CN111437299A - 绞股蓝植物提取物溶液及其在制备促进毛发生长药物中的应用 - Google Patents

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刘小锦
王本阳
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    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
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    • A61K36/424—Gynostemma
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
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    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia

Abstract

本发明涉及毛发生长药物制备技术领域，尤其涉及绞股蓝植物提取物溶液及其在制备促进毛发生长药物中的应用。本发明选用绞股蓝植物提取物应用于生发研究，具体的可促进人真皮乳头细胞的增殖，可增加毛囊细胞个数，增大毛囊生长长度，增加毛发生长长度，即绞股蓝植物提取物表现出了显著的生发效果。

Description

绞股蓝植物提取物溶液及其在制备促进毛发生长药物中的 应用
技术领域
本发明涉及毛发生长药物制备技术领域，尤其涉及绞股蓝植物提取物溶液及其在制备促进毛发生长药物中的应用。
背景技术
人的头发在社交中起着重要作用，脱发不仅影响个人形象，对生活、工作也有诸多阻碍。在巨大的需求之下，国内外科学家做了很多工作来研究脱发机理以及解决方案。
目前，FDA仅批准两种化学合成药物用于治疗雄激素性脱发，口服非那雄胺和局部用米诺地尔。但是这两种药物的副作用也非常明显，非那雄胺在男性胎儿中具有潜在的外生殖器畸形的风险，因此在生育或孕妇中禁用。米诺地尔的作用则是暂时的，已经报道了几种不良反应，例如瘙痒、皮炎及具有刺激性。
绞股蓝为葫芦科、绞股蓝属，草质攀援植物，茎细弱，具分枝，具纵棱及槽，无毛或疏被短柔毛。绞股蓝主要有效成份是绞股蓝皂甙、绞股蓝糖甙(多糖)、水溶性氨基酸、黄酮类、多种维生素、微量元素、矿物质等。本种入药，有消炎解毒、止咳祛痰的功效，可治疗高血压、高血脂、高血糖、脂肪肝等症。有保肝解毒、降血压、降血脂血糖的功效。
近年来，许多防脱发或者促进头发生长的草本外用产品在全球销售，相比较单一生化作用模式的治疗方式，这些天然药物有很多优势，包括适应性强、副作用少、易于获得、低成本等。但是植物提取物用于脱发治疗的效果依然不尽如人意，且缺乏新意。
发明内容
本发明的目的在于提供绞股蓝植物提取物在制备促进头发生长药物中的应用，本发明选用绞股蓝植物提取物应用于生发研究，发现绞股蓝植物提取物各个浓度均表现出显著的生发效果。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种绞股蓝植物提取物溶液在制备促进毛发生长药物中的应用。
作为优选，应用方法为：将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成绞股蓝植物提取物溶液后，即可应用于促进毛发生长。
作为优选，所述绞股蓝植物提取物溶液的浓度为50mg/ml～800mg/ml。
作为优选，所述毛发包含头发。
本发明还提供了一种所述应用中用到的绞股蓝植物提取物溶液。
本发明的有益效果是：本发明选用绞股蓝植物提取物应用于生发研究，具体的可促进人真皮乳头细胞的增殖，可增加毛囊细胞个数，增大毛囊生长长度，增加毛发生长长度，即绞股蓝植物提取物表现出了显著的生发效果。
具体实施方式
本发明提供了一种绞股蓝植物提取物溶液在制备促进毛发生长药物中的应用。
在本发明中，应用方法优选为：将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成绞股蓝植物提取物溶液后，即可应用于促进毛发生长。
在本发明中，绞股蓝植物提取物购自陕西百草萃生物科技有限公司，吐温80购自南通奥诺化工有限公司。
在本发明中，所述绞股蓝植物提取物溶液的浓度优选为50mg/ml～800mg/ml，进一步优选为100mg/ml～400mg/ml，更进一步优选为200mg/ml～300mg/ml。
在本发明中，所述毛发包含头发。
本发明还提供了一种所述应用中用到的绞股蓝植物提取物溶液。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成浓度为50mg/ml的绞股蓝植物提取物溶液，即可应用于促进毛发生长。
实施例2
将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成浓度为100mg/ml的绞股蓝植物提取物溶液，即可应用于促进毛发生长。
实施例3
将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成浓度为200mg/ml的绞股蓝植物提取物溶液，即可应用于促进毛发生长。
实施例4
将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成浓度为400mg/ml的绞股蓝植物提取物溶液，即可应用于促进毛发生长。
实施例5
将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成浓度为800mg/ml的绞股蓝植物提取物溶液，即可应用于促进毛发生长。
实验例1
MTT法测定人真皮乳头细胞DPC的增殖：
人真皮乳头细胞是毛囊生长调节的重要细胞，它存在于毛囊的基底部位，调控毛囊的生长、循环，指导毛基质细胞分化形成毛干，决定毛发的直径。因此人真皮乳头细胞成为体外筛选脱发药物的首选细胞。考察药物对细胞生长的影响采用MTT法，采用比色法检测细胞的生长。细胞增殖通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)(Sigma,St.Louis,MO,USA)测定。
在96孔微孔板里，每个孔接种5×103个人真皮乳头细胞(购自美国CellApplications)孵育24h，将细胞与100μL无血清Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM，Sigma)一起培养24h；然后分别加入实施例1～3的绞股蓝植物提取物溶液和2％米诺地尔(溶于DMEM培养基)，无血清DMEM培养基和聚乙二醇辛基苯基醚(Sigma，圣路易斯，密苏里州，美国)培养基分别用作阴性(NC)和空白对照，将10μM米诺地尔用作体外阳性对照(PC)；处理24h后，向每个孔中加入10μLCCK-8溶液，然后将细胞在37℃下孵育3h。用微孔板分光光度计(EpochMulti-VolumeVolumeSpectrophotometer System,Epoch,VT,USA)在450nm(测试波长)和650nm(参考波长)处测量吸光度，测得的吸光度用于通过以下方程式确定细胞增殖：
Cellproliferation(％)＝
[(ABSsample-ABSblank)450nm-(ABSsample-ABSblank)650nm]/
[(ABScontrol-ABSblank)450nm-(ABScontrol-ABSblank)650nm]
表1不同药物处理时的人真皮乳头细胞增殖率
组别 实施例1 实施例2 实施例3 阳性对照 阴性对照
DPC增殖率 110.4 120.2 125.8 127.3 100
其中的阳性对照为2％米诺地尔(溶于DMEM培养基)，阴性对照为无血清DMEM培养基。
由表1可知，各个浓度的绞股蓝植物提取物均显示了高于阴性对照的增殖率，且绞股蓝植物提取物为200mg/ml时与阳性对照效果相当，优于绞股蓝植物提取物50mg/ml和100mg/ml的处理。
实验例2
毛囊细胞个数的测定：
将固定好的皮肤按照石蜡切片的制作技术进行包埋、切片，切片厚度为7μm，均为背部横切。切片经脱蜡、复水和苏木素-伊红染色后镜检，选4×镜下的5个不同的视野进行观察，分别统计毛囊总数，计算出相应平均数。实验数据采用Excel软件进行整理，运用SPSS17.0软件进行统计分析。
表2各处理对小鼠的毛囊总数的影响
组别 毛囊数目
实施例1 317.08±23.49
实施例2 331.16±22.56*
实施例3 355.03±21.01*
阴性对照 310.51±24.68
阳性对照 342.40±22.79**
注：与空白组比较，*表示差异显著(P<0.05)，**表示差异极显著(P<0.01)。
由表2可知，毛囊个数按大小排序依次是：绞股蓝植物提取物(200mg/ml)>阳性对照(2％米诺地尔)>绞股蓝植物提取物(100mg/ml)>绞股蓝植物提取物(50mg/ml)>阴性对照(无血清DMEM培养基)。
实验例3
毛囊生长长度的测定：Williams'E培养基(华美公司)，Hepes(Sigma公司)。
毛囊培养基由Williams'E培养基(含L-型谷酰胺2mmol/L)加入胰岛素120u/L、氢化可的松0.4ug/ml、Hepes20mmol/L、青霉素100u/ml、链霉素100u/ml构成。
将毛囊分离后选取完整无损的生长期毛囊进行培养。通过倒置显微镜观察，可发现培养第2日大部分毛囊开始生长，以后逐日增长，表现为毛干、内外根鞘的延长。各组毛囊在第1～4日平均增长速度较快，第6～8日增长速度开始减慢，至第8日阴性对照组毛囊基本停止生长，而绞股蓝植物提取物组和阳性对照组毛囊的生长维持至第10日以后。各组毛囊生长长度见表3：
表3各组毛囊第2、4、6、8、10日平均生长长度
Figure BDA0002519389160000051
实验例4
对毛发生长影响的定性记录和对小鼠毛发长度的影响：
(1)实验动物
健康六周大的C57BL/6小鼠(体重18～20g)购自安徽师范大学实验动物中心(中国芜湖)。将动物圈养在聚丙烯笼中，并保持在标准条件下(光照/黑暗周期12h，23.2℃和35～60％的湿度)，所有动物自由进食。
在6个随机组(n＝10)中的60只动物用于这项研究。在毛发静止期阶段，将小鼠的背部区域毛发(宽度约2cm，长度约3cm)在施用药物前24h剃掉。第1、第2、第3和第4组的动物分别接受不同处理。第5组中的动物用作阴性物对照(85％的酒精)，第6组中的动物接受2％的米诺地尔作为阳性对照组。每天一次以100ml的剂量将药物局部应用到测试区域，持续21天。分离动物一个小时，然后放回各自的笼子中。在施用期间，未观察到治疗组和非治疗组之间小鼠的平均体重或异常方面的差异。
(2)测定毛发的长度
从第12天开始，所有组的整个裸露区域都被绒毛覆盖，通过照片不能明显观察到毛发生长情况。因此，我们确定了新毛的长度和重量以评估生长状态。在开始治疗后的第12、16和21天，从所有小鼠的相同剃毛区域中选择毛发。研究人员选择了最长的10根毛发来测量和计算平均长度。结果显示为平均长度。
表4对毛发生长影响的定性记录
Figure BDA0002519389160000061
记录每组小鼠不同时期的毛发生长，结果显示为平均值S.D。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，通过Student’st-test学生t检验(n＝10)与相应的对照值进行比较。
表5对毛发长度生长的影响
Figure BDA0002519389160000062
从12天到21天，测量小鼠毛发的长度，结果显示为平均值S.D。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，通过学生t检验(n＝10)与相应的对照值进行比较。
由以上实施例可知，本发明提供了绞股蓝植物提取物溶液及其在制备促进毛发生长药物中的应用。本发明选用绞股蓝植物提取物应用于生发研究，具体的可促进人真皮乳头细胞的增殖，可增加毛囊细胞个数，增大毛囊生长长度，增加毛发生长长度，即绞股蓝植物提取物表现出了显著的生发效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种绞股蓝植物提取物溶液在制备促进毛发生长药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，应用方法为：将绞股蓝植物提取物溶于吐温80，配成绞股蓝植物提取物溶液后，即可应用于促进毛发生长。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述绞股蓝植物提取物溶液的浓度为50mg/ml～800mg/ml。
4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述毛发包含头发。
5.权利要求1～4任意一项所述应用中用到的绞股蓝植物提取物溶液。
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