CN111423984B - 防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法和菌剂 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了属于生物防治技术领域的一种防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法和菌剂，步骤如下：在健康土壤中加入特异活性碳源，得到驯化土壤；在其中种植植物，采用活体生物刺激法处理植物，使植物患病；采集患病植物的根系病害部位与未患病植物的相同部位的微生物，进行菌群检测，筛选出现富集的微生物菌群；采集患病植物的根系病害部位，制备成接种液，筛选出富集的微生物菌群，得到协同促根抗病菌种。本发明的筛选方法，显著提高了筛选概率，兼顾了微生物间的协同作用及微生物与作物根系的亲和性，很大程度上保证了植株对生防菌的适应能力，更加有效且生态环保。

Description

防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法和菌剂
技术领域
本发明属于生物防治技术领域，具体涉及一种防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法和菌剂。
背景技术
目前植物根结线虫病害的防治主要采用化学药剂防治(如棉隆和威百亩)和物理防治(如高温闷棚和大水漫灌)的方法。但是，化学药剂本身具有环境污染性和人体毒害性，长期施用不仅会提高根结线虫自身的抗性而降低药剂药效，而且容易对非靶目标(如无害土壤微生物和动物)造成毒害。此外，物理防治不仅会破坏土壤理化性状(如破坏土壤团聚体结构、造成养分失衡)，而且对有益微生物群落和作物生长不利。因此，通过生物措施抑制土壤中根结线虫的繁殖和阻控作物根结线虫病害的发生是亟待解决的重要问题之一。
已有一些研究表明，土壤中存在潜在的对植食性线虫具有拮抗作用的微生物，可以预防植物病害，有望成为化学制剂的环境友好型代替品。但是，现有筛选可以提高作物根系耐根结线虫的微生物多集中在单一菌株上，往往忽略了微生物间的协同作用，且忽略了微生物与作物根系的亲和性。
以根结线虫为例，目前，大多数筛选抗根结线虫生防菌的方法主要利用广谱性培养基进行大量筛选验证，不仅工作量大，而且筛选概率小；相关筛选方法的定向选择性差，而且具有明显盲目性。
发明内容
针对上述问题，本发明提出了一种防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法，包括步骤如下：
1)在健康土壤中加入特异活性碳源，得到驯化土壤；
2)在驯化土壤中种植植物，采用活体生物刺激法处理植物，使植物患病；
3)采集患病植物的根系病害部位与未患病植物的相同部位的微生物，进行菌群检测，筛选出患病植物相对于未患病植物出现富集的微生物菌群；
4)采集患病植物的根系病害部位，制备成接种液，进一步筛选出步骤3)中确定的所述富集的微生物菌群，得到协同促根抗病菌种。
所述特异活性碳源：健康土壤的质量比为6:94-100；
所述特异活性碳源包括蚯蚓粪、柠条粉和棕榈果串生物炭；进一步的，所述蚯蚓粪：柠条粉：棕榈果串生物炭的质量比为(1-2):(0.5-1.5):(1-2)。
所述活体生物刺激法包括：用病原体侵染植物体一段时间；
进一步的，所述活体生物刺激法包括：在植物第二片真叶完全展开后接种病原体，然后进行培养；所述培养时间至少为病原体的一个生长周期；
所述病原体为害虫、细菌或病毒；进一步的，所述病原体为根结线虫；例如，南方根结线虫；所述植物为黄瓜。
一种防治南方根结线虫的协同促根抗病菌剂，所述菌剂包括以下菌种：
Pseudomonas oleovorans subsp.Lubricantis、Pseudomonaschloritidismutans、Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonas chengduensis和Pseudomonas taiwanensis DSM 21245。
所述菌剂还包括以下菌种中的一种或一种以上：Agrobacteriumsalinitolerans、Rhizobium pusense、Acinetobacter calcoaceticus、Acinetobacterpittii DSM 21653、Acinetobacter soli、Pseudoxanthomonasmexicana、Pararheinheimeramesophila、Enterobacter hormaechei subsp.Xiangfangensis、Enterobacter cloacae。
所述菌剂中各菌种的浓度相同；进一步的，所述各菌种的最小浓度分别为2×108CFU/mL。
所述菌种分别为对利福平不敏感的突变菌株。
所述的协同促根抗病菌剂，还包括载体；
进一步的，所述载体为活性碳源强化固态载体；
更进一步的，所述活性碳源强化固态载体成分为：蚯蚓粪7-9wt％、柠条粉7-9wt％、棕榈果串生物炭7-9wt％、草炭25-27wt％、棉粕13-15wt％、蛋白胨1.0-2.0wt％、葡萄糖0.4-0.6wt％、七水硫酸镁0.03-0.05wt％、余量为花生饼粉。
协同促根抗病菌剂的添加量为所述固态载体最大持水量的80％以上。
所述协同促根抗病菌剂的以下任一种应用：
制备抗南方根结线虫农药；
制备促进植物根部生长剂；
防治南方根结线虫病害；
促进植物根部生长。
本发明的有益效果在于：
1.本发明提供了一种协同促根抗病的固态菌剂中菌群的筛选方法，所述筛选方法基于生态学原理，从病害组织自身角度出发，从病原-微生物互作原位高效筛选生防菌，利用协同生防菌群的病原物激发效应，即，当病原物入侵微生物多样性高的健康土壤时，植物有益功能微生物的协同菌群被激发，它们迅速生长繁殖并在根系定殖；利用高通量测序的手段提高筛菌导向性，相较于没有病原物入侵的植物根系，植物有益功能微生物数量和种类的相对丰度均显著上升；之后利用特异性培养基高效筛选目标菌株更大程度提高筛选效率，为后续筛选到协同菌群提高精度
2.本发明所述筛选方法不仅能节省时间，降低工作量，显著提高筛选概率，克服了现有技术中，筛选提高作物根系耐南方根结线虫的微生物仅仅集中在单一菌株的限制，兼顾了微生物间的协同作用及微生物与作物根系的亲和性，很大程度上保证了植株对生防菌的适应能力，更加有效且生态环保。
3.本发明不仅提供了一种高效且简便易行的协同促根抗病的固态菌剂，所述菌剂具有良好的抑制根结线虫和促进根系生长的效果；与未采用所述菌剂处理的根系对照，协同促根抗病菌剂处理的黄瓜根系的根结减少70％以上，并且生长形势良好；协同促根抗病菌剂处理的二龄幼虫、三/四龄幼虫、雌虫、卵块分别减少了97.0％、45.8％、41.5％、87.8％。
附图说明
图1为接种根结线虫的根系与未接种根结线虫的根系的微生物高通量测序结果；
图2为14个属于变形菌门的纯化菌株的物种信息结果；
图3为协同促根抗病菌剂对黄瓜根结及根系生长的直观影响图；
图3-1为为患南方根结线虫病害的黄瓜根结的照片；图3-2为图3-1部位的放大照片；图3-3为使用协同促根抗病菌剂处理的黄瓜根结的照片；图3-4为图3-3部位的放大照片；
图4为协同促根抗病菌剂对黄瓜根结线虫相关指标的影响。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作进一步的详细说明：
实施例1
1)采集样品：
准备工作：将采集土壤样品所需的铁锹在浓度为0.3-0.5％的次氯酸钠溶液中浸泡1小时，然后用无菌水冲洗3次，已实现铁锹的灭菌。
采集土壤样品：用一个灭菌的铁锹将土壤的0-5cm表层土去掉，然后挖出深度5-15cm的土壤，将土壤样品放置在一个10号自封袋中，然后将自封袋放在一个装有冰袋的泡沫盒中；用此方法从北京延庆一个森林中，采集了没有受到化肥、农药和抗生素影响的健康土壤；
去除植物组织：用一个孔径2毫米的无菌网筛，筛除肉眼明显可见的植物组织和杂物，获得待培养的土壤。
2)驯化培养：在上述步骤获得的土壤中添加特异活性碳源，特异活性碳源由由质量比为1:1:1的蚯蚓粪、柠条粉和棕榈果串生物炭组成，添加量为60克/公斤，一公斤的土壤中添加60克的特异活性碳源。将特异活性碳源与土壤均匀混合均匀后装在一个容积为500毫升无菌塑料栽培钵中，然后将混合的土壤的含水量调节至土壤最大持水量的85％；用塑料薄膜将栽培钵密封，然后置于一个25℃的培养箱中恒温黑暗培养25天。
采用包括蚯蚓粪、柠条粉和棕榈果串生物炭的特异活性碳源，对潜在的植物有害微生物有明显抑制作用，可通过调控土壤碳库，直接将对植物有益的潜在功能微生物驯化培养，并促进有益菌群在原生境中的协同生长。
3)激发菌群：将驯化培养的土壤装在一个栽培钵中，置于环境可控的温室中，采用活体生物刺激法，激发潜在的协同促根抗病菌群在植物根系定殖；该方法利用协同生防菌群的病原物激发效应，即，当病原物入侵微生物多样性高的健康土壤时，植物有益功能微生物的协同菌群被激发，它们迅速生长繁殖并在根系定殖。相较于没有病原物入侵的植物根系，植物有益功能微生物数量和种类的相对丰度均显著上升，大幅增加了这些协同菌群被高效筛选出来的概率。
活体生物刺激法的具体方法为：将对南方根结线虫敏感的黄瓜品种新泰密刺的种子消毒催芽后播种在驯化培养的土壤中，播种密度为1粒/500毫升，每500毫升土壤播种1粒种子；出苗14天后接种南方根结线虫二龄幼虫，接种量为300头/株，每株瓜幼苗接种300头南方根结线虫二龄幼虫；接种后的幼苗养时间为25天，培养条件为：白天在光照为20000勒克斯、28℃条件下培养14小时，夜间在黑暗18℃条件下培养10小时，空气相对湿度为65-85％。
黄瓜种子消毒催芽的方法为：将黄瓜种子先用75％乙醇浸泡30秒，再用5％的次氯酸钠处理3次，每次1分钟，然后用无菌水冲洗3次；将消毒的种子置于无菌水中浸泡5-6小时，然后将浸泡的种子放置在装有湿润滤纸的无菌培养皿中，置于一个28℃的培养箱中，进行恒温催芽至露白。
南方根结线虫二龄幼虫的制备方法为：挑取感染南方根结线虫病害的植株根系的卵块，浸泡于含有1.5毫克/毫升的庆大霉素和0.05毫克/毫升的制霉菌素的溶液中，黑暗条件下孵化3-4天，然后用2％次氯酸钠溶液表面灭菌2分钟，并用无菌水进行仔细冲洗2-3次，之后置于30℃恒温培养箱内孵化3天，最后依次通过200目和500目的筛子，使南方根结线虫二龄幼虫最终集中在500目的筛子上，最终用无菌水冲洗集中到10mL离心管内，在体式显微镜下吸取100微升进行计数，重复10次，最终确定离心管内二龄幼虫的浓度。
实施例2
4)筛选菌群：将实施例1中被根结线虫侵染的黄瓜幼苗带土坨从栽培钵中取出，抖落掉所有能轻易抖掉的土壤，然后用一个无菌剪刀剪掉地上部植株，将根系放入一个装有30毫升无菌磷酸盐缓冲液的50毫升离心管中，将离心管密封后放置在摇床上震荡20分钟，震荡时的转速为180转/分钟；用无菌镊子将震荡后的根系从离心管中取出，将取出的根系通过无菌手术刀剪取明显根结部位，进行表面灭菌；
将表面灭菌的根结破碎在硫酸镁缓冲液中，然后用25微米孔径的膜滤掉较大的植物组织碎屑，将滤液离心，离心时间为10分钟，离心转速为500离心力/分钟，以去掉剩下的植物组织碎屑，然后将悬浮液再次离心，离心时间为15分钟，离心转速为9500转/分钟，以获得植物细胞和微生物细胞混合物；将植物细胞和微生物细胞混合物置于碘苯六醇密度梯度离心缓冲液中进行梯度离心，离心时间为50分钟，离心转速为8500转/分钟。将植物组织从根结样品中直接排除筛弃，最大限度地保留了的微生物细胞，可高效分析潜在的协同促根抗病菌群；以高效提取微生物细胞群；将微生物细胞群用硫酸镁缓冲液冲洗5次，然后离心，离心时间为5分钟，离心转速为13000离心力/分钟，以去除碘苯六醇树脂；将微生物细胞群置于500微升硫酸镁缓冲液均匀混合，用于微生物菌群检测。
A)筛选确定协同促根抗病菌群：当在驯化培养有益功能微生物的健康森林土壤中种植黄瓜并接种南方根结线虫后，对接种根结线虫的根系及没有接种的对照根系进行了微生物高通量测序分析鉴定，与未接种根系相比，结果如图1所示。接种后的根结线虫根系显著富集特殊微生物菌群，以变形菌门最为明显，说明这一类微生物是潜在的可挖掘的协同促根抗病菌群。
B)筛选变形菌门微生物：将表面灭菌的根结碾碎后与硫酸镁缓冲液混合，制成涂布液，按1％的量接种在专化变形菌三抗液体培养基上，在有氧条件下于25度恒温悬浮震荡培养4天，最终筛选出防治根结线虫的协同促根抗病菌群。采用的专化变形菌三抗液体培养基，只针对性地定向选择可明显提高作物适应生物逆境并对根系生长有促进作用的变形菌门的菌群，特别是该菌门下的假单胞菌菌群。
C)筛选变形菌门下的微生物菌种：将上述筛选出的协同促根抗病菌群，用硫酸镁缓冲液稀释制成以10倍递进的梯度稀释液，之后吸取100微升均匀涂布在专化变形菌三抗固体培养基上，25℃条件下倒置暗培养96小时，挑去取单菌落并继续纯化，每个单菌落纯化4次，得到的菌落为纯化的单一菌株。采用16S片段扩增鉴定变形菌门下的微生物种类，使用27F(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3')、1492R(5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3')做为引物，通过分子生物学进行测序鉴定，保留序列不同的菌株，通过比对标准卡，得到14个属于变形菌门的纯化菌株的测序结果示于序列表；并将其物种信息结果对应示于图2和表1。
结果表明：对根结线虫有协同促进根部生长并且抗根结线虫的微生物菌群为变形菌门，具体微生物种类包括以下14种：Agrobacterium salinitolerans、Rhizobiumpusense、Acinetobacter calcoaceticus、Acinetobacter pittii DSM 21653、Acinetobacter soli、Pseudoxanthomonasmexicana、Pararheinheimeramesophila、Enterobacter hormaechei subsp.Xiangfangensis、Enterobacter cloacae、Pseudomonasoleovorans subsp.Lubricantis、Pseudomonas chloritidismutans、Pseudomonasplecoglossicida、Pseudomonas chengduensis、Pseudomonas taiwanensis DSM 21245。
通过敏感材料富集变形菌门微生物，继而利用变形菌门专化培养基筛选富集到有益微生物。根结线虫侵染敏感材料刺激抗根结线虫微生物生长，通过高通量锁定这类微生物是变形菌，用变形菌专性培养基筛选这类微生物。而这一筛选的重点是所用的材料——根结线虫侵染的敏感材料的根结，而且筛选的微生物是内生菌。根结线虫侵染的敏感材料富集的量大，变形菌被筛选出的概率最高。最终通过单个代表性菌株构建协同菌群。
其中，磷酸盐缓冲液的配方为：硫酸氢二钾0.6618克、磷酸二氢钾0.1633克、硫酸镁0.1克、去离子水1升、pH7.0；
根结表面灭菌的方法为：将根结先用75％乙醇浸泡30秒，然后用2％次氯酸溶液处理2次，每次2分钟，最后无菌水冲洗3次；
硫酸镁缓冲液的配方为：硫酸镁1.2克、去离子水1000毫升；
碘苯六醇密度梯度离心缓冲液的浓度为90-360g/L，溶剂为硫酸镁缓冲液。将此范围的浓度，成等差数列配置成浓度梯度，梯度个数≥3。
具体配制方法：360克/升(一升硫酸镁缓冲液中添加360克碘苯六醇)、180克/升(一升硫酸镁缓冲液中添加180克碘苯六醇)、90克/升(一升硫酸镁缓冲液中添加90克碘苯六醇)；
筛选变形菌门下的微生物菌种的过程中：每个单菌落至少纯化4次以上，以保证得到的菌落为纯化的单一菌株。
专化变形菌三抗液体培养基的配方为：
Figure BDA0002434768990000051
蛋白胨20克、绵羊血琼脂12克、甘油10毫升、硫酸钾1.5克、七水硫酸镁1.5克、环己酰亚胺75毫克、氨苄青霉素50毫克、氯霉素12.5毫克、匹马霉素100毫克、去离子水1升、pH7.2。
专化变形菌三抗固体培养基的配方为：在专化变形菌三抗液体培养基的基础上添加20g琼脂凝固剂，加热至100℃溶解，40℃下冷却并凝固。
5)选取属于不同种的纯化菌株，涂布在利福平梯度培养基上，筛选出每一种纯化菌株中对利福平不敏感突变菌株。
利福平梯度培养基的配方为：胰蛋白胨15g/L、大豆蛋白酶消化物5g/L、氯化钠5g/L、琼脂15g/L、利福平50-250mg/L、溶剂为水、pH＝7.3。
利福平浓度的梯度范围为50-250mg/L，将此范围的浓度，成等差数列配置成浓度梯度，梯度个数≥5。
具体配制方法：利福平梯度培养基的配方为：胰蛋白胨15克、大豆蛋白酶消化物5克、氯化钠5克、琼脂15克、利福平分别配置成50、100、150、200、250毫克、去离子水1升、pH7.3。
采用利福平专化培养基筛选对利福平不敏感突变菌株，实现了这些菌株的稳定继代培养，防止了其生防功效的丢失。
实施例3
制备菌剂：将实施例2中筛选出的Pseudomonas oleovorans subsp.Lubricantis、Pseudomonas chloritidismutans、Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonaschengduensis和Pseudomonas taiwanensis DSM 21245的纯化菌株中对利福平不敏感的突变菌株分别富集培养，将菌株配置成浓度为2.5×108CFU/mL的菌液，每株取10ml菌液混合，然与2g活性碳源强化固态载体混合，保持协同促根抗病菌剂的添加量为固态载体最大持水量的80％，最终制备出防治南方根结线虫病害的协同促根抗病菌群固态制剂。
活性碳源强化固态载体的配方为：每100克总栽培中含有8克蚯蚓粪、8克柠条粉、8克棕榈果串生物炭、26克草炭、34克花生饼粉、14.46克棉粕、1.0克蛋白胨、0.5克葡萄糖、0.04克七水硫酸镁。
实施例4
制备菌剂：将实施例2中筛选出的Pseudomonas oleovorans subsp.Lubricantis、Pseudomonas chloritidismutans、Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonaschengduensis和Pseudomonas taiwanensis DSM 21245、Agrobacterium salinitolerans、Rhizobium pusense、Acinetobacter calcoaceticus、Acinetobacter pittii DSM 21653、Acinetobacter soli、Pseudoxanthomonasmexicana、Pararheinheimeramesophila、Enterobacter hormaechei subsp.Xiangfangensis、Enterobacter cloacae的纯化菌株中对利福平不敏感的突变菌株分别富集培养，将菌株配置成浓度为2×108CFU/mL的菌液，每株取10ml菌液混合，然与2g活性碳源强化固态载体混合，保持协同促根抗病菌剂的添加量为固态载体最大持水量的80％，最终制备出防治南方根结线虫病害的协同促根抗病菌群固态制剂。
活性碳源强化固态载体的配方为：每100克总栽培中含有8克蚯蚓粪、8克柠条粉、8克棕榈果串生物炭、26克草炭、34克花生饼粉、14.46克棉粕、1.0克蛋白胨、0.5克葡萄糖、0.04克七水硫酸镁。
实施例5
菌剂应用：
防治南方根结线虫病害的协同促根抗病菌群固态制剂育苗期施用量为基质质量的8％-12％；定植后施用量控制在每亩地650公斤。
随后，采用协同促根抗病菌剂，进一步检测了其对黄瓜根系接种根结线虫后根结相关指标的影响。将防治南方根结线虫病害的协同促根抗病菌剂在黄瓜育苗以基质量的10％添加，在一个感染根结线虫的地块中以650公斤/亩的量施入黄瓜地中，在黄瓜植株生长过程中，测定了协同促根抗病菌剂对黄瓜根结线虫相关指标的影响。如图3，未处理对照根系根结明显，根结情况示于图3-1和图3-2，而协同促根抗病菌剂处理的黄瓜根系的根结较对照明显减少，根系情况示于图3-3和图3-4，并且生长形势良好；如图4，与未处理对照相比，协同促根抗病菌剂处理的二龄幼虫、三/四龄幼虫、雌虫、卵块和根结数量分别减少了97.0％、45.8％、41.5％、87.8％和71.4％。
将本发明制备的防治南方根结线虫病害的协同促根抗病菌群固态制剂应用到作物生长中，在实现菌群协同共生并与作物根系高度亲和的基础上，通过生存与功能协同，促进作物根系的抗根结线虫性并改善其生长，从而大幅提高了这些菌群在防治根结线虫病害中的应用效果。以上实例的试验结果表明，本发明不仅提供了一种协同高效且简便易行的促根抗病的协同菌群的固态制剂的有效制备方法，同时制备的菌剂具有良好的促进根系生长的效果。
表1
门 科 属 种
变形菌门 根瘤菌科 根瘤菌 Agrobacterium salinitolerans
变形菌门 根瘤菌科 根瘤菌 Rhizobium pusense
变形菌门 莫拉氏菌科 不动杆菌属 Acinetobacter calcoaceticus
变形菌门 莫拉氏菌科 不动杆菌属 Acinetobacter pittii DSM 21653
变形菌门 莫拉氏菌科 不动杆菌属 Acinetobacter soli
变形菌门 黄单胞菌科 假黄色单胞菌属 Pseudoxanthomonasmexicana
变形菌门 着色菌科 假黄色单胞菌属 Pararheinheimeramesophila
变形菌门 肠杆菌科 肠杆菌 Enterobacter hormaechei subsp.xiangfangensis
变形菌门 肠杆菌科 肠杆菌 Enterobacter cloacae
变形菌门 假单胞菌科 假单胞菌属 Pseudomonas oleovorans subsp.lubricantis
变形菌门 假单胞菌科 假单胞菌属 Pseudomonas chloritidismutans
变形菌门 假单胞菌科 假单胞菌属 Pseudomonas plecoglossicida
变形菌门 假单胞菌科 假单胞菌属 Pseudomonas chengduensis
变形菌门 假单胞菌科 假单胞菌属 Pseudomonas taiwanensis DSM 21245
序列表
<110> 中国农业大学
<120> 防治植物病虫害的协同促根抗病菌的筛选方法和菌剂
<160> 14
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1328
<212> DNA
<213> Agrobacterium salinitolerans
<400> 1
ctgcctcctt gcggttagcg cactaccttc gggtaaaacc aactcccatg gtgtgacggg 60
cggtgtgtac aaggcccggg aacgtattca ccgcagcatg ctgatctgcg attactagcg 120
attccaactt catgcactcg agttgcagag tgcaatccga actgagatgg cttttggaga 180
ttagctcgac atcgctgtct cgctgcccac tgtcaccacc attgtagcac gtgtgtagcc 240
cagcccgtaa gggccatgag gacttgacgt catccccacc ttcctctcgg cttatcaccg 300
gcagtcccct tagagtgccc aactaaatgc tggcaactaa gggcgagggt tgcgctcgtt 360
gcgggactta acccaacatc tcacgacacg agctgacgac agccatgcag cacctgttct 420
ggggccagcc taactgaagg acatcgtctc caatgcccat accccgaatg tcaagagctg 480
gtaaggttct gcgcgttgct tcgaattaaa ccacatgctc caccgcttgt gcgggccccc 540
gtcaattcct ttgagtttta atcttgcgac cgtactcccc aggcggaatg tttaatgcgt 600
tagctgcgcc accgaacagt atactgcccg acggctaaca ttcatcgttt acggcgtgga 660
ctaccagggt atctaatcct gtttgctccc cacgctttcg cacctcagcg tcagtaatgg 720
accagtaagc cgccttcgcc actggtgttc ctccgaatat ctacgaattt cacctctaca 780
ctcggaattc cacttacctc ttccatactc aagataccca gtatcaaagg cagttccgca 840
gttgagctgc gggatttcac ccctgactta aatatccgcc tacgtgcgct ttacgcccag 900
taattccgaa caacgctagc ccccttcgta ttaccgcggc tgctggcacg aagttagccg 960
gggcttcttc tccgactacc gtcattatct tcatcggtga aagagcttta caaccctaag 1020
gccttcatca ctcacgcggc atggctggat caggcttgcg cccattgtcc aatattcccc 1080
actgctgcct cccgtaggag tttgggccgt gtctcagtcc caatgtggct gatcatcctc 1140
tcagaccagc tatggatcgt cgccttggta ggcctttacc ccaccaacta gctaatccaa 1200
cgcgggccaa tccttccccg ataaatcttt cccccgtagg gcgtatgcgg tattaattcc 1260
agtttcccgg agctattccg caggaaaggg tatgttccca cgcgttactc acccgtctgc 1320
cactcccc 1328
<210> 2
<211> 1378
<212> DNA
<213> Rhizobium pusense
<400> 2
cgccctcctt gcggttaggc tactacttct ggcagaaccc gctcccatgg tgtgacgggc 60
ggtgtgtaca agacccggga acgtattcac cgcggcaagc tgatccgcga ttactagcga 120
ttccgacttc acgcagtcga gttgcagact gcgatccgga ctacgaccgg gtttctggga 180
ttagctcccc ctcgcgggtt ggcagccctc tgtcccggcc attgtatgac gtgtgtagcc 240
ctacccataa gggccatgat gacctgacgt catccccacc ttcctccggt ttgtcaccgg 300
cagtctcatt agagtgccct ttcgtagcaa ctaatgacaa gggttgcgct cgttgcggga 360
cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacggccat gcagcacctg tgtccaggtt 420
ctctttcgag cactctcaca tctctgcaag attcctggca tgtcaagggt aggtaaggtt 480
tttcgcgttg catcgaatta aaccacatca tccaccgctt gtgcgggtcc ccgtcaattc 540
ctttgagttt caaccttgcg gccgtactcc ccaggcggtc aacttcacgc gttagctacg 600
ttactgagaa gaaaccctcc caacaaccag ttgacatcgt ttagggcgtg gactaccagg 660
gtatctaatc ctgtttgctc cccacgcttt cgtgcatgag cgtcagtaca ggcccagggg 720
attgccttcg ccatcggtgt tcctccgcat atctacgcat ttcactgcta cacgcggaat 780
tccatccccc tctgccgtac tctagccatg cagtcacaaa tgcagttccc aggttgagcc 840
cggggatttc acatctgtct tgcataaccg cctgcgcacg ctttacgccc agtaattccg 900
attaacgctt gcaccctacg tattaccgcg gctgctggca cgtagttagc cggtgcttat 960
tcttcaggta ccgtcatgaa cccccggtat taacaggagt cttttcttcc ctgacaaaag 1020
cggtttacaa cccgaaggcc ttcttcccgc acgcggcatg gctggatcag ggttgccccc 1080
attgtccaaa attccccact gctgcctccc gtaggagtct gggccgtgtc tcagtcccag 1140
tgtggctggt cgtcctctca gaccagctac agatcgttgg cttggtgagc ctttacccca 1200
ccaactacct aatctgatat cggccgctcc aactgcgcga ggtcttgcga tcccccgctt 1260
tcaccctcag gtcgtatgcg gtattagctg ctctttcgag cagttatccc ccacaactgg 1320
gcacgttccg atacattact cacccgttcg ccactcgtcg ccaggtgccc cgcgttac 1378
<210> 3
<211> 1358
<212> DNA
<213> Acinetobacter calcoaceticus
<400> 3
ctagctactt ctggtgcaca aactcccatg gtgtgacggg cggtgtgtac aaggcccggg 60
aacgtattca ccgcggcatt ctgatccgcg attactagcg attccgactt catggagtcg 120
agttgcagac tccaatccgg actacgatcg gctttttgag attagcatcc tatcgctagg 180
tagcaaccct ttgtaccgac cattgtagca cgtgtgtagc cctggccgta agggccatga 240
tgacttgacg tcgtccccgc cttcctccag tttgtcactg gcagtatcct taaagttccc 300
gacattactc gctggcaaat aaggaaaagg gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca 360
tctcacgaca cgagctgacg acagccatgc agcacctgta tgtaagttcc cgaaggcacc 420
aatccatctc tggaaagttc ttactatgtc aaggccaggt aaggttcttc gcgttgcatc 480
gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt caattcattt gagttttagt 540
cttgcgaccg tactccccag gcggtctact tatcgcgtta gctgcgccac taaagcctca 600
aaggctccaa cggctagtag acatcgttta cggcatggac taccagggta tctaatcctg 660
tttgctcccc atgctttcgc acctcagcgt cagtgttagg ccagatggct gccttcgcca 720
tcggtattcc tccagatctc tacgcatttc accgctacac ctggaattct accatcctct 780
cccacactct agctaaccag tatcgaatgc aattcccaag ttaagctcgg ggatttcaca 840
tttgacttaa ttagccgcct acgcgcgctt tacgcccagt aaatccgatt aacgcttgca 900
ccctctgtat taccgcggct gctggcacag agttagccgg tgcttattct gcgagtaacg 960
tccactatct ctaggtatta actaaagtag cctcctcctc gcttaaagtg ctttacaacc 1020
ataaggcctt cttcacacac gcggcatggc tggatcaggc ttgcgcccat tgtccaatat 1080
tccccactgc tgcctcccgt aggagtctgg gccgtgtctc agtcccagtg tggcggatca 1140
tcctctcaga cccgctacag atcgtcgcct tggtaggcct ttaccccacc aactagctaa 1200
tccgacttag gctcatctat tagcgcaagg tccgaagatc ccctgctttc tcccgtagga 1260
cgtatgcggt attagcattc ctttcgaaat gttgtccccc actaataggc agattcctaa 1320
gcattactca cccgtccgcc gctaagatca gtagcaag 1358
<210> 4
<211> 1301
<212> DNA
<213> Acinetobacter pittii DSM 21653
<400> 4
aggctagcta cttctggtgc acaaactccc atggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc 60
gggaacgtat tcaccgcggc attctgatcc gcgattacta gcgattccga cttcatggag 120
tcgagttgca gactccaatc cggactacga tcggcttttt gagattagca tcctatcgct 180
aggtagcaac cctttgtacc gaccattgta gcacgtgtgt agccctggcc gtaagggcca 240
tgatgacttg acgtcgtccc cgccttcctc cagtttgtca ctggcagtat ccttaaagtt 300
cccgacatta ctcgctggca aataaggaaa agggttgcgc tcgttgcggg acttaaccca 360
acatctcacg acacgagctg acgacagcca tgcagcacct gtatgtaagt tcccgaaggc 420
accaatccat ctctggaaag ttcttactat gtcaaggcca ggtaaggttc ttcgcgttgc 480
atcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattca tttgagtttt 540
agtcttgcga ccgtactccc caggcggtct acttatcgcg ttagctgcgc cactaaagcc 600
tcaaaggctc caacggctag tagacatcgt ttacggcatg gactaccagg gtatctaatc 660
ctgtttgctc cccatgcttt cgcacctcag cgtcagtgtt aggccagatg gctgccttcg 720
ccatcggtat tcctccagat ctctacgcat ttcaccgcta cacctggaat tctaccatcc 780
tctcccacac tctagctaac cagtatcgaa tgcaattccc aagttaagct cggggatttc 840
acatttgact taattagccg cctacgcgcg ctttacgccc agtaaatccg attaacgctt 900
gcaccctctg tattaccgcg gctgctggca cagagttagc cggtgcttat tctgcgagta 960
acgtccacta tctctaggta ttaactaaag tagcctcctc ctcgcttaaa gtgctttaca 1020
accataaggc cttcttcaca cacgcggcat ggctggatca ggcttgcgcc cattgtccaa 1080
tattccccac tgctgcctcc cgtaggagtc tgggccgtgt ctcagtccca gtgtggcgga 1140
tcatcctctc agacccgcta cagatcgtcg ccttggtagg cctttacccc accaactagc 1200
taatccgact taggctcatc tattagcgca aggtccgaag atcccctgct ttctcccgta 1260
ggacgtatgc ggtattagca ttcctttcga aatgttgtcc c 1301
<210> 5
<211> 1393
<212> DNA
<213> Acinetobacter soli
<400> 5
cgccctcttt gcagttaggc tagctacttc tggtgcacaa actcccatgg tgtgacgggc 60
ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcggcattc tgatccgcga ttactagcga 120
ttccgacttc atggagtcga gttgcagact ccaatccgga ctacgatcgg ctttttgaga 180
ttagcatcct atcgctaggt agcaaccctt tgtaccgacc attgtagcac gtgtgtagcc 240
ctggccgtaa gggccatgat gacttgacgt cgtccccgcc ttcctccagt ttgtcactgg 300
cagtatcctt aaagttccca tccgaaatgc tggcaagtaa ggaaaagggt tgcgctcgtt 360
gcgggactta acccaacatc tcacgacacg agctgacgac agccatgcag cacctgtatg 420
tagattcccg aaggcaccaa tccatctctg gaaagtttct actatgtcaa ggccaggtaa 480
ggttcttcgc gttgcatcga attaaaccac atgctccacc gcttgtgcgg gcccccgtca 540
attcatttga gttttagtct tgcgaccgta ctccccaggc ggtctactta tcgcgttagc 600
tgcgccacta aagcctcaaa ggccccaacg gctagtagac atcgtttacg gcatggacta 660
ccagggtatc taatcctgtt tgctccccat gctttcgcac ctcagcgtca gtgttaggcc 720
agatggctgc cttcgccatc ggtattcctc cagatctcta cgcatttcac cgctacacct 780
ggaattctac catcctctcc cacactctag ccaaccagta tcgaatgcaa ttcccaagtt 840
aagctcgggg atttcacatt tgacttaatt ggccgcctac gcgcgcttta cgcccagtaa 900
atccgattaa cgcttgcacc ctctgtatta ccgcggctgc tggcacagag ttagccggtg 960
cttattctgc gagtaacgtc cactcatctc aggtattaac caaaagagcc tcctcctcgc 1020
ttaaagtgct ttacaaccat aaggccttct tcacacacgc ggcatggctg gatcagggtt 1080
ccccccattg tccaatattc cccactgctg cctcccgtag gagtctgggc cgtgtctcag 1140
tcccagtgtg gcggatcatc ctctcagacc cgctacagat cgtcgccttg gtaggccttt 1200
accccaccaa ctagctaatc cgacttaggc tcatctatta gcgcaaggtc acaagtgatc 1260
ccctgctttc tcccgtagga cgtatgcggt attagcatcc ctttcgagat gttgtccccc 1320
actaataggc agattcctaa gcattactca cccgtccgcc gctaagtgat aggcaagcac 1380
catcactccg ctc 1393
<210> 6
<211> 1404
<212> DNA
<213> Pseudoxanthomonas mexicana
<400> 6
agcgccctcc cgaaggttaa gctacctgct tctggtgcac aaactcccat ggtgtgacgg 60
gcggtgtgta caaggcccgg gaacgtattc accgcagcaa tgctgatctg cgattactag 120
cgattccgac ttcatggagt cgagttgcag actccaatcc ggactgagat agggtttctg 180
ggattggctc accctcgcgg gtttgcagcc ctctgtcccc accattgtag tacgtgtgta 240
gccctggtcg taagggccat gatgacttga cgtcatcccc accttcctcc ggtttgtcac 300
cggcggtctc cttagagttc ccaccattac gtgctggcaa ctaaggacaa gggttgcgct 360
cgttgcggga cttaacccaa catctcacga cacgagctga cgacagccat gcagcacctg 420
tctcacggtt cccgaaggca ccaatccatc tctggaaagt tccgtggatg tcaagaccag 480
gtaaggttct tcgcgttgca tcgaattaaa ccacatactc caccgcttgt gcgggccccc 540
gtcaattcct ttgagtttca gtcttgcgac cgtactcccc aggcggcgaa cttaacgcgt 600
tagcttcgat actgggtgcc aagttgcacc caacatccag ttcgcatcgt ttagggcgtg 660
gactaccagg gtatctaatc ctgtttgctc cccacgcttt cgtgcctcag tgtcagtgtt 720
ggcccaggat gccgccttcg ccacggatgt tccttctgat ctctacgcat ttcactgcta 780
caccagaaat tccgcatccc tctaccacac tctagtgatc cagtatccac tgcaattccc 840
aggttgagcc cagggctttc acagcagact taaaccacca cctacgcacg ctttacgccc 900
agtaattccg agtaacgctt gcacccttcg tattaccgcg gctgctggca cgaagttagc 960
cggtgcttat tctttgggta ccgtcatccc caccgagtat taatcgacag gatttctttc 1020
ccaacaaaag ggctttacaa cccgaaggcc ttcttcaccc acgcggtatg gctggatcag 1080
gcttgcgccc attgtccaat attccccact gctgcctccc gtaggagtct ggaccgtgtc 1140
tcagttccag tgtggctgat catcctctca gaccagctac cgatcgtcgc cttggtgggc 1200
cattaccccg ccaactagct aatcggacat cggctcatct aatcgcgtga ggccttgcgg 1260
tcccccactt tcacccgtag gtcgtatgcg gtattagcgt aagtttccct acgttatccc 1320
ccacgaaaag gtagattccg atgtattcct cacccgtccg ccactcgcca cccagagagc 1380
aagctctcct gtgctgccgt tcga 1404
<210> 7
<211> 1381
<212> DNA
<213> Pararheinheimera mesophila
<400> 7
gccctcccga aggttaagct acctacttct tttgcaccca ctcccatggt gtgacgggcg 60
gtgtgtacaa ggcccgggaa cgtattcacc gcaacattct gatttgcgat tactagcgat 120
tccgacttca cgcagtcgag ttgcagactg cgatccggac tacgatacgc tttaagagat 180
ccgctcactg tcgccagctt gcctccctct gtacgtacca ttgtagcacg tgtgtagccc 240
tactcgtaag ggccatgatg acttgacgtc gtccccacct tcctccggtt tatcaccggc 300
agtctcccta gagttcccga catgactcgc tggcaactaa ggataggggt tgcgctcgtt 360
gcgggactta acccaacatt tcacaacacg agctgacgac agccatgcag cacctgtctt 420
acggttcccg aaggcacaac cgcatctctg cagtcttccg tagatgtcaa gagtaggtaa 480
ggttcttcgc gttgcgtcga attaaaccac atgctccacc gcttgtgcgg gcccccgtca 540
attcatttga gttttaatct tgcgaccgta ctccccaggc ggtctactta gtgcgttagc 600
tgcgctactc acgccacaag ggcacgaaca gctagtagac atcgtttacg gcgtggacta 660
ccagggtatc taatcctgtt tgctccccac gctttcgcac ctgagcgtca gtgttgtgcc 720
agggggccgc cttcgccact ggtattcctc caaatctcta cgcatttcac cgctacactt 780
ggaattctac ccccctctca cacactctag tttcccagtt tcaaatgcaa ttcccaggtt 840
gagcccgggg ctttcacatc tgacttaaaa aaccgcctac gtgcgcttta cgcccagtaa 900
ttccgattaa cgcttgcacc ctctgtatta ccgcggctgc tggcacagag ttagccggtg 960
cttcttctgc gagtaacgtc aaaatgatgt gctattaaca caccaccctt cctcctcgct 1020
gaaagtgctt tacaacccga aggccttctt cacacacgcg gcatggctgg atcaggcttg 1080
cgcccattgt ccaatattcc ccactgctgc ctcccgtagg agtctggacc gtgtctcagt 1140
tccagtgtgg ctgatcatcc tctcaaacca gctagagatc gtcgccttgg tgagccatta 1200
cctcaccaac tagctaatcc cacgtaggcg catccgatag catgtggccc gaaggtccca 1260
cactttggtc cgtagacatt atgcggtatt aacagtcgtt tccaactggt atccccctct 1320
atcgggcagc ttcctacgca ttactcaccc gtccgccgct aggtccgaaa accccgctcg 1380
a 1381
<210> 8
<211> 1395
<212> DNA
<213> Enterobacter hormaechei subsp. xiangfangensis
<400> 8
tcccgaaggt taagctacct acttcttttg cacccactcc catggtgtga cgggcggtgt 60
gtacaaggcc cgggaacgta ttcaccgtgg cattctgatc cacgattact agcgattccg 120
acttcatgga gtcgagttgc agactccaat ccggactacg acgcacttta tgaggtccgc 180
ttgctctcgc gaggtcgctt ctctttgtat gcgccattgt agcacgtgtg tagccctact 240
cgtaagggcc atgatgactt gacgtcatcc ccaccttcct ccagtttatc actggcagtc 300
tcctttgagt tcccggccta accgctggca acaaaggata agggttgcgc tcgttgcggg 360
acttaaccca acatttcaca acacgagctg acgacagcca tgcagcacct gtctcagagt 420
tcccgaaggc accaatccat ctctggaaag ttctctggat gtcaagagta ggtaaggttc 480
ttcgcgttgc atcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattca 540
tttgagtttt aaccttgcgg ccgtactccc caggcggtcg acttaacgcg ttagctccgg 600
aagccacgcc tcaagggcac aacctccaag tcgacatcgt ttacggcgtg gactaccagg 660
gtatctaatc ctgtttgctc cccacgcttt cgcacctgag cgtcagtctt tgtccagggg 720
gccgccttcg ccaccggtat tcctccagat ctctacgcat ttcaccgcta cacctggaat 780
tctacccccc tctacaagac tctagcctgc cagtttcgaa tgcagttccc aggttgagcc 840
cggggatttc acatccgact tgacagaccg cctgcgtgcg ctttacgccc agtaattccg 900
attaacgctt gcaccctccg tattaccgcg gctgctggca cggagttagc cggtgcttct 960
tctgcgggta acgtcaatcg acagggttat taaccctgtc gccttcctcc ccgctgaaag 1020
tactttacaa cccgaaggcc ttcttcatac acgcggcatg gctgcatcag gcttgcgccc 1080
attgtgcaat attccccact gctgcctccc gtaggagtct ggaccgtgtc tcagttccag 1140
tgtggctggt catcctctca gaccagctag ggatcgtcgc ctaggtgagc cgttacccca 1200
cctactagct aatcccatct gggcacatcc gatggcaaga ggcccgaagg tccccctctt 1260
tggtcttgcg acgttatgcg gtattagcta ccgtttccag tagttatccc cctccatcag 1320
gcagtttccc agacattact cacccgtccg ccactcgtca gcgaagcagc aagctgcttc 1380
ctgttaccgt tcgac 1395
<210> 9
<211> 1359
<212> DNA
<213> Enterobacter cloacae
<400> 9
gctacctact tcttttgcac ccactcccat ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg 60
gaacgtattc accgtggcat tctgatccac gattactagc gattccgact tcatggagtc 120
gagttgcaga ctccaatccg gactacgacg cactttatga ggtccgcttg ctctcgcgag 180
gtcgcttctc tttgtatgcg ccattgtagc acgtgtgtag ccctactcgt aagggccatg 240
atgacttgac gtcatcccca ccttcctcca gtttatcact ggcagtctcc tttgagttcc 300
cggcctaacc gctggcaaca aaggataagg gttgcgctcg ttgcgggact taacccaaca 360
tttcacaaca cgagctgacg acagccatgc agcacctgtc tcagagttcc cgaaggcacc 420
aatccatctc tggaaagttc tctggatgtc aagagtaggt aaggttcttc gcgttgcatc 480
gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt caattcattt gagttttaac 540
cttgcggccg tactccccag cggtcgactt aacgcgttag ctccggaagc cacgcctcaa 600
gggcacaacc tccaagtcga catcgtttac ggcgtggact accagggtat ctaatcctgt 660
ttgctcccca cgctttcgca cctgagcgtc agtctttgtc cagggggccg ccttcgccac 720
cggtattcct ccagatctct acgcatttca ccgctacacc tggaattcta cccccctcta 780
caagactcta gcctgccagt ttcgaatgca gttcccaggt tgagcccggg gatttcacat 840
ccgacttgac agaccgcctg cgtgcgcttt acgcccagta attccgatta acgcttgcac 900
cctccgtatt accgcggctg ctggcacgga gttagccggt gcttcttctg cgggtaacgt 960
caatcgacag ggttattaac cctgtcgcct tcctccccgc tgaaagtact ttacaacccg 1020
aaggccttct tcatacacgc ggcatggctg catcaggctt gcgcccattg tgcaatattc 1080
cccactgctg cctcccgtag gagtctggac cgtgtctcag ttccagtgtg gctggtcatc 1140
ctctcagacc agctagggat cgtcgcctag gtgagccgtt accccaccta ctagctaatc 1200
ccatctgggc acatccgatg gcaagaggcc cgaaggtccc cctctttggt cttgcgacgt 1260
tatgcggtat tagctaccgt ttccagtagt tatccccctc catcaggcag tttcccagac 1320
attactcacc cgtccgccac tcgtcagcga agcagcagc 1359
<210> 10
<211> 1363
<212> DNA
<213> Pseudomonas oleovorans subsp. lubricantis
<400> 10
agctacttct ggagcaaccc actcccatgg tgtgacgggc ggtgtgtaca aggcccggga 60
acgtattcac cgtgacattc tgattcacga ttactagcga ttccgacttc acgcagtcga 120
gttgcagact gcgatccgga ctacgatcgg ttttatggga ttagctccac ctcgcggctt 180
ggcaaccctt tgtaccgacc attgtagcac gtgtgtagcc ctggccgtaa gggccatgat 240
gacttgacgt catccccacc ttcctccggt ttgtcaccgg cagtctcctt agagtgccca 300
ccataacgtg ctggtaacta aggacaaggg ttgcgctcgt tacgggactt aacccaacat 360
ctcacgacac gagctgacga cagccatgca gcacctgtgt ctgagttccc gaaggcacca 420
atccatctct ggaaagttct cagcatgtca aggccaggta aggttcttcg cgttgcttcg 480
aattaaacca catgctccac cgcttgtgcg ggcccccgtc aattcatttg agttttaacc 540
ttgcggccgt actccccagg cggtcaactt aatgcgttag ctgcgccact aagttctcaa 600
ggaacccaac ggctagttga catcgtttac ggcgtggact accagggtat ctaatcctgt 660
ttgctcccca cgctttcgca cctcagtgtc agtatcagtc caggtggtcg ccttcgccac 720
tggtgttcct tcctatatct acgcatttca ccgctacaca ggaaattcca ccaccctcta 780
ccgtactcta gctcgccagt tttggatgca gttcccaggt tgagcccggg gctttcacat 840
ccaacttaac gaaccaccta cgcgcgcttt acgcccagta attccgatta acgcttgcac 900
ccttcgtatt accgcggctg ctggcacgaa gttagccggt gcttattctg tcggtaacgt 960
caaaacacta acgtattagg ttaatgccct tcctcccaac ttaaagtgct ttacaatccg 1020
aagaccttct tcacacacgc ggcatggctg gatcaggctt tcgcccattg tccaatattc 1080
cccactgctg cctcccgtag gagtctggac cgtgtctcag ttccagtgtg actgatcatc 1140
ctctcagacc agttacggat cgtcgccttg gtgagccatt acctcaccaa ctagctaatc 1200
cgacctaggc tcatctgata gcgcaaggcc cgaaggtccc ctgctttctc ccgtaggacg 1260
tatgcggtat tagcgcccgt ttccggacgt tatcccccac taccaggcag attcctaggc 1320
attactcacc cgtccgccgc taaatcaagg agcaagctcc tct 1363
<210> 11
<211> 1378
<212> DNA
<213> Pseudomonas chloritidismutans
<400> 11
agactagcta cttctggagc acccactccc atggtgtgac gggcggtgtg tacaaggccc 60
gggaacgtat tcaccgtgac attctgattc acgattacta gcgattccga cttcacgcag 120
tcgagttgca gactgcgatc cggactacga tcggttttat gggattagct ccacctcgcg 180
gcttggcaac cctttgtacc gaccattgta gcacgtgtgt agcccaggcc gtaagggcca 240
tgatgacttg acgtcatccc caccttcctc cggtttgtca ccggcagtct ccttagagtg 300
cccaccttaa cgtgctggta actaaggaca agggttgcgc tcgttacggg acttaaccca 360
acatctcacg acacgagctg acgacagcca tgcagcacct gtgtcagagc tcccgaaggc 420
accaatccat ctctggaaag ttctctgcat gtcaaggcct ggtaaggttc ttcgcgttgc 480
ttcgaattaa accacatgct ccaccgcttg tgcgggcccc cgtcaattca tttgagtttt 540
aaccttgcgg ccgtactccc caggcggtcg acttaatgcg ttagctgcgc cactaagatc 600
tcaaggatcc caacggctag tcgacatcgt ttacggcgtg gactaccagg gtatctaatc 660
ctgtttgctc cccacgcttt cgcacctcag tgtcagtatt agcccaggtg gtcgccttcg 720
ccactggtgt tccttcctat atctacgcat ttcaccgcta cacaggaaat tccaccaccc 780
tctgccatac tctagcttgc cagttttgga tgcagttccc aggttgagcc cggggctttc 840
acattcaact taacaaacca cctacgcgcg ctttacgccc agtaattccg attaacgctt 900
gcacccttcg tattaccgcg gctgctggca cgaagttagc cggtgcttat tctgtcggta 960
acgtcaaaac actaacgtat taggttaatg cccttcctcc caacttaaag tgctttacaa 1020
tccgaagacc ttcttcacac acgcggcatg gctggatcag gctttcgccc attgtccaat 1080
attccccact gctgcctccc gtaggagtct ggaccgtgtc tcagttccag tgtgactgat 1140
catcctctca gaccagttac ggatcgtcgc cttggtgagc cgttacctca ccaactagct 1200
aatccgacct aggctcatct gatagcgcaa ggcccgaagg tcccctgctt tctcccgtag 1260
gacgtatgcg gtattagcgt tcctttcgaa acgttgtccc ccactatcag gcagattcct 1320
aggcattact cacccgtccg ccgctgaatc agagagcaag ctctcttcat ccgctcga 1378
<210> 12
<211> 1375
<212> DNA
<213> Pseudomonas plecoglossicida
<400> 12
ctcccgaggt tagactagct acttctggtg cacccactcc catggtgtga cgggcggtgt 60
gtacaaggcc cgggaacgta ttcaccgcga cattctgatt cgcgattact agcgattccg 120
acttcacgca gtcgagttgc agactgcgat ccggactacg atcggttttg tgagattagc 180
tccacctcgc ggcttggcaa ccctctgtac cgaccattgt agcacgtgtg tagcccaggc 240
cgtaagggcc atgatgactt gacgtcatcc ccaccttcct ccggtttgtc accggcagtc 300
tccttagagt gcccaccata acgtgctggt aactaaggac aagggttgcg ctcgttacgg 360
gacttaaccc aacatctcac gacacgagct gacgacagcc atgcagcacc tgtgtcagag 420
ttcccgaagg caccaatcca tctctggaaa gttctctgca tgtcaaggcc tggtaaggtt 480
cttcgcgttg cttcgaatta aaccacatgc tccaccgctt gtgcgggccc ccgtcaattc 540
atttgagttt taaccttgcg gccgtactcc ccaggcggtc aacttaatgc gttagctgcg 600
ccactaaaat ctcaaggatt ccaacggcta gttgacatcg tttacggcgt ggactaccag 660
ggtatctaat cctgtttgct ccccacgctt tcgcacctca gtgtcagtat cagtccaggt 720
ggtcgccttc gccactggtg ttccttccta tatctacgca tttcaccgct acacaggaaa 780
ttccaccacc ctctaccgta ctctagctcg ccagttttgg atgcagttcc caggttgagc 840
ccggggcttt cacatccaac ttaacgaacc acctacgcgc gctttacgcc cagtaattcc 900
gattaacgct tgcaccctct gtattaccgc ggctgctggc acagagttag ccggtgctta 960
ttctgtcggt aacgtcaaaa cagcaaggta ttaacttact gcccttcctc ccaacttaaa 1020
gtgctttaca atccgaagac cttcttcaca cacgcggcat ggctggatca ggctttcgcc 1080
cattgtccaa tattccccac tgctgcctcc cgtaggagtc tggaccgtgt ctcagttcca 1140
gtgtgactga tcatcctctc agaccagtta cggatcgtcg ccttggtgag ccattacccc 1200
accaactagc taatccgacc taggctcatc tgatagcgca aggcccgaag gtcccctgct 1260
ttctcccgta ggacgtatgc ggtattagcg ttcctttcga aacgttgtcc cccactacca 1320
ggcagattcc taggcattac tcacccgtcc gccgctgaat caaggagcaa gctcc 1375
<210> 13
<211> 1358
<212> DNA
<213> Pseudomonas chengduensis
<400> 13
ctagctactt ctggagcaac ccactcccat ggtgtgacgg gcggtgtgta caaggcccgg 60
gaacgtattc accgtgacat tctgattcac gattactagc gattccgact tcacgcagtc 120
gagttgcaga ctgcgatccg gactacgatc ggttttatgg gattagctcc acctcgcggc 180
ttggcaaccc tttgtaccga ccattgtagc acgtgtgtag ccctggccgt aagggccatg 240
atgacttgac gtcatcccca ccttcctccg gtttgtcacc ggcagtctcc ttagagtgcc 300
caccattacg tgctggtaac taaggacaag ggttgcgctc gttacgggac ttaacccaac 360
atctcacgac acgagctgac gacagccatg cagcacctgt gtctgagctc ccgaaggcac 420
caatccatct ctggaaagtt ctcagcatgt caaggccagg taaggttctt cgcgttgctt 480
cgaattaaac cacatgctcc accgcttgtg cgggcccccg tcaattcatt tgagttttaa 540
ccttgcggcc gtactcccca ggcggtcaac ttaatgcgtt agctgcgcca ctaagttctc 600
aaggaaccca acggctagtt gacatcgttt acggcgtgga ctaccagggt atctaatcct 660
gtttgctccc cacgctttcg cacctcagtg tcagtatcag tccaggtggt cgccttcgcc 720
actggtgttc cttcctatat ctacgcattt caccgctaca caggaaattc caccaccctc 780
taccgtactc tagctcgcca gttttggatg cagttcccag gttgagcccg gggctttcac 840
atccaactta acgaaccacc tacgcgcgct ttacgcccag taattccgat taacgcttgc 900
acccttcgta ttaccgcggc tgctggcacg aagttagccg gtgcttattc tgtcggtaac 960
gtcaaaacac taacgtatta ggttaatgcc cttcctccca acttaaagtg ctttacaatc 1020
cgaagacctt cttcacacac gcggcatggc tggatcaggc tttcgcccat tgtccaatat 1080
tccccactgc tgcctcccgt aggagtctgg accgtgtctc agttccagtg tgactgatca 1140
tcctctcaga ccagttacgg atcgtcgcct tggtgagcca ttacctcacc aactagctaa 1200
tccgacctag gctcatctga tagcgcaagg cccgaaggtc ccctgctttc tcccgtagga 1260
cgtatgcggt attagcgttc ctttcggaac gttatccccc actaccaggc agattcctag 1320
gcattactca cccgtccgcc gctaaatcaa ggagcaag 1358
<210> 14
<211> 1364
<212> DNA
<213> Pseudomonas taiwanensis DSM 21245
<400> 14
ctagctactt ctggtgcacc cactcccatg gtgtgacggg cggtgtgtac aaggcccggg 60
aacgtattca ccgcgacatt ctgattcgcg attactagcg attccgactt cacgcagtcg 120
agttgcagac tgcgatccgg actacgatcg gttttgtgag attagctcca cctcgcggct 180
tggcaaccct ctgtaccgac cattgtagca cgtgtgtagc ccaggccgta agggccatga 240
tgacttgacg tcatccccac cttcctccgg tttgtcaccg gcagtctcct tagagtgccc 300
accataacgt gctggtaact aaggacaagg gttgcgctcg ttacgggact taacccaaca 360
tctcacgaca cgagctgacg acagccatgc agcacctgtg tcagagttcc cgaaggcacc 420
aatccatctc tggaaagttc tctgcatgtc aaggcctggt aaggttcttc gcgttgcttc 480
gaattaaacc acatgctcca ccgcttgtgc gggcccccgt caattcattt gagttttaac 540
cttgcggccg tactccccag gcggtcaact taatgcgtta gctgcgccac taaaatctca 600
aggattccaa cggctagttg acatcgttta cggcgtggac taccagggta tctaatcctg 660
tttgctcccc acgctttcgc acctcagtgt cagtatcagt ccaggtggtc gccttcgcca 720
ctggtgttcc ttcctatatc tacgcatttc accgctacac aggaaattcc accaccctct 780
accgtactct agctcgccag ttttggatgc agttcccagg ttgagcccgg ggctttcaca 840
tccaacttaa cgaaccacct acgcgcgctt tacgcccagt aattccgatt aacgcttgca 900
ccctctgtat taccgcggct gctggcacag agttagccgg tgcttattct gtcggtaacg 960
tcaaaacagc aaggtattaa cttactgccc ttcctcccaa cttaaagtgc tttacaatcc 1020
gaagaccttc ttcacacacg cggcatggct ggatcaggct ttcgcccatt gtccaatatt 1080
ccccactgct gcctcccgta ggagtctgga ccgtgtctca gttccagtgt gactgatcat 1140
cctctcagac cagttacgga tcgtcgcctt ggtgagccat tacctcacca actagctaat 1200
ccgacctagg ctcatctgat agcgcaaggc ccgaaggtcc cctgctttct cccgtaggac 1260
gtatgcggta ttagcgttcc tttcgaaacg ttgtccccca ctaccaggca gattcctagg 1320
cattactcac ccgtccgccg ctgaatcaag gagcaagctc ccgt 1364

Claims (9)

1.一种防治南方根结线虫的协同促根抗病菌剂，其特征在于，所述菌剂中菌种为：
Pseudomonas oleovorans subsp. Lubricantis、Pseudomonas chloritidismutans、Pseudomonas plecoglossicida、Pseudomonas chengduensis、Pseudomonas taiwanensis DSM 21245、Agrobacterium salinitolerans、Rhizobium pusense、Acinetobacter calcoaceticus、Acinetobacter pittii DSM 21653、Acinetobacter soli、Pseudoxanthomonasmexicana、Pararheinheimeramesophila、Enterobacter hormaechei subsp. Xiangfangensis和Enterobacter cloacae。
2.根据权利要求1所述的协同促根抗病菌剂，其特征在于，所述菌剂中各菌种的浓度相同。
3.根据权利要求2所述的协同促根抗病菌剂，其特征在于，所述菌剂中各菌种的最小浓度分别为2×108CFU/mL。
4.根据权利要求1所述协同促根抗病菌剂，其特征在于：所述菌种分别为对利福平不敏感的突变菌株。
5.根据权利要求1-4任一项所述的协同促根抗病菌剂，其特征在于，还包括载体。
6.根据权利要求5所述的协同促根抗病菌剂，其特征在于，所述载体为活性碳源强化固态载体。
7.根据权利要求6所述的协同促根抗病菌剂，其特征在于，所述活性碳源强化固态载体成分为：蚯蚓粪7-9wt%、柠条粉7-9 wt %、棕榈果串生物炭7-9 wt %、草炭25-27 wt %、棉粕13-15 wt %、蛋白胨1.0-2.0 wt %、葡萄糖0.4-0.6 wt %、七水硫酸镁0.03-0.05 wt %、余量为花生饼粉。
8.根据权利要求6或7所述协同促根抗病菌剂，其特征在于：协同促根抗病菌剂的添加量为所述活性碳源强化固态载体最大持水量的80%以上。
9.一种权利要求1所述的防治南方根结线虫的协同促根抗病菌剂的以下任一种应用：
制备抗南方根结线虫农药；
防治南方根结线虫病害。
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