CN117384993B - 一种猴头菌中有机硒的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种猴头菌中有机硒的提取方法。该提取方法包括以下步骤：将猴头菌与缓冲液混合，调节至碱性，酶解、离心，得含硒蛋白的上清液以及含硒多糖的沉淀物；所述酶解采用碱性蛋白酶和碱性木聚糖酶按质量比为1～2：1搭配的复合酶。本发明工艺简单，硒蛋白和硒多糖的得率高，且硒浓度含量高。
Description
技术领域
本发明属于食品加工技术领域，具体涉及一种猴头菌中有机硒的提取方法。
背景技术
硒是人体不可或缺的微量元素，作为多种酶的活性中心参与人体代谢。具有提高机体免疫能力、抗肿瘤、清除体内自由基、降低某些重金属毒性的生理功能。另外还具有保护心肌和防治克山病、大骨节病、肝病及降低多种癌症发病危险等功能。由于人体内无法自发地合成硒，硒因此很容易就被人体排除体外，所以机体必须每日都摄入一定量的硒，才能保持人体正常的代谢功能。因此，在低硒带生活的人单靠天然食物补充硒无法从根本上缓解缺硒的情况，对富硒食品及产品的需求成为现在所需解决的问题。
在生物体内硒以硒蛋白、硒多糖和硒核酸等有机硒形态为主。硒蛋白主要以含硒氨基酸等含硒有机化合物的形式存在于蛋白质中，如硒代半胱氨酸和硒代甲硫氨酸。同时，硒可以与多糖或核酸进行结合，它们与硒蛋白一起构成了生物体内主要的含硒生物大分子物质。科学研究已经证实，无机硒因为其毒性和致突变效应，在利用时对控制剂量的要求极高，而有机硒毒性远远低于无机硒且具有副作用小等优势，并且有机硒的生物利用率以及生物活性都明显优于无机硒，所以使得更多的研究注重于以生物方式合成有机硒。
目前，在大型真菌提取蛋白方法中，主要有碱提法、酶提法和超声复合提取法。碱法具备提取率高，操作简单等优势，但如碱液浓度过高会使蛋白结构产生不可逆的变性，降低其营养价值。酶解法具有反应条件温和、操作方便等优势，但成本较高蛋白质得率却不理想。超声波辅助法短时高效，但单独使用时提取效果十分有限，通常需要和其它提取方法联合使用。
因此，有必要提供一种能够高效提取食用真菌中硒蛋白以及硒多糖的方法。
发明内容
本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种猴头菌中有机硒的提取方法。因此本发明工艺简单，硒蛋白和硒多糖的得率高，且硒浓度含量高。
本发明的第一方面，提供一种猴头菌中有机硒的提取方法，包括以下步骤：
将猴头菌与缓冲液混合，调节至碱性，酶解、离心，得含硒蛋白的上清液以及含硒多糖的沉淀物；
所述酶解采用碱性蛋白酶和碱性木聚糖酶按质量比为1～2：1搭配的复合酶。
在本发明的一些实施方式中，按重量计，所述缓冲液为Tris缓冲液。
在本发明的一些实施方式中，按重量计，所述复合酶占猴头菌的2％～5％。
在本发明的一些实施方式中，所述碱性指的是pH为9～11。
在本发明的一些实施方式中，所述酶解的温度为40～50℃；和/或，所述酶解的时间为8～36h。
在本发明的一些实施方式中，所述猴头菌与缓冲液的固液比为1g：5～25mL。
在本发明的一些实施方式中，所述离心的温度为0～10℃；和/或，所述离心的转速为3000～6000r/min；和/或，所述离心的时间为5～20min。
在本发明的一些实施方式中，还包括猴头菌的前处理步骤：将猴头菌粉粹至粒径≤100目。
在本发明的一些实施方式中，还包括沉淀物的纯化步骤：向沉淀物中加水浸提，压滤，取滤液，浓缩后进行醇提，得纯化硒多糖。
在本发明的一些实施方式中，所述浸提的温度为80～100℃；和/或，所述浸提的时间为2h；和/或，所述醇提使用60％～95％的乙醇。
在本发明的一些实施方式中，所述猴头菌为猴头菌菌丝体。
本发明有益效果：
(1)本发明以水或乙醇水溶液为溶剂，未添加任何化学试剂，操作环境能耗较低；
(2)本发明以碱性蛋白酶和碱性木聚糖酶搭配的复合酶进行酶解，二者具有协同作用，有效增加硒蛋白以及硒多糖的提取效率；
(3)本发明采用的原料为食源性猴头菌，通过本发明方法制备得到的硒蛋白和硒多糖可进一步用作食品添加剂。
具体实施方式
以下将结合实施例对本发明的构思及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本发明的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本发明的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本发明的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本发明保护的范围。
实施例
实施例1
将猴头菌富硒菌丝体粉碎并过100目筛，称取1g，用10mLTris缓冲液悬浮后，调节溶液的pH为9～10。加入20mg的碱性蛋白酶和15mg的碱性木聚糖酶，于40℃条件下密闭酶解12h。灭酶，放置至室温，然后在4℃条件下，5000r/min离心10min，得到上清液以及沉淀物，其中上清液即为含硒蛋白液。
向所得沉淀物中加入10倍量的蒸馏水进行热水浸提，浸提温度为90℃，浸提时间2.5h。压滤，取滤液，真空浓缩至原体积的1/4。浓缩液取出后按1∶5的比例加入75％乙醇，静置一夜，取沉淀。将沉淀物置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥过程中：温度设置为-50℃；然后将干燥后的沉淀物进行粉碎并过80目筛，得到硒多糖粉末。
实施例2
将猴头菌富硒菌丝体粉碎并过100目筛，称取1g，用10mLTris缓冲液悬浮后，调节溶液的pH为9～10。加入15mg的碱性蛋白酶和12mg的碱性木聚糖酶，于45℃条件下密闭酶解16h。灭酶，放置至室温，然后在4℃条件下，5500r/min离心10min，得到上清液以及沉淀物，其中上清液即为含硒蛋白液。
向所得沉淀物中加入12倍量的蒸馏水进行热水浸提，浸提温度为95℃，浸提时间2h。压滤，取滤液，真空浓缩至原体积的1/3。浓缩液取出后按1∶4的比例加入75％乙醇，静置一夜，取沉淀。将沉淀物置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥过程中：温度设置为-50℃；然后将干燥后的沉淀物进行粉碎并过80目筛，得到硒多糖粉末。
实施例3
将猴头菌富硒菌丝体粉碎并过100目筛，称取1g，用20mLTris缓冲液悬浮后，调节溶液的pH为9～10。加入20mg的碱性蛋白酶和10mg的碱性木聚糖酶，于40℃条件下密闭酶解24h。灭酶，放置至室温，然后在4℃条件下，4000r/min离心15min，得到上清液以及沉淀物，其中上清液即为含硒蛋白液。
向所得沉淀物中加入15倍量的蒸馏水进行热水浸提，浸提温度为90℃，浸提时间2h。压滤，取滤液，真空浓缩至原体积的1/4。浓缩液取出后按1∶4的比例加入75％乙醇，静置一夜，取沉淀。将沉淀物置于真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥过程中：温度设置为-50℃；然后将干燥后的沉淀物进行粉碎并过80目筛，得到硒多糖粉末。
对比例1
参照实施例1中的方法进行，区别仅在于：仅加入35mg的碱性蛋白酶进行酶解。
对比例2
参照实施例1中的方法进行，区别仅在于：仅加入35mg的碱性木聚糖酶进行酶解。
对比例3
参照实施例1中的方法进行，区别仅在于：加入10mg的碱性蛋白酶和25mg的碱性木聚糖酶进行酶解。
对比例4
参照实施例1中的方法进行，区别仅在于：加入20mg的碱性蛋白酶和15mg的纤维素酶进行酶解。
测试例
1、蛋白及多糖含量测定
配制1mg/mL的牛血清蛋白(BSA)标准液，分别吸取BSA标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，补加蒸馏水到10mL，各自添加适量考马斯亮蓝G250试剂，在595nm处测定吸光度，绘制蛋白含量与吸光度的标准曲线。并根据标准曲线换算各蛋白提取液的吸光度为蛋白质含量。结果见表1。
配制0.1mg/mL的葡萄糖(D+)标准液，分别吸取BSA标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，补加蒸馏水到1mL，各加1mL 5％苯酚、5mL浓硫酸，在485nm处测定吸光值，绘制葡萄糖含量与吸光度的标准曲线。测定最终多糖提取液的吸光度，并根据标准曲线换算为多糖含量。结果见表1。
表1实施例1～3以及对比例1～4上清液中蛋白质以及多糖含量
| 蛋白含量mg/猴头菌富硒菌丝体g | 多糖含量mg/猴头菌富硒菌丝体g | |
| 实施例1 | 105.2 | 414.7 |
| 实施例2 | 102.4 | 402.6 |
| 实施例3 | 98.1 | 405.9 |
| 对比例1 | 50.6 | 186.3 |
| 对比例2 | 42.9 | 174.0 |
| 对比例3 | 79.6 | 306.4 |
| 对比例4 | 72.3 | 328.5 |
2、硒含量的测定：
测定实施例1～3和对比例1～4中蛋白质和多糖提取物的总硒以及有机硒含量。
(1)吸取蛋白质/多糖提取液5mL，按照GB 5009.93-2017第一法原子荧光光度计法测总硒含量；
(2)分别向蛋白质/多糖提取液中加入10mL混合酸液(盐酸：硝酸(4:1，V/V)，加热消解，并及时补加混酸，待溶液变为澄清无色并伴有白烟时，继续加热至剩余量为2mL时；再加入5mL盐酸溶液(6mol/L)，继续加热至清亮无色并伴有白烟出现，冷却，转移至25mL容量瓶中，加入盐酸5.0mL、铁氰化钾溶液2.5mL，用去离子水定容至刻度，混匀，采用原子荧光光谱法测无机硒含量。
(3)根据有机硒含量＝总硒含量-无机硒含量，计算得到有机硒含量。
结果见表2。
表2蛋白质、多糖提取物中的总硒含量和有机硒含量
由上表的数据可以看出，实施例1～3的蛋白以及多糖提取率显著高于对比例1～4，相应地，实施例1～3提取得到的蛋白质和多糖提取物中的总硒以及有机硒也要显著高于对比例1～4；本发明中将碱性蛋白酶和碱性木聚糖酶以适当质量比例搭配具有协同作用。
以上内容对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所属技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。此外，在不冲突的情况下，本发明的实施例及实施例中的特征可以相互组合。
Claims (6)
1.一种猴头菌中有机硒的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
将猴头菌与缓冲液混合，调节至碱性，酶解、离心，得含硒蛋白的上清液以及含硒多糖的沉淀物；
所述酶解采用碱性蛋白酶和碱性木聚糖酶按质量比为1～2：1搭配的复合酶；
所述猴头菌为富硒猴头菌菌丝体；
按重量计，所述复合酶占猴头菌的2％～5％；
所述碱性指的是pH为9～11；
所述酶解的温度为40～50℃，所述酶解的时间为8～36h。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述猴头菌与缓冲液的固液比为1g：5～25mL。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述离心的温度为0～10℃；和/或，所述离心的转速为3000～6000r/min；和/或，所述离心的时间为5～20min。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，还包括猴头菌的前处理步骤：将猴头菌粉粹至粒径≤100目。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，还包括沉淀物的纯化步骤：向沉淀物中加水浸提，压滤，取滤液，浓缩后进行醇提，得纯化硒多糖。
6.根据权利要求5所述的提取方法，其特征在于，所述浸提的温度为80～100℃；和/或，所述浸提的时间为2h；和/或，所述醇提使用60％～95％的乙醇。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105779539A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-07-20 | 福建农林大学 | 一种猴头菇蛋白肽-硒螯合物的制备方法 |
| CN111748046A (zh) * | 2019-03-29 | 2020-10-09 | 湖南万臻生物科技有限公司 | 一种富硒蕈菌菌粉硒多糖的高效提取方法 |
| CN112062866A (zh) * | 2020-07-22 | 2020-12-11 | 湖北民族大学 | 一种猴头菌富硒多糖及其制备方法和用途 |
| CN115948491A (zh) * | 2023-01-06 | 2023-04-11 | 和乐聚健康产业(扬州)有限公司 | 一种抗氧化及预防肿瘤的硒肽螯合物的制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Mushrooms as Efficient Enzymatic Machinery;Waill A Elkhateeb等;Journal of Biomedical research&environmental sciences;20220429;第3卷(第4期);第423-428页 * |
| 酶法辅助提取猴头菇中硒多糖工艺中复合酶用量的优化;顾浩峰;食品与发酵科技;20170731;第53卷(第4期);第39-44页 * |
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