CN111273004B - 一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及制备方法，所述试剂条包括玻璃纤维、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫、塑料底板、检测线包被HIV‑I/II抗原、对照线包被鼠IgG，所述塑料底板上设置有玻璃纤维、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫，所述硝酸纤维膜两端左右分别相对设置金标垫、吸水纸，所述金标垫外端搭接玻璃纤维，所述检测线包被HIV‑I/II抗原混合包被在硝酸纤维膜上，所述金标垫上固化有胶体金标记SPA。本发明通过增加组合抗原片段的方式提高了HIV‑1型抗体检出率，该发明的试纸条灵敏度高，适于医院、个人进行艾滋病初筛，检测时间短，准确率高。
Description
技术领域
本发明涉及医学领域，尤其涉及一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法。
背景技术
现有的艾滋病检测首先通过初步筛选然后进行确诊，初步筛选主要通过血液检测、口腔粘膜检测两种方式进行，血液检测需要抽取待测人血液，存在交叉感染的风险，同时使用的器械处理不当存在感染风险；口腔粘膜检测采样操作繁琐，需要不断刮取渗透液，必须由经培训的专业人士操作，否则对检测准确性有较大影响。鉴于以上弊端，本申请人通过工艺的改进不断的创新，研发出一种新的胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，以作为艾滋病检测初步筛选试剂条，操作方便、快速，无创采样，适用于普通人群自测。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法，该发明能够快速检测艾滋病阳性，
为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，所述试剂条包括玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫、塑料底板、检测线包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG，所述塑料底板上设置有玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫、检测线包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG，所述硝酸纤维膜两端左右分别相对搭接金标垫、吸水纸，所述金标垫外端搭接玻璃纤维膜，所述金标垫上固化有胶体金标记SPA，所述以胶体金标记的SPA胶体金结合物垫，作为显色探针，所述硝酸纤维素膜上检测线混合包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG，对照线包被鼠IgG与检测线包被HIV-I/II抗原相对设置。
进一步，所述在硝酸纤维素膜上检测线包被HIV-I/II抗原包括gp41+gp36融合抗原，作为检测HIV 1型抗体和HIV 2型抗体的检测线。
进一步，所述在硝酸纤维素膜2上检测线包被HIV-I/II抗原6还包括gp120抗原，作为检测HIV 1型抗体检测线。
进一步，金标垫的制备方法如下：
1)标记SPA,以0.1M硼酸-硼砂缓冲液调节胶体金PH在8.0-8.5，10-20μg/ml金的比例加入SPA,震荡反应10-30分钟后，以BSA或casein进行封闭，封闭液的终浓度5-10mg/ml,10000rpm离心10-20min分钟,弃上清，沉淀复溶至原体积10％；
2)复溶液为含有PEG、BSA、Casein、蔗糖、Tween-20的50mM Tris-Hcl(pH8.5-9.0)缓冲液；
3)用喷金仪将复溶液均匀喷涂于玻璃纤维膜膜上，喷金浓度为4.5μl/cm,于25℃，湿度10-30％，烘干处理，16-24h。
进一步，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5-2.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.25-0.5mg/ml。
进一步，所述gp41+gp36融合抗原与gp120抗原采用混合包被一条检测线。
进一步，所述检测线包被缓冲液为pH8.9、50mM的Tris-HCl缓冲液。
进一步，所述金标垫的制备方法采用胶体金标记鼠抗人IgG或SPA中的任意一种。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条检测笔所述试剂条安置于检测笔内，所述检测笔分为上、下两部分，且上、下两部分采用卡接方式固定，位于所述检测笔下部分笔体内开有安置槽与试剂条匹配，所述检测笔末端开有检测口，所述检测笔上部分中间位置开有可视窗口。
本发明的有益效果：
1、本发明的试纸条检测线包被选用gp41+gp36融合抗原，兼具HIV-1型和HIV-2型抗体的检测能力，等效于gp41抗原与gp36抗原混合包被，避免了混合包被时两种抗原的互相干扰，同时简化了生产工艺，降低了制造成本。
2、本发明的试纸条检测线同时包被gp120抗原，与gp41互为补充，比单一包被gp41的HIV-1型抗体检出率更高更精准，达到与gp160等效的效果。gp160分解即为gp41和gp120两个片段，但gp120相比gp160具有更好的溶解性和分散性，包被缓冲液不用加入S9、脲等物质进行特殊处理，简化了生产工艺，提高产品稳定性。
3、本发明的试纸条检测尿液，无创采样，避免因采血等使用方式造成的交叉感染。并且本试纸条设置为检测笔的形式，可以直接插入待测样本，使用人全程无需接触样本，操作简单，方便检测。
4、本发明试纸条检测灵敏度高，适合个人辅助检测，在医学观察及医学检测时起到自检筛选的作用。
附图说明
图1为本发明的结构示意图；
图2为本发明的检测笔结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不局限于说明书上的内容。
如图1-2所示为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，所述试剂条包括玻璃纤维膜1、硝酸纤维膜2、吸水纸3、金标垫4、塑料底板5、检测线包被HIV-I/II抗原6、对照线包被鼠IgG7，所述塑料底板5上设置有玻璃纤维膜1、硝酸纤维膜2、吸水纸3、金标垫4、检测线包被HIV-I/II抗原6、对照线包被鼠IgG7，所述硝酸纤维膜2两端左右分别相对搭接金标垫4、吸水纸3，所述金标垫4外端搭接玻璃纤维膜1，所述金标垫4上固化有胶体金标记SPA，所述以胶体金标记的SPA胶体金结合物垫，作为显色探针，所述硝酸纤维素膜2上检测线混合包被HIV-I/II抗原6、对照线包被鼠IgG7，对照线包被鼠IgG7与检测线包被HIV-I/II抗原6相对设置。
在本实施例中，所述在硝酸纤维素膜2上检测线包被HIV-I/II抗原6包括gp41+gp36融合抗原，作为检测HIV 1型抗体和HIV 2型抗体的检测线。
在本实施例中，所述在硝酸纤维素膜2上检测线包被HIV-I/II抗原6还包括gp120抗原，作为检测HIV 1型抗体检测线。
金标垫的制备方法如下：
4)标记SPA,以0.1M硼酸-硼砂缓冲液调节胶体金PH在8.0-8.5，10-20μg/ml金的比例加入SPA,震荡反应10-30分钟后，以BSA或casein进行封闭，封闭液的终浓度5-10mg/ml,10000rpm离心10-20min分钟,弃上清，沉淀复溶至原体积10％；
5)复溶液为含有PEG、BSA、Casein、蔗糖、Tween-20的50mM Tris-Hcl(pH8.5-9.0)缓冲液；
6)用喷金仪将复溶液均匀喷涂于玻璃纤维膜膜上，喷金浓度为4.5μl/cm,于25℃，湿度10-30％，烘干处理，16-24h。
在本实施例中，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5-2.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.25-0.5mg/ml。
在本实施例中，所述gp41+gp36融合抗原与gp120抗原采用混合包被一条检测线。
在本实施例中，所述检测线包被缓冲液为pH8.9、50mM的Tris-HCl缓冲液。
在本实施例中，所述金标垫的制备方法采用胶体金标记鼠抗人IgG或SPA中的任意一种。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条检测笔，所述试剂条安置于检测笔内，所述检测笔分为上、下两部分，且上、下两部分采用卡接方式固定，位于所述检测笔下部分笔体内开有安置槽与试剂条匹配，所述检测笔末端开有检测口71，所述检测笔上部分中间位置开有可视窗口72,由所述附图2显示，在检测笔的上、下两部分中，其中检测笔下部分中上下对称开有对接孔，与检测笔上部分底面固定设置的固定柱扣合卡接在一起，或是直接通过固定柱粘接在对接孔内固定上下两部分。
在本实施例中，所述在检测中，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.5mg/ml。本试剂预先将HIV-I/II抗原混合包被在硝酸纤维素膜上，将胶体金标记SPA固化在金标垫上。检测时，样本通过层析作用向上流动，如果样本中含有HIV-I/II抗体，首先与胶体金标记的SPA蛋白特异性结合，随后在毛细作用力下向上层析，与硝酸纤维素膜上包被的HIV-I/II抗原结合，形成固相抗原-HIV-I/II抗体-胶体金标记SPA三元复合物，所述在检测中，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.5mg/ml经多次实施例验证，此浓度为最佳的检测浓度，同时下文表1中相关数据均是以gp41+gp36融合抗原浓度为1.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.5mg/ml为基础，从而实际检测时在检测线(T)显现出一条红色条带。如是阴性样本，则将无红色条带显现。在硝酸纤维素膜上还包被了鼠IgG作为对照线(C)，无论样本中是否存在HIV-I/II抗体，鼠IgG都会与金标记SPA结合，在对照线出现一条红色条带，作为实验有效性的依据。
所述本发明外形为手持检测笔，包括硝酸纤维素膜、金标垫、吸水纸、胶板和塑料卡壳，所述塑料卡壳分为上下两部分。胶板宽度为4mm，长度为70mm。检测笔下端有尿液浸液孔和位置指示线即是检测口，中部有结果视窗，上部为握持手柄，贴涂有试剂名称和样本编号书写区，防止混淆。
所述附图2中C-T标记对应检测线包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG。
所述附图2中检测笔末端设有S标记，确保样本液面不超过“S”线，然后将检测卡平置。
表1为本发明实验对比数据的影响结果
注1：“+”表示明确可判断阳性，“++”、“+++”表示显色逐级加深
注2：“-”表示明确可判断阴性
注3：“±”表示显色极浅，平行测定时有时为阴性，有时为极弱的阳性。
注4：弱阳性1～3为同1份阳性样本使用阴性尿液梯度稀释所得。
可见，gp41+gp36融合抗原单独包被等效于gp41和gp36两种抗原混合包被，且原料用量更少；混合加入gp120抗原后，可以有效提高个别阳性样本显色，提高阳性检出率。
所述本试剂条检验方法
S1：在进行测试前必须将检测卡和待检样本平衡至室温。
S2：撕开铝箔袋，小心取出检测卡。
S3：加样操作方法：
3.1新鲜尿液可直接检测：握住上端手持区，将下端样本区箭头所指方向浸入样品中，确保样本液面不超过“S”线，然后将检测卡平置，同时开始计时。
3.2不能及时检测的尿液需要加到尿液保存液中保存和检测；新鲜尿液也可以加到尿液保存液中检测：将尿液倒入尿液保存液滴瓶至瓶颈处，上下颠倒混匀。再如“3.1”所述方法插入检测卡，然后将检测卡平置，同时开始计时。
S4可以观察到红色胶金向上端流动，并在观测区沉积成红线。
S5测试结果应在15分钟内判定。15分钟后判定无效。
显然，本发明的上述实施方式仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (3)
1.一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体的试剂条，其特征在于：所述试剂条包括玻璃纤维膜（1）、硝酸纤维膜（2）、吸水纸（3）、金标垫（4）、塑料底板（5）、检测线包被HIV-I/II抗原（6）、对照线包被鼠IgG（7），所述塑料底板（5）上设置有玻璃纤维膜（1）、硝酸纤维膜（2）、吸水纸（3）、金标垫（4）、检测线包被HIV-I/II抗原（6）、对照线包被鼠IgG（7），所述硝酸纤维膜（2）两端左右分别相对搭接金标垫（4）、吸水纸（3），所述金标垫（4）外端搭接玻璃纤维膜（1），所述金标垫（4）上固化有胶体金标记SPA，以所述胶体金标记的SPA胶体金结合物垫，作为显色探针，所述硝酸纤维膜（2）上检测线混合包被HIV-I/II抗原（6）、对照线包被鼠IgG（7），对照线包被鼠IgG（7）与检测线包被HIV-I/II抗原（6）相对设置；
在所述硝酸纤维膜（2）上检测线包被HIV-I/II抗原（6）包括gp41+gp36融合抗原，作为检测HIV 1型抗体和HIV 2型抗体的检测线，还包括gp120抗原，作为检测HIV 1型抗体检测线；
所述金标垫的制备方法如下：
1) 标记SPA，以0.1M硼酸-硼砂缓冲液调节胶体金pH在8.0-8.5，10〜20μg/ml金的比例加入SPA，震荡反应10〜30分钟后，以BSA或casein进行封闭，封闭液的终浓度5〜10mg/ml，10000rpm离心10〜20min分钟，弃上清，沉淀复溶至原体积10%；
2) 复溶液为含有PEG、BSA、Casein、蔗糖和Tween-20的50mM、pH8.5~9.0的Tris-Hcl缓冲液；
3) 用喷金仪将复溶液均匀喷涂于玻璃纤维膜膜上，喷金浓度为4.5μl/cm,于25℃，湿度10～30％，烘干处理，16-24h；
在硝酸纤维膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5 mg/ml，gp120抗原浓度为0.5mg/ml；
所述检测线的包被缓冲液为pH8.9、50mM的Tris-HCl缓冲液。
2.根据权利要求1所述的试剂条，其特征在于，所述gp41+gp36融合抗原与gp120抗原采用混合包被一条检测线。
3.一种包含根据权利要求1所述的试剂条的检测笔，其特征在于：所述试剂条安置于检测笔内，所述检测笔分为上、下两部分，且上、下两部分采用卡接方式固定，位于所述检测笔下部分笔体内开有安置槽与试剂条匹配，所述检测笔末端开有检测口（71），所述检测笔上部分中间位置开有可视窗口（72）。
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