fowl egg antibodies |
| CN107365382A (zh) * | 2017-07-26 | 2017-11-21 | 山东信得科技股份有限公司 | 一种鸭2型腺病毒病的卵黄抗体及制备方法 |
| CN110117576A (zh) * | 2019-04-23 | 2019-08-13 | 广东迈科特生物科技有限公司 | 一种鸭腺病毒3型病毒株及其卵黄抗体制备和应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111533803A (zh) | 2020-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111905100B (zh) | 一种鹅星状病毒二价灭活疫苗和卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN110251671B (zh) | 鹅星状病毒卵黄抗原抗体复合物制备方法 | |
| CN108558995B (zh) | 一种防治新型鹅星状病毒的卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN105950564B (zh) | 番鸭肝炎病毒及应用该病毒制备番鸭肝炎病毒精制卵黄抗体的方法 | |
| CN109265540B (zh) | 一种鹅星状病毒卵黄抗体的制备及其应用 | |
| CN111533803B (zh) | 一种番鸭腺病毒2型、3型精制卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN104922663A (zh) | 一种鸡新城疫和h9亚型禽流感二联疫苗 | |
| CN108912227B (zh) | 一种抗鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法和应用 | |
| CN108794627A (zh) | 一种鸭呼肠孤病毒精制卵黄抗体的制备方法 | |
| CN105949307B (zh) | 一种用于防治番鸭源小鹅瘟的卵黄抗体 | |
| CN111420042A (zh) | 一种鸭圆环病毒和腺病毒二联灭活疫苗及其卵黄抗体的制备方法 | |
| CN104922665A (zh) | 一种鸡新城疫、传染性支气管炎和h9亚型禽流感三联灭活疫苗 | |
| CN105031638A (zh) | 一种鸡新城疫、禽流感和传染性法氏囊三联灭活疫苗 | |
| CN110628726B (zh) | 一种番鸭新型腺病毒株、二价灭活疫苗及其制备方法 | |
| CN103495167B (zh) | 一种鸡传染性法氏囊病复合活疫苗的制备方法 | |
| CN110590941B (zh) | 一种新型番鸭腺病毒精制卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN108676092B (zh) | 一种防治新型鸭呼肠孤病毒的卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN106563125B (zh) | 鸭甲肝病毒ⅲ型复合物活疫苗及其制备方法 | |
| CN102743751A (zh) | 一种鸡新城疫、传染性法氏囊病二联高免卵黄抗体冻干粉的制备方法 | |
| CN112341539B (zh) | 防治具有跨种传播能力的新型鹅星状病毒的卵黄抗体及其制备方法 | |
| CN109097340A (zh) | 一种禽腺病毒、一种四联疫苗及其制备方法 | |
| CN107365382B (zh) | 一种鸭2型腺病毒病的卵黄抗体及制备方法 | |
| CN109207436A (zh) | 一株i群4型禽腺病毒毒株及其应用 | |
| CN108939063B (zh) | 一种番鸭三联灭活疫苗 | |
| CN112552398B (zh) | 一种鸭病毒性肝炎卵黄抗体及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: The invention relates to a Muscovy Duck adenovirus type 2 and 3 refined egg yolk antibody and a preparation method thereof Effective date of registration: 20211222 Granted publication date: 20210928 Pledgee: Shandong Zhucheng rural commercial bank Limited by Share Ltd. Pledgor: SHANDONG SINDER TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2021980015708 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Date of cancellation: 20221223 Granted publication date: 20210928 Pledgee: Shandong Zhucheng rural commercial bank Limited by Share Ltd. Pledgor: SHANDONG SINDER TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2021980015708 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: A Refined Egg Yolk Antibody Against Muscovy Duck Adenovirus Type 2 and 3 and Its Preparation Method Effective date of registration: 20230608 Granted publication date: 20210928 Pledgee: Shandong Zhucheng rural commercial bank Limited by Share Ltd. Pledgor: SHANDONG SINDER TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023980043376 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Granted publication date: 20210928 Pledgee: Shandong Zhucheng rural commercial bank Limited by Share Ltd. Pledgor: SHANDONG SINDER TECHNOLOGY Co.,Ltd. Registration number: Y2023980043376 |