CN111366547A - 一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及烟草的技术领域，特别涉及一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α‑氨基氮的检测方法。本发明的检测方法为在PH值为5.4‑5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α‑氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定稳定化合物的吸光度，通过预定的标准曲线计算得到烟草或烟草制品的萃取液中α‑氨基氮的浓度。本发明的检测方法可以填补现有没有连续流动法测定烟草或烟草制品中α‑氨基氮的检测方法的空缺。
Description
技术领域
本发明涉及烟草的技术领域，特别涉及一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法。
背景技术
烟草化学研究已经对烟叶和烟气的几千种化合物进行了定性分析，在对烟草和烟草制品中的化学成分的定量分析方面也提出了越来越多的要求，包括分析方法的更新和改进，分析效率的提高，分析手段的逐步现代化。这是卷烟稳定和发展的重要基础工作。烟草或烟草制品的化学成分对烟叶质量、卷烟感官质量等有很大影响。目前，烟草或烟草制品中已有的常规化学指标的定量分析包括总糖、还原糖、总氮、烟碱、氯化物等，很多非常规化学指标还未开展定量分析。烟草中的含氮化合物对烟草的感官评吸质量有着重要的影响，历来受到人们的重视。其中，组成蛋白质的氨基酸其氨基大都在羧基一侧的α位碳原子上，称之为α-氨基酸，常将氨基酸类的低分子含氮物质称为α-氨基氮。在发酵或醇化的烟叶中，挥发碱类和α-氨基酸量大为减少，蛋白质和氨基酸含量的增加对卷烟香气会产生不利影响。根据文献，α-氨基氮已被作为十一项指标之一用于建立云南烤烟主产区烟叶质量评价指标体系，但仅作为企业内部成果。因此对于烟草和烟草制品中α-氨基氮的准确、快速测定对卷烟制品的研发和产品质量控制有重要意义。
目前，烟草或烟草制品中α-氨基氮的测定方法未见报道。用于其他食品中α-氨基氮的检测方法主要包括：甲醛滴定法，电位滴定法，茚三酮比色法，2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)法等，这些方法操作复杂，人为或操作引起的误差较大，测定结果重现性差，效率低，无法实现批量检测。近年来有文献采用流动分析法进行测定，但未有针对烟草或烟草制品中α-氨基氮的流动分析检测报道。因烟草样品性状、性质以及基体影响的差异较大，现有的流动分析法测定α-氨基氮的适用性有待考察。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种使用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法，以填补现有没有连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法的空缺。
为达到上述目的，本发明提供以下技术方案：
一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法，所述检测方法为在PH值为5.4-5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定所述稳定化合物吸光度，通过预定的标准曲线计算得到烟草或烟草制品的萃取液中α-氨基氮的浓度，所述连续流动分析仪的检测方法如下：
1)、将烟草或烟草制品的萃取滤液输进进样管，R1溶液输进第一管道，所述烟草或烟草制品的萃取滤液与所述R1溶液混合，得到混合液1；
2)、所述混合液1经过第一线圈后，R2溶液输进第二管道，所述混合液1与所述R2溶液反应，得到反应液1；
3)、所述反应液1经过第二线圈后，R3溶液输进第三管道，所述反应液1与所述R3溶液反应，得到反应液2；
4)、所述反应液2经过第三线圈后，对所述反应液2加热，然后依次经过第四线圈、第五线圈和第六线圈后得到反应液3，所述反应液3输进检测器在570nm处测定吸光度；
5)、根据预定的标准曲线和所述烟草或烟草制品的萃取滤液的反应产物的吸光度，得到所述烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度；
其中，所述R1溶液的配制方法为250g的Brij-35溶解于1000mL水中而得；所述R2溶液的配制方法为10g的茚三酮溶解于500mL乙二醇甲醚，再加入250mL缓冲液，用水定容至1000mL而得；所述R3溶液的配制方法为0.5g的抗坏血酸溶解于100mL水中而得；所述缓冲液的配制方法为328g的无水醋酸钠溶解于700ml水中，再加入100mL纯乙酸，然后用水定容至1000mL而得。
需要说明的是，在PH值为5.4-5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定所述稳定化合物吸光度，将所述吸光度的数值代入标准曲线，通过标准曲线得到烟草或烟草制品的萃取液中α-氨基氮的浓度。
需要说明的是，所述R2溶液的用缓冲液精确配置茚三酮溶液，用于控制反应适宜的酸碱环境，更为稳定。缓冲系统对显色有影响。同一浓度的氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，不同浓度的氨基酸检测对PH要求也不相同，条件不好甚至不会显色。本发明利用醋酸钠缓冲液配置茚三酮溶液以控制反应条件为PH5.4-5.6。用乙二醇甲醚配置R2溶液的作用：1、提供反应溶液的沸点，因反应温度95℃，在海拔高的地方水已沸腾变成气体，无法保持液体状态下进行分析，加乙二醇甲醚后沸点高于100℃，保证在高海拔地区95℃也能不沸腾；2、防止微生物生成，增加试剂保存有效期。
需要说明的是，所述R3溶液的抗坏血酸用于将茚三酮还原成还原型茚三酮，再参与生成显色物质用于测定，是本发明优化后的分析条件。抗坏血酸反应温和，还原性更稳定。若使用硫酸肼做还原剂，硫酸肼还原性太强，如果加入量控制不好，会导致还原过渡，而抗坏血酸就不存在这个问题，使用抗坏血酸的基线比硫酸肼的基线更稳定。
需要说明的是，3)中，R3溶液与反应液1中的R2溶液发生氧化还原反应，将茚三酮还原成还原型茚三酮。反应液2进行加热，使得R2溶液、还原性茚三酮和烟草或烟草制品的萃取滤液中氨基氮被R2溶液氧化后生成的NH3反应生产显色物质。
作为优选，所述烟草或烟草制品的萃取滤液为预先按照YC/T 31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量，然后将已知质量的所述烟草或烟草制品与萃取液进行萃取反应，然后过滤得到烟草或烟草制品的萃取滤液；
其中，所述萃取液为1％-10％体积百分比的醋酸溶液。
更为优选，所述萃取液为5％体积百分比的醋酸溶液。所述萃取液的体积为10mL-200mL，优选为50mL。
作为优选，所述预先按照YC/T 31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量之前还包括：对所述烟草或烟草制品进行研磨过筛，所述过筛的目数为40目。本方法的烟草或烟草制品的前处理，参考了YC/T 31《烟草或烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法》中试样的制备。
作为优选，所述萃取液的体积为10mL-200mL；所述萃取时间为0.1h-24h。
更为优选，所述萃取时间为0.5h。
具体的，烟草或烟草制品的萃取滤液的具体制备方法为：
1)制备样品：如研磨样品水分含量过高，可预先在不超过40℃的温度下干燥一定时间，将样品研磨并过0.45mm筛(40目)；
2)按照YC/T 31测定样品水分质量百分含量；
3)准确称取一定量烟草或烟草制品(精确至0.1mg)，置于100mL干燥的具塞三角瓶中，加入萃取液。盖上塞子，室温下机械振荡萃取，静置后取萃取液用滤纸过滤，收集滤液用于分析。
更为优选，所述滤纸为Whatman No.40同规格滤纸，优选为Whatman No.40滤纸。
作为优选，在4)中，对所述反应液2加热的温度为95℃。
作为优选，所述烟草或烟草制品的萃取滤液的流速为0.32mL/min；所述R1溶液的流速为1.2mL/min；所述R2溶液的流速为0.8mL/min；所述R3溶液的流速为0.43mL/min。
作为优选，所述第一线圈为10匝线圈；所述第二线圈为10匝线圈；所述第三线圈为20匝线圈；所述第四线圈为20匝线圈；所述第五线圈为20匝线圈；所述第六线圈为20匝线圈。
作为优选，使用连续流动法进行检测后，根据下式计算烟草或烟草制品中α-氨基氮的含量：
式中，
c为烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度，单位毫克每毫升(mg/mL)；
V为烟草或烟草制品的萃取滤液的总体积，单位为毫升(mL)；
m为烟草或烟草制品的质量，单位为毫克mg；
M为为烟草或烟草制品的水分的质量百分数，单位为％；
其中，上式计算的α-氨基氮为以α-氨基氮干基计的α-氨基氮含量。
需要说明的是，首先，通过预定的标准曲线，得到烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度c；然后，通过以上公式计算出烟草或烟草制品中α-氨基氮的含量。
作为优选，所述预定的标准曲线的测定方法包括以下步骤：
步骤1、按照权利要求1所述的连续流动分析仪的检测方法使用连续流动分析仪在570nm测定至少5个不同浓度的工作标准溶液生成稳定化合物的吸光度，所述工作标准溶液中甘氨酸含量浓度范围大于0mg/L，小于50mg/L；
步骤2、以吸光度为横坐标、工作标准溶液中甘氨酸的浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
更为优选，工作标准溶液中甘氨酸含量浓度范围大于0mg/L，小于20mg/L。
具体的，工作标准溶液中甘氨酸含量浓度为4mg/L、8mg/L、12mg/L、16mg/L和20mg/L。
作为优选，所述工作标准溶液的配制方法为将甘氨酸溶解于水中配制而得。
更为优选，所述甘氨酸(C2H5NO2)置于真空干燥箱中一定时间，取出后保存在干燥器中冷却；甘氨酸置于真空干燥箱时间大于1h-24h，优选为大于4h；真空干燥箱温度为50℃-100℃，优选为80℃；保存在干燥器中时间大于10min，优选为大于30min。
需要说明的是，所述烟草或烟草制品的质量为0.1g-5g，优选为0.5g。
需要说明的是，所述水为蒸馏水，去离子水，或同等纯度的水。
需要说明的是，以上试剂均要求分析纯或以上试剂，标准溶液配制要求使用优级纯试剂。
需要说明的是，连续流动分析仪的运行参数为：进样清洗比为1/1；进样频率为60样品/小时。
需要说明的是，本发明用干燥后的甘氨酸，以蒸馏水为稀释剂，分别配制不同浓度的工作标准溶液，采用连续流动分析仪进行分析，在570nm处检测响应值，以目标物峰高为纵坐标(Y)，目标物浓度为横坐标(X，mg/L)，作标准曲线，得到标准曲线及其相关系数(R2为0.9995-0.9999)。将最低浓度的标准溶液稀释并进行连续流动分析，以3倍信噪比为方法的检出限(LOD)，则用该方法测定α-氨基氮含量的LOD为0.001％。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明建立了测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的连续流动分析法，旨在为进一步掌握烟草或烟草制品中化学成分的检测提供参考，为更深入的研究分析提供技术支持。连续流动分析法是通过蠕动泵将来自取样器的样品和反应所需的药品溶液泵送至反应器，并通过空气注入器将管路中的溶液分隔成间隔相等的小段，用均匀的空气泡将样品与样品分开，反应器中的加热器可以为生化反应提供准确、稳定的恒温环境，样品溶液和药品溶液在反应器中通过不同元件和管路的连接完成相应的化学反应，再进入检测器测定相应波长下的吸光度，标准样品和未知的烟草或烟草制品样品通过同样的处理和同样的环境，通过吸光度的比较，进而计算出待测样品中相应物质浓度。
本发明的检测方法能实现烟草或烟草制品中α-氨基氮的测定。本发明的方法采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成紫色化合物在570nm进行测定，吸光度与烟草或烟草制品的α-氨基氮浓度成正比，测定过程中准确控制PH值为5.4-5.6，控制反应条件为PH为5.4-5.6，对于用本系统的检测方法进行烟草和烟草制品中α-氨基氮的测定，响应值最高同时基线稳定。本发明的方法处理简单，分析速度快，重现性好，能实现批量检测。烟草或烟草制品的处理方法及连续流动分析条件优化，实现烟草或烟草制品中α-氨基氮的批量测定；对建立的分析方法进行优化与评价，保证方法的适用性、准确性和重现性。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例采用连续流动分析仪分析烟草或烟草制品中α-氨基氮的模块典型配制图。
具体实施方式
本发明的核心是建立了测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的连续流动分析法，实现了烟草或烟草制品中α-氨基氮成分的检测。
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
请参考图1，本发明实施例提供了一种用连续流动法测定烟叶样品中α-氨基氮的检测方法，包括以下步骤：
采用烘箱法(YC/T 31)进行水分测定，使用连续流动分析法测定不同烟叶样品的α-氨基氮的含量。
1)样品前处理：
将烟叶样品研磨并过0.45mm筛(40目)，并测定其水分含量。准确称取0.5g左右烟叶样品(精确至0.1mg)，置于100mL干燥的具塞三角瓶中，加入50ml 5％的醋酸溶液，盖上塞子，室温下机械振荡萃取30min，静置后取萃取液用Whatman No.40滤纸过滤，收集滤液用于分析。
2)反应试剂的配制：
缓冲液配制：称取328克无水醋酸钠溶解于700ml蒸馏水中，再加入100mL纯乙酸，然后用蒸馏水定容至1000mL。
R1溶液：Brij-35溶液：称取250gBrij-35溶解于1000mL蒸馏水中，加热搅拌直至溶解。
R2溶液：茚三酮溶液：称取10g茚三酮溶解于500mL乙二醇甲醚(CAS:109-86-4)，再加入250mL缓冲液,用蒸馏水定容至1000mL。
R3溶液：抗坏血酸溶液：称取0.5g抗坏血酸溶解于100mL蒸馏水中。
3)工作标准溶液的配制：
移取适量甘氨酸(C2H5NO2)置于80℃真空干燥箱中4h后，取出后保存在干燥器中冷却至少30min。
储备液A配制：准确称取5.36g甘氨酸(精确至0.1mg)，用蒸馏水溶解，并定容到100mL容量瓶中，α-氨基氮含量为10g/L。
储备液B配制：移取2mL储备液A到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容，α-氨基氮含量为200mg/L。
工作标准溶液配制：将储备液B用蒸馏水稀释配制5个点的工作标准溶液，得到的工作标准溶液浓度分别为4mg/L、8mg/L、12mg/L、16mg/L、20mg/L。
4)实际烟叶样品测定：
采用连续流动分析，连续流动分析仪的检测方法如下：
1)、将烟叶样品萃取滤液以0.32mL/min的流速输进进样管，R1溶液以1.2mL/min的流速输进第一管道，烟叶样品萃取滤液与R1溶液混合，得到混合液1；
2)、混合液1经过10匝玻璃线圈后，R2溶液以0.8mL/min的流速输进第二管道，混合液1与R2溶液反应，得到反应液1；
3)、反应液1经过10匝玻璃线圈后，R3溶液以0.43mL/min的流速输进第三管道，反应液1与R3溶液反应，得到反应液2；
4)、反应液2经过20匝玻璃线圈后，对反应液2加热到95℃，然后依次经过20匝玻璃线圈、20匝玻璃线圈和20匝玻璃线圈后得到反应液3，反应液3输进检测器在570nm处测定吸光度；
5)、将步骤3的5个点的工作标准溶液按照以上连续流动分析仪的测定方法得到对应的稳定化合物的吸光度，以5个点的工作标准溶液对应生产稳定化合物的吸光度为横坐标，5个点的工作标准溶液中甘氨酸的浓度为纵坐标，绘制标准曲线，标准曲线为Y＝30.966X-0.088(R2＝0.9999)，Y为烟叶样品萃取滤液中α-氨基氮的浓度值，X为吸光度值。根据标准曲线和烟草或烟草制品的萃取滤液的吸光度，得到烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮的浓度。
其中，5个点的工作标准溶液和5个不同α-氨基氮浓度的烟叶样品溶液(样品做平行样)，由570nm处检测器响应值(峰高)采用外标法定量(标准曲线的相关系数R2为0.9999)。实验前先用去离子水清洗流路15min，然后走试剂直至基线平稳才可进样。所使用的分析仪器为法国Alliance公司生产的Futura连续流动分析仪，模块配制图如图1所示。结果如表1所示。
表1烟叶中α-氨基氮测定结果
样品中α-氨基氮干基(以α-氨基氮)含量以下式计算：
式中：
c为烟叶样品萃取滤液中的α-氨基氮浓度，mg/mL；
V为烟叶样品萃取滤液的总体积，mL；
m为烟叶样品的质量，mg；
M为烟叶样品的水分质量百分数，％。
实验结束后用0.5N的HCl溶液(含0.1％Brij-35)清洗分析流路20min，再用蒸馏水清洗分析流路30min。
实施例2
本发明实施例提供了一种用连续流动法测定成品卷烟烟丝样品中α-氨基氮的检测方法，包括以下步骤：
1)样品前处理：
将成品卷烟样品中烟丝剥出，40℃温度下干燥后，研磨并过0.45mm筛(40目)，测定其水分含量。准确称取0.5g左右样品(精确至0.1mg)，置于100mL干燥的具塞三角瓶中，加入50ml 5％的醋酸溶液。盖上塞子，室温下机械振荡萃取30min，静置后取萃取液用WhatmanNo.40滤纸过滤，收集滤液用于分析。
2)反应试剂和工作标准溶液配制同实施例1。
3)实际样品测定：
采用连续流动分析，以及实施例1的方法分析工作标准溶液和5个不同α-氨基氮含量的成品卷烟烟丝样品溶液，由570nm处检测器响应值(峰高)采用外标法定量。实验前先用去离子水清洗流路15min，然后走试剂直至基线平稳才可进样。所使用的分析仪器为法国Alliance公司生产的Futura连续流动分析仪，模块配制图如图1所示。结果如表2所示。
表2成品卷烟烟丝α-氨基氮测定结果
样品中α-氨基氮干基(以α-氨基氮)含量以下式计算：
式中：
c为烟叶样品萃取滤液中的α-氨基氮浓度，mg/mL；
V为烟叶样品萃取滤液的总体积，mL；
m为烟叶样品的质量，mg；
M为烟叶样品的水分质量百分数，％。
实验结束后用0.5N的HCl溶液(含0.1％Brij-35)清洗分析流路20min，再用蒸馏水清洗分析流路30min。
从实施例1和实施例2可知，本发明的检测方法可以实现烟草或烟草制品中α-氨基氮含量快速、准确地测定，且前处理简便、快速，适合批量检测，检测效率高，检测成本低。本发明取0.5g GBW08514a青州标物样品，按低、中、高3种添加水平添加标准溶液，然后按前文所述的烟草或烟草制品样品前处理方法对烟草或烟草制品样品进行处理，每个添加水平平行测定5次，进行回收率和精密度的测定，结果可知，α-氨基氮的平均加标回收率在99.3％～102.8％，平均相对标准偏差(RSD％)小于1.2％。可以满足定量需要。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。
Claims (10)
1.一种用连续流动法测定烟草或烟草制品中α-氨基氮的检测方法，其特征在于，所述检测方法为在PH值为5.4-5.6条件下，采用茚三酮与烟草或烟草制品的α-氨基氮反应，生成稳定化合物，在570nm测定所述稳定化合物吸光度，通过预定的标准曲线计算得到烟草或烟草制品的萃取液中α-氨基氮的浓度，所述连续流动分析仪的检测方法如下：
1)、将烟草或烟草制品的萃取滤液输进进样管，R1溶液输进第一管道，所述烟草或烟草制品的萃取滤液与所述R1溶液混合，得到混合液1；
2)、所述混合液1经过第一线圈后，R2溶液输进第二管道，所述混合液1与所述R2溶液反应，得到反应液1；
3)、所述反应液1经过第二线圈后，R3溶液输进第三管道，所述反应液1与所述R3溶液反应，得到反应液2；
4)、所述反应液2经过第三线圈后，对所述反应液2加热，然后依次经过第四线圈、第五线圈和第六线圈后得到反应液3，所述反应液3输进检测器在570nm处测定吸光度；
5)、根据预定的标准曲线和所述烟草或烟草制品的萃取滤液的反应产物的吸光度，得到所述烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度；
其中，所述R1溶液的配制方法为250g的Brij-35溶解于1000mL水中得到；所述R2溶液的配制方法为10g的茚三酮溶解于500mL乙二醇甲醚，再加入250mL缓冲液，用水定容至1000mL得到；所述R3溶液的配制方法为0.5g的抗坏血酸溶解于100mL水中得到；所述缓冲液的配制方法为328g的无水醋酸钠溶解于700ml水中，再加入100mL纯乙酸，然后用水定容至1000mL得到。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述烟草或烟草制品的萃取滤液为预先按照YC/T 31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量，然后将已知质量的所述烟草或烟草制品与萃取液进行萃取反应，然后过滤得到烟草或烟草制品的萃取滤液；
其中，所述萃取液为1％-10％体积百分比的醋酸溶液。
3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述预先按照YC/T 31测定烟草或烟草制品的水分质量百分含量之前还包括：对所述烟草或烟草制品进行研磨过筛，所述过筛的目数为40目。
4.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述萃取液的体积为10mL-200mL；所述萃取时间为0.1h-24h。
5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，在4)中，对所述反应液2加热的温度为95℃。
6.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述导入烟草或烟草制品的萃取滤液的流速为0.32mL/min；所述导入R1溶液的流速为1.2mL/min；所述导入R2溶液的流速为0.8mL/min；所述导入R3溶液的流速为0.43mL/min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述第一线圈为10匝线圈；所述第二线圈为10匝线圈；所述第三线圈为20匝线圈；所述第四线圈为20匝线圈；所述第五线圈为20匝线圈；所述第六线圈为20匝线圈。
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，使用连续流动法进行检测后，根据下式计算烟草或烟草制品中α-氨基氮的含量：
式中，
c为烟草或烟草制品的萃取液中的α-氨基氮浓度，单位毫克每毫升(mg/mL)；
V为烟草或烟草制品的萃取滤液的总体积，单位为毫升(mL)；
m为烟草或烟草制品的质量，单位为毫克mg；
M为烟草或烟草制品的水分的质量百分数，单位为％；
其中，上式计算的α-氨基氮为以α-氨基氮干基计的α-氨基氮含量。
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述预定的标准曲线的测定方法包括以下步骤：
步骤1、按照权利要求1所述的连续流动分析仪的检测方法使用连续流动分析仪在570nm测定至少5个不同浓度的工作标准溶液生成稳定化合物的吸光度，所述工作标准溶液中甘氨酸浓度范围大于0mg/L，小于50mg/L；
步骤2、以吸光度为横坐标，工作标准溶液中甘氨酸的浓度为纵坐标，绘制标准曲线。
10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述工作标准溶液的配制方法为将甘氨酸溶解于水中配制而得。
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|---|---|
| CN (1) | CN111366547A (zh) |
Citations (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6057287A (en) * | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
| HK1038068A1 (en) * | 1999-11-19 | 2002-03-01 | Nikkiso Co Ltd | Flow injection analyzer and flow injection analysis method. |
| FR2908423A1 (fr) * | 2006-11-14 | 2008-05-16 | Air Liquide | Procede de fabrication de biere. |
| CN101304670A (zh) * | 2005-11-11 | 2008-11-12 | 埃德瓦多·沃特·埃特林 | 用氨基酸和/或铵盐稳定的矿质营养素的盐，含有这种盐的产品和食品补充剂及这种盐的获得方法 |
| CN101437536A (zh) * | 2006-03-23 | 2009-05-20 | 诺华有限公司 | 抗肿瘤细胞抗原抗体治疗 |
| CN101592670A (zh) * | 2008-05-29 | 2009-12-02 | Bltec韩国株式会社 | 自动分析定量测量方法及自动分析定量测量设备 |
| CN202024965U (zh) * | 2011-05-09 | 2011-11-02 | 中国海洋大学 | 一种实时在线检测海水中硝酸根离子浓度的装置 |
| CN102247009A (zh) * | 2011-07-12 | 2011-11-23 | 广东中烟工业有限责任公司 | 烟梗提取液的美拉德反应工艺 |
| CN102317247A (zh) * | 2009-02-17 | 2012-01-11 | 国立大学法人宇都宫大学 | 含氧化合物的制造方法 |
| CN102803152A (zh) * | 2009-05-29 | 2012-11-28 | H·布卢姆 | 用丙烯醛处理压舱水的方法和设备 |
| CN102905718A (zh) * | 2010-05-25 | 2013-01-30 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 纯化多肽的方法 |
| CN103487398A (zh) * | 2013-09-30 | 2014-01-01 | 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 | 一种赖氨酸发酵液的分析方法 |
| CN103558349A (zh) * | 2013-11-25 | 2014-02-05 | 国家烟草质量监督检验中心 | 一种测定烟草中糖的连续流动分析方法及其专用连续流动分析仪 |
| CN104316634A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-01-28 | 贵州中烟工业有限责任公司 | 一种卷烟主流烟气中挥发性有机酸的测定方法 |
| CN105283549A (zh) * | 2013-06-12 | 2016-01-27 | 生化学工业株式会社 | 细菌肝素前体-葡萄糖醛酸-5-差向异构酶以及使用其的多糖的制造方法 |
| CN106198477A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-12-07 | 北京宝德仪器有限公司 | 用于原子荧光光谱仪的氢化物发生装置以及发生方法 |
| TW201842333A (zh) * | 2017-04-04 | 2018-12-01 | 日商奧璐佳瑙股份有限公司 | 尿素之定量方法及分析裝置 |
-
2018
- 2018-12-26 CN CN201811604865.3A patent/CN111366547A/zh active Pending
Patent Citations (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6057287A (en) * | 1994-01-11 | 2000-05-02 | Dyax Corp. | Kallikrein-binding "Kunitz domain" proteins and analogues thereof |
| HK1038068A1 (en) * | 1999-11-19 | 2002-03-01 | Nikkiso Co Ltd | Flow injection analyzer and flow injection analysis method. |
| CN101304670A (zh) * | 2005-11-11 | 2008-11-12 | 埃德瓦多·沃特·埃特林 | 用氨基酸和/或铵盐稳定的矿质营养素的盐，含有这种盐的产品和食品补充剂及这种盐的获得方法 |
| CN101437536A (zh) * | 2006-03-23 | 2009-05-20 | 诺华有限公司 | 抗肿瘤细胞抗原抗体治疗 |
| FR2908423A1 (fr) * | 2006-11-14 | 2008-05-16 | Air Liquide | Procede de fabrication de biere. |
| CN101592670A (zh) * | 2008-05-29 | 2009-12-02 | Bltec韩国株式会社 | 自动分析定量测量方法及自动分析定量测量设备 |
| CN102317247A (zh) * | 2009-02-17 | 2012-01-11 | 国立大学法人宇都宫大学 | 含氧化合物的制造方法 |
| CN102803152A (zh) * | 2009-05-29 | 2012-11-28 | H·布卢姆 | 用丙烯醛处理压舱水的方法和设备 |
| CN102905718A (zh) * | 2010-05-25 | 2013-01-30 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 纯化多肽的方法 |
| CN202024965U (zh) * | 2011-05-09 | 2011-11-02 | 中国海洋大学 | 一种实时在线检测海水中硝酸根离子浓度的装置 |
| CN102247009A (zh) * | 2011-07-12 | 2011-11-23 | 广东中烟工业有限责任公司 | 烟梗提取液的美拉德反应工艺 |
| CN105283549A (zh) * | 2013-06-12 | 2016-01-27 | 生化学工业株式会社 | 细菌肝素前体-葡萄糖醛酸-5-差向异构酶以及使用其的多糖的制造方法 |
| CN103487398A (zh) * | 2013-09-30 | 2014-01-01 | 中粮生物化学（安徽）股份有限公司 | 一种赖氨酸发酵液的分析方法 |
| CN103558349A (zh) * | 2013-11-25 | 2014-02-05 | 国家烟草质量监督检验中心 | 一种测定烟草中糖的连续流动分析方法及其专用连续流动分析仪 |
| CN104316634A (zh) * | 2014-10-24 | 2015-01-28 | 贵州中烟工业有限责任公司 | 一种卷烟主流烟气中挥发性有机酸的测定方法 |
| CN106198477A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-12-07 | 北京宝德仪器有限公司 | 用于原子荧光光谱仪的氢化物发生装置以及发生方法 |
| TW201842333A (zh) * | 2017-04-04 | 2018-12-01 | 日商奧璐佳瑙股份有限公司 | 尿素之定量方法及分析裝置 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 夏未铭: "《动物生物化学》", 31 January 2006 * |
| 宗绪岩: "连续流动化学分析仪在发酵液在线监测上的应用", 《食品与机械》 * |
| 河南省烟草公司三门峡分公司: "《三门峡烤烟综合标准体系》", 31 July 2004 * |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20200703 |