CN111337610A - 一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚a的检测方法 - Google Patents

一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚a的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，该方法中，所测复杂环境基质为污泥，对所测复杂环境基质依次进行超声萃取、液‑液分配净化、两步固相萃取净化和制样处理得到待测样品；其中，所述超声萃取中，加入同位素净化内标，以甲醇为萃取溶剂；将得到的待测样品经高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测，得出所述雌激素、壬基酚及双酚A的浓度。该方法能实现快速、准确测定得出复杂环境基质污泥中的雌激素、壬基酚及双酚A浓度。该方法操作简便，抗基质干扰、重现性好、可靠性高。

Description

一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法
技术领域
本发明属于有害物质检测领域，尤其涉及一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法。
背景技术
近年来，环境雌激素由于具有内分泌干扰效应引起了国内外学者的普遍关注，主要有人体及动物自然产生的内源性雌激素如雌酮(即Estrone，E1)、17β-雌二醇(即17β-Estradiol,E2)、雌三醇(即Estradiol,E3)等，合成的外源性雌激素如17α-乙炔雌二醇(即17a-Ethinylestradiol，EE2)，烷基酚类如壬基酚(即Nonylphenol，NP)、双酚A(即Bisphenol A，BPA)等。
这些污染物会随着粪尿排放进入污水处理系统或农田土壤中，研究调查表明现行的污水处理工艺不能对环境雌激素进行有效的去除，部分污染物会随着污水排放进入环境，还有一部分由于环境雌激素有较高的亲脂特性而易于与活性污泥相结合，最终伴随污泥脱水、填埋、堆肥、焚烧等进入环境水体，对环境及生态系统造成潜在威胁。因此测定污泥中雌激素的含量，对污水处理系统中雌激素的控制和生态风险评价，具有重要意义。
目前针对环境雌激素的检测多集中于地表水、沉积物、污水出水等，而对于污染严重的污泥样品研究的较少，主要是因为其基质复杂，干扰严重，分析前处理难度远大于对水体中雌激素的检测，如何高效地从污泥样品中提取雌激素成为了痕量雌激素的分析瓶颈。
在污泥的环境雌激素的常用萃取方法中，单独采用快速溶剂萃取法或超声波萃取法等具有分析时间短、有毒溶剂使用量少、萃取效率高等优点，当丙酮或者含有丙酮的混合溶剂作为常用的萃取溶剂时，虽然萃取效率高，但由于选择性宽泛导致萃取液基质背景复杂，大大增加后续富集净化难度。在富集净化方法中，发展最成熟、运用最广泛的是固相萃取技术(SPE)，操作简单、重复性好、易于实现自动化等优点，但是对基质复杂的污泥样品来说，仅通过一步净化，很难最大程度的降低背景干扰。近年来，雌激素的仪器检测技术有了很大的提高，如气相色谱—质谱联用(GC/MS)、气相色谱—串联质谱联用(GC-MS/MS)、液相色谱—质谱联用(LC/MS)、液相色谱—串联质谱联用(LC-MS/MS)等，具有较高的灵敏度和精确度，主要以外标法进行定量测定，或者多个化合物使用一个内标定量测定，但是，灵敏度、选择性、和准确度远不如同位素稀释法。同位素稀释法作为复杂基质中痕量组分测定的常用方法，能有效地减小或消除背景干扰，具有测量范围广、灵敏度高、准确度好等特点，目前已被广泛应用于食品、生物样品、无机样品、环境等各种复杂基质的痕量分析，当每个目标化合物用其对应的同位素内标定量，能最有效的减小或消除背景干扰，准确度和选择性最好。因此，建立回收率高、重现性好、精确度及精密度高的污泥中痕量雌激素分析方法，成为研究的关键。
发明内容
基于现有技术所存在的问题，本发明的目的是提供一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，能解决现有检测方法用于复杂环境基质污泥样品检测时，因污泥基质复杂且雌激素痕量存在出现的背景干扰大准确度不高的问题。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
本发明实施方式提供一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，该方法中，所测复杂环境基质为污泥，对所测复杂环境基质依次进行超声萃取、液-液分配净化、两步固相萃取净化和制样处理得到待测样品；其中，所述超声萃取中，加入同位素净化内标，以甲醇为萃取溶剂；
将得到的待测样品经高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测，得出所述雌激素、壬基酚及双酚A的浓度。
由上述本发明提供的技术方案可以看出，本发明实施例提供的复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，其有益效果为：
通过先将所测复杂环境基质的污泥依次进行超声萃取、液-液分配净化、两步固相萃取净化和制样处理，由于超声萃取中，加入同位素净化内标，并以甲醇为萃取溶剂，这样通过甲醇提取、液-液分配净化、两步固相萃取净化、配合同位素稀释法，最大限度的去除了背景干扰，保证了测量的抗干扰性能，能提升测量的准确性，后续配合高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用进行测得，实现了快速、准确测定得出复杂环境基质污泥中的雌激素、壬基酚及双酚A浓度。该方法操作简便，抗基质干扰、重现性好、可靠性高。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域的普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他附图。
图1为复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法的流程图；
图2为本发明实施例提供的检测方法验证用的0.5ng/mL标准溶液的色谱图；其中，(a)为雌酮的0.5ng/mL标准溶液的色谱图；(b)为雌酮对应的同位素定量内标雌二醇-13C6的50ng/mL标准溶液的色谱图；(c)为雌二醇的0.5ng/mL标准溶液的色谱图；(d)为雌二醇对应的同位素定量内标雌二醇-13C6的50ng/mL标准溶液的色谱图；(e)为雌三醇的0.5ng/mL标准溶液的色谱图；(f)为雌三醇对应的同位素定量内标雌三醇-d2的50ng/mL标准溶液的色谱图；(g)为炔雌醇的0.5ng/mL标准溶液的色谱图；(h)为炔雌醇对应的同位素定量内标炔雌醇-13C2的50ng/mL标准溶液的色谱图；(i)为双酚A的0.5ng/mL标准溶液的色谱图；(j)为双酚A对应的同位素定量内标双酚A-d16的50ng/mL标准溶液的色谱图；(k)为4-壬基酚的0.5ng/mL标准溶液的色谱图；(l)为4-壬基酚对应的同位素定量内标4-壬基酚-d4的50ng/mL标准溶液的色谱图；(m)为进样内标炔雌醇-d4的50ng/mL标准溶液的色谱图；
图3为本发明实施例提供的检测方法验证用雌激素、壬基酚、双酚A的标准曲线示意图。
具体实施方式
下面结合本发明的具体内容，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。本发明实施例中未作详细描述的内容属于本领域专业技术人员公知的现有技术。
参见图1，本发明实施例提供一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，该方法中，所测复杂环境基质为污泥，对所测复杂环境基质依次进行超声萃取、液-液分配净化、两步固相萃取净化和制样处理得到待测样品；其中，所述超声萃取中，加入同位素净化内标，以甲醇为萃取溶剂；
将得到的待测样品经高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行同检测，得出所述雌激素、壬基酚及双酚A的浓度。
参见图1，上述方法中，对所测复杂环境基质依次进行超声萃取、液-液分配净化、两步固相萃取净化和制样处理得到待测样品具体包括：
将采集的污泥样品进行冷冻干燥、研磨、过筛，加入同位素净化内标，以甲醇为萃取溶剂，超声萃取污泥中的雌激素、壬基酚和双酚A得到萃取液；
将所述萃取液经旋转蒸发至干，乙腈转溶，加入正己烷振荡后静置弃去正己烷，留下乙腈相，完成液-液分配净化；
将所述乙腈相旋转蒸发至干，用正己烷与二氯甲烷的混合液溶解后，过弗罗里硅藻土固相萃取小柱，再用第一混合液和乙酸乙酯洗脱得到第一洗脱液，继续用甲醇洗脱得到第二洗脱液，完成第一步固相萃取净化；所述第一混合液是由正己烷和丙酮按4:1体积比混合形成的混合液；
将所述第一洗脱液旋转蒸发并用甲醇转溶，加100ml水过C18固相萃取小柱，分别用甲醇和第二混合液洗脱得到第三洗脱液，完成第二步固相萃取净化；所述第二混合溶液是由正己烷和二氯甲烷按4:1体积比混合形成的混合液；
将所述第二洗脱液与第三洗脱液经氮气吹干，1ml甲醇溶解，加入同位素进样内标，涡旋冷藏待用；根据检测的目标物选择对应的待测样品：所述第二洗脱液作为检测雌三醇的待测样品；所述第三洗脱液作为检测雌酮、17β-雌二醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚和双酚A的待测样品；所述第二洗脱液和第三洗脱液的混合洗脱液作为测试所有目标物的待测样品。
上述方法在具体检测时，可根据分析目标物的需要选择对应的待侧样品，如：若只测试底泥中雌三醇，则弃去第一洗脱液，不开展后续净化，只收集第二洗脱液作为待侧样品，定容检测即可；若只检测雌酮、17β-雌二醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚和双酚A，则收集第一洗脱液，并开展后续净化制样，得到第三洗脱液进行检测，而不用收集第二洗脱液；若检测所有目标物，则第二洗脱液和第三洗脱液都收集并混合后作为待侧样品。这样使得本发明的方法具有很好的灵活性，能根据检测目标物的不同，选择不同的待侧样品，简化检测流程。
上述方法中，所述第二洗脱液与第三洗脱液经氮气吹干为：将第二洗脱液、第三洗脱液分别单独经氮气吹干；或者将第二洗脱液与第三洗脱液混合后经氮气吹干。
上述方法中，将得到的待测样品经高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测为：
采用岛津公司的LC-20ADXR高效液相色谱串联AB SCIEX公司的API3200 Trap型质谱对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测；
色谱柱为：Waters XBridge C18，3.5μm，3.0×150mm；
流动相梯度：分别采用体积比为0.025％氨水的甲醇溶液和体积比0.025％氨水的水溶液为流动相，所述甲醇溶液的比例在0～3min内由30％升到100％，维持3min，7min内降至30％，维持6min平衡。
上述方法还包括：用以下方式中的至少一种验证检测结果的准确性：
方式一、通过将分析数据与绘制的目标物标准曲线进行比较，换算得到待测样品中的雌激素、壬基酚及双酚A的浓度，将得到的浓度与检测待测的浓度比较来验证检测结果的准确性；
方式二：采用单点法测定净化内标回收率，以净化内标与进样标的峰面积比值为纵坐标，净化内标的浓度为横坐标，单点法计算净化内标回收率，根据得出的回收率验证检测结果的准确性。
上述方式一中，绘制的目标物标准曲线为：配制各种雌激素、壬基酚、双酚A系列浓度的标准溶液，并加入对应的净化同位素内标及进样内标，采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述标准溶液进行分析，以目标物与对应净化内标的峰面积比值为纵坐标，目标物的浓度为横坐标，得到目标物标准曲线。绘制目标物标准曲线可以是每次检测都进行测量绘制，这样验证结果更准确，也可以是绘制一次多次使用，这样操作更简单、方便。
本发明的检测方法由于在样品的前处理中，采用甲醇为萃取溶剂，可降低对非极性化合物的提取，减少基质干扰；采用超声萃取，操作简便；通过在乙腈复溶的萃取液中加入正己烷液-液分配净化可除去乙腈中的脂类物质；复合采用弗罗里硅藻土固相萃取小柱和C18固相萃取小柱对萃取液进一步净化，可排除极性大的化合物而保留中等极性的目标物；通过采用同位素稀释法测定，可进一步降低基质效应，确保测定结果准确；还可以根据测试需求选择不同的分析流程分析样品。本发明方法能实现对复杂环境基质样品进行雌激素及壬基酚、双酚A准确测定，是一种抗基质干扰、重现性好、可靠性高、操作简便，能实现快速对复杂环境基质中的雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚、双酚A进行定量测定的方法。
下面对本发明实施例具体作进一步地详细描述。
本发明实施例提供一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，能检测复杂环境样品中痕量雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚、双酚A的浓度。该方法将所测复杂环境基质经前处理得到待测样品，经高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测，得出所述雌激素、壬基酚及双酚A的浓度。
参见图1，该方法具体包括以下步骤：
步骤1，采集污泥样品并进行前处理：
取经冷冻干燥、研磨过筛的1g污泥样品，加入50ng净化内标，震荡摇匀后静置30min；向上述样品中加入20ml甲醇40℃超声提取20min，在3500rpm下离心5min，重复两次，合并上清液；将萃取液旋转蒸发至干，用5ml乙腈复溶，加入10ml正己烷，涡旋振荡1min，静置除去正己烷，重复两次；弗罗里硅藻土固相萃取小柱，依次用6ml正己烷，6ml正己烷和二氯甲烷的混合溶液(按体积比3:1混合)活化；乙腈相旋转蒸发至干后，用正己烷：二氯甲烷(3:1)复溶，过弗罗里硅藻土柱，后用6ml正己烷和二氯甲烷的混合溶液(按体积比3:1混合)清洗小柱，依次用6ml正己烷和丙酮的混合溶液(按体积比4:1混合)和6ml乙酸乙酯洗脱得到第一洗脱液，之后用6ml甲醇继续洗脱得到第二洗脱液；C18固相萃取柱依次经5ml正己烷、5ml二氯甲烷、5ml甲醇净化，抽干柱子后，用5ml甲醇、10ml超纯水平衡，流速为1ml/min；将第一洗脱液旋转蒸发至干，5ml甲醇复溶，加入100ml蒸馏水后混匀，过C18固相萃取柱富集净化，流速为5ml/min，上样完成后，用10ml甲醇水溶液(按体积比1:4混合)清洗固相萃取小柱，真空抽干C18柱1h，尽可能的除去水分，分别用3ml甲醇、5ml二氯己烷和正己烷的混合溶液(按体积比1:4混合)洗脱，洗脱液收集于10ml玻璃离心管中，流速为1ml/min，得到第三洗脱液；第二洗脱液与第三洗脱液经氮气吹干后(两者可以是分别经氮气吹干，也可以是两者混合后经氮气吹干)，加入1ml甲醇，再加入50ng进样内标，涡旋混匀后过0.22μm膜，冷藏待测；第三洗脱液用于雌酮、17β-雌二醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚、双酚A测定，第二洗脱液用于雌三醇定量测定，混合洗脱液则测试全部的目标物。具体可根据分析检测目标物的要求来选择对应的待侧样品，若只检测底泥中雌三醇则弃去第一洗脱液不开展后续净化，只收集第二洗脱液并定容测试；若检测雌酮、17β-雌二醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚和双酚A，则收集第一洗脱液并开展后续净化制样得到第三洗脱液，进行检测，而不用收集第二洗脱液；若检测所有目标物，则对第二洗脱液和第三洗脱液均进行收集并混合后，作为待侧样品进行检测。
步骤2，利用高效液相色谱串联三重四级杆质谱测定待测样品中的环境雌激素(即待测量的目标物)浓度；
色谱柱：Waters XBridge C18，3.5μm，3.0×150mm；温度：30℃；
梯度洗脱：采用含体积比为0.025％氨水的甲醇溶液和体积比0.025％氨水的水溶液为流动相，所述甲醇溶液的比例在3min内由30％升至100％，维持3min，7min降到30％，维持6min，流速为0.35ml/min。
上述方法对所测复杂环境基质样品的前处理中，由于采用了同位素内标稀释法，不同目标物采用性质相近或一致的内标作为净化内标，样品前处理过程中可准确弥补目标物的损失，确保检测结果准确，同时使用进样内标，能自动修正仪器测定造成的误差。内标参数见表1。
表1为同位素内标法参数
Figure BDA0002415778780000071
进一步的，上述方法在测得目标物浓度后，还可以通过以下方式对测量结果进行验证，包括：
绘制标准曲线：标准曲线以目标物与净化内标的面积比值为纵坐标，目标物浓度为横坐标，绘制标准曲线计算样品浓度(参见图3)，进而验证上述方法的检测结果是否准确；
净化内标回收率计算：净化内标回收率测定采用单点校正计算，比较样品与标准溶液中净化内标与进样内标的比值，计算回收率，通过回收率验证上述方法的检测结果是否准确。
本发明方法的回收率与方法检出限如表2所示。
表2为本发明方法的回收率与方法检出限
Figure BDA0002415778780000072
Figure BDA0002415778780000081
注：表2中目标物加标量为低(5ng)、中(250ng)和高(500ng)三个不同量，每个加标量做6个平行样，对应的目标物回收率和净化内标回收率都均为6个样品的平均值。
Figure BDA0002415778780000082
实施例
本实施例为利用本发明检测方法对污水处理厂污泥中痕量雌酮、17β-雌二醇、雌三醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚、双酚A进行检测的实施例：
对采集好的污水处理厂污泥样品进行冷冻干燥、研磨过筛，取1g样品，加入50ng净化内标，以20ml甲醇40℃进行超声提取20min，在3500rpm下离心5min，重复两次，合并上清液；将萃取液旋转蒸发至干，用5ml色谱纯乙腈复溶，转移至50ml刻度离心管，加入10ml正己烷，涡旋振荡1min，静置除去正己烷，重复两次；弗罗里硅藻土固相萃取小柱，依次用6ml正己烷，6ml正己烷和二氯甲烷的混合溶液(按体积比3:1混合)活化，流速为1ml/min；乙腈相旋转蒸发至干后，用正己烷和二氯甲烷的混合溶液(按体积比3:1混合)复溶，过弗罗里硅藻土柱，后用6ml正己烷和二氯甲烷的混合溶液(按体积比3:1混合)清洗小柱，依次用6ml正己烷和丙酮的混合溶液(按体积比4:1混合)和6ml乙酸乙酯洗脱，流速为1ml/min得到第一洗脱液，之后用6ml甲醇继续洗脱得到第二洗脱液；C18固相萃取柱依次经5ml正己烷、5ml二氯甲烷、5ml甲醇净化，抽干柱子后，用5ml甲醇、10ml超纯水平衡，流速为1ml/min；将第一洗脱液旋转蒸发至干，5ml甲醇复溶，加入100ml蒸馏水后混匀，过C18固相萃取柱富集净化，流速为5ml/min，上样完成后，用10ml甲醇水溶液(按体积比1:4混合)溶液清洗固相萃取小柱，真空抽干C18柱1h，尽可能的除去水分，分别用3ml甲醇、5ml二氯己烷和正己烷的混合溶液(按体积比1:4混合)洗脱，洗脱液收集于10ml玻璃离心管中，流速为1ml/min，得到第三洗脱液；第二洗脱液与第三洗脱液混合后经氮气吹干，加入1ml甲醇，再加入50ng进样内标，涡旋混匀后过0.22μm膜，冷藏待用；
利用高效液相色谱串联三重四级杆质谱测定上述待测样品中的雌激素及壬基酚、双酚A；离子源：电喷雾离子源(ESI)，负离子模式检测，喷雾电压为-4500V，干燥气温度500℃，气帘气压力20psi，碰撞气压力5psi，辅助气1压力40psi，辅助气2压力50psi，扫描模式为多重反应监测；
实际污泥样品中雌激素及壬基酚、双酚A测试结果见表3。
表3实际污泥样品中雌激素及壬基酚、双酚A含量(ng/g)及净化内标回收率
Figure BDA0002415778780000091
注：表3中n.d.表示未检出。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书的保护范围为准。

Claims (6)

1.一种复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，其特征在于，该方法中，所测复杂环境基质为污泥，对所测复杂环境基质依次进行超声萃取、液-液分配净化、两步固相萃取净化和制样处理得到待测样品；其中，所述超声萃取中，加入同位素净化内标，以甲醇为萃取溶剂；将得到的待测样品经高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测，得出所述雌激素、壬基酚及双酚A的浓度。
2.根据权利要求1所述的复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，其特征在于，所述方法中，对所测复杂环境基质依次进行超声萃取、液-液分配净化、两步固相萃取净化和制样处理得到待测样品具体包括：
将采集的污泥样品进行冷冻干燥、研磨、过筛，加入同位素净化内标，以甲醇为萃取溶剂，超声萃取污泥中的雌激素、壬基酚和双酚A得到萃取液；
将所述萃取液经旋转蒸发至干，乙腈转溶，加入正己烷振荡后静置弃去正己烷，留下乙腈相，完成液-液分配净化；
将所述乙腈相旋转蒸发至干，再用正己烷与二氯甲烷的混合液溶解后，过弗罗里硅藻土固相萃取小柱，用第一混合液和乙酸乙酯洗脱得到第一洗脱液，继续用甲醇洗脱得到第二洗脱液，完成第一步固相萃取净化；所述第一混合液是由正己烷和丙酮按4:1体积比混合形成的混合液；
将所述第一洗脱液旋转蒸发并用甲醇转溶，加100ml水过C18固相萃取小柱，分别用甲醇和第二混合液洗脱得到第三洗脱液，完成第二步固相萃取净化；所述第二混合溶液是由正己烷和二氯甲烷按4:1混合形成的混合液；
将所述第二洗脱液与第三洗脱液经氮气吹干，1ml甲醇溶解，加入同位素进样内标，涡旋冷藏待用；根据检测的目标物选择对应的待测样品：所述第二洗脱液作为检测雌三醇的待测样品；所述第三洗脱液作为检测雌酮、17β-雌二醇、17α-乙炔雌二醇、壬基酚和双酚A的待测样品；所述第二洗脱液和第三洗脱液的混合洗脱液作为测试所有目标物的待测样品。
3.根据权利要求2所述的复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，其特征在于，所述方法中，所述第二洗脱液与第三洗脱液经氮气吹干为：将所述第二洗脱液、所述第三洗脱液分别单独经氮气吹干；或者将所述第二洗脱液与第三洗脱液混合后经氮气吹干。
4.根据权利要求1至3任一项所述的复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，其特征在于，所述方法中，将得到的待测样品经高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测为：
采用岛津公司的LC-20ADXR高效液相色谱串联AB SCIEX公司的API3200 Trap型质谱对所述待测样品中的痕量雌激素、壬基酚及双酚A进行检测；
色谱柱为：Waters XBridge C18，3.0×150mm，3.5μm dp；
流动相梯度：分别采用体积比为0.025％氨水的甲醇溶液和体积比0.025％氨水的水溶液为流动相，所述甲醇溶液的比例在0～3min内由30％升到100％，维持3min，7min内降至30％，维持6min平衡。
5.根据权利要求1至3任一项所述的复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，其特征在于，所述方法还包括：用以下方式中的至少一种验证检测结果的准确性：
方式一、通过将分析数据与绘制的目标物标准曲线进行比较，换算得到待测样品中的雌激素、壬基酚及双酚A的浓度，将得到的浓度与检测待测的浓度比较来验证检测结果的准确性；
方式二：采用单点法测定净化内标回收率，以净化内标与进样标的峰面积比值为纵坐标，净化内标的浓度为横坐标，单点法计算净化内标回收率，根据得出的回收率验证检测结果的准确性。
6.根据权利要求5所述的复杂环境基质中痕量雌激素、壬基酚及双酚A的检测方法，其特征在于，所述方式一中，绘制的目标物标准曲线为：
配制各种雌激素、壬基酚、双酚A系列浓度的标准溶液，并加入对应的净化同位素内标及进样内标，采用高效液相色谱串联三重四级杆质谱联用对所述标准溶液进行分析，以目标物与对应净化内标的峰面积比值为纵坐标，目标物的浓度为横坐标，得到目标物标准曲线。
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