CN111246849A - 学习记忆能力增强组合物 - Google Patents

Abstract

提供一种增强学习记忆能力的新型方法。更具体而言，提供一种含有去氢厄弗酚的学习记忆能力增强组合物。

Description

学习记忆能力增强组合物

技术领域

本发明涉及学习记忆能力增强组合物等。

背景技术

从年轻到老年各个年龄层都需要脑功能的维持、提高、改善。学习记忆能力的维持、提高、改善不仅对准备升学、资格考试等的学习而言很重要，对于日常工作和生活来说也很重要。此外，对高龄层而言，记忆力的降低、认知功能的降低关乎生活的质量，因此特别重要。不论年龄，都需要预防学习记忆能力降低和/或维持、提高、改善学习记忆能力。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Singhuber J，Baburin L，Khom S et al.：GABAA receptormodulators from the Chinese herbal drug junci medulla-the pith of juncuseffuses.Planta med 78：455-458(2012)

非专利文献2：Wang YG，Wang YL，Zhai HF et al.：Phenanthrens from juncuseffusus with anxiolytic and sedative activities.Nat Prod Res.26：1234-1239(2012)

非专利文献3：Liao YJ，Zhai HF，Zhang B et al.：Anxiolytic and sedativeeffects of dehydroeffusol from juncus effusus in mice.Planta med.77：416-420(2011)

发明内容

发明要解决的问题

本发明的课题在于提供增强学习记忆能力的新型方法。

用于解决问题的方案

本发明人等发现去氢厄弗酚的增强学习记忆能力的可能性，进而反复进行改良从而完成了本发明。

本发明例如包含以下项目记载的主题。

项目1.

一种学习记忆能力增强组合物，其含有去氢厄弗酚。

项目2.

根据项目1所述的组合物，其用于抑制学习记忆能力降低或用于改善学习记忆能力。

项目3.

根据项目1或2所述的组合物，其为经口组合物。

项目4.

根据项目1～3中任一项所述的组合物，其为食品组合物或药物组合物。

项目5.

一种学习记忆能力增强组合物的制造方法，其中包含配混去氢厄弗酚的工序。

发明的效果

通过本发明，提供一种学习记忆能力增强组合物，其对学习记忆能力的提高、维持、改善、降低抑制(特别是降低预防)等是有用的。

附图说明

图1示出将蔺草全草50％乙醇水溶液提取液或蔺草芯50％乙醇水溶液提取液进行HPLC分析得到的色谱图。

图2示出用于Y型迷宫测试的Y字型迷宫的总览、及自发交替行为率(％)的算出例。

图3示出通过Y型迷宫测试对厄弗酚及去氢厄弗酚的学习记忆能力增强效果进行研究并算出的自发交替行为率(％)。

图4示出通过Y型迷宫测试对去氢厄弗酚的学习记忆能力增强效果进行研究并算出的自发交替行为率(％)。

具体实施方式

以下对本发明的各实施方式进行进一步详细的说明。

本发明所包含的学习记忆能力增强组合物(以下有时称作“本发明的学习记忆能力增强组合物”)含有去氢厄弗酚。去氢厄弗酚为以下的结构式所示的化合物。

用于本发明的去氢厄弗酚可以为合成品，也可以为将自然界中存在的物质进行提取及纯化而得者。可以通过公知的方法或基于公知的方法可以容易地联想到的方法来合成并得到。由自然界获取时，例如已知去氢厄弗酚存在于蔺草中，可以由蔺草提取(及根据需要的纯化)并得到。更详细而言，例如可以通过水、乙醇、或这些的混合液由蔺草进行提取而得到。作为该提取液，特别优选40～60％乙醇水溶液，特别优选50％乙醇水溶液。此外，根据需要，还可以将进一步得到的提取液进一步进行分馏和/或纯化。分馏例如可以通过液-液分配提取来进行。该分配例如可以使用水和乙酸乙酯来进行。此外，纯化例如可以通过高效液相色谱(HPLC)进行。此外，供于提取的蔺草的部分也没有特别限制，例如可以将蔺草的全草供于提取，也可以将蔺草的芯供于提取。蔺草的芯中存在大量去氢厄弗酚，因此特别优选使用蔺草的芯。

对于本发明而言，学习记忆能力增强包含学习记忆能力的提高、维持、改善、降低抑制(特别是降低预防)等。此外，作为记忆增强的对象，并没有特别限制，从年轻到年老均可以为对象。如下详述，例如即使对于衰老、疾病等导致认知功能降低的对象或认知功能降低存疑的对象，本发明的学习记忆能力增强组合物也是有用的。需要说明的是，本发明的学习记忆能力增强组合物并没有特别限制。但对短期记忆障碍是有特别效的。

例如，为了抑制学习记忆能力降低的对象者的学习记忆能力的进一步降低、或学习记忆能力的维持或改善，可以优选使用本发明的学习记忆能力增强组合物。作为学习记忆能力降低的原因，并没有特别限制，可举出例如衰老、疾病。作为疾病，只要是能成为学习记忆能力降低的原因的疾病就没有特别限制，但可举出例如认知症、阿尔茨海默病等。特别是对于衰老、疾病导致的认知功能降低的对象者而言，为了抑制学习记忆能力的进一步降低、或学习记忆能力的维持或改善，可以优选使用本发明的学习记忆能力增强组合物。并没有特别限制，但为了抑制认知功能降低的对象者的记忆力、注意力、判断力、空间认知能力等的进一步降低、或维持或改善，也可以使用本发明的学习记忆能力增强组合物。

此外，例如为了抑制、维持、或提高担心学习记忆能力降低的对象者的学习记忆能力降低，可以优选使用本发明的学习记忆能力增强组合物。作为担心学习记忆能力降低的原因，与前述同样，可举出例如衰老及疾病等。作为担心学习记忆能力降低的对象者，可举出例如中年或初老(例如40～60岁左右)的对象者、患有初期或轻度疾病的对象者等。作为此处的疾病，可举出例如认知症、阿尔茨海默病等。特别是对于担心衰老或疾病导致的认知功能降低的对象者而言，为了抑制学习记忆能力的进一步降低、或者维持或改善学习记忆能力，可以优选使用本发明的学习记忆能力增强组合物。并没有特别限制，但为了维持或改善担心认知功能的降低的对象者的记忆力、注意力、判断力、空间认知能力等，也可以使用本发明的学习记忆能力增强组合物。

健康人为了学习记忆能力的维持、提高、降低抑制，也可以优选使用本发明的学习记忆能力增强组合物。如下所述，本发明的学习记忆能力增强组合物也可以作为食品组合物使用，此情况下，例如还可以优选用于记忆方面的困扰或增强回想能力等。

需要说明的是，本发明的学习记忆能力增强组合物不仅限于用于人，还可以用于非人哺乳动物。特别优选作为宠物及家畜饲养的哺乳动物。具体而言，可例示出狗、猫、猴、牛、马、羊、山羊、猪、兔、小鼠、大鼠、骆驼、美洲驼等。

本发明的学习记忆能力增强组合物例如优选用于医药领域及食品领域。如以下详述，该组合物可以仅由去氢厄弗酚组成，也可以为包含去氢厄弗酚及其他成分(各种基剂、载体、添加剂等)的组合物。此外，生物提取物(优选为蔺草提取物)本身也包含于该组合物中。即，含有去氢厄弗酚的生物提取物(及根据需要进一步配混有其他成分者)也包含于本发明的含有去氢厄弗酚的学习记忆能力增强组合物中。需要说明的是，组合物通常是指由多个成分组成的物质，因此在本发明的学习记忆能力增强组合物仅由去氢厄弗酚组成的时将其记作组合物可能不太适当，但本说明书中即使在仅由去氢厄弗酚组成时也将其记作组合物。(即，该学习记忆能力增强组合物的记法与学习记忆能力增强剂的记法同义。)

本发明的学习记忆能力增强组合物于医药领域(包含医药品及准药物)使用时，该组合物(以下有时记载为“本发明所述的药物组合物”)可以为仅由去氢厄弗酚组成者，也可以为配混有其他成分的组合物。例如，本发明所述的药物组合物中，根据需要可以在作为有效成分的去氢厄弗酚中配混药学上容许的基剂、载体、添加剂(例如赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、溶剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、矫臭剂、表面活性剂、保湿剂、防腐剂、pH调节剂、增稠剂等)等。像这样的基材、载体、添加剂等具体记载于例如医药品添加物辞典2016(株式会社药事日报社)等中，例如可以使用其中记载的那些。此外，制剂形式也没有特别限制，可以通过通常方法将有效成分及其他成分混合，并制备成例如片剂、包衣剂片、散剂、颗粒剂、细粒剂、胶囊剂、丸剂、液剂、悬浊剂、乳剂、啫喱剂、咀嚼剂、软片剂等制剂。例如片剂的制造可以通过压片法进行。使用将混合的原料直接压片的直接压片法、先将混合的原料制成颗粒再进行压片的颗粒压片法均可。此外，例如在胶囊剂的情况下，软胶囊及硬胶囊均可。

本发明所述的药物组合物中的去氢厄弗酚的配混量，只要能发挥学习记忆能力增强效果就没有特别限制，可以根据对象者适当设定。优选为0.0005～100质量％，更优选为0.005～90质量％，进一步优选为0.05～80质量％。需要说明的是，下限为10质量％、20质量％、30质量％、40质量％、50质量％、60质量％、70质量％、或80质量％左右均可。

本发明所述的药物组合物的给药时期并没有特别限定，例如可以考虑制剂形式、给药对象的年龄、给药对象的症状的程度等选择适当给药时期。需要说明的是，给药方式并没有特别限制，但优选经口给药及经血管给药(经静脉给药、经动脉给药)，更优选经口给药。

本发明所述的药物组合物的给药量可以根据给药对象的年龄、给药对象的症状的程度、其他条件等适当选择。特别是可以以包含的去氢厄弗酚量作为基准，在不损害本发明的效果的范围内适当设定。并没有特别限制，但例如成人每日给药的去氢厄弗酚量优选为1～50mg左右、5～30mg左右、6～24mg左右、10～24mg左右，或更优选为12～24mg左右。需要说明的是，可以1日1次或分为多次(优选为2～3次)给药。非人哺乳动物的情况下，可以将对应的人的情况作为参考来设定适当给药量。

将本发明的学习记忆能力增强组合物以食品组合物(例如饮食品、食品添加物)的方式使用时，该组合物(以下有时记作“本发明所述的食品组合物”)为适当配混有去氢厄弗酚、及食品卫生学上容许的基剂、载体、添加剂、可以作为其他饮食品利用的成分·材料等的组合物。例如可例示出包含氢厄弗酚的学习记忆能力增强用的加工食品、饮料、健康食品、功能性食品、营养辅助食品、补充剂、保健功能食品、特定保健用食品、营养功能性食品、功能性表示食品、或患者用食品(医院餐、病人餐或护理餐等)等食品组合物。并没有特别限制，但配混于该食品组合物的去氢厄弗酚为生物提取物(优选为蔺草提取物)时，例如也可以为配混有该提取物的加工食品、健康食品、营养功能食品、特定保健用食品、补充剂、患者用食品等。此外，也可以将去氢厄弗酚制成例如粉末状等，并使其包含于饮料类(果汁等)、点心类、面包、汤类(包括粉汤等)、加工食品等各种饮食品中。需要说明的是，在不久的将来可以预测到会发生学习记忆能力降低时，本发明所述的食品组合物也可以用于预防。此外，医院餐是指入院时提供的餐点，病人餐是病人用的餐点，护理餐是指被护理者用的餐点。本发明所述的食品组合物可以特别优选作为入院、家庭治疗等患者、或正在接受护理的患者中感受到学习记忆能力降低的对象者用的医院餐、病人餐或护理餐来使用。

作为健康食品(营养功能食品、特定保健用食品等)、补充剂，制备本发明所述的食品组合物时，为了使连续的摄取易于进行，例如优选制备为颗粒、胶囊、片剂(包括咀嚼剂等)、饮料(饮剂)等方式，其中胶囊、药片、片剂的方式从摄取的便利性的方面来看优选。但并不特别限定于这些。颗粒、胶囊、片剂等方式的本发明所述的食品组合物可以通过使用药学和/或食品卫生学上容许的载体等，并按照通常方法适当制备。此外，以其他方式制备时，遵循以往的方法即可。

本发明所述的食品组合物中的去氢厄弗酚的配混量，只要可以发挥学习记忆能力增强效果就没有特别限制，优选为0.0005～100质量％、更优选为0.005～90质量％、进一步优选为0.05～80质量％。需要说明的是，下限为10质量％、20质量％、30质量％、40质量％、50质量％、60质量％、70质量％、或80质量％左右均可。

本发明所述的食品组合物可以优选为了学习记忆能力增强而使用。此外，对于摄取量、摄取对象等而言，例如与优选上述的本发明所述的药物组合物同样。

本发明还包括：包含配混去氢厄弗酚的工序的、学习记忆能力增强组合物的制造方法；及、通过给予去氢厄弗酚(优选为上述的含有去氢厄弗酚的学习记忆能力增强组合物)来增强学习记忆能力的方法。这些方法中的各种条件如上所述。

需要说明的是，本说明书中的“包含”包括“本质上的组成”和“组成”(The term"comprising"includes"consisting essentially of”and"consisting of.")。

实施例

以下更具体地说明本发明，但本发明并不受下述例的限定。

使用作为阿尔茨海默病模型的β淀粉样蛋脑室内给予小鼠，对检测物质(具体而言，厄弗酚或去氢厄弗酚)对学习记忆障碍的效果使用Y型迷宫测试进行研究。Y型迷宫测试是为了研究学习记忆障碍(特别是短期记忆障碍)通常使用的试验。需要说明的是，以下示出作为检测物质使用的厄弗酚及去氢厄弗酚的结构式。

该研究具体而言按如下方式进行。小鼠使用从Japan SLC，Inc.Slc：ddY购入的雄性小鼠。购入后，设置5天的检疫期，并在其后设置3天的驯化期。将检测物质1天1次、14天反复经口给药，于给药第6天将β淀粉样蛋白(2mM水溶液3μL)于脑室内进行单次给药，于给药12天的检测物质给药1小时后进行Y型迷宫测试。

对于组构成而言，作为对照，设置将注射用水进行脑室内给药并进行溶剂(0.5％CMC-Na)经口给药的假手术组、将β淀粉样蛋白进行脑室内给药并进行溶剂(0.5％CMC-Na)经口给药的溶剂对照组；设定厄弗酚10mg/kg组及去氢厄弗酚10mg/kg组，每1组分别为10例(n＝10)。使用电脑程序(IBUKI，Japan Bio Research Center Co.，Ltd.)进行分组，将体重进行分层，并通过随机抽样法以各组的平均体重基本相等的方法进行。注射用水或β淀粉样蛋白的脑室内给药基于实施戊巴比妥钠麻醉进行。需要说明的是，0.5％CMC-Na为羧甲基纤维素钠的0.5w/v％水溶液(用注射用水制备)。此外，分别使检测物质悬浊于0.5％CMC-Na并使用。经口给药通过使用探针的强制给药进行。

需要说明的是，厄弗酚及去氢厄弗酚均使用将蔺草(全草或芯)的50％乙醇水溶液提取液进一步纯化得到者。图1示出将蔺草全草50％乙醇水溶液提取液或蔺草芯50％乙醇水溶液提取液进行HPLC分析得到的色谱图。以下详细说明蔺草芯的提取、分馏及纯化。将5kg市售的灯心草(将灯心草科灯心草的茎髓干燥而得者)在20倍量的50％含水乙醇中于80℃下加热，进行2次2小时回流提取并过滤。将滤液在减压下浓缩，于浓缩液中添加1.3升的蒸馏水并使其悬浊，添加1.3升的乙酸乙酯，并用分液漏斗进行液-液分配提取。将其重复3次，分层为水层和乙酸乙酯层。乙酸乙酯在减压下蒸发去除溶剂并干燥从而得到乙酸乙酯提取物26.2g。将该乙酸乙酯提取物用硅胶柱色谱(510微升)分馏为A至M的13个馏分(洗脱液：含有2％甲醇的氯仿～含有40％甲醇的氯仿)。将馏分F及G用分取HPLC纯化，得到化合物1(0.218克)、化合物2(1.725克)。测定化合物1及2的NMR频谱图，确定分别为厄弗酚及去氢厄弗酚。

对于Y型迷宫测试(自发交替行为试验)而言，使用每根臂的长度为39.5cm、底宽度为4.5cm、壁的高度为12cm，3臂分别以120度分叉的塑料制的Y字型迷宫(Unicom Co.，Ltd.)(图2)。

测定前，将装置的底面的照度调节为10～40Lux(实测值：13.1～16.9Lux)。将小鼠置于Y字型迷宫的任一臂,使其在迷宫内自由地探索8分钟。记录小鼠在测定时间内移动过臂的顺序，计数在臂中移动的次数，将其作为总条数。然后，调查出其中连续选择了三个不同的臂的组合，并将该数作为自发交替行为数。进而使用下述式算出自发交替行为率。

自发交替行为率(％)＝[自发交替行为数/(总条数-2)]×100

即，将Y字型迷宫的各臂设为A、B、C，例如小鼠以ACBABACBAB的顺序移动时，自发交替行为数为ACB、CBA、BAC、ACB、CBA5个，将其除以用总条数10减去2得到的8，再乘以100，得到的数值62.5为自发交替行为率(图2)。

自发交替行为率(％)＝[5/(10-2)]×100＝62.5％

各组的自发交替行为率(％)于图3示出。分别地，1组示出假手术组，2组示出溶剂对照组，3组示出厄弗酚10mg/kg组，4组示出去氢厄弗酚10mg/kg组。作为统计处理，2组之间的比较检验基于F检验进行方差齐性检验，方差齐性时进行Student t检验，异方差性时进行Aspin-Welch检验。溶剂对照组与假手术组相比，自发交替行为率(％)显着降低，确认有学习记忆障碍。厄弗酚10mg/kg组与溶剂对照组相比，其自发交替行为率几乎未确认到差别，但氢厄弗酚10mg/kg组确认有自发交替行为率的上升倾向(p＝0.052)，确认了学习记忆障碍的改善。

接着，为了进一步研究去氢厄弗酚的学习记忆障碍改善力，将每1组小鼠数设为12(n＝12)，进一步改变去氢厄弗酚给药量，除10mg/kg组外，对5mg/kg组、及15mg/kg组也进行研究。通过与上述同样的时间安排及方法进行Y型迷宫测试，并算出各组的自发交替行为率(％)。结果于图4示出。分别地，1组为假手术组，2组为溶剂对照组，3组为去氢厄弗酚5mg/kg组，4组为去氢厄弗酚10mg/kg组，5组为去氢厄弗酚15mg/kg组。作为统计处理，进行1组和2组这两组之间的比较检验、2组和3～5组的多重比较检验。两组之间的比较检验基于F检验进行方差齐性检验，由于为方差齐性因此进行Student t检验。此外，多重比较检验基于Bartlett检验进行方差齐性检验，由于为方差齐性因此进行Dunnett检验。溶剂对照组与假手术组相比，自发交替行为率(％)显着降低，确认有学习记忆障碍。去氢厄弗酚5mg/kg组与溶剂对照组相比，自发交替行为率并未确认到显著性差异，但确认有学习记忆障碍改善倾向。去氢厄弗酚10mg/kg组及15mg/kg组确认到自发交替行为率的显著上升，确认到学习记忆障碍的明显改善。此外，如上可明确：去氢厄弗酚对β淀粉样蛋脑室内给药小鼠的学习记忆障碍表现出剂量依赖性的改善效果。

根据以上的结果，明确了去氢厄弗酚对学习记忆能力增强是有用的。

Claims (5)

1.一种学习记忆能力增强组合物，其含有去氢厄弗酚。

2.根据权利要求1所述的组合物，其用于抑制学习记忆能力降低或用于改善学习记忆能力。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其为经口组合物。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的组合物，其为食品组合物或药物组合物。

5.一种学习记忆能力增强组合物的制造方法，其包含配混去氢厄弗酚的工序。

Images