CN110835640A - 一种羊肚菌多糖的提取方法及应用 - Google Patents

一种羊肚菌多糖的提取方法及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种羊肚菌多糖的提取方法及应用，首先将羊肚菌粉碎后与复合菌剂混合发酵；其中，复合菌剂包括酵母菌和能够分泌几丁质酶的枯草芽孢杆菌；然后将得到的发酵液与复合酶制剂混合，获得酶解液；其中，复合酶制剂包括几丁质酶与酸性蛋白酶；最后，将酶解液离心、取上清并进行浓缩，加入无水乙醇进行醇析、干燥，得到羊肚菌多糖。本发明的提取工艺简单，工艺条件温和，所得的羊肚菌多糖含量高、生物活性强，在促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖方面具有显著效果。

Description

一种羊肚菌多糖的提取方法及应用
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种羊肚菌多糖的提取方法及应用。
背景技术
羊肚菌隶属于子囊菌亚门、盘菌纲、盘菌目、羊肚菌科、羊肚菌属，因其形似羊肚而得名。羊肚菌兼可药用和食用，传统中医认为，羊肚菌性平、味甘，具有益肠胃、消化助食的作用。现代研究则表明，羊肚菌含有丰富的多糖、蛋白质、氨基酸、维生素以及锌、硒、铁、锗、铜等多种微量元素。特别是羊肚菌多糖，现代医学研究发现，羊肚菌多糖具有抗肿瘤、抗菌、抗疲劳、增强免疫力等作用，在现代医学上有重要的开发和利用价值。
目前，羊肚菌多糖的提取一般有溶剂浸提法、酸提法、碱提法、酶法等。溶剂浸提法的提取效率低且费时；酸碱提法的程序繁琐，且极易破坏多糖中的糖苷键，使其生物活性降低；酶解法能作用于限定的底物，限制了它的广泛应用。
发明内容
针对上述技术问题，本发明提供了一种羊肚菌多糖的提取方法及应用，以解决现有方法提取效率低、费时、程序繁琐、易降低多糖生物活性的问题。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案予以实现：
一种羊肚菌多糖的提取方法，包括：
步骤1：将羊肚菌粉碎后与复合菌剂混合发酵；其中，复合菌剂包括酵母菌和能够分泌几丁质酶的枯草芽孢杆菌；
步骤2：将步骤1得到的发酵液与复合酶制剂混合，获得酶解液；其中，复合酶制剂包括几丁质酶与酸性蛋白酶；
步骤3：将酶解液离心、取上清并进行浓缩，加入无水乙醇进行醇析、干燥，得到羊肚菌多糖。
具体的，所述的复合菌剂的添加质量为羊肚菌质量的1％～5％。
具体的，复合菌剂中酵母菌与芽孢杆菌的质量比为1：2。
具体的，所述的步骤1中发酵温度为29～33℃，pH值为3.5～4.5，发酵时间为12～16小时。
具体的，复合酶制剂添加质量为羊肚菌质量的1.5％～2.0％。
具体的，复合酶制剂中几丁质酶与酸性蛋白酶的质量比为1：1。
具体的，所述的步骤2中酶解过程温度为36～40℃，pH值为3.5～4.2，作用时间为8～12小时。
本发明还公开了上述制备方法制备的羊肚菌多糖用于淋巴细胞和白细胞增殖方面的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的提取工艺简单，工艺条件温和，所得的羊肚菌多糖含量高、生物活性强，在促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖方面具有显著效果。
具体实施方式
本发明下列实施例中所使用的酵母菌为安琪酵母股份有限公司购买，酵母菌的保藏编号为CGMCC No.2.1638。芽孢杆菌也为市购，芽孢杆菌的保藏编号为CGMCC No.9166。
以下给出本发明的具体实施例，需要说明的是本发明并不局限于以下具体实施例中，凡在本申请技术方案基础上做的等同变换均落入本发明的保护范围。
实施例1
步骤1，发酵：将干燥的羊肚菌子实体粉碎后加入5～7倍水膨胀，并加入1％(w/w)的由酵母菌和能分泌几丁质酶的枯草芽孢杆菌(以下简称芽孢杆菌)的复合菌剂进行摇床发酵。酵母菌与芽孢杆菌的重量比为1：2，发酵温度为29℃，pH值为4.5，发酵时间为16小时。
步骤2，酶解：发酵一段时间后，将发酵液混合均匀，加入复合酶制剂，该复合酶制剂由几丁质酶与酸性蛋白酶按照重量比为1：1的比例混合而成。复合酶制剂的添加量为1.5％，作用温度为36℃，pH值为4.2，作用时间为 12小时。
步骤3：将步骤2获得的酶解液进行离心，取上清液并进行浓缩，之后加入4倍体积的无水乙醇，得醇析物，之后将醇析物喷雾干燥，得水溶性羊肚菌多糖。测试发现，本实施例获得的羊肚菌多糖的得率为71.7％。
本实施例制备的羊肚菌多糖用于促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖，其增值效果见表1和下述实验结果。
实施例2
步骤1，发酵：将干燥的羊肚菌子实体粉碎后加入5-7倍水膨胀，并加入3％(w/w)的酵母菌和能分泌几丁质酶的枯草芽孢杆菌(以下简称芽孢杆菌)的复合菌剂进行摇床发酵。酵母菌与芽孢杆菌的重量比为1：2，发酵温度为31℃，pH值为4.0，发酵时间为14小时。
步骤2，酶解：发酵一段时间后，将发酵液混合均匀，加入复合酶制剂，该复合酶制剂由几丁质酶与酸性蛋白酶按照重量比为1：1的比例混合而成。复合酶制剂的添加量为1.75％，作用温度为38℃，pH值为3.9，作用时间为 10小时。
将步骤2获得的酶解液进行离心，取上清液并进行浓缩，之后加入4 倍体积的无水乙醇，得醇析物，之后将醇析物喷雾干燥，得水溶性羊肚菌多糖。水溶性羊肚菌多糖的得率为72.5％。
本实施例制备的羊肚菌多糖用于促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖，其增值效果同实施例1。
实施例3
步骤1，发酵：将干燥羊肚菌子实体粉碎后加入5-7倍水膨胀，并加入 5％(w/w)的酵母菌和能分泌几丁质酶的枯草芽孢杆菌(以下简称芽孢杆菌) 的复合菌剂进行摇床发酵。酵母菌与芽孢杆菌的重量比为1：2，发酵温度为33℃，pH值为3.5，发酵时间为12小时。
步骤2，酶解：发酵一段时间后，将发酵液混合均匀，加入复合酶制剂，该复合酶制剂由几丁质酶与酸性蛋白酶按照重量比为1：1混合而成。复合酶制剂添加量为2.0％，作用温度为40℃，pH值为3.5，作用时间为8小时。
步骤3：将步骤2获得的酶解液进行离心，取上清液并进行浓缩，之后加入4倍体积的无水乙醇，得醇析物，之后将醇析物喷雾干燥，得水溶性羊肚菌多糖。水溶性羊肚菌多糖的得率为74.3％。
本实施例制备的羊肚菌多糖用于促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖，其增值效果同实施例1。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于：本对比例中不加入复合菌剂。
本对比例制备的羊肚菌多糖用于促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖，其增值效果见表1和下述实验结果。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于：羊肚菌子实体粉碎后，使用NaOH 溶液取代水使其膨胀(NaOH溶液与水的作用时间为实施例3中发酵与酶解的时间之和)，并且不加入复合菌剂及复合酶制剂。
本对比例制备的羊肚菌多糖用于促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖，其增值效果见表1和下述实验结果。
对比例3
本对比例与实施例1的区别在于：羊肚菌子实体粉碎后，使用盐酸溶液取代水使其膨胀(盐酸溶液与水的作用时间为实施例3中发酵与酶解的时间之和)，并且不加入复合菌剂及复合酶制剂。
本对比例制备的羊肚菌多糖用于促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖，其增值效果见表1和下述实验结果。
对比例4
本对比例与实施例1的区别在于：不加入复合菌剂及复合酶制剂，且羊肚菌子实体粉碎后加入5-7倍水膨胀，并于95℃的水浴条件下反应一段时间 (反应时间为实施例3中发酵与酶解的时间之和)。
本对比例制备的羊肚菌多糖用于促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖，其增值效果见表1和下述实验结果。
以羊肚菌多糖对小鼠外周血中白细胞和淋巴细胞数量的影响程度表示羊肚菌多糖的生物活性。
(1)实验方法
60只SPF BALB/c小鼠(8周龄，18至20g)被随机分为6组，每组 10只，在无菌、22±1℃的环境下饲养一周后，采用灌胃的方式对小鼠进行多糖给药，实验时间共进行7天。CT组为空白对照组，对小鼠不做任何处理；PC1组为药物对照组，每天为小鼠灌胃碱提法(对比例2)所得羊肚菌多糖(200mg/Kg体重)；PC2组为药物对照组，每天为小鼠灌胃酸提法 (对比例3)所得羊肚菌多糖(200mg/Kg体重)；PC3组为药物对照组，每天为小鼠灌胃溶剂浸提法(对比例4)所得羊肚菌多糖(200mg/Kg体重)； PC4组为药物对照组，每天为小鼠灌胃酶法(对比例1)所得羊肚菌多糖(200 mg/Kg体重)；EG组为本发明组，每天为小鼠灌胃实施例1所得的羊肚菌多糖(200mg/Kg体重)。使用全自动血细胞分析仪对小鼠外周血中的白细胞及淋巴细胞数量进行测定。
(2)实验结果
表1羊肚菌多糖对小鼠外周血中白细胞和淋巴细胞数量的影响
Figure RE-GDA0002361219970000061
经统计分析，本发明组的小鼠外周血中的白细胞及淋巴细胞数量均显著高于各药物对照组和空白对照组(p<0.05)，说明在促进外周血白细胞及淋巴细胞的增殖方面，本发明组所得的羊肚菌多糖效果显著。

Claims (8)

1.一种羊肚菌多糖的提取方法，其特征在于，包括：
步骤1：将羊肚菌粉碎后与复合菌剂混合发酵；其中，复合菌剂包括酵母菌和能够分泌几丁质酶的枯草芽孢杆菌；
步骤2：将步骤1得到的发酵液与复合酶制剂混合，获得酶解液；其中，复合酶制剂包括几丁质酶与酸性蛋白酶；
步骤3：将酶解液离心、取上清并进行浓缩，加入无水乙醇进行醇析、干燥，得到羊肚菌多糖。
2.如权利要求1所述的羊肚菌多糖的提取方法，其特征在于，所述的复合菌剂的添加质量为羊肚菌质量的1％～5％。
3.如权利要求1所述的羊肚菌多糖的提取方法，其特征在于，复合菌剂中酵母菌与芽孢杆菌的质量比为1：2。
4.如权利要求1所述的羊肚菌多糖的提取方法，其特征在于，所述的步骤1中发酵温度为29～33℃，pH值为3.5～4.5，发酵时间为12～16小时。
5.如权利要求1所述的羊肚菌多糖的提取方法，其特征在于，复合酶制剂添加质量为羊肚菌质量的1.5％～2.0％。
6.如权利要求1所述的羊肚菌多糖的提取方法，其特征在于，复合酶制剂中几丁质酶与酸性蛋白酶的质量比为1：1。
7.如权利要求1所述的羊肚菌多糖的提取方法，其特征在于，所述的步骤2中酶解过程温度为36～40℃，pH值为3.5～4.2，作用时间为8～12小时。
8.权利要求1～7任一项所述的制备方法制备的羊肚菌多糖用于淋巴细胞和白细胞增殖方面的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112442520A (zh) * 2020-11-12 2021-03-05 正安绿福康农业有限责任公司 一种羊肚菌多糖的高效率提取加工工艺

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101870740A (zh) * 2010-06-13 2010-10-27 华南师范大学 一种尖顶羊肚菌胞外多糖提取物及其制备方法和应用
CN103130909A (zh) * 2013-03-17 2013-06-05 吉林大学 一种富硒羊肚菌多糖的制备方法
US20130289136A1 (en) * 2010-12-24 2013-10-31 Societe Industrielle Limousine D'application Biologique Saccharide polymer obtained from manihot esculenta, production process, and use as cosmetic active ingredient for tightening the skin
CN104357361A (zh) * 2014-11-14 2015-02-18 青岛农业大学 一株产几丁质酶的枯草芽孢杆菌及其应用
CN108659139A (zh) * 2018-04-12 2018-10-16 山西大学 Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101870740A (zh) * 2010-06-13 2010-10-27 华南师范大学 一种尖顶羊肚菌胞外多糖提取物及其制备方法和应用
US20130289136A1 (en) * 2010-12-24 2013-10-31 Societe Industrielle Limousine D'application Biologique Saccharide polymer obtained from manihot esculenta, production process, and use as cosmetic active ingredient for tightening the skin
CN103130909A (zh) * 2013-03-17 2013-06-05 吉林大学 一种富硒羊肚菌多糖的制备方法
CN104357361A (zh) * 2014-11-14 2015-02-18 青岛农业大学 一株产几丁质酶的枯草芽孢杆菌及其应用
CN108659139A (zh) * 2018-04-12 2018-10-16 山西大学 Plackett-Burman设计和响应面法联用优化提取羊肚菌多糖的方法

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙剑秋 等: "《微生物原生质体技术》", 30 April 2008, 东北林业大学出版社 *
张修彦等: "SPF级Balb/c小鼠脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标的测定与比较", 《中国组织工程研究与临床康复》 *
秦川: "《中华医学百科全书 医学实验动物学》", 31 December 2018, 中国协和医科大学出版社 *
范三红 等: "响应面优化羊肚菌多糖提取工艺及抗氧化性", 《食品工业科技》 *
蔡玉春等: "田鼠巴贝虫感染BALB/c小鼠血细胞动态变化", 《中国血吸虫病防治杂志》 *
阮文强等: "不同来源的3株牛病毒性腹泻病毒对小鼠的致病性分析", 《畜牧兽医学报》 *
陈慧英 等: "T-2毒素对BALB/c小鼠生长性能、血液指标和抗氧化能力的影响", 《动物营养学报》 *
顾可飞等: "牛肝菌、羊肚菌营养功能特性及利用价值浅析", 《食品工业》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112442520A (zh) * 2020-11-12 2021-03-05 正安绿福康农业有限责任公司 一种羊肚菌多糖的高效率提取加工工艺

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