CN114948932B - 包含桑根酮的组合物在制备通过作用于毛囊组织防治脱发的产品中的用途 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药化妆品领域，具体涉及包含桑根酮的组合物在制备通过作用于毛囊组织防治脱发的产品中的用途。所述组合物由桑根酮C、桑根酮G和桑辛素M组成。本发明还提供了上述组合物在制备提高毛囊组织活性的产品中的用途，将所述产品直接涂抹或喷洒到头皮上促使休止期的毛囊进入再生周期，促进毛发生长。本发明还提供了上述组合物在制备提高体外培养的毛囊组织活性的药物中的用途，将所述组合物制成组织培养液作用于体外培养毛囊组织能够提高培养的毛囊组织的活性，显著提高移植毛囊的存活率。

Description

包含桑根酮的组合物在制备通过作用于毛囊组织防治脱发的 产品中的用途

技术领域

本发明属于医药化妆品领域，具体涉及包含桑根酮的组合物在制备通过作用于毛囊组织防治脱发的产品中的用途。

背景技术

头发作为身体结构的一部分，在我们的日常生活中起着重要的作用。首先头发对头皮有着直接的保护作用，外力作用到头皮能起缓冲作用，降低损伤，保护头部。临床上，由于头发的存在，除染发剂外，外物无法直接接触头皮，避免了与灰尘、细菌的接触，因此头皮部接触性皮炎的发生较其他部位少。与此同时，毛发有着非常重要的美学功能，具有独特而重要的社会心理功能。中医上认为发为血之余，肾藏精，其华在发，毛发的生长依赖精血的充养，浓密亮泽的头发代表着健康，能给人美好的形象，头发的形状及状态的不同，给人的印象是不同的，健康美丽的秀发让人在人际交往中更加自信。同样各种毛发疾病，如脱发、少发、头屑等会让人产生自卑、焦虑等不良心理，严重者甚至影响社交活动，因此在日常生活中不得不注意头发的护理。

正常脱落的头发都是处于退行期及休止期的毛发，由于进入退行期与新进入生长期的毛发不断处于动态平衡，故能维持正常数量的头发。病理性异常头发脱落，如男性的秃顶或女生的发际线后移，是在某些因素的作用下毛囊长期处于休止期而无法进入生长周期。随着社会竞争加剧，生存压力增大，高脂饮食，睡眠减少，环境影响以及染发和烫发等美发造型产品的使用，脱发患者出现了年轻化迹象。

目前，我国市场上常见的生发剂以各种生发洗发水、保健品、中药煎煮后的洗剂等为主，主要通过改善微循环达到促进生发的作用，但通常效果不佳。临床上治疗病理性脱发的药物很少，且这些药物也是只针对很少比例的患者有作用，并且长期使用可能存在一定的毒副作用。毛囊组织移植虽然可以从根本上解决脱发的问题，但也存在价格极其昂贵和毛囊组织存活率不高的问题。因而，目前对于能够有效防治脱发以及提高毛囊移植手术过程中的毛囊存活率且安全的产品仍存在极大需求。

桑白皮(CortexMori)是桑科桑属植物桑(MorusAlba L)的干燥根皮，性甘微苦、寒，归肺经，具有润肺平喘、利水消肿功效，主治肺热喘咳、水肿胀满尿少、面目肌肤浮肿。现代医学表明其具有防腐杀菌、抗氧化、降血糖、抗肿瘤、平喘和抗炎等作用。桑白皮常用于防治脱发的中药方剂中，例如，CN105194601A公开了一种可以防白、防脱、生发的洗发剂，包括以下原料：茶麸、干姜、细辛、防风、续断、川芎、皂荚、柏叶、白芷、竹叶、松叶、泽兰、零陵香、桑寄生、蔓荆子、桑根白皮、首乌、当归。CN102671095A公开了一种健康养发、护发、黑发的中药组合物，包括以下原料：石菖蒲、茶麸、桑根、何首乌、野山姜汁、茶籽油、人参。

有研究表明，桑白皮中含量较高的黄酮类成分桑根酮C具有明显的降压、抗炎、降血压、降血糖、抗动脉粥样硬化和抗肿瘤作用(例如，参见，王艺等，“桑根酮C体内外抗肿瘤作用研究”，石河子大学学报(自然科学版)，第37卷，第4期，2019年8月，第524页-第528页)。桑白皮中的黄酮类成分桑根酮G和二氢黄酮类成分桑根酮O具有抗炎作用(参见，杨利红等，“桑白皮抗炎活性成分的分离及抗炎机制研究”，中华中医药学刊，第34卷第12期，2016年12月，第3008-3012页)。桑辛素M是桑科植物桑白皮内中的一种酚类成分，可从桑白皮中提取或人工合成获得。已有研究表明桑辛素M具有抗炎、治疗哮喘、抗肿瘤、镇痛与抗HIV活性等功能。

本申请的发明人在多年来专注于天然产物及其提取物相关单体防治脱发和提高毛囊组织存活方面的研究，并在研究过程中意外地发现了以特定比例将主要活性成分桑根酮C和桑根酮G与辅助成分桑辛素M组合，能够显著提高主要活性成分桑根酮C和桑根酮G的效果，从而研制出了一种成分简单、安全有效的通过作用于毛囊组织防治脱发的组合物产品。特别是，此前未见包含桑根酮的防治脱发以及提高毛囊组织的组合物产品的报道。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，实现采用现代研究方法对天然产物进行开发利用，结合大量实验筛选，提供了以特定比例将主要活性成分桑根酮C和桑根酮G与辅助成分桑辛素M组合制备的包含桑根酮的组合物在制备防治脱发以及提高毛囊组织存活产品中的应用。

具体地，通过以下几个方面的技术方案实现了本发明：

在第一个方面中，本发明提供了一种包含桑根酮的组合物在制备通过作用于毛囊组织防治脱发的产品中的用途，所述包含桑根酮的组合物由桑根酮C、桑根酮G和桑辛素M组成，其中以重量份数计桑根酮C：桑根酮G：桑辛素M的比例为(1-5)：(1-5)：(0.5-2)。

作为可选的方式，在上述用途中，其中以重量份数计桑根酮C：桑根酮G：桑辛素M的比例为3：2：1。

作为可选的方式，在上述用途中，所述脱发为雄激素性脱发、神经性脱发、内分泌脱发、营养性脱发、物理性脱发、化学性脱发、感染性脱发、先天性脱发和季节性脱发中的一种或多种。

优选地，所述脱发为雄激素性脱发、神经性脱发和/或内分泌脱发。

在第二个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述包含桑根酮的组合物在制备提高毛囊组织活性的产品中的用途。

作为可选的方式，在上述用途中，所述产品促使休止期的毛囊进入再生周期，促进毛发生长。

作为可选的方式，在上述用途中，所述产品包含上述第一个方面所述的包含桑根酮的组合物。

优选地，所述产品为外用产品。

更优选地，所述产品为药物或化妆品。

更优选地，所述外用产品为凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、泡沫剂、洗发水、护发素或喷雾型液体制剂。

在第三个方面中，本发明提供了上述第一个方面所述的包含桑根酮的组合物在制备提高体外培养的毛囊组织活性的药物中的用途。

作为可选的方式，在上述用途中，所述药物改善毛囊组织的微环境，促使休止期和退化期状态的毛囊组织转变为生长期毛囊组织，进而提高培养的毛囊组织的活性，显著提高移植毛囊的存活率。

作为可选的方式，在上述用途中，其特征在于，所述药物包含在临床上常用的毛囊组织培养液中。

其中，在本发明中，桑根酮C、桑根酮G是主要活性成分，桑辛素M是辅助成分。

“辅助成分”通常指不具有或几乎不具有目标活性，但是能够增强主要活性成分目标活性的物质。本发明的目标活性主要是通过作用于毛囊组织防治脱发，提高毛囊组织活性以及提高培养的毛囊组织活性和提高移植毛囊的存活率。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一赘述。

本发明相对于现有技术，具有以下有益效果：

本发明人在研究过程中意外地发现了以特定比例将主要活性成分桑根酮C、桑根酮G与辅助成分桑辛素M组合，能够显著提高主要活性成分桑根酮C和桑根酮G的效果并且显著降低上述活性成分的用量，从而研制出了一种成分简单、安全有效的通过作用于毛囊组织防治脱发的组合物产品。

实验结果表明，在防治脱发以及激发毛发再生方面，桑辛素M与桑根酮C和桑根酮G两者组合起到了协同增效作用。此外，本发明组合物对体外培养的小鼠毛囊毛发生长起促进作用，同时可促进毛囊球部细胞增殖，其作用效果显著优于仅含桑根酮C和桑根酮G两者的组合物。

本发明组合物中使用的桑根酮C、桑根酮G和桑辛素M可以从含有这些活性成分的桑白皮等植物中提取分离得到，其来源广泛，成本低，经济实惠，安全性高。

具体实施方式

以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道购买得到的常规产品。

本发明包含桑根酮的组合物中的桑根酮C、桑根酮G和桑辛素M可以采用天然药物化学领域的常规提取和纯化方法从含有这些活性成分的桑白皮等植物中提取分离得到，也可购自市售产品。

实施例1：本发明组合物对雄激素脱发模型小鼠具有促进毛发生长的作用

1.实验分组和给药

将6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分组，共分为以下5组。

(1)空白组(涂抹常规空白护发精华基质0.2mL；n＝10)；

(2)模型组(涂抹常规空白护发精华基质0.2mL；n＝10)；

(3)C+G组(涂抹包含桑根酮C和桑根酮G的护发精华基质0.2mL，其中桑根酮C的含量占护发精华基质总重量的3％，桑根酮G的含量占护发精华基质总重量的2％；n＝10)；

(4)M组(涂抹包含桑辛素M的护发精华基质0.2mL，其中桑辛素M的含量占护发精华基质总重量的1％；n＝10)；

(5)C+G+M组(涂抹包含桑根酮C、桑根酮G和桑辛素M的护发精华基质0.2mL，其中桑根酮C的含量占护发精华基质总重量的3％，桑根酮G的含量占护发精华基质总重量的2％，桑辛素M的含量占护发精华基质总重量的1％；n＝10)；

各组均于小鼠背部脱毛24h后给予产品，1次/天。第(2)-(5)组每天在涂抹5mg/mL睾酮稀释液2小时后，再涂抹产品。

2.C57BL/6J小鼠雄激素性脱发模型的制备

用剃毛器剃除各组小鼠背部毛发，面积约2cm×2cm，然后按照说明书分别涂抹脱毛膏(薇婷温和脱毛膏)去除残留的毛发，并确认当前小鼠毛发生长处于休止期(皮肤呈现粉红色)。脱毛24h后，除空白组以外，其余各组小鼠均于背部脱毛区涂抹5mg/mL睾酮稀释液0.2mL/只，1次/天，连续造模28天。本实验总周期为4周，实验过程中小鼠正常摄食饮水。

3.检测指标和统计学方法

连续给予产品28天，1次/天。每天涂样前观察小鼠皮肤颜色变化，每7天对小鼠脱毛区新生毛发生长情况进行拍照并计算毛发生长百分比。

毛发生长百分比(％)＝(剃毛后毛发生长区域面积/剃毛前毛发区域面积)×100％。

统计数据以均值±标准误表示。统计学分析采用重复测定的方差分析进行比较，组间差异应用Fisher LSD检验进行比较。

4.实验结果

雄激素脱发小鼠毛发生长情况的实验结果如下表1所示。

表1：本发明组合物对雄激素脱发模型小鼠毛发生长情况的影响

注：**，p<0.01，与空白组比较；^##，p<0.01，与模型组比较；^△，p<0.05，^△△，p<0.01，与C+G组比较

如表1中所述，在第1天时，各组脱毛C57BL/6J小鼠的毛发均未开始生长，因此各组实验动物的毛发覆盖率均为0％。

在第21天和第28天两个检测时间点，模型组实验动物的毛发覆盖率分别为9.6％和20.4％，实验结果均显著低于空白对照组(p<0.01)，上述结果表明雄激素脱发小鼠模型造模成功。

对于C+G组，在第21天和第28天两个检测时间点，实验动物的毛发覆盖率分别为11.4％和27.8％，高于模型组，但上述结果与模型组相比不具有显著性。上述结果表明，将桑根酮C和桑根酮G联用具有一定的改善雄激素脱发模型小鼠毛发生长的作用，但该作用较为有限。

对于M组，在第21天和第28天两个检测时间点，实验动物的毛发覆盖率分别为9.8％和22.3％，与模型组接近。上述结果表明，桑辛素M单独使用对雄激素脱发模型小鼠毛发生长没有影响。

对于C+G+M组，在第21天和第28天两个检测时间点，实验动物的毛发覆盖率分别为25.6％和61.5％，该结果显著优于模型组(p<0.01)，并且该结果显著优于C+G组(p<0.05，p<0.01)。上述结果表明，将桑根酮C、桑根酮G和桑辛素M联用对雄激素脱发小鼠的毛发生长具有非常显著的促进作用，并且可以看出桑辛素M对桑根酮C和桑根酮G之间的组合具有显著的协同增效作用。

因此，可以将本发明组合物用于防治脱发，特别是用于防治雄激素性脱发。

实施例2：本发明组合物对体外培养的小鼠毛囊毛发生长和毛囊球部细胞增殖的影响

2.1小鼠触须毛囊体外实验

1.小鼠触须毛囊器官培养

将4-6周龄C57BL/6J小鼠颈椎脱臼处死，剪去双侧胡须，用75％酒精消毒触须3次，无菌条件下剪下触须垫，置于D-Hanks液中洗涤3次，然后置于Williams培养液中，在解剖显微镜下，用显微剪、镊子分离出生长期毛囊，并剪去毛囊上1/3部分。毛囊培养在96孔板中进行，每孔放一个毛囊，每孔加入Williams培养液无血清培养基0.2mL，该培养基中含有转铁蛋白10mg/L、青霉素100U/mL、链霉素100μg/mL等成分，放入37℃、5％CO₂的细胞培养箱中培养。

2.实验分组

实验分为空白组、C+G组、M组、C+G+M组，每组10-15个毛囊，空白组不加药物。C+G组中，桑根酮C的终浓度为3×10^-5g/mL，桑根酮G的终浓度为2×10^-5g/mL。M组中桑辛素M的终浓度为1×10^-5g/mL。C+G+M组中，桑根酮C的终浓度为3×10^-5g/mL，桑根酮G的终浓度为2×10^-5g/mL，桑辛素M的终浓度为1×10^-5g/mL。

3.毛发生长情况观察

培养第1天至第7天，在倒置光学显微镜下，通过目镜测微器每天测量毛囊底部到毛发顶部的长度，第7天测量结果减去第1天测量结果即为毛发生长长度，比较各组的毛发生长长度。

2.2小鼠毛囊球部细胞体外实验

1.小鼠毛囊球部细胞体外培养

将出生4天的C57BL/6J乳鼠，在无菌条件下取其背部整层皮肤，采用两步酶(含0.5％分离酶和0.2％I型胶原酶)消化法，分离取得纯度较高的毛囊球部细胞，用于上述2.1部分的空白组、C+G组、M组、C+G+M组的Williams培养液的96孔板中，每组设定6孔，每孔体积0.2mL，接种细胞浓度5×10⁴个/mL。放入37℃、5％CO₂的细胞培养箱中培养。

2.本发明组合物对小鼠毛囊球部细胞生长活力的影响

分别于培养后24h和96h进行MTT比色测定，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，37℃下继续培养4h，弃去孔内培养液。每孔加入0.2mL DMSO，振荡10min，使结晶充分溶解。波长570nm，在酶标仪上测定各孔吸光度值，比较各组吸光度值。

2.3统计学方法

结果采用SPSS 20.0统计软件进行分析，数据以平均值±SD表示。多组间比较采用单因素方差分析，两组间比较采用t检验，p<0.05表示差异有统计学意义。

2.4实验结果

1.毛发生长长度

培养第7天，各组毛囊毛发平均生长长度如表2中所示。C+G+M组实验动物的平均毛囊毛发生长长度显著大于空白组(p<0.05)，且显著大于C+G组(p<0.05)。C+G组小鼠触须毛囊生长也优于空白组，但该组实验结果与空白组实验结果之间的差异不具有统计学显著性。M组与空白组之间的毛囊毛发生长长度基本相似。提示桑辛素M单独使用基本上不具有促进小鼠触须毛囊生长的作用。从这些结果可以看出，桑辛素M对桑根酮C和桑根酮G之间的组合促进小鼠触须毛囊生长的作用具有显著的协同增效作用。

2.细胞生长活力

小鼠毛囊球部细胞生长活力实验结果见表2。在培养后96h时，C+G+M组实验动物的平均吸光度值显著高于空白组(p<0.05)，且显著大于C+G组(p<0.05)。C+G组实验动物的平均吸光度也高于空白组，但该组实验结果与空白组实验结果之间的差异不具有统计学显著性。M组与空白组之间的平均吸光度基本相似。提示桑辛素M单独使用基本上不具有促进小鼠毛囊球部细胞生长活力的作用。从这些结果可以看出，桑辛素M对桑根酮C和桑根酮G之间的组合促进小鼠毛囊球部细胞生长活力的作用具有显著的协同增效作用。

表2：本发明组合物对小鼠触须毛囊生长和小鼠毛囊球部细胞生长活力的影响

注：*p<0.05，与空白组比较，^#，p<0.05，与C+G组比较。

2.5实验结论

本发明组合物对体外培养的小鼠毛囊毛发生长起促进作用，同时可促进毛囊球部细胞增殖，其作用效果显著优于桑根酮C与桑根酮G两者的组合。桑辛素M与空白组相比，对小鼠毛囊毛发生长和小鼠毛囊球部细胞生长活力几乎不具有影响。即，桑辛素M对桑根酮C与桑根酮G两者的组合在促进体外培养的小鼠毛囊毛发生长方面产生了显著的协同增效作用。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

Claims (9)

1.包含桑根酮的组合物在制备通过作用于毛囊组织防治脱发的药物中的用途，其特征在于：所述包含桑根酮的组合物由桑根酮C、桑根酮G和桑辛素M组成，其中以重量份数计桑根酮C：桑根酮G：桑辛素M的比例为(1-5)：(1-5)：(0.5-2)。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，其中以重量份数计桑根酮C：桑根酮G：桑辛素M的比例为3：2：1。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的用途，其特征在于，所述脱发为雄激素性脱发、神经性脱发、内分泌脱发、营养性脱发、物理性脱发、化学性脱发、感染性脱发、先天性脱发和季节性脱发中的一种或多种。

4.权利要求1或权利要求2所述的包含桑根酮的组合物在制备提高毛囊组织活性的药物中的用途。

5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于，所述药物促使休止期的毛囊进入再生周期，促进毛发生长。

6.根据权利要求1或权利要求4所述的用途，其特征在于，所述药物包含权利要求1或权利要求2所述的包含桑根酮的组合物，且所述药物为外用产品，所述外用产品为凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、泡沫剂或喷雾型液体制剂。

7.权利要求1或权利要求2所述的包含桑根酮的组合物在制备提高体外培养的毛囊组织活性的药物中的用途。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述药物改善毛囊组织的微环境，促使休止期和退化期状态的毛囊组织转变为生长期毛囊组织，进而提高培养的毛囊组织的活性，显著提高移植毛囊的存活率。

9.根据权利要求7或权利要求8所述的用途，其特征在于，所述药物包含在临床上常用的毛囊组织培养液中。