CN111273004A - 一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法 - Google Patents
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111273004A CN111273004A CN202010158610.XA CN202010158610A CN111273004A CN 111273004 A CN111273004 A CN 111273004A CN 202010158610 A CN202010158610 A CN 202010158610A CN 111273004 A CN111273004 A CN 111273004A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hiv
- gold
- coated
- antigen
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 73
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 33
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 85
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 58
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 58
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 58
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 43
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 31
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 31
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 18
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 claims abstract description 13
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 claims abstract description 13
- 239000004033 plastic Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 24
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 20
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 claims description 19
- 101800000385 Transmembrane protein Proteins 0.000 claims description 16
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims description 14
- 238000005507 spraying Methods 0.000 claims description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 6
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 238000007789 sealing Methods 0.000 claims description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- 229910021538 borax Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 239000004328 sodium tetraborate Substances 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 abstract description 14
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 5
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 abstract description 3
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 abstract description 3
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 9
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 9
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 206010011409 Cross infection Diseases 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 206010029803 Nosocomial infection Diseases 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 229910001112 rose gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/558—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using diffusion or migration of antigen or antibody
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及制备方法，所述试剂条包括玻璃纤维、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫、塑料底板、检测线包被HIV‑I/II抗原、对照线包被鼠IgG，所述塑料底板上设置有玻璃纤维、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫，所述硝酸纤维膜两端左右分别相对设置金标垫、吸水纸，所述金标垫外端搭接玻璃纤维，所述检测线包被HIV‑I/II抗原混合包被在硝酸纤维膜上，所述金标垫上固化有胶体金标记SPA。本发明通过增加组合抗原片段的方式提高了HIV‑1型抗体检出率，该发明的试纸条灵敏度高，适于医院、个人进行艾滋病初筛，检测时间短，准确率高。
Description
技术领域
本发明涉及医学领域，尤其涉及一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法。
背景技术
现有的艾滋病检测首先通过初步筛选然后进行确诊，初步筛选主要通过血液检测、口腔粘膜检测两种方式进行，血液检测需要抽取待测人血液，存在交叉感染的风险，同时使用的器械处理不当存在感染风险；口腔粘膜检测采样操作繁琐，需要不断刮取渗透液，必须由经培训的专业人士操作，否则对检测准确性有较大影响。鉴于以上弊端，本申请人通过工艺的改进不断的创新，研发出一种新的胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，以作为艾滋病检测初步筛选试剂条，操作方便、快速，无创采样，适用于普通人群自测。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足而提供一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法，该发明能够快速检测艾滋病阳性，
为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，所述试剂条包括玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫、塑料底板、检测线包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG，所述塑料底板上设置有玻璃纤维膜、硝酸纤维膜、吸水纸、金标垫、检测线包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG，所述硝酸纤维膜两端左右分别相对搭接金标垫、吸水纸，所述金标垫外端搭接玻璃纤维膜，所述金标垫上固化有胶体金标记SPA，所述以胶体金标记的SPA胶体金结合物垫，作为显色探针，所述硝酸纤维素膜上检测线混合包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG，对照线包被鼠IgG与检测线包被HIV-I/II抗原相对设置。
进一步，所述在硝酸纤维素膜上检测线包被HIV-I/II抗原包括gp41+gp36融合抗原，作为检测HIV 1型抗体和HIV 2型抗体的检测线。
进一步，所述在硝酸纤维素膜2上检测线包被HIV-I/II抗原6还包括gp120抗原，作为检测HIV 1型抗体检测线。
进一步，金标垫的制备方法如下：
1)标记SPA,以0.1M硼酸-硼砂缓冲液调节胶体金PH在8.0-8.5，10-20μg/ml金的比例加入SPA,震荡反应10-30分钟后，以BSA或casein进行封闭，封闭液的终浓度5-10mg/ml,10000rpm离心10-20min分钟,弃上清，沉淀复溶至原体积10％；
2)复溶液为含有PEG、BSA、Casein、蔗糖、Tween-20的50mM Tris-Hcl(pH8.5-9.0)缓冲液；
3)用喷金仪将复溶液均匀喷涂于玻璃纤维膜膜上，喷金浓度为4.5μl/cm,于25℃，湿度10-30％，烘干处理，16-24h。
进一步，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5-2.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.25-0.5mg/ml。
进一步，所述gp41+gp36融合抗原与gp120抗原采用混合包被一条检测线。
进一步，所述检测线包被缓冲液为pH8.9、50mM的Tris-HCl缓冲液。
进一步，所述金标垫的制备方法采用胶体金标记鼠抗人IgG或SPA中的任意一种。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条检测笔所述试剂条安置于检测笔内，所述检测笔分为上、下两部分，且上、下两部分采用卡接方式固定，位于所述检测笔下部分笔体内开有安置槽与试剂条匹配，所述检测笔末端开有检测口，所述检测笔上部分中间位置开有可视窗口。
本发明的有益效果：
1、本发明的试纸条检测线包被选用gp41+gp36融合抗原，兼具HIV-1型和HIV-2型抗体的检测能力，等效于gp41抗原与gp36抗原混合包被，避免了混合包被时两种抗原的互相干扰，同时简化了生产工艺，降低了制造成本。
2、本发明的试纸条检测线同时包被gp120抗原，与gp41互为补充，比单一包被gp41的HIV-1型抗体检出率更高更精准，达到与gp160等效的效果。gp160分解即为gp41和gp120两个片段，但gp120相比gp160具有更好的溶解性和分散性，包被缓冲液不用加入S9、脲等物质进行特殊处理，简化了生产工艺，提高产品稳定性。
3、本发明的试纸条检测尿液，无创采样，避免因采血等使用方式造成的交叉感染。并且本试纸条设置为检测笔的形式，可以直接插入待测样本，使用人全程无需接触样本，操作简单，方便检测。
4、本发明试纸条检测灵敏度高，适合个人辅助检测，在医学观察及医学检测时起到自检筛选的作用。
附图说明
图1为本发明的结构示意图；
图2为本发明的检测笔结构示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不局限于说明书上的内容。
如图1-2所示为达到上述目的，本发明通过以下技术方案来实现。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，所述试剂条包括玻璃纤维膜1、硝酸纤维膜2、吸水纸3、金标垫4、塑料底板5、检测线包被HIV-I/II抗原6、对照线包被鼠IgG7，所述塑料底板5上设置有玻璃纤维膜1、硝酸纤维膜2、吸水纸3、金标垫4、检测线包被HIV-I/II抗原6、对照线包被鼠IgG7，所述硝酸纤维膜2两端左右分别相对搭接金标垫4、吸水纸3，所述金标垫4外端搭接玻璃纤维膜1，所述金标垫4上固化有胶体金标记SPA，所述以胶体金标记的SPA胶体金结合物垫，作为显色探针，所述硝酸纤维素膜2上检测线混合包被HIV-I/II抗原6、对照线包被鼠IgG7，对照线包被鼠IgG7与检测线包被HIV-I/II抗原6相对设置。
在本实施例中，所述在硝酸纤维素膜2上检测线包被HIV-I/II抗原6包括gp41+gp36融合抗原，作为检测HIV 1型抗体和HIV 2型抗体的检测线。
在本实施例中，所述在硝酸纤维素膜2上检测线包被HIV-I/II抗原6还包括gp120抗原，作为检测HIV 1型抗体检测线。
金标垫的制备方法如下：
4)标记SPA,以0.1M硼酸-硼砂缓冲液调节胶体金PH在8.0-8.5，10-20μg/ml金的比例加入SPA,震荡反应10-30分钟后，以BSA或casein进行封闭，封闭液的终浓度5-10mg/ml,10000rpm离心10-20min分钟,弃上清，沉淀复溶至原体积10％；
5)复溶液为含有PEG、BSA、Casein、蔗糖、Tween-20的50mM Tris-Hcl(pH8.5-9.0)缓冲液；
6)用喷金仪将复溶液均匀喷涂于玻璃纤维膜膜上，喷金浓度为4.5μl/cm,于25℃，湿度10-30％，烘干处理，16-24h。
在本实施例中，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5-2.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.25-0.5mg/ml。
在本实施例中，所述gp41+gp36融合抗原与gp120抗原采用混合包被一条检测线。
在本实施例中，所述检测线包被缓冲液为pH8.9、50mM的Tris-HCl缓冲液。
在本实施例中，所述金标垫的制备方法采用胶体金标记鼠抗人IgG或SPA中的任意一种。
一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条检测笔，所述试剂条安置于检测笔内，所述检测笔分为上、下两部分，且上、下两部分采用卡接方式固定，位于所述检测笔下部分笔体内开有安置槽与试剂条匹配，所述检测笔末端开有检测口71，所述检测笔上部分中间位置开有可视窗口72,由所述附图2显示，在检测笔的上、下两部分中，其中检测笔下部分中上下对称开有对接孔，与检测笔上部分底面固定设置的固定柱扣合卡接在一起，或是直接通过固定柱粘接在对接孔内固定上下两部分。
在本实施例中，所述在检测中，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.5mg/ml。本试剂预先将HIV-I/II抗原混合包被在硝酸纤维素膜上，将胶体金标记SPA固化在金标垫上。检测时，样本通过层析作用向上流动，如果样本中含有HIV-I/II抗体，首先与胶体金标记的SPA蛋白特异性结合，随后在毛细作用力下向上层析，与硝酸纤维素膜上包被的HIV-I/II抗原结合，形成固相抗原-HIV-I/II抗体-胶体金标记SPA三元复合物，所述在检测中，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.5mg/ml经多次实施例验证，此浓度为最佳的检测浓度，同时下文表1中相关数据均是以gp41+gp36融合抗原浓度为1.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.5mg/ml为基础，从而实际检测时在检测线(T)显现出一条红色条带。如是阴性样本，则将无红色条带显现。在硝酸纤维素膜上还包被了鼠IgG作为对照线(C)，无论样本中是否存在HIV-I/II抗体，鼠IgG都会与金标记SPA结合，在对照线出现一条红色条带，作为实验有效性的依据。
所述本发明外形为手持检测笔，包括硝酸纤维素膜、金标垫、吸水纸、胶板和塑料卡壳，所述塑料卡壳分为上下两部分。胶板宽度为4mm，长度为70mm。检测笔下端有尿液浸液孔和位置指示线即是检测口，中部有结果视窗，上部为握持手柄，贴涂有试剂名称和样本编号书写区，防止混淆。
所述附图2中C-T标记对应检测线包被HIV-I/II抗原、对照线包被鼠IgG。
所述附图2中检测笔末端设有S标记，确保样本液面不超过“S”线，然后将检测卡平置。
表1为本发明实验对比数据的影响结果
注1：“+”表示明确可判断阳性，“++”、“+++”表示显色逐级加深
注2：“-”表示明确可判断阴性
注3：“±”表示显色极浅，平行测定时有时为阴性，有时为极弱的阳性。
注4：弱阳性1～3为同1份阳性样本使用阴性尿液梯度稀释所得。
可见，gp41+gp36融合抗原单独包被等效于gp41和gp36两种抗原混合包被，且原料用量更少；混合加入gp120抗原后，可以有效提高个别阳性样本显色，提高阳性检出率。
所述本试剂条检验方法
S1：在进行测试前必须将检测卡和待检样本平衡至室温。
S2：撕开铝箔袋，小心取出检测卡。
S3：加样操作方法：
3.1新鲜尿液可直接检测：握住上端手持区，将下端样本区箭头所指方向浸入样品中，确保样本液面不超过“S”线，然后将检测卡平置，同时开始计时。
3.2不能及时检测的尿液需要加到尿液保存液中保存和检测；新鲜尿液也可以加到尿液保存液中检测：将尿液倒入尿液保存液滴瓶至瓶颈处，上下颠倒混匀。再如“3.1”所述方法插入检测卡，然后将检测卡平置，同时开始计时。
S4可以观察到红色胶金向上端流动，并在观测区沉积成红线。
S5测试结果应在15分钟内判定。15分钟后判定无效。
显然，本发明的上述实施方式仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。
Claims (9)
1.一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，其特征在于：所述试剂条包括玻璃纤维膜(1)、硝酸纤维膜(2)、吸水纸(3)、金标垫(4)、塑料底板(5)、检测线包被HIV-I/II抗原(6)、对照线包被鼠IgG(7)，所述塑料底板(5)上设置有玻璃纤维膜(1)、硝酸纤维膜(2)、吸水纸(3)、金标垫(4)、检测线包被HIV-I/II抗原(6)、对照线包被鼠IgG(7)，所述硝酸纤维膜(2)两端左右分别相对搭接金标垫(4)、吸水纸(3)，所述金标垫(4)外端搭接玻璃纤维膜(1)，所述金标垫(4)上固化有胶体金标记SPA，所述以胶体金标记的SPA胶体金结合物垫，作为显色探针，所述硝酸纤维素膜2上检测线混合包被HIV-I/II抗原6、对照线包被鼠IgG(7)，对照线包被鼠IgG(7)与检测线包被HIV-I/II抗原(6)相对设置。
2.根据权利要求1所述的一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，其特征在于：所述在硝酸纤维素膜(2)上检测线包被HIV-I/II抗原(6)包括gp41+gp36融合抗原，作为检测HIV 1型抗体和HIV 2型抗体的检测线。
3.根据权利要求1所述的一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条，其特征在于：所述在硝酸纤维素膜(2)上检测线包被HIV-I/II抗原(6)还包括gp120抗原，作为检测HIV 1型抗体检测线。
4.根据权利要求1所述一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条的制备方法，其特征在于，金标垫的制备方法如下：
1)标记SPA,以0.1M硼酸-硼砂缓冲液调节胶体金PH在8.0-8.5，10-20μg/ml金的比例加入SPA,震荡反应10-30分钟后，以BSA或casein进行封闭，封闭液的终浓度5～10mg/ml,10000rpm离心10-20min分钟,弃上清，沉淀复溶至原体积10％；
2)复溶液为含有PEG、BSA、Casein、蔗糖、Tween-20的50mM Tris-Hcl(pH8.5-9.0)缓冲液；
3)用喷金仪将复溶液均匀喷涂于玻璃纤维膜膜上，喷金浓度为4.5μl/cm,于25℃，湿度10-30％，烘干处理，16-24h。
5.根据权利要求1所述的一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条的制备方法，其特征在于，在硝酸纤维素膜上包被的gp41+gp36融合抗原浓度为1.5-2.5mg/ml，gp120抗原浓度为0.25-0.5mg/ml。
6.根据权利要求5所述的一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条的制备方法，其特征在于，所述gp41+gp36融合抗原与gp120抗原采用混合包被一条检测线。
7.根据权利要求5所述的一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条的制备方法，其特征在于，所述检测线包被缓冲液为pH8.9、50mM的Tris-HCl缓冲液。
8.根据权利要求4所述的一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条的制备方法，其特征在于，所述金标垫的制备方法采用胶体金标记鼠抗人IgG或SPA中的任意一种。
9.根据权利要求1-8所述的一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条检测笔，其特征在于：所述试剂条安置于检测笔内，所述检测笔分为上、下两部分，且上、下两部分采用卡接方式固定，位于所述检测笔下部分笔体内开有安置槽与试剂条匹配，所述检测笔末端开有检测口(71)，所述检测笔上部分中间位置开有可视窗口(72)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010158610.XA CN111273004B (zh) | 2020-03-09 | 2020-03-09 | 一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010158610.XA CN111273004B (zh) | 2020-03-09 | 2020-03-09 | 一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111273004A true CN111273004A (zh) | 2020-06-12 |
| CN111273004B CN111273004B (zh) | 2024-01-19 |
Family
ID=70997739
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010158610.XA Active CN111273004B (zh) | 2020-03-09 | 2020-03-09 | 一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111273004B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111562366A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-08-21 | 郑州方欣生物科技有限责任公司 | 尿液hiv抗体快速检测试剂盒、制备方法及使用方法 |
| CN112816700A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-05-18 | 杭州新脉生物科技有限公司 | 一种检测尿液中hiv抗体的胶体金试纸条 |
| CN116298279A (zh) * | 2023-05-23 | 2023-06-23 | 南京申基医药科技有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中人类免疫缺陷病毒抗体的试剂盒 |
| CN116643044A (zh) * | 2023-06-15 | 2023-08-25 | 广州贝思奇诊断试剂有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中hiv-1和hiv-2抗体的试剂盒及其制备方法、应用 |
Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005069002A1 (en) * | 2003-12-30 | 2005-07-28 | Calypte Biomedical Corporation | Rapid test for antibodies against hiv in urine |
| CN101266247A (zh) * | 2008-04-30 | 2008-09-17 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 人类免疫缺陷病毒(hiv)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒 |
| CN101943699A (zh) * | 2010-08-31 | 2011-01-12 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种检测唾液中hiv抗体的试纸条及其制备方法 |
| CN102559724A (zh) * | 2010-12-22 | 2012-07-11 | 北京万达因生物医学技术有限责任公司 | 一种新的hiv重组多表位融合抗原及其应用 |
| CN102680690A (zh) * | 2011-03-17 | 2012-09-19 | 北京易斯威特生物医学科技有限公司 | 第四代hiv抗体抗原检测试纸及其制备方法和应用 |
| CN202975019U (zh) * | 2012-07-20 | 2013-06-05 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 人类免疫缺陷病毒抗体和抗原检测试剂盒 |
| WO2017018939A1 (en) * | 2015-07-27 | 2017-02-02 | Mp Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd | Methods and kit for differentiating hiv-1 and hiv-2 antibodies |
| CN106546733A (zh) * | 2015-09-18 | 2017-03-29 | 天津红枫湾医疗科技有限公司 | 一种人类免疫缺陷病毒抗体胶体金检测试剂盒 |
| CN106970219A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-07-21 | 北京金豪制药股份有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中hiv（1+2）抗体试剂 |
| CN107727856A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-02-23 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 检测尿液中hiv抗体的试纸条、检测线包被液及其制备方法 |
| CN207396503U (zh) * | 2017-09-30 | 2018-05-22 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 检测尿液中hiv抗体的试纸条及液体检测杯 |
-
2020
- 2020-03-09 CN CN202010158610.XA patent/CN111273004B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005069002A1 (en) * | 2003-12-30 | 2005-07-28 | Calypte Biomedical Corporation | Rapid test for antibodies against hiv in urine |
| CN101266247A (zh) * | 2008-04-30 | 2008-09-17 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 人类免疫缺陷病毒(hiv)抗体免疫磁珠快速检测试剂盒 |
| CN101943699A (zh) * | 2010-08-31 | 2011-01-12 | 广州万孚生物技术有限公司 | 一种检测唾液中hiv抗体的试纸条及其制备方法 |
| CN102559724A (zh) * | 2010-12-22 | 2012-07-11 | 北京万达因生物医学技术有限责任公司 | 一种新的hiv重组多表位融合抗原及其应用 |
| CN102680690A (zh) * | 2011-03-17 | 2012-09-19 | 北京易斯威特生物医学科技有限公司 | 第四代hiv抗体抗原检测试纸及其制备方法和应用 |
| CN202975019U (zh) * | 2012-07-20 | 2013-06-05 | 天津中新科炬生物制药有限公司 | 人类免疫缺陷病毒抗体和抗原检测试剂盒 |
| WO2017018939A1 (en) * | 2015-07-27 | 2017-02-02 | Mp Biomedicals Asia Pacific Pte Ltd | Methods and kit for differentiating hiv-1 and hiv-2 antibodies |
| CN106546733A (zh) * | 2015-09-18 | 2017-03-29 | 天津红枫湾医疗科技有限公司 | 一种人类免疫缺陷病毒抗体胶体金检测试剂盒 |
| CN106970219A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-07-21 | 北京金豪制药股份有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中hiv（1+2）抗体试剂 |
| CN107727856A (zh) * | 2017-09-30 | 2018-02-23 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 检测尿液中hiv抗体的试纸条、检测线包被液及其制备方法 |
| CN207396503U (zh) * | 2017-09-30 | 2018-05-22 | 广州万孚生物技术股份有限公司 | 检测尿液中hiv抗体的试纸条及液体检测杯 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| XU ZHENBO 等: "Expression and purification of gp41-gp36 fusion protein and application in serological screening assay of HIV-1 and HIV-2", vol. 6, no. 6, pages 6295 - 6299 * |
| 买制刚,杨青,李振勇,李建军,屈凌波: "HIV化学发光免疫诊断试剂盒的研制", no. 06, pages 511 - 513 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111562366A (zh) * | 2020-06-15 | 2020-08-21 | 郑州方欣生物科技有限责任公司 | 尿液hiv抗体快速检测试剂盒、制备方法及使用方法 |
| CN112816700A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-05-18 | 杭州新脉生物科技有限公司 | 一种检测尿液中hiv抗体的胶体金试纸条 |
| CN116298279A (zh) * | 2023-05-23 | 2023-06-23 | 南京申基医药科技有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中人类免疫缺陷病毒抗体的试剂盒 |
| CN116298279B (zh) * | 2023-05-23 | 2023-08-04 | 南京申基医药科技有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中人类免疫缺陷病毒抗体的试剂盒 |
| CN116643044A (zh) * | 2023-06-15 | 2023-08-25 | 广州贝思奇诊断试剂有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中hiv-1和hiv-2抗体的试剂盒及其制备方法、应用 |
| CN116643044B (zh) * | 2023-06-15 | 2023-12-12 | 广州贝思奇诊断试剂有限公司 | 一种基于胶体金法检测尿液中hiv-1和hiv-2抗体的试剂盒及其制备方法、应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111273004B (zh) | 2024-01-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111273004A (zh) | 一种基于胶体金法检测尿液中HIV(l+2)抗体试剂条及其制备方法 | |
| CN100492010C (zh) | 生物传感器 | |
| CN100533147C (zh) | 生物传感器 | |
| CA2119168A1 (en) | Apparatus and process for simplified measurement | |
| BRPI0520182A2 (pt) | teste imunocromatográfico rápido do fluido oral | |
| CN114755418A (zh) | 一种猴痘病毒抗原检测试剂盒及其制备方法 | |
| CN111999492B (zh) | 一种联合检验covid-19n抗原和s蛋白抗体的胶体金免疫层析检测卡 | |
| CN111983229A (zh) | 胶体金定量检测幽门螺杆菌抗体试剂条及检测方法 | |
| CN211235890U (zh) | SARS-CoV-2检测试纸条、检测卡和检测试剂盒 | |
| CN112326966A (zh) | 一种新型冠状病毒抗原的快速检测试剂盒及其制备方法和应用 | |
| CN111896730A (zh) | 一种干式免疫荧光定量法肝素结合蛋白（hbp）检测试剂盒 | |
| CN104569389B (zh) | 一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒 | |
| JP3304214B2 (ja) | 簡易測定方法及び簡易測定装置 | |
| CN214750354U (zh) | 一种新型冠状病毒抗原、抗体联合智能化检测装置 | |
| JP2007218593A (ja) | バイオピリン検出用イムノクロマトグラフィー測定方法及び装置 | |
| CN106188248A (zh) | 一种eb病毒抗原制备方法及利用该抗原制备的检测eb病毒抗体的快速检测试剂盒 | |
| NO171754B (no) | Immunokjemisk kompetitiv metode for bestemmelse av antistoffer mot hiv, et proevesett for gjennomfoering av fremgangsmaaten samt anvendelse av proevesettet | |
| CN105277722A (zh) | 一种用于分型检测幽门螺杆菌感染的蛋白芯片 | |
| CN102967705A (zh) | 一种幽门螺杆菌分型检测的试剂盒 | |
| JP4229943B2 (ja) | 検体の検査方法及びその検査方法に用いる検体収容用容器 | |
| JPS63210664A (ja) | 酸素要求検出系を用いる装置のための乾燥試験片及び被検流体中の分析成分の検出方法 | |
| CN115267208A (zh) | 一种幽门螺旋杆菌抗体检测用抗原、试剂盒及其制备方法 | |
| CN215066713U (zh) | 一种新型冠状病毒中和抗体检测试纸和检测装置 | |
| CN114264816A (zh) | 一种棘球蚴抗体免疫层析试纸条和检测卡 | |
| JP2008224543A (ja) | 唾液緩衝能の測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |