CN111450137A - 一种促毛发生长的杜仲/淫羊藿植物提取物溶液及其应用 - Google Patents

一种促毛发生长的杜仲/淫羊藿植物提取物溶液及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于促毛发生长技术领域。本发明提供了一种促毛发生长的植物提取物溶液，所述植物提取物溶液为植物提取物的酒精溶液，所述植物提取物为杜仲提取物和/或淫羊藿提取物。杜仲具有泻火除烦、清热利湿、凉血散癖之功效，临床用于热病心烦、急性黄疽型肝炎、膀胱炎、目赤肿痛、上消化道出血等。淫羊藿能舒筋活血、止咳化痰、祛风止痛，药理研究表明其有镇咳、平喘、补肾等作用。本发明以单一的杜仲提取物的酒精溶液、单一的淫羊藿提取物的酒精溶液及其二者提取物组合物的酒精溶液应用于生发研究，均表现出显著的生发效果，其中，提取物组合物的酒精溶液生发效果更为显著。

Description

一种促毛发生长的杜仲/淫羊藿植物提取物溶液及其应用
技术领域
本发明涉及促毛发生长技术领域，尤其涉及一种促毛发生长的杜仲/淫羊藿植物提取物溶液及其应用。
背景技术
人的头发在社交中起着重要作用，脱发不仅影响个人形象，对生活、工作也有诸多阻碍。在巨大的需求之下，国内外科学家做了很多工作来研究脱发机理以及解决方案。
目前，FDA仅批准两种化学合成药物用于治疗雄激素性脱发的药物，口服非那雄胺和局部用米诺地尔[Price VH,1999]。但是这两种药物的副作用也非常明显，非那雄胺在男性胎儿中具有潜在的外生殖器畸形的风险，因此在生育或孕妇中禁用。米诺地尔的作用则是暂时的，已经报道了几种不良反应，例如瘙痒、皮炎和刺激性[Trueb RM,2002；De VillezRL,1990]。
近年来，许多防脱发或者促进头发生长的草本外用产品在全球销售，相比较单一生化作用模式的治疗方式，这些天然药物有很多优势，包括适应性强、副作用少、易于获得、成本低等。但是植物提取物用于脱发治疗的效果依然不尽如人意，且缺乏新意。
发明内容
本发明的目的在于提供一种促毛发生长的植物提取物溶液及其应用。本研究筛选出杜仲提取物的酒精溶液和淫羊藿提取物的酒精溶液以及二者提取物组合物的酒精溶液应用于生发研究，以质量浓度为2％的米诺地尔为阳性对照，发现两种提取物的酒精溶液和提取物组合物的酒精溶液均表现出生发效果，提取物组合物的酒精溶液具有更为显著的生发效果。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种促毛发生长的植物提取物溶液，所述植物提取物溶液为植物提取物的酒精溶液，所述植物提取物为杜仲提取物和/或淫羊藿提取物。
作为优选，所述杜仲提取物和酒精的比例为20～100mg：0.5～1.8mL。
作为优选，所述淫羊藿提取物和酒精的比例为20～100mg：0.5～1.8mL。
作为优选，当所述植物提取物为杜仲提取物和淫羊藿提取物时，杜仲提取物、淫羊藿提取物和酒精的比例为20～100mg：20～100mg：0.5～1.8mL。
作为优选，所述酒精的体积浓度为80～90％。
作为优选，所述杜仲提取物和酒精的比例为40～90mg：0.9～1.1mL。
作为优选，所述淫羊藿提取物和酒精的比例为40～90mg：0.9～1.1mL。
作为优选，当所述植物提取物为杜仲提取物和淫羊藿提取物时，杜仲提取物、淫羊藿提取物和酒精的比例为40～90mg：40～90mg：0.9～1.1mL。
本发明还提供了一种促毛发生长的植物提取物溶液在制备促进毛发生长的药物中的应用。
作为优选，所述毛发包含头发。
本发明的有益效果包括以下几点：
1)杜仲是茜草科植物，性寒味苦，具有泻火除烦、清热利湿、凉血散癖之功效，临床用于热病心烦、急性黄疽型肝炎、膀胱炎、目赤肿痛、上消化道出血及局部出血等。已知杜仲中含有多种环烯醚萜苷类化合物，包括杜仲苷、异羟杜仲苷、京尼平-1-β-龙胆双糖苷、山杜仲苷等。
2)淫羊藿为多年生缠绕草质藤本，性温、味甘。能舒筋活血，止咳化痰，祛风止痛。用于腰腿疼痛、风湿痛、风湿关节痛、筋骨麻木、大骨节病、跌打损伤、闪腰、咳嗽喘息、糖尿病、高血压、冠心病、支气管炎。药理研究表明其有镇咳、平喘、补肾等作用。
3)以单一的杜仲提取物的酒精溶液、单一的淫羊藿提取物的酒精溶液及其二者提取物组合物的酒精溶液应用于生发研究，均表现出显著的生发效果，其中，提取物组合物的酒精溶液生发效果更为显著。
具体实施方式
本发明提供了一种促毛发生长的植物提取物溶液，所述植物提取物溶液为植物提取物的酒精溶液，所述植物提取物为杜仲提取物和/或淫羊藿提取物。
本发明所述杜仲提取物和酒精的比例优选为20～100mg：0.5～1.8mL，进一步优选为40～90mg：0.9～1.1mL，更优选为60～80mg：1.0mL。
本发明所述淫羊藿提取物和酒精的比例优选为20～100mg：0.5～1.8mL，进一步优选为40～90mg：0.9～1.1mL，更优选为60～80mg：1.0mL。
本发明所述植物提取物为杜仲提取物和淫羊藿提取物时，杜仲提取物、淫羊藿提取物和酒精的比例优选为20～100mg：20～100mg：0.5～1.8mL，进一步优选为40～90mg：40～90mg：0.9～1.1mL，更优选为60～80mg：60～80mg：1.0mL。
本发明所述酒精的体积浓度优选为80～90％，进一步优选为85％。
本发明还提供了一种促毛发生长的植物提取物溶液在制备促进毛发生长的药物中的应用。
本发明所述毛发优选为头发。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
将20mg杜仲提取物(购自陕西百草萃生物科技有限公司)和20mg淫羊藿提取物(购自陕西百草萃生物科技有限公司)同时溶于1mL酒精得到提取物组合物的酒精溶液。
实施例2
将30mg杜仲提取物溶于1mL酒精得到杜仲提取物的酒精溶液。
实施例3
将30mg淫羊藿提取物溶于1mL酒精得到淫羊藿提取物的酒精溶液。
实施例4
将70mg杜仲提取物(购自陕西百草萃生物科技有限公司)和70mg淫羊藿提取物(购自陕西百草萃生物科技有限公司)同时溶于1mL酒精得到提取物组合物的酒精溶液。
实施例5
将100mg杜仲提取物溶于1mL酒精得到杜仲提取物的酒精溶液。
实施例6
将100mg淫羊藿提取物溶于1mL酒精得到淫羊藿提取物的酒精溶液。
实施例7
将40mg杜仲提取物(购自陕西百草萃生物科技有限公司)和40mg淫羊藿提取物(购自陕西百草萃生物科技有限公司)同时溶于1mL酒精得到提取物组合物的酒精溶液。
实施例8
将60mg杜仲提取物溶于1mL酒精得到杜仲提取物的酒精溶液。
实施例9
将60mg淫羊藿提取物溶于1mL酒精得到淫羊藿提取物的酒精溶液。
应用例1MTT法测定人真皮乳头细胞DPC的增殖
人真皮乳头细胞是毛囊生长调节的重要细胞，它存在于毛囊的基底部位，调控毛囊的生长、循环，指导毛基质细胞分化形成毛干，决定毛发的直径。因此人真皮乳头细胞成为体外筛选脱发药物的首选细胞。考察药物对细胞生长的影响通常采用MTT比色法检测细胞的生长。细胞增殖通过细胞计数试剂盒8(CCK-8)(Sigma，St.Louis，MO，USA)测定。在96孔微孔板里，每个孔接种5×103个人真皮乳头细胞(购自美国CellApplications)。孵育24小时后，将细胞与100μL无血清Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM，Sigma)(购自美国CellApplications)一起培养24h，然后分别加入实施例1的溶液、实施例2的溶液、质量浓度为2％的10μM米诺地尔(溶于DMEM培养基)(购自美国CellApplications)处理，米诺地尔、无血清DMEM培养基和triton X-100(Sigma，圣路易斯，密苏里州，美国)培养基分别用作阳性对照组、阴性对照组和空白对照组。处理24小时后，向每个孔中加入10μL CCK-8溶液，然后将细胞在37℃下孵育3小时。用微孔板分光光度计(Epoch Multi-Volume VolumeSpectrophotometer System，Epoch，VT，USA)在450nm(测试波长)和650nm(参考波长)处测量吸光度。测得的吸光度用于通过以下方程式确定细胞增殖，DPC增殖率见表1。
Cellproliferation(％)＝
[(ABSsample-ABSblank)450nm-(ABSsample-ABSblank)650nm]/
[(ABScontrol-ABSblank)450nm-(ABScontrol-ABSblank)650nm]
表1 DPC增殖率
组别 实施例1 实施例2 阳性对照组 阴性对照组
DPC增殖率 136.5 120.4 125.6 100
表1为不同药物处理人真皮乳头细胞的DPC增殖率。由表1可知，实施例1处理的人真皮乳头细胞的增殖率最高，实施例2的增殖率明显高于阴性对照组(p<0.05)。
应用例2毛囊细胞的总数
将固定好的皮肤按照石蜡切片的制作技术进行包埋、切片，切片厚度为7μm，均为背部横切。切片经脱蜡、复水和苏木素-伊红染色后镜检，选4×镜下的5个不同的视野进行观察，分别统计毛囊总数，计算出相应平均数。实验数据采用Excel软件进行整理，运用SPSS17.0软件进行统计分析，结果见表2。
表2小鼠的毛囊总数
组别 毛囊总数/个
实施例1 336.80±23.17*
实施例2 323.40±23.08
实施例3 315.40±22.43**
阴性对照组 301.40±27.15
阳性对照组 328.23±20.99
注：与阴性对照组比较，*表示差异显著(P<0.05)，**表示差异极显著(P<0.01)。
由表2可知，毛囊总数由多到少排序依次是：实施例1＞阳性对照组>实施例2>实施例3>阴性对照组。
应用例3毛囊生长长度的测定
毛囊培养基由Williams'E培养基(含L-型谷酰胺2mmol/L)(华美公司)和120u/L胰岛素、0.4ug/ml氢化可的松、20mmol/LHepes(Sigma公司)、100u/ml青霉素和100u/ml链霉素组成。分离毛囊的方法参照文献[谷朝霞,2007]，选取完整无损的生长期毛囊进行培养。
通过倒置显微镜观察，可发现培养第2天大部分毛囊开始生长，以后逐日增长，表现为毛干、内外根鞘的延长。各组毛囊在第1～4天平均增长速度较快，第6～8天增长速度开始减慢，至第8天阴性对照组毛囊基本停止生长，而实施例和阳性对照组毛囊的生长维持至第10天以后。通过人头皮游离毛囊体外培养，筛选出制杜仲、淫羊藿两味中药促人毛囊生长的最佳浓度。
结果发现，毛囊增长幅度按大小排序依次是：实施例1>阳性对照组>实施例2>实施例3>阴性对照组。各组毛囊生长长度见表3。
表3各组毛囊第2、4、6、8、10天平均生长长度
Figure BDA0002493718890000061
应用例4对毛发生长的定性影响和对毛发长度的定量影响
对毛发生长的定性影响
将健康六周大的C57BL/50只小鼠(体重18～20g)(购自安徽师范大学实验动物中心，中国芜湖)圈养在聚丙烯笼中，并保持在标准条件下(光照和黑暗条件循环进行，其中，每次光照时间和每次黑暗时间均为12小时，温度：23.2℃，湿度：35～60％)，所有动物自由进食。全部实验根据安徽师范大学《实验动物的护理和使用指南》进行本研究中的步骤操作。
将50只小鼠随机分成5组(每组10只)。在毛发静止期阶段，将小鼠背部区域毛发(宽度约2cm，长度约3cm)在施用药物前24小时剃掉。第1、2、3组的小鼠分别采用实施例4、实施例5、实施例6的溶液进行处理。第4组中的小鼠接受体积浓度为85％的酒精作为阴性对照组，第5组中的小鼠接受质量浓度为2％的米诺地尔作为阳性对照组。每天以1.0mL的剂量将药物局部应用到测试区域一次。分离小鼠一个小时，然后放回各自的笼子中，持续21天。在施用期间，未观察到各组之间小鼠的平均体重或异常方面的差异。
表4对毛发生长影响的定性记录
Figure BDA0002493718890000071
注：结果显示为平均值S.D。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，与通过Student’s t-test学生t检验(n＝10)与相应的对照值进行比较时。
测定毛发的长度
从第12天开始，所有组的小鼠整个裸露区域都被绒毛覆盖，通过照片不能明显观察到毛发生长情况。因此，我们确定了新毛的长度以评估生长状态。在开始治疗后的第12、16和21天，从所有小鼠的相同剃毛区域中选择了最长的10根毛发来测量和计算平均长度。结果显示为平均长度。
从第12天到第21天，测量小鼠毛发的长度，结果以平均值S.D.*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，与通过学生t检验(n＝10)与相应的对照值进行比较时。
表5对毛发长度生长的影响
Figure BDA0002493718890000072
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种促毛发生长的植物提取物溶液，其特征在于，所述植物提取物溶液为植物提取物的酒精溶液，所述植物提取物为杜仲提取物和/或淫羊藿提取物。
2.根据权利要求1所述的植物提取物溶液，其特征在于，所述杜仲提取物和酒精的比例为20～100mg：0.5～1.8mL。
3.根据权利要求1所述的植物提取物溶液，其特征在于，所述淫羊藿提取物和酒精的比例为20～100mg：0.5～1.8mL。
4.根据权利要求1所述的植物提取物溶液，其特征在于，当所述植物提取物为杜仲提取物和淫羊藿提取物时，杜仲提取物、淫羊藿提取物和酒精的比例为20～100mg：20～100mg：0.5～1.8mL。
5.根据权利要求1～4任一项所述的植物提取物溶液，其特征在于，所述酒精的体积浓度为80～90％。
6.根据权利要求1或2所述的植物提取物溶液，其特征在于，所述杜仲提取物和酒精的比例为40～90mg：0.9～1.1mL。
7.根据权利要求1或3所述的植物提取物溶液，其特征在于，所述淫羊藿提取物和酒精的比例为40～90mg：0.9～1.1mL。
8.根据权利要求1或4所述的植物提取物溶液，其特征在于，当所述植物提取物为杜仲提取物和淫羊藿提取物时，杜仲提取物、淫羊藿提取物和酒精的比例为40～90mg：40～90mg：0.9～1.1mL。
9.权利要求1～8任意一项所述促毛发生长的植物提取物溶液在制备促进毛发生长的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述毛发包含头发。
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