CN111562366A - 尿液hiv抗体快速检测试剂盒、制备方法及使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了尿液HIV抗体快速检测试剂盒、制备方法及使用方法,尿液HIV抗体快速检测试剂盒包括检测试纸条、含有浓缩介质的样本管、取样杯。检测试纸条由在PVC板上固定的样品垫、金标重组蛋白A结合垫、包HIV重组抗原gp41、gp120和gp36和抗重组蛋白A抗体的硝酸纤维素膜、吸水纸组成。检测时,先用取样杯搜集尿液样本,取尿液样本添加至装有浓缩介质的样本管中,静置3分钟,将试纸条样品垫端插入样本管中,检测尿液样本中是否含有HIV1/2抗体。可广泛应用于包括医院、防疫站、出入境检疫、现场初筛诊断及自测,该发明取样无创、安全、方便、快速,且通过尿液浓缩技术可以显著提高检测灵敏度。
Description
技术领域
本发明涉及HIV检测技术领域,具体为尿液HIV抗体快速检测试剂盒、制备方法及使用方法。
背景技术
人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus,HIV)是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒。自1981年被发现以来,HIV病毒在全球经历了复杂的起源和流行过程,据中国疾控中心、联合国艾滋病规划署、世界卫生组织联合评估,截至2018年底,我国存活艾滋病感染者约125万,新发感染者每年8万例左右。虽然我国对HIV感染者的检测和治疗都是免费的,仍有许多人因为“难为情”不愿意在公开场所检测。高危人群进行主动检测的积极性很低,导致约30%的感染者没有被发现,从而造成HIV在高危人群中继续传播。因此,开发无创快速简便的HIV检测方法、技术和产品很重要。本发明基于胶体金免疫层析技术平台,用于体外快速检测尿液中HIV抗体的含量来初步确定是否感染HIV。
尿液中HIV抗体含量约为血液中含量的0.1‰到1‰,相对于血清,其抗体含量微少,因此检测灵敏度低。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有的缺陷,提供尿液HIV抗体快速检测试剂盒、制备方法及使用方法,采用把尿液浓缩再检测的方式来提高检测灵敏度,明显提高了检测灵敏度,临床符合率高,且无创取样,结果显示清楚,检测效率更高,可以有效解决背景技术中的问题。
为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:尿液HIV抗体快速检测试剂盒,包括检测试纸条、含有浓缩介质的样本管、取样杯,所述检测试纸条由在PVC板上固定的样品垫、结合垫、包被检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸组成。
进一步的,所述检测试纸条的结合垫上涂有金标重组蛋白A,使用的胶体金颗粒为40nm,使用的胶体金浓度为万分之四,所述重组蛋白A的标记浓度为10-20μg/ml。
进一步的,所述检测试纸条的检测线上包被HIV重组抗原gp41、HIV重组抗原gp120及HIV重组抗原gp36,在质控线上包被有抗重组蛋白A抗体。
进一步的,所述检测线上包被的HIV重组抗原gp41的浓度为0.2-0.4mg/ml,HIV重组抗抗原gp120的浓度为0.2-0.4mg/ml, HIV重组抗原gp36的浓度为0.1-0.2mg/ml。
进一步的,所述质控线上包被的抗重组蛋白A抗体的浓度为0.5-1mg/ml。
进一步的,样本处理时样本管内浓缩介质与尿液样本的比例为1:6-1:8。
尿液HIV抗体快速检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤;
1)将重组蛋白A与胶体金颗粒结合形成的胶体金标记的重组蛋白A溶均匀涂于玻璃纤维上,烘干处理;
2)将检测线包被液划线于硝酸纤维素膜上形成检测线,质控线包被液划线于硝酸纤维素膜上形成质控线,烘干处理;
3)将样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接在底板上,即得。
尿液HIV抗体快速检测试剂盒的使用方法,取0.6-0.8ml的尿液样本于装有浓缩介质的样本管中,反应3min时将检测试纸条的加样端插入尿液样本中,待层析过程完全,5-10min观察结果。
与现有技术相比,本发明的有益效果是:本尿液HIV抗体快速检测试剂盒、制备方法及使用方法,具有以下好处:
1、采用把尿液浓缩再检测的方式来提高检测灵敏度,明显提高了检测灵敏度,临床符合率高,结果显示清楚,检测效率更高。
2、可广泛应用于包括医院、防疫站、出入境检疫、现场初筛诊断及自测,该发明取样无创、安全、方便、快速,且通过尿液浓缩技术可以显著提高检测灵敏度。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
本发明提供一种技术方案:尿液HIV抗体快速检测试剂盒,包括检测试纸条、含有浓缩介质的样本管、取样杯,检测试纸条由在PVC板上固定的样品垫、结合垫、包被检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸组成。
检测试纸条的结合垫上涂有金标重组蛋白A,使用的胶体金颗粒为40nm,使用的胶体金浓度为万分之四,重组蛋白A的标记浓度为10-20μg/ml。
检测试纸条的检测线上包被HIV重组抗原gp41、HIV重组抗原gp120及HIV重组抗原gp36,在质控线上包被有抗重组蛋白A抗体。
检测线上包被的HIV重组抗原gp41的浓度为0.2-0.4mg/ml,HIV重组抗抗原gp120的浓度为0.2-0.4mg/ml, HIV重组抗原gp36的浓度为0.1-0.2mg/ml。
质控线上包被的抗重组蛋白A抗体的浓度为0.5-1mg/ml。
样本处理时样本管内浓缩介质与尿液样本的比例为1:6-1:8。
尿液HIV抗体快速检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤;
1)将重组蛋白A与胶体金颗粒结合形成的胶体金标记的重组蛋白A溶均匀涂于玻璃纤维上,烘干处理;
2)将检测线包被液划线于硝酸纤维素膜上形成检测线,质控线包被液划线于硝酸纤维素膜上形成质控线,烘干处理;
3)将样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接在底板上,即得。
尿液HIV抗体快速检测试剂盒的使用方法,取0.6-0.8ml的尿液样本于装有浓缩介质的样本管中,反应3min时将检测试纸条的加样端插入尿液样本中,待层析过程完全,5-10min观察结果。
尿液HIV抗体快速检测试剂盒的制备方法,还包括样品垫的制备、金标结合垫的制备、印膜的制备及包装和含有浓缩介质的样本管,其各自制备方法如下:
1.胶体金垫的制备:
1)胶体金溶液的制备:
量取200ml的万分之四氯金酸溶液,倒入洁净的三角瓶中,搅拌加热至沸腾,加入12ml的1%柠檬酸三钠溶液,继续搅拌至金溶液为稳定的酒红色,搅拌冷却后恢复体积备用;
2)重组蛋白A的标记:
量取200ml胶体金溶液,调整PH后分别搅拌加入适量的重组蛋白A搅拌5min后,加入50ul 10%BSA溶液,并继续搅拌5min;
3)金标重组蛋白的纯化:
将标记后的金标重组蛋白A溶液以11000rpm转速于离心机中离心50分钟后,弃上清;
4)金标重组蛋白的包被:
将纯化后的金标重组蛋白A复溶至50ml。以30ml/张玻璃纤维(30cm*28cm)量将复溶后的金标重组蛋白均匀包被于玻璃纤维结合垫上,将结合垫放在纱窗上在干燥室干燥后密封备用。
2.印膜的制备:
1)制备检测线印膜溶液:取HIV重组抗原加入印膜缓冲液中,其中gp41和gp120抗原浓度各为0.3mg/ml,gp36抗原的浓度为0.2mg/ml;
2)制备质控线印膜溶液:取抗重组蛋白A抗体加入印膜缓冲液中,使浓度为0.5mg/ml;
3)印膜的制备:将两种配制好的印膜溶液分别包被到硝酸纤维素摸的检测线和质控线处,将包被好的印膜放入干燥室中干燥4小时,密封备用。
3.样品垫的制备方法,其具体包括以下步骤:
1)将玻璃纤维或无纺布浸泡于0.05M Tris-HCl pH9.0的溶液中1小时;
2)取出放在纱窗上自然晾干,密封备用;
4.包装方法,其具体包括以下步骤:
1)将吸水纸、印膜、胶体金垫、样品垫依次搭在PVC大板上;
2)切条后包装。
5.浓缩介质:称取0.1g的浓缩介质加入样本管中。
浓缩介质能够自发而快速地吸入分子量7000以下的溶剂(如水)及小分子溶质(如盐及缓冲物质),人尿所含的微量抗体可以经过简单快速的浓缩介质浓缩能提高它的浓度和可检测性。
检测结果的解释:
阳性(+):质控线和检测线均显色。
阴性(-):仅质控线显色。
无效:质控线不显色。
检测试纸条因变质损坏或不正确操作而失效,建议重新检测。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例,对于本领域的普通技术人员而言,可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (8)
1.尿液HIV抗体快速检测试剂盒,其特征在于:包括检测试纸条、含有浓缩介质的样本管、取样杯,所述检测试纸条由在PVC板上固定的样品垫、结合垫、包被检测线和质控线的硝酸纤维素膜、吸水纸组成。
2.根据权利要求1所述的尿液HIV抗体快速检测试剂盒,其特征在于:所述检测试纸条的结合垫上涂有金标重组蛋白A,使用的胶体金颗粒为40nm,使用的胶体金浓度为万分之四,所述重组蛋白A的标记浓度为10-20μg/ml。
3.根据权利要求1所述的尿液HIV抗体快速检测试剂盒,其特征在于:所述检测试纸条的检测线上包被HIV重组抗原gp41、HIV重组抗原gp120及HIV重组抗原gp36,在质控线上包被有抗重组蛋白A抗体。
4. 根据权利要求3所述的尿液HIV抗体快速检测试剂盒,其特征在于:所述检测线上包被的HIV重组抗原gp41的浓度为0.2-0.4mg/ml,HIV重组抗抗原gp120的浓度为0.2-0.4mg/ml, HIV重组抗原gp36的浓度为0.1-0.2mg/ml。
5.根据权利要求3所述的尿液HIV抗体快速检测试剂盒,其特征在于:所述质控线上包被的抗重组蛋白A抗体的浓度为0.5-1mg/ml。
6.根据权利要求1所述的尿液HIV抗体快速检测试剂盒,其特征在于:样本处理时样本管内浓缩介质与尿液样本的比例为1:6-1:8。
7.如权利要求1至6中任意一项所述的尿液HIV抗体快速检测试剂盒的制备方法,其特征在于:包括如下步骤;
1)将重组蛋白A与胶体金颗粒结合形成的胶体金标记的重组蛋白A溶均匀涂于玻璃纤维上,烘干处理;
2)将权利要求3至5中任意一项所述的检测线包被液划线于硝酸纤维素膜上形成检测线,质控线包被液划线于硝酸纤维素膜上形成质控线,烘干处理;
3)将样品垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次搭接在底板上,即得。
8.如权利要求1至6中任意一项所述的尿液HIV抗体快速检测试剂盒的使用方法,其特征在于:取0.6-0.8ml的尿液样本于装有浓缩介质的样本管中,反应3min时将检测试纸条的加样端插入尿液样本中,待层析过程完全,5-10min观察结果。
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