CN111253468A - 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 - Google Patents
一种锌离子配合肽及其配合物和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111253468A CN111253468A CN202010073635.XA CN202010073635A CN111253468A CN 111253468 A CN111253468 A CN 111253468A CN 202010073635 A CN202010073635 A CN 202010073635A CN 111253468 A CN111253468 A CN 111253468A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- peptide
- zinc ion
- zinc
- ion complex
- complex
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 83
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 58
- 239000011701 zinc Substances 0.000 claims abstract description 35
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 claims abstract description 32
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 31
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 7
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 claims abstract description 6
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims abstract description 5
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 8
- JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L zinc dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Zn+2] JIAARYAFYJHUJI-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 8
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 6
- XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N Zinc monoxide Chemical compound [Zn]=O XLOMVQKBTHCTTD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims description 5
- 239000011592 zinc chloride Substances 0.000 claims description 5
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 4
- 108010056079 Subtilisins Proteins 0.000 claims description 4
- 102000005158 Subtilisins Human genes 0.000 claims description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 4
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 4
- 235000005074 zinc chloride Nutrition 0.000 claims description 4
- 108090000787 Subtilisin Proteins 0.000 claims description 3
- 239000011787 zinc oxide Substances 0.000 claims description 3
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 claims description 3
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N acetic acid;zinc Chemical compound [Zn].CC(O)=O.CC(O)=O ZOIORXHNWRGPMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 2
- 239000004246 zinc acetate Substances 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 abstract description 2
- 238000011165 process development Methods 0.000 abstract description 2
- 230000002508 compound effect Effects 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 206010048259 Zinc deficiency Diseases 0.000 description 6
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 4
- 229940091251 zinc supplement Drugs 0.000 description 4
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 3
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 2
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- GIVWETPOBCRTND-DCAQKATOSA-N Arg-Gln-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O GIVWETPOBCRTND-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 108090000145 Bacillolysin Proteins 0.000 description 1
- 238000001157 Fourier transform infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N Lys-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 WINFHLHJTRGLCV-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010044278 Trace element deficiency Diseases 0.000 description 1
- WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L Zinc gluconate Chemical compound [Zn+2].OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O WHMDKBIGKVEYHS-IYEMJOQQSA-L 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000003889 chemical engineering Methods 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000021245 dietary protein Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 108010045397 lysyl-tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 229960000306 zinc gluconate Drugs 0.000 description 1
- 239000011670 zinc gluconate Substances 0.000 description 1
- 235000011478 zinc gluconate Nutrition 0.000 description 1
- 229960001296 zinc oxide Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/14—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from leguminous or other vegetable seeds; from press-cake or oil-bearing seeds
- A23J1/148—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from leguminous or other vegetable seeds; from press-cake or oil-bearing seeds by treatment involving enzymes or microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/14—Vegetable proteins
- A23J3/16—Vegetable proteins from soybean
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/12—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes by fermentation of natural products, e.g. of vegetable material, animal waste material or biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/10—Organic substances
- A23K20/142—Amino acids; Derivatives thereof
- A23K20/147—Polymeric derivatives, e.g. peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K20/00—Accessory food factors for animal feeding-stuffs
- A23K20/20—Inorganic substances, e.g. oligoelements
- A23K20/30—Oligoelements
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
- A23L11/50—Fermented pulses or legumes; Fermentation of pulses or legumes based on the addition of microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/16—Inorganic salts, minerals or trace elements
- A23L33/165—Complexes or chelates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21062—Subtilisin (3.4.21.62)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/22—Cysteine endopeptidases (3.4.22)
- C12Y304/22002—Papain (3.4.22.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/24—Metalloendopeptidases (3.4.24)
- C12Y304/24028—Bacillolysin (3.4.24.28)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种锌离子配合肽及其配合物和应用,其氨基酸构成序列具体为Lys‑Tyr‑Lys‑Arg‑Gln‑Arg‑Trp(KYKRQRW)。通过鉴定出该肽的氨基酸构成及氨基酸序列,实现了推动其定向合成、制备的工艺发展,进而可以批量生产出该肽锌配合物;而且该配合肽源于大豆或花生,是食物的固有组成成分,具有与锌离子超强的配合作用。
Description
技术领域
本发明涉及物化工技术领域,具体涉及一种锌离子配合肽及其配合物与应用。
背景技术
我国人群缺锌现象比较普遍,尤其是儿童的锌缺乏状况非常严重,有高达39.6%的儿童存在不同程度的缺锌,尤其是年龄段3-4岁儿童的锌缺乏率高达64.6%;对0-18岁人群微量元素缺乏以缺锌排在第一位,缺乏率均达50%以上。促进微量元素锌在人体中的转运吸收、提高锌的吸收利用率是食品营养或功能性食品领域一直关注的重要科学问题。此外,为避免养殖畜禽及水产类动物缺锌而导致病发等危机情况,通常需在饲料中额外添加锌补充剂。目前,通常采用添加氧化锌、硫酸锌或葡萄糖酸锌等无机锌作为人或动物机体的补锌剂。
现有研究发现,真正在体内发挥作用的是有机锌而不是无机锌,有机锌更接近于机体内锌的功能作用形式,可以防止因补充无机锌而导致机体内形成不溶性物质,而且,有机锌的生物学效率比无机锌高,只需摄入微量的有机锌便可达到补锌效果,并避免体内因无机锌吸收不良而导致锌过量带来的危害。研究表明,与锌离子(Zn2+)有亲和作用的活性肽——锌配合肽及其配合物都可促锌的转运吸收。肽-锌配合物属于有机锌范畴,是一种促进机体锌摄入的新型微量元素强化剂,更有助于促进机体细胞对锌的转运吸收。
目前,市场中普遍缺少锌配合肽及其配合物相关产品,尤其是在食品及动物饲料方面,更是缺乏能够安全有效的有机锌补充产品,因此,提供一种稳定有效的锌离子配合肽及其配合物能够弥补该领域的空白。
发明内容
本发明的目的在于提供一种锌离子配合肽及其配合物和应用。
本发明所采取的技术方案是:
本发明的第一个方面,提供:
一种锌离子配合肽,其氨基酸构成序列为Lys-Tyr-Lys-Arg-Gln-Arg-Trp(KYKRQRW)。
在一些实例中,上述锌离子配合肽源自大豆、花生或化学合成。当然,可以根据实际需求,合理选择本领域中其他可替代性的氨基酸、蛋白质合成方法来得到上述锌离子配合肽。
本发明的第二个方面,提供:
一种锌离子配合肽的制备方法,具体步骤如下:
(1)取大豆、花生材料,调节温度和pH,进行酶解,得到蛋白肽溶液;
(2)取步骤(1)所得蛋白肽溶液,分离、筛选、纯化出肽组分;
其中,酶解所用酶选自ALcalase酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶的一种或多种;
所得肽组分含有上述锌离子配合肽。
当然,可以根据实际需求,合理的增加或简化其制备步骤,以得到与上述肽组分具有等同效果的肽。
在一些实例中,步骤(2)中肽组分的分子量为1~5K Da;肽含量比例为15.58%~17.18%;锌离子配合率为48.5%~52.16%。当然,可以根据实际需求,合理的选择肽组分的的分子量、肽含量比例及锌离子配合率。
在一些实例中,步骤(2)中上述分离、筛选、纯化方式选自超滤分级、凝胶层析和高效液相色谱中的一种或多种。
当然,也可以根据实际需求,合理选择本领域中其他可替代性的分离、筛选、纯化方式。
在一些实例中,步骤(1)中,温度为35℃~55℃,pH为6.0~8.5。
当然,可以根据实际需求,在选择酶的过程中适应性的调整pH,具体来说,ALcalase酶为7.0~8.5、木瓜蛋白酶为6.5~7.5、枯草杆菌中性蛋白酶为6.0~7.0。
当然,也可以根据实际需求,合理选择本领域中其他可替代性的酶。
本发明的第三个方面,提供:
一种锌离子配合物,其制备方法为:取上述锌离子配合肽或上述肽组分,加入锌离子溶液,调节pH和温度,充分反应。
当然,可以根据实际需求,合理的增加或简化其制备步骤,以得到与上述锌离子配合物具有等同效果的锌肽产物。
在一些实例中,上述锌离子配合物的制备反应pH为5.0~6.5,反应温度为60℃~90℃。
当然,可以根据实际需求,合理的调节反应中的pH及温度。
在一些实例中,上述锌离子溶液选自氯化锌溶液、硫酸锌溶液、氧化锌溶液或乙酸锌溶液;溶液浓度为0.1~1.0mmol/L。
当然,可以根据实际需求,合理的选择其他可替代性的不同浓度的含有锌离子的溶液。
本发明的第四个方面,提供:
上述锌离子配合肽、上述方法制备所得的肽组分及锌离子配合物在制备食品及动物饲料中的应用。
本发明的有益效果是:
1.本发明提供了一种锌离子配合肽及其配合物,并鉴定出该肽的氨基酸构成及氨基酸序列,推动了其定向合成、制备的工艺发展,进而批量生产出肽锌配合物;
2.本发明中的配合肽源于大豆蛋白或花生蛋白,是食物蛋白质的固有组成成分,并具有与锌离子超强的配合作用。
附图说明
图1为肽组分SPIH2的凝胶层析分离图谱;
图2为HPLC(A)和LC-ESI/MS(B、C)方法鉴定出配合肽F21的氨基酸构成序列图;
图3为锌离子配合肽与肽锌配合物的红外光谱FTIR对比图;
图4为肽锌配合物的电喷雾一级质谱(A)及二级质谱图(B);
图5为锌离子配合肽(A)和肽锌配合物(B)的H-NMR核磁共振谱图。
具体实施方式
为了使本发明的发明目的、技术方案及其技术效果更加清晰,以下结合具体实施方式,对本发明进行进一步详细说明。应当理解的是,本说明书中描述的具体实施方式仅仅是为了解释本发明,并非为了限定本发明。
以下实施例中均采用同一种锌离子配合肽,其氨基酸构成及氨基酸序列为Lys-Tyr-Lys-Arg-Gln-Arg-Trp(KYKRQRW)。
表1.不同分子量肽段的锌配合率比较
显著差异系数p<0.05。
实施例1
本例提供了一种锌离子配合物的制备方法,步骤包括:
(1)取大豆蛋白粉与纯水按1:50比例混合,调节温度至50℃和pH值至8.0,加入ALcalase酶进行酶解;
(2)取步骤(1)所得酶解产物进行100℃、5分钟灭酶后离心,取上清液即得蛋白肽液。
(3)取步骤(2)所得蛋白肽液进行超滤分级分离,超滤膜的切割分子量分别为5KDa、1K Da、0.5K Da,收集锌离子配合率最强的1~5K Da组分SPIH2(见表1)。
(4)取步骤(3)所得SPIH2组分进行凝胶层析分离,筛选收集与锌离子配合力最强的肽组分F2(见图1)。
(5)取肽组分F2进行高效液相色谱HPLC分离纯化,获得锌离子配合力最强的单一配合肽组分F21,再采用LC-ESI/MS进行氨基酸序列分析,鉴定出该配合肽的氨基酸序列为Lys-Tyr-Lys-Arg-Gln-Arg-Trp(即KYKRQRW)(见图2)。
(6)在KYKRQRW肽浓度为1mg/mL,氯化锌ZnCl2溶液浓度为0.5mmol/L,反应温度为70℃,pH=5.5等条件下,促使配合肽(KYKRQRW)与锌离子发生配合反应生成肽锌配合物(KYKRQRW-Zn)(见图3、图4、图5)。
实施例2
本例提供了一种锌离子配合物的制备方法,步骤包括:
(1)取大豆粕进行超微粉碎或先膨化后粉碎,制成大豆粕蛋白粉,再将大豆蛋白粉与纯水按1:10比例混合,调节温度50℃和pH值至7.0,依次加入木瓜蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶进行酶解。
(2)取步骤(1)所得酶解产物进行100℃灭酶5分钟后离心,取上清液即得蛋白肽液。
(3)取步骤(2)所得蛋白肽液进行超滤分级分离,超滤膜的切割分子量分别为5KDa、1K Da、0.5K Da,收集锌离子配合率最强的1~5K Da组分SPIH2(见表1)。
(4)取步骤(3)所得SPIH2组分进行凝胶层析分离,筛选收集与锌离子配合力最强的肽组分F2(见图1)。
(5)对肽组分F2进行高效液相色谱HPLC分离纯化,获取锌离子配合力最强的单一配合肽组分F21,再采用LC-ESI/MS进行氨基酸序列分析,鉴定出该配合肽的氨基酸序列为Lys-Tyr-Lys-Arg-Gln-Arg-Trp(即KYKRQRW)(见图2)。
(6)在KYKRQRW肽浓度为1mg/mL,氯化锌ZnCl2溶液浓度为0.5mmol/L,反应温度为70℃,pH=5.5等条件下,促使配合肽(KYKRQRW)与锌离子发生配合反应生成肽锌配合物(KYKRQRW-Zn)(见图3、图4、图5)。
实施例3
本例提供了一种锌离子配合物的制备方法与应用,步骤包括:
(1)根据锌离子配合肽的氨基酸组成及序列,采用固相多肽合成法制备出纯度达95%以上的锌离子配合肽(Lys-Tyr-Lys-Arg-Gln-Arg-Trp)(见图2)。
(2)配制锌离子配合肽(100μM),溶于含有ZnCl2(250μM)的50mM磷酸盐缓冲液(pH7.2)中,将混合物在室温下搅拌平衡1h。使用截止分子量为500Da的半透膜透析5h去除未结合锌,收集保留物(配合物),冷冻干燥即制取出肽锌配合物粉末。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州大学
<120> 一种锌离子配合肽及其配合物和应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Lys Tyr Lys Arg Gln Arg Trp
1 5
Claims (10)
1.一种锌离子配合肽,其特征在于,其氨基酸构成序列为Lys-Tyr-Lys-Arg-Gln-Arg-Trp。
2.根据权利要求1所述的锌离子配合肽,其特征在于,所述锌离子配合肽源自大豆、花生或化学合成。
3.一种锌离子配合肽的制备方法,其特征在于,具体步骤如下:
(1)取大豆、花生材料,调节温度和pH,进行酶解,得到蛋白肽溶液;
(2)取步骤(1)所得蛋白肽溶液,分离、筛选、纯化出肽组分;
其中,酶解所用酶选自ALcalase酶、木瓜蛋白酶和枯草杆菌中性蛋白酶的一种或多种;
所得肽组分含有如权利要求1所述锌离子配合肽。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所得肽组分的分子量为1~5KDa;肽含量比例为15.58%~17.18%;锌离子配合率为48.5%~52.16%。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(2)中所述分离、筛选、纯化方式选自超滤分级、凝胶层析和高效液相色谱中的一种或多种。
6.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,步骤(1)中所述温度为35℃~55℃,所述pH为6.0~8.5。
7.一种锌离子配合物,其特征在于,其制备方法为:取如权利要求1~2任一项所述锌离子配合肽或如权利要求3所述方法制得的锌离子配合肽,加入锌离子溶液,调节pH和温度,充分反应。
8.根据权利要求7所述的锌离子配合物,其特征在于,所述pH为5.0~6.5,所述反应温度为60℃~90℃。
9.根据权利要求7所述的锌离子配合物,其特征在于,所述锌离子溶液选自氯化锌溶液、硫酸锌溶液、氧化锌溶液或乙酸锌溶液;溶液浓度为0.1~1.0mmol/L。
10.如权利要求1~2任一项所述锌离子配合肽、如权利要求3所述方法制得的肽组分及权利要求7所述的锌离子配合物在制备食品及动物饲料中的应用。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010073635.XA CN111253468B (zh) | 2020-01-22 | 2020-01-22 | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 |
PCT/CN2020/117329 WO2021147361A1 (zh) | 2020-01-22 | 2020-09-24 | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 |
US17/586,774 US20220154239A1 (en) | 2020-01-22 | 2022-01-27 | Peptide for complexing zinc ion, complex thereof and use therefor |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202010073635.XA CN111253468B (zh) | 2020-01-22 | 2020-01-22 | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN111253468A true CN111253468A (zh) | 2020-06-09 |
CN111253468B CN111253468B (zh) | 2021-12-07 |
Family
ID=70942801
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202010073635.XA Active CN111253468B (zh) | 2020-01-22 | 2020-01-22 | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 |
Country Status (3)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20220154239A1 (zh) |
CN (1) | CN111253468B (zh) |
WO (1) | WO2021147361A1 (zh) |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021147361A1 (zh) * | 2020-01-22 | 2021-07-29 | 广州大学 | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 |
CN114395602A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-04-26 | 广州大学 | 一种促乳酸菌生长发酵的肽-锌配合物的制备方法及应用 |
CN114634882A (zh) * | 2022-03-25 | 2022-06-17 | 广州大学 | 一种促进酵母生长和发酵的方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101283805A (zh) * | 2008-05-22 | 2008-10-15 | 广州大学 | 一种锌-多肽配合物及其制备方法和应用 |
CN103667407A (zh) * | 2012-09-07 | 2014-03-26 | 天津拓飞生物科技有限公司 | 一种多肽-锌金属配合物及其制备方法与应用 |
CN108251488A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-07-06 | 奥格生物技术(上海)有限公司 | 一种脱脂大豆蛋白小肽螯合锌及其制备方法 |
CN108531532A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-14 | 南京财经大学 | 一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用 |
CN109439715A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-08 | 黑龙江八农垦大学 | 绿豆蛋白肽-锌螯合物的制备方法 |
CN109957592A (zh) * | 2017-12-14 | 2019-07-02 | 中食都庆(山东)生物技术有限公司 | 一种酶解法制备大豆肽 |
Family Cites Families (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN106260602A (zh) * | 2016-08-11 | 2017-01-04 | 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所 | 一种强螯合强度蛋白锌饲料添加剂的制备方法及用途 |
CN107156856A (zh) * | 2017-05-09 | 2017-09-15 | 安徽珠峰生物科技有限公司 | 一种大豆源锌螯合肽、肽锌螯合物的制备方法及其用途 |
CN108201137A (zh) * | 2018-01-22 | 2018-06-26 | 武汉维奥制药有限公司 | 一种氨基酸螯合物的制备方法 |
CN111066963A (zh) * | 2018-10-21 | 2020-04-28 | 陈石良 | 一种适合反刍动物的蛋白肽锌螯合物的制备方法 |
CN111253468B (zh) * | 2020-01-22 | 2021-12-07 | 广州大学 | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 |
-
2020
- 2020-01-22 CN CN202010073635.XA patent/CN111253468B/zh active Active
- 2020-09-24 WO PCT/CN2020/117329 patent/WO2021147361A1/zh active Application Filing
-
2022
- 2022-01-27 US US17/586,774 patent/US20220154239A1/en active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101283805A (zh) * | 2008-05-22 | 2008-10-15 | 广州大学 | 一种锌-多肽配合物及其制备方法和应用 |
CN103667407A (zh) * | 2012-09-07 | 2014-03-26 | 天津拓飞生物科技有限公司 | 一种多肽-锌金属配合物及其制备方法与应用 |
CN109957592A (zh) * | 2017-12-14 | 2019-07-02 | 中食都庆(山东)生物技术有限公司 | 一种酶解法制备大豆肽 |
CN108251488A (zh) * | 2018-03-30 | 2018-07-06 | 奥格生物技术(上海)有限公司 | 一种脱脂大豆蛋白小肽螯合锌及其制备方法 |
CN108531532A (zh) * | 2018-04-17 | 2018-09-14 | 南京财经大学 | 一种大豆蛋白肽及其制备方法和应用 |
CN109439715A (zh) * | 2018-11-23 | 2019-03-08 | 黑龙江八农垦大学 | 绿豆蛋白肽-锌螯合物的制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
SUYIN ZHU ET AL: "Novel Zn-Binding Peptide Isolated from Soy Protein Hydrolysates:Purification, Structure, and Digestion", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 * |
郑英敏等: "大豆多肽-锌螯合物的制备工艺优化及其结构表征", 《食品工业科技》 * |
高素蕴: "大豆多肽锌螯合盐的制备及生理活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技I辑》 * |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2021147361A1 (zh) * | 2020-01-22 | 2021-07-29 | 广州大学 | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 |
CN114395602A (zh) * | 2022-01-21 | 2022-04-26 | 广州大学 | 一种促乳酸菌生长发酵的肽-锌配合物的制备方法及应用 |
CN114634882A (zh) * | 2022-03-25 | 2022-06-17 | 广州大学 | 一种促进酵母生长和发酵的方法 |
CN114634882B (zh) * | 2022-03-25 | 2023-06-20 | 广州大学 | 一种促进酵母生长和发酵的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20220154239A1 (en) | 2022-05-19 |
CN111253468B (zh) | 2021-12-07 |
WO2021147361A1 (zh) | 2021-07-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN111253468B (zh) | 一种锌离子配合肽及其配合物和应用 | |
CN107163129B (zh) | κ-酪蛋白来源生物活性肽的制备和应用 | |
CN107573413B (zh) | 牛乳αs2-酪蛋白来源生物活性肽的制备和应用 | |
CN108794577A (zh) | 一种抗氧化多肽的制备方法 | |
CN111066963A (zh) | 一种适合反刍动物的蛋白肽锌螯合物的制备方法 | |
CN105724784A (zh) | 以大豆分离蛋白为基底物制备的多肽锌螯合物及制备方法 | |
CN116715724B (zh) | 来源于草菇子实体的抗氧化肽及其应用 | |
CN116731108B (zh) | 草菇抗氧化肽及其应用 | |
CN112094881B (zh) | 稳定型钙离子螯合肽的制备方法与应用 | |
CN109868302A (zh) | 一种大豆蛋白肽铁螯合物的制备方法 | |
CN108484721B (zh) | 一种酶解黑鲨鱼皮制备抗氧化多肽及分离纯化的方法 | |
CN109868301A (zh) | 一种血球蛋白肽铁螯合物的制备方法 | |
CN111825745B (zh) | 一种免疫调节活性七肽及其制备方法和应用 | |
CN108794576B (zh) | 以黑鲨鱼皮为原料制备抗氧化多肽的方法 | |
CN108976290B (zh) | 一种红毛藻抗氧化肽的制备方法 | |
CN116751248B (zh) | 抗氧化肽及其在制备清除自由基的药物中的应用 | |
CN111100895A (zh) | 一种高活性小肽螯合钙的生产工艺 | |
CN116239666B (zh) | 一种螯合钙肽混合物 | |
CN108794575A (zh) | 一种黑鲨鱼皮抗氧化多肽的制备方法 | |
CN117384993B (zh) | 一种猴头菌中有机硒的提取方法 | |
CN113185575B (zh) | 一种花生抗氧化多肽及其制备方法 | |
CN110776554B (zh) | 抗氧化肽的筛选方法 | |
CN115894622A (zh) | 一种具有抗氧化活性的葛根多肽及其应用 | |
CN111073927A (zh) | 一种高活性小肽铈螯合物的生产工艺 | |
CN114685640A (zh) | 一种蚕蛹活性肽螯合物的制备方法及应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |