CN111304039A - 一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒及其制备方法。本发明属于果酒加工技术领域。本发明解决了传统浸泡方法时间不易控制，造成果酒的口味酸涩，口感较差以及缺少具有抗氧化等保健功效的果酒的技术问题。产品是用酶解后多依果和发酵后黄芪制成的。制备方法为：一、选果；二、制备多依果酶解液；三、制备黄芪多糖发酵液；四、将多依果酶解液和黄芪多糖发酵液混合，然后接入酵母菌进行发酵，获得黄芪多依果酒；五、离心过滤去除果渣，再除菌、除杂，得到具有抗氧化功能的黄芪多依果酒。本发明将黄芪多糖发酵液和多依果酶解液一起进行发酵，制成富含黄芪多糖的多依果酒，产品澄清、透亮，具有提高免疫力、抗氧化等功效。

Description

一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒及其制备方法
技术领域
本发明属于果酒加工技术领域，具体涉及一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒及其制备方法。
背景技术
多依果(Docynia delavayi)又名栘依果、酸苹果、酸木瓜、楂子，是云南栘的果实，其味酸中带涩，涩中带甜，是一种具有药食兼用价值的经济植物。在我国主要分布在云南、四川、贵州，台湾也有少数分布。野生的多依果形似酸梨，乒乓球大小，成熟后果青黄色，偶尔泛橘红色。多依果的总酸含量为3.9％，总糖为16.1％，粗纤维为18.56％；果实富含单宁，也富含氨基酸，其中天冬氨酸和脯氨酸含量高；并且还富含植物多酚、矿质元素及丰富、维生素E和不饱和脂肪酸，具有抗氧化、舒筋活血、调理肠道、消除便秘、和脾燥湿、舒肝止痛等功效。
多依果硬难嚼，味酸涩，生吃难咽。当地一般会加入盐、辣椒、白糖等腌制凉拌后吃，或舂碎拌以各种调料吃。除了吃鲜果，多依果还可以放泡菜坛中腌着吃，也可以切片晒干了当干果吃，也可蜜饯制成果脯。但是除了直接食用和简单加工外，多依果还适合酿酒。
黄芪是来自于豆科植物膜荚黄芪或蒙古黄芪的干燥根，是临床常用的中药。研究发现黄芪的主要成分为多糖类、黄酮类、皂苷等物质，这些成分大部分是黄芪发挥药效作用的物质基础。其中黄芪多糖是豆科植物蒙古黄芪或膜荚黄芪的干燥根经提取、浓缩、纯化而成的水溶性杂多糖，是黄芪药理作用中起决定性因素的一类大分子物质，可作为免疫促进剂或调节剂，同时具有抗病毒、抗肿瘤、抗衰老、抗辐射、抗应激、抗氧化等作用。
目前关于黄芪多糖提取的传统方法主要有水溶醇沉法，碱浸提法，碱醇提法，酶法提取等，以上方法存在提取率低、稳定性差、纯化难度大等问题；采用现代提取方法主要有微波提取法，超声提取法等，虽然可以明显提高提取率，但是所需设备较为复杂，大规模使用受到限制。
目前市场上大多数多依果酒为甜酒，采用酒精浸泡加糖工艺制备，而发酵型多依果酒研究较少。但是采用浸泡方法制备多依果酒，由于泡制时间不易把握，经常出现泡制时间短不能充分提取其营养成分，或者由于泡制时间过长，破坏了多依原有的营养成分；并且也可能多依果有机酸融入酒精中的浓度过高，容易造成果酒的口味酸涩，口感较差。此外，目前果酒产品大部分是纯果酒、不同水果混合的果酒，较少有见到将药食两用的中药材和水果混合发酵成为果酒的。
发明内容
本发明解决了传统浸泡方法时间不易控制，造成果酒的口味酸涩，口感较差以及缺少具有抗氧化等保健功效的果酒的技术问题，而提供了一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒及其制备方法。
本发明的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒是用酶解后多依果和发酵后黄芪制成的。
本发明的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法具体步骤如下：
一、选择成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果；
二、将多依果打浆得到多依果浆后，加入果胶酶进行酶解，获得多依果酶解液；
三、制备黄芪多糖培养基，向黄芪多糖培养基中接入乳酸菌进行发酵，获得黄芪多糖发酵液；
四、将步骤二获得的多依果酶解液和步骤三获得的黄芪多糖发酵液混合，得到混合液，向混合液中接入酵母菌进行发酵，获得黄芪多依果酒；
五、将步骤四获得的黄芪多依果酒经离心过滤去除果渣，再除菌、除杂，最终得到具有抗氧化功能的黄芪多依果酒。
进一步限定，步骤二所述的多依果浆的含糖度为12％～15％。
进一步限定，步骤二所述的果胶酶占多依果浆的质量分数为0.2％～0.4％。
进一步限定，步骤二所述的酶解温度为40℃～50℃，酶解时间为2h～3h。
进一步限定，步骤三所述的黄芪多糖培养基按以下步骤进行制备：按质量分数将蛋白胨1％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、磷酸二氢钾0.2％、柠檬酸三胺0.2％、黄芪粉8％和余量的蒸馏水混合，在121℃条件下，灭菌20min。
进一步限定，所述的黄芪粉是将黄芪经低温超微粉碎得到的，所述低温温度为-40℃。
进一步限定，步骤三所述的乳酸菌为植物乳杆菌CICC 24258，接种量按体积分数为5％～10％。
进一步限定，步骤三所述的发酵过程为在37℃恒温和100r/min～150r/min条件下发酵48h～72h。
进一步限定，步骤四所述的混合液中多依果酶解液黄芪多糖发酵液的体积比为(3～5):1。
进一步限定，步骤四所述的酵母菌为酿酒酵母CICC 32891，接种量按体积分数为5％～8％。
进一步限定，步骤四所述的发酵过程为在25℃～35℃温度下发酵6～8天，每24h搅拌20min，搅拌速率为100r/min，发酵至酒精度8％～12％。
本发明中黄芪粉采用低温超微粉碎，可以最大程度的实现植物细胞的破壁，使药材植物细胞中有效成分充分释放，经微生物发酵后可提高多糖的得率，增强药效。发酵黄芪过程中，微生物可以转化黄芪中的纤维、糖类和蛋白质等成分，同时可以使黄芪细胞破壁，促进有效成分溶出使多糖提取率提高。添加乳酸菌发酵的黄芪多糖发酵液，不仅黄芪的多糖产率高，而且省去了黄芪多糖的提取、干燥等步骤，节省了生产成本。
本发明将黄芪多糖发酵液和多依果酶解液一起进行发酵，不仅能够减少熬制黄芪的麻烦，还能掩盖黄芪的特殊气味，制成富含黄芪多糖的多依果酒，产品澄清、透亮，有特有的中草药香；富含丰富的风味物质，并且保留多依果原有的营养成分，具有提高免疫力、抗氧化等功效。而且可以使黄芪和多依果共同发挥其各自的保健优势，实现优势互补，达到显著的抗氧化保健效果，拓宽多依果酒的消费人群。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式中的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法如下：
一、选择成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果；
其中所述选果过程为：将成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果以3t/h的速度均匀地将多依果由皮带输送到洗果槽，使多依果在洗果槽中随水波振动到毛刷洗果池进行清洗，并除去泥沙和杂质，然后经链板提升机传送至刷洗机，并用水喷淋，最后传送至选果台。在选果台上随着果子的滚动，将滚动过来的霉烂、变质果拣出；
二、将步骤一选出的多依果在打浆机中打浆，使果肉与果核分离打浆去核，获得多依果浆后，加入质量分数为0.2％的果胶酶，在温度40℃下酶解2h，然后煮沸15min杀灭酶活性及杀菌，冷却后，得多依果酶解液；其中所述的多依果浆的含糖度为12％；
三、制备黄芪多糖培养基，向黄芪多糖培养基中接入体积分数为5％的植物乳杆菌CICC 24258进行发酵，在37℃恒温和100r/min条件下发酵48h，过滤后获得黄芪多糖发酵液；所述的黄芪多糖发酵液经测定其多糖得率可达21.35％；
所述的黄芪多糖培养基按以下步骤进行制备：按质量分数将蛋白胨1％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、磷酸二氢钾0.2％、柠檬酸三胺0.2％、黄芪粉8％和余量的蒸馏水混合，在121℃条件下，灭菌20min；其中所述的黄芪粉是将黄芪经低温超微粉碎得到的，所述低温温度为-40℃；
其中所述的植物乳杆菌CICC 24258购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造白酒；
该植物乳杆菌CICC 24258的制备方法为：将植物乳杆菌CICC 24258接入MRS培养基中，37℃静置培养24后，4000r/min离心10min取菌体，并用生理盐水重悬菌体；其中所述的MRS培养基配方为：葡萄糖20g、蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、磷酸氢二钾2g、柠檬酸二铵2g、乙酸钠2g、吐温801g、无水硫酸镁0.2g、硫酸锰0.05g、蒸馏水1L，pH 6.2-6.4，121℃，20min灭菌；
四、将步骤二获得的多依果酶解液和步骤三获得的黄芪多糖发酵液按体积比3:1混合，得到混合液，向混合液中接入体积分数为5％的酿酒酵母CICC 32891并输送至酒精发酵罐进行发酵，在25℃温度下发酵6天，第一天敞口发酵，之后封口发酵，每24h搅拌20min，搅拌速率为100r/min，发酵至酒精度10％，获得黄芪多依果酒；
所述的酿酒酵母CICC 32891购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造水果酒。
该酿酒酵母CICC 32891的制备方法为：将酿酒酵母CICC 32891接入麦芽汁培养基中，30℃静置培养24后，4000r/min离心10min取菌体，并用生理盐水重悬菌体；其中所述的麦芽汁培养基制备方法：将麦芽粉碎后得麦芽粉，按质量比加4倍的水于60℃保温糖化4h，不断搅拌后取一滴糖化液和碘液反应，碘成色反应为无色证明糖化完成；将糖化液用纱布过滤，去渣后煮沸滤液，再过滤即得麦芽汁，121℃，20min灭菌；
五、将步骤四获得的黄芪多依果酒经离心过滤去除果渣等固形物，再以300目板框压滤去除杂质，最后用200nm的陶瓷膜过滤除菌、除杂，再除菌、除杂，最终得到具有抗氧化功能的黄芪多依果酒。
具体实施方式二：本实施方式中的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法如下：
一、选择成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果；
其中所述选果过程为：将成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果以3t/h的速度均匀地将多依果由皮带输送到洗果槽，使多依果在洗果槽中随水波振动到毛刷洗果池进行清洗，并除去泥沙和杂质，然后经链板提升机传送至刷洗机，并用水喷淋，最后传送至选果台。在选果台上随着果子的滚动，将滚动过来的霉烂、变质果拣出；
二、将步骤一选出的多依果在打浆机中打浆，使果肉与果核分离打浆去核，获得多依果浆后，加入质量分数为0.3％的果胶酶，在温度45℃下酶解2.5h，然后煮沸15min杀灭酶活性及杀菌，冷却后，得多依果酶解液；其中所述的多依果浆的含糖度为12％；
三、制备黄芪多糖培养基，向黄芪多糖培养基中接入体积分数为5％的植物乳杆菌CICC 24258进行发酵，在37℃恒温和150r/min条件下发酵60h，过滤后获得黄芪多糖发酵液；所述的黄芪多糖发酵液经测定其多糖得率可达22.68％；
所述的黄芪多糖培养基按以下步骤进行制备：按质量分数将蛋白胨1％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、磷酸二氢钾0.2％、柠檬酸三胺0.2％、黄芪粉8％和余量的蒸馏水混合，在121℃条件下，灭菌20min；其中所述的黄芪粉是将黄芪经低温超微粉碎得到的，所述低温温度为-40℃；
其中所述的植物乳杆菌CICC 24258购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造白酒；
四、将步骤二获得的多依果酶解液和步骤三获得的黄芪多糖发酵液按体积比3:1混合，得到混合液，向混合液中接入体积分数为8％的酿酒酵母CICC 32891并输送至酒精发酵罐进行发酵，在25℃温度下发酵6天，第一天敞口发酵，之后封口发酵，每24h搅拌20min，搅拌速率为100r/min，发酵至酒精度10％，获得黄芪多依果酒；
所述的酿酒酵母CICC 32891购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造水果酒。
五、将步骤四获得的黄芪多依果酒经离心过滤去除果渣等固形物，再以300目板框压滤去除杂质，最后用200nm的陶瓷膜过滤除菌、除杂，再除菌、除杂，最终得到具有抗氧化功能的黄芪多依果酒。
具体实施方式三：本实施方式中的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法如下：
一、选择成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果；
其中所述选果过程为：将成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果以3t/h的速度均匀地将多依果由皮带输送到洗果槽，使多依果在洗果槽中随水波振动到毛刷洗果池进行清洗，并除去泥沙和杂质，然后经链板提升机传送至刷洗机，并用水喷淋，最后传送至选果台。在选果台上随着果子的滚动，将滚动过来的霉烂、变质果拣出；
二、将步骤一选出的多依果在打浆机中打浆，使果肉与果核分离打浆去核，获得多依果浆后，加入质量分数为0.4％的果胶酶，在温度50℃下酶解3h，然后煮沸15min杀灭酶活性及杀菌，冷却后，得多依果酶解液；其中所述的多依果浆的含糖度为12％；
三、制备黄芪多糖培养基，向黄芪多糖培养基中接入体积分数为10％的植物乳杆菌CICC 24258进行发酵，在37℃恒温和100r/min条件下发酵72h，过滤后获得黄芪多糖发酵液；所述的黄芪多糖发酵液经测定其多糖得率可达25.10％；
所述的黄芪多糖培养基按以下步骤进行制备：按质量分数将蛋白胨1％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、磷酸二氢钾0.2％、柠檬酸三胺0.2％、黄芪粉8％和余量的蒸馏水混合，在121℃条件下，灭菌20min；其中所述的黄芪粉是将黄芪经低温超微粉碎得到的，所述低温温度为-40℃；
其中所述的植物乳杆菌CICC 24258购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造白酒；
四、将步骤二获得的多依果酶解液和步骤三获得的黄芪多糖发酵液按体积比4:1混合，得到混合液，向混合液中接入体积分数为5％的酿酒酵母CICC 32891并输送至酒精发酵罐进行发酵，在25℃温度下发酵6天，第一天敞口发酵，之后封口发酵，每24h搅拌20min，搅拌速率为100r/min，发酵至酒精度10％，获得黄芪多依果酒；
所述的酿酒酵母CICC 32891购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造水果酒。
五、将步骤四获得的黄芪多依果酒经离心过滤去除果渣等固形物，再以300目板框压滤去除杂质，最后用200nm的陶瓷膜过滤除菌、除杂，再除菌、除杂，最终得到具有抗氧化功能的黄芪多依果酒。
具体实施方式四：本实施方式中的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法如下：
一、选择成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果；
其中所述选果过程为：将成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果以3t/h的速度均匀地将多依果由皮带输送到洗果槽，使多依果在洗果槽中随水波振动到毛刷洗果池进行清洗，并除去泥沙和杂质，然后经链板提升机传送至刷洗机，并用水喷淋，最后传送至选果台。在选果台上随着果子的滚动，将滚动过来的霉烂、变质果拣出；
二、将步骤一选出的多依果在打浆机中打浆，使果肉与果核分离打浆去核，获得多依果浆后，加入质量分数为0.4％的果胶酶，在温度50℃下酶解3h，然后煮沸15min杀灭酶活性及杀菌，冷却后，得多依果酶解液；其中所述的多依果浆的含糖度为12％；
三、制备黄芪多糖培养基，向黄芪多糖培养基中接入体积分数为10％的植物乳杆菌CICC 24258进行发酵，在37℃恒温和150r/min条件下发酵72h，过滤后获得黄芪多糖发酵液；所述的黄芪多糖发酵液经测定其多糖得率可达23.45％；
所述的黄芪多糖培养基按以下步骤进行制备：按质量分数将蛋白胨1％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、磷酸二氢钾0.2％、柠檬酸三胺0.2％、黄芪粉8％和余量的蒸馏水混合，在121℃条件下，灭菌20min；其中所述的黄芪粉是将黄芪经低温超微粉碎得到的，所述低温温度为-40℃；
其中所述的植物乳杆菌CICC 24258购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造白酒；
四、将步骤二获得的多依果酶解液和步骤三获得的黄芪多糖发酵液按体积比5:1混合，得到混合液，向混合液中接入体积分数为5％的酿酒酵母CICC 32891并输送至酒精发酵罐进行发酵，在25℃温度下发酵6天，第一天敞口发酵，之后封口发酵，每24h搅拌20min，搅拌速率为100r/min，发酵至酒精度10％，获得黄芪多依果酒；
所述的酿酒酵母CICC 32891购买自中国工业微生物菌种保藏管理中心，主要用于酿造水果酒。
五、将步骤四获得的黄芪多依果酒经离心过滤去除果渣等固形物，再以300目板框压滤去除杂质，最后用200nm的陶瓷膜过滤除菌、除杂，再除菌、除杂，最终得到具有抗氧化功能的黄芪多依果酒。
验证黄芪多依果酒的抗氧化能力，具体如下：
对本发明具体实施方式一至四植被得到的具有抗氧化功能的黄芪多依果酒进行抗氧化试验研究，具体试验方法如下：健康成年小鼠，10周龄，体重25±5克。除空白对照组外，其余动物用D-半乳糖1.0g/kg b.w颈背部皮下注射造模，注射量为0.1mL/10g，每日1次，连续造模6周，取血测MDA，按MDA水平分组，每组15只，随机分成模型对照组和高、低剂量实验组。高、低剂量实验组按照1.5、0.3mL/kg b.w的剂量灌胃；模型对照组则灌胃生理盐水，并且继续注射相同剂量D-半乳糖；摘眼球取血，3500r/min离心10min分离制备血清，实验期间饲喂普通饲料，测定血清中总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)活力的含量，按试剂盒操作说明书操作测定，抗氧化效果见表1。
表1不同实施方式中黄芪多依果酒对小鼠抗氧化能力的影响
Figure BDA0002328557100000081
结果显示：用实施方式一至四中的黄芪多依果酒灌胃小鼠后，低、高剂量实验组与空白对照组相比，低、高剂量的黄芪多依果酒能显著降低小鼠血清中MDA水平，明显提高小鼠血清中T-AOC、SOD的活性，其中具体实施方式三的降低最为显著，表明黄芪多依果酒对小鼠有明显的抗氧化作用。

Claims (10)

1.一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒，其特征在于所述具有抗氧化功能的黄芪多依果酒是用酶解后多依果和发酵后黄芪制成的。
2.如权利要求1所述一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，该制备方法具体步骤如下：
一、选择成熟、完整、无腐烂、无霉变的多依果；
二、将多依果打浆得到多依果浆后，加入果胶酶进行酶解，获得多依果酶解液；
三、制备黄芪多糖培养基，向黄芪多糖培养基中接入乳酸菌进行发酵，获得黄芪多糖发酵液；
四、将步骤二获得的多依果酶解液和步骤三获得的黄芪多糖发酵液混合，得到混合液，向混合液中接入酵母菌进行发酵，获得黄芪多依果酒；
五、将步骤四获得的黄芪多依果酒经离心过滤去除果渣，再除菌、除杂，最终得到具有抗氧化功能的黄芪多依果酒。
3.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤二所述的果胶酶占多依果浆的质量分数为0.2％～0.4％。
4.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤二所述的酶解温度为40℃～50℃，酶解时间为2h～3h。
5.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤三所述的黄芪多糖培养基按以下步骤进行制备：按质量分数将蛋白胨1％、葡萄糖2％、酵母膏0.5％、磷酸氢二钾0.2％、磷酸二氢钾0.2％、柠檬酸三胺0.2％、黄芪粉8％和余量的蒸馏水混合，在121℃条件下，灭菌20min；其中所述的黄芪粉是将黄芪经低温超微粉碎得到的，所述低温温度为-40℃。
6.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤三所述的乳酸菌为植物乳杆菌CICC 24258，接种量按体积分数为5％～10％。
7.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤三所述的发酵过程为在37℃恒温和100r/min～150r/min条件下发酵48h～72h。
8.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤四所述的混合液中多依果酶解液黄芪多糖发酵液的体积比为(3～5):1。
9.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤四所述的酵母菌为酿酒酵母CICC 32891，接种量按体积分数为5％～8％。
10.根据权利要求2所述的一种具有抗氧化功能的黄芪多依果酒的制备方法，其特征在于，步骤四所述的发酵过程为在25℃～35℃温度下发酵6～8天，每24h搅拌20min，搅拌速率为100r/min，发酵至酒精度8％～12％。
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