CN111220729A - 谷制品中合成着色剂的检测方法 - Google Patents

谷制品中合成着色剂的检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111220729A
CN111220729A CN202010056850.9A CN202010056850A CN111220729A CN 111220729 A CN111220729 A CN 111220729A CN 202010056850 A CN202010056850 A CN 202010056850A CN 111220729 A CN111220729 A CN 111220729A
Authority
CN
China
Prior art keywords
methanol
solution
flow rate
ammonium acetate
time
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010056850.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111220729B (zh
Inventor
张春娥
廖若宇
刘新保
孙悦
李国荣
田建文
赵静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ningxia Hui Autonomous Region Grain And Oil Product Quality Inspection Center
Original Assignee
Ningxia Hui Autonomous Region Grain And Oil Product Quality Inspection Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ningxia Hui Autonomous Region Grain And Oil Product Quality Inspection Center filed Critical Ningxia Hui Autonomous Region Grain And Oil Product Quality Inspection Center
Priority to CN202010056850.9A priority Critical patent/CN111220729B/zh
Publication of CN111220729A publication Critical patent/CN111220729A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111220729B publication Critical patent/CN111220729B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N30/14—Preparation by elimination of some components
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information
    • G01N30/8679—Target compound analysis, i.e. whereby a limited number of peaks is analysed
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/062—Preparation extracting sample from raw material

Landscapes

  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种谷制品中合成着色剂的检测方法，包括合成着色剂的提取、净化和检测方法。提取过程为称取样品,并添加优纯级碳酸氢钠，加入甲醇水溶液，充分混合后进行合成着色剂的提取，提取完毕后对提取液进行离心，离心结束后提取上清液，并进行定容。净化工艺包括活化、上样、淋洗、洗脱、氮吹、复容。测定方法设计了一种22min洗脱方式的液相色谱法。本发明的有益效果在于：采用弱碱提取谷制品中的合成着色剂，提取效果好，方法简单，利于快速准确的测定合成着色剂；采用低浓度甲酸水溶液平衡固相萃取柱，使得样品牢固富集在固相萃取柱，在上样和淋洗环节均无合成着色剂损失；本发明的测定方法测定合成着色剂加标回收率高。

Description

谷制品中合成着色剂的检测方法
技术领域
本发明涉及色素的提取和测定方法，特别是谷制品中合成着色剂的测定方法，包括了合成着色剂的提取、净化和检测步骤。
背景技术
目前国内外研究色素的样品种类多，既有天然色素提取与测定的研究，也有合成着色剂的测定研究。如不同葡萄品种中花青素和酚类化合物的提取，酸奶中合成着色剂的提取,火锅调味品中胭脂红、苋菜红、诱惑红、日落黄等水溶性色素和其他脂溶性色素的测定,饮料、糕点和方便面中栀子黄的测定，鱼制品中日落黄、苋菜红和诱惑红等合成着色剂的测定。色素的测定方法主要有液相色谱法、液相-电喷雾质谱法、RamTracer-200-HS拉曼光谱仪分析法、紫外可见分光光度测定法。借鉴现有的提取工艺，对玉米粉中添加有柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红和亮蓝的质控样品中的合成着色剂提取，当采用不同提取工艺时，溶液颜色不同。
目前已有11种提取加工谷物中的合成着色剂提取工艺的研究报道。
1.不同比例的甘油和乙醇混合液60℃水浴浸提法，利用此种方法合成着色剂未被充分提取，固体试样仍有颜色残留，提取液呈黄色。
2.不同比例甘油水溶液提取法，该提取法不能有效提取六种合成着色剂。3.不同比例的1,2丙二醇-无水乙醇溶液混合提取法，试样中的合成着色剂未被充分提取，该方法提取后，试样呈明显的粉红色，提取液呈黄色。4.利用氯化钾容易提取，该方法提取的提取液呈无色。5.利用25％氨水与甲醇以5:95的比例混合作为提取液提取合成着色剂方法，该法可提取部分合成着色剂。6.利用甲醇-氨-水(80:2:18,V/V/V)混合液提取法，该法可提取部分合成着色剂。7.超声波辅助浸提法，该法提取的提取液无色。8.乙醇:水:乙酸(50:50:1)溶液提取法，该法不适于提取合成着色剂。9.0.9％氨水乙醇溶液提取法，该法可提取部分合成着色剂。10.利用8：2的甲醇：氨水混合液提取，该法可提取部分合成着色剂。11.利用乙醇:氨水:水(7:2:1,v/v/v)溶液提取，该法可提取部分合成着色剂。
以上11种方法，均不能同时完全有效提取六种合成着色剂。并且提取液在样品净化过程中，这11种提取方法提取的六种合成着色剂均不能在Strata-X-AW 33μPolymericWeak Anion型号固相萃取柱和cleanert PWAX型号固相萃取柱有效富集，即样品在净化过程中已损失，不利于测定。
利用现有技术对发酵面制品、谷物加工品中的合成着色剂进行检测，检测合成着色剂是柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、诱惑红和亮蓝。使用的检测标准是GB5009.35-2016。在近千份样品，检测结果均为未检出，并且加标回收率低，检测标准中规定的方法测定饮料中的柠檬黄和诱惑红检出结果符合产品标签说明，并且加标回收率好，但是由于发酵面制品和谷物加工品样品中淀粉吸附合成着色剂的特性，应用GB5009.35-2016方法，可能会存在样品含有合成着色剂但是检不出的隐患。
现有技术在净化工艺中，关于六种合成着色剂在固相萃取柱的富集原理方面，已有的研究报道中，是在中性环境或碱性环境条件下上样，在样品通过固相萃取柱的时候合成着色剂有损失，并且因为在中性或者碱性条件下样品富集不牢固，导致在淋洗环节合成着色剂已完全洗掉，从而使得测定结果是0或者加标回收率低于15％。
测定方面：现有技术采用液相色谱质谱联用技术，六种合成着色剂属于紫外吸收能力强而带电能力不强的物质，用质谱法测定灵敏度相比于液相方法变化不大，并且响应值不大，并且采用该方法，柠檬黄合成着色剂未能用质谱检测到。
利用液相色谱法测定合成着色剂中，标准GB5009.35-2016采用的梯度洗脱方式可以测定柠檬黄，新红，苋菜红，胭脂红，日落黄，亮蓝，赤藓红七种合成着色剂，测定标准品色谱图中，柠檬黄，新红，苋菜红色谱峰距离近，在谷物加工品合成着色剂检测中由于样品自身的特点，该梯度洗脱方式不适用。
发明内容
针对利用上述的现有谷物中合成着色剂的提取方法，在强酸性条件下六种合成着色剂不能被提取，并且乙醇提取效果不如甲醇明显，在氨水存在的情况下，六种合成着色剂部分能被提取的技术缺点，本发明公开了一种能够高效提取和检测六种合成着色剂的方法，本发明公开了一种在弱碱性条件下提取，酸性环境中净化，碱性环境中有效洗脱测定的方法。
针对现有技术提取谷物加工品中的合成着色剂仅可提取部分合成着色剂或样品含有合成着色剂但是检不出等技术缺陷，本发明优化了色素提取工艺，提高样品加标回收率。
本发明是通过以下技术方案对谷制品中的六种合成着色剂进行提取、净化和检测。
S1.谷制品中合成着色剂的提取工艺，包括以下提取步骤：
a.称取一定量样品于离心管中，并添加优级纯碳酸氢钠作为辅助提取剂，样品和辅助提取剂的质量比为1:0.04～1：1，
b.将步骤a中加入的试剂充分混合后在离心管中加入35％～45％的甲醇水溶液提取试剂进行合成着色剂的提取，样品的称取量与提取试剂的加入量的质量之比为1:4～1:6,
c.步骤b合成着色剂提取完毕后对提取液进行离心，
d.步骤c充分离心结束后提取上清液，
e.重复c-d步骤，至少提取2次，
f.将上述步骤提取的上清液转移到容量瓶中，并用35％～45％的甲醇水溶液提取试剂将样品提取溶液定容,定容体积与提取次数和提取液体积关系为:定容体积＝样品提取溶液体积×提取次数+10mL。实验室常用的容量瓶有50ml,100ml，250ml,500ml,1000ml等规格，因此本领域技术人员在提取实验过程中，会根据容量瓶规格进行适当的添加各物料和药品。
进一步，所述步骤a中，样品和优级纯碳酸氢钠试剂辅助剂的添加比例为1:0.04～0.2。
进一步，所述步骤a中，比例为0.04～0.2的优级纯碳酸氢钠试剂辅助剂替换为0.1～0.3的食用小苏打。优级纯碳酸氢钠的纯度≥99.8％,食用小苏打碳酸氢钠的纯度≥99％，因此，在本发明的提取工艺中，可以利用食用小苏打作为辅助提取剂。
进一步，所述甲醇水溶液是40％的甲醇水溶液。
进一步，所述步骤b中，利用振荡提取法或涡旋混合提取法。
进一步，所述步骤c中,在转速为4000r/min的条件下离心5min。
称取添加有六种合成着色剂的淀粉谷物样品于离心管中，添加碳酸氢钠为辅助提取试剂,在1:0.04至1:0.2范围内，提取完毕的样品颜色与原没有添加合成着色剂样品的颜色一致，当样品与碳酸氢钠添加量比例增至1:0.4时，碳酸氢钠会吸附一些亮蓝，从而会影响亮蓝的加标回收率。当样品与碳酸氢钠添加量比例增至1:1时，碳酸氢钠会吸附一些红色素，会影响红色素的加标回收率。
在离心管中加入甲醇水溶液，充分混合后进行合成着色剂的提取。当采用35％甲醇提取时，水相比例大，色谱峰杂峰多，在样品未采用净化工艺处理的条件下，进样次数多，容易造成色谱柱污染。当采用45％甲醇提取时，目标峰附近容易出现小杂峰。提取试剂为40％的甲醇水溶液时，综合加标回收率和色谱峰两方面因素效果最为理想。
本发明的谷物合成着色剂的提取方法能有效地将六种合成着色剂充分提取，并且采用该法提取，提取两次后，合成着色剂基本被提取干净，第三次后，样品提取干净。
碳酸氢钠是强碱与弱酸中和后生成的酸式盐，溶于水时呈现弱碱性，本发明采用食用小苏打或优级纯碳酸氢钠试剂提取谷物中的合成着色剂，提取效果好，方法简单，利于快速准确地测定合成着色剂。
采用本发明的提取工艺处理后，提取液通过聚砜醚针式过滤器后上机分析，结果分析由于杂峰过多，存在定量不准确问题，影响数据的重现性和稳定性，针对这一技术缺点，本发明还公开了一种谷物加工品中合成着色剂检测相应的净化工艺。
本发明公开的提取合成着色剂的净化工艺，具体如下：
S2.一种提取合成着色剂的净化工艺，包括以下步骤：
a.活化：依次采用一定体积的甲醇、水进行活化，甲醇和水的用量是固相萃取柱柱容量的1～2倍，然后用固相萃取柱柱容量1～2倍的1.5％～2.5％的甲酸水溶液平衡，弃去滤液；
b.上样：将提取工艺中得到提取液的1％～2％体积的提取液作为待净化样品加入到小柱中，弃去滤液；
c.淋洗：用固相萃取柱柱容量1/3～2倍体积的1.5％～2.5％的甲酸水溶液淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽干。
d.洗脱：用固相萃取柱柱容量的1/3～4/3倍体积的20％～25％的氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液；
e.氮吹：将收集的洗脱液采用氮气吹扫方式吹干；
f.复容：用与上样体积相同的去离子水复容，进行混合，待样品充分溶解，将样品溶液过亲水性针式过滤器，待上机分析。
进一步，所述步骤c淋洗：用固相萃取柱柱容量1/3倍体积的2％的甲酸水溶液淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽干；所述步骤d.洗脱：用固相萃取柱柱容量1/3倍体积的25％的氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液；
提取合成着色剂的净化工艺中，当淋洗液的体积增加时，淋洗液始终为无色。在该工艺中，活化和淋洗步骤所用的溶液体积与柱容量大小有关，对加标回收率结果无影响。在该过程中，影响加标回收率的高低主要与洗脱液体积有关，洗脱液对色素洗脱效果的影响，随着洗脱液体积的增加，加标回收率变化不大。由于洗脱液中氨水的存在，采用旋转蒸发仪浓缩样品时会出现样品喷溅而导致测定结果不准确，因此只能采用氮气吹扫方式定容。但是洗脱液体积过大，不利于采用氮气吹扫方式浓缩样品。从经济效益和工作效率考虑，洗脱液体积为1/3倍的固相萃取柱柱容量时，更利于样品快速浓缩且不会降低加标回收率。
现有技术在中性环境或碱性环境条件下上样，在样品通过固相萃取柱的时候合成着色剂有损失，并且因为在中性或者碱性条件下样品富集不牢固，导致在淋洗环节合成着色剂已完全洗掉，从而使得测定结果是0或者加标回收率低于15％。
在本发明中，采用1.5％～2.5％甲酸水溶液平衡固相萃取柱，使得样品牢固富集在固相萃取柱，在上样和淋洗环节均无合成着色剂损失。
合成着色剂的净化工艺目的是为了保护色谱柱的使用寿命，另外对于准确定量起到至关重要作用,因此本发明有利于淀粉含量高的谷物加工品中添加剂合成着色剂的准确、高效测定。
针对标准GB5009.35-2016采用的梯度洗脱方式测定合成着色剂中，测定的标准品色谱图中，柠檬黄，新红，苋菜红色谱峰距离近，在谷物加工品合成着色剂检测中由于样品自身的特点，该梯度洗脱方式不适用，本发明提供了一种22min检测法的液相色谱法，具体如下：
S3.液相色谱法，洗脱方式如下：
时间在0-0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01-4min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在4-8min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在8-15min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在15-20min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在20-22min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
采用该法能有效测定六种合成着色剂。
进一步，本发明的另一种液相色谱测定方法：35min检测法，
洗脱方式如下：
时间在0-0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01-10min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在10-18min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在18-25min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶和37％的甲醇，
时间在25-25.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在25-35min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
使用该方法优点是合成着色剂色谱峰距离远，不影响样品定量结果，该方法不能检测亮蓝。
进一步，本发明的第三种液相色谱法，采用45min检测法，洗脱方式如下：
时间在0-0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01-10min,流速:1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在10-20min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在20-25min,流速：1.0mL/min，流动相为50％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和50％的甲醇，
时间在25-30min,流速：1.0mL/min，流动相为40％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和60％的甲醇，
时间在30-35min,流速：1.0mL/min，流动相为40％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和60％的甲醇，
时间在35-40min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在40-45min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
使用该方法可以检测六种合成着色剂。
本发明中的甲醇的纯度为分析纯。
本发明的有益效果在于：
本发明采用了一种在弱碱性条件下提取，酸性环境中净化，碱性环境中有效洗脱测定的方法。
提取工艺中，本发明的谷物合成着色剂的提取方法能有效地将六种合成着色剂充分提取，碳酸氢钠是强碱与弱酸中和后生成的酸式盐，溶于水时呈现弱碱性，本发明采用食用小苏打或碳酸氢钠作为辅助剂提取谷制品中的合成着色剂，提取效果好，方法简单，利于快速准确的测定合成着色剂。
净化工艺中：含有碳酸氢钠或食用小苏打的合成着色剂提取液，在酸性条件下净化样品，使得样品高效富集在固相萃取柱，在强酸性条件下淋洗固相萃取柱，采用2％甲酸水溶液平衡固相萃取柱，使得样品牢固富集在固相萃取柱，在上样和淋洗环节均无合成着色剂损失。合成着色剂的净化工艺目的是为了保护色谱柱的使用寿命，另外对于准确定量起到至关重要作用。
洗脱测定方法中：采用22min高效液相色谱法方法测试，六种合成着色剂加标回收率高。
因此本发明利于淀粉含量高的谷物加工品中添加剂合成着色剂的准确、高效测定。
附图说明
图1：当采用40％甲醇水溶液提取时日落黄质控样色谱图，
图2：当采用35％甲醇水溶液提取时日落黄质控样色谱图，
图3：当采用45％甲醇水溶液提取时日落黄质控样色谱图，
图4：田间玉米样品净化后的液相测定色谱图，
图5：净化工艺中，有无甲酸水溶液平衡的合成着色剂加标回收率对比图，
图6：22min洗脱方式的液相色谱法色谱图，
图7：35min洗脱方式的液相色谱法色谱图，
图8：45min洗脱方式的液相色谱法色谱图。
具体实施方式
结合说明书附图对具体实施例进行说明。
下述实施例中采用本发明公开的一种谷制品中合成着色剂的提取方法提取玉米粉中合成着色剂，六种合成着色剂是：柠檬黄，苋菜红，胭脂红，日落黄，诱惑红，亮蓝。
实施例一，
谷制品中合成着色剂的检测方法,包括以下步骤：
S1.谷制品中合成着色剂的提取工艺，
a.称取样品5g于离心管中,添加0.8g碳酸氢钠试剂作为辅助提取剂。
b.在离心管中加入25mL，40％的甲醇水溶液，涡旋混合提取5min。
c.提取完毕后在4000r/min的条件下离心5min。
d.离心结束后提取上清液。
e.重复a-d步骤，提取3次。
f.将上述步骤提取的上清液转移到容量瓶中，并用40％的甲醇水溶液将样品提取容液定容至100mL。
S2.谷制品中合成着色剂的净化工艺：
固相萃取柱型号：Strata-X-AW 33μPolymeric Weak Anion60mg/3ml。
具体步骤：
a.活化：用3mL甲醇、3mL水活化，用3mL 2％甲酸水溶液平衡，弃去滤液；
b.上样：将待净化样品1mL加入小柱，弃去滤液；
c.淋洗：用1mL，2％甲酸水溶液淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽干。
d.洗脱：用1mL，25％氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液；
e.氮吹：将收集的洗脱液采用氮气吹扫方式吹干；
f.复容：用1mL的去离子水复容，涡旋混合1min，待样品充分溶解，将样品溶液过0.22um聚砜醚针式过滤器，待上机分析。
S3.合成着色剂的检测，采用液相色谱法，液相色谱仪型号为岛津LC-20AD，色谱柱采用ODS C18 4.5*250mm。
采用22min检测法，洗脱方式为：
时间在0-0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01min-4min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在4min-8min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在8min-15min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在15min-20min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在20min-22min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
采用该方法测定的六种合成着色剂的色谱图如图6。
本实施例中，提取的六种合成着色剂：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别是90.04％、93.24％、99.04％、88.84％、92.80％、91.93％。图1显示了当采用40％甲醇提取合成着色剂时日落黄质控样色谱图。
实施例二：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S1中，步骤a中，将碳酸氢钠试剂添加到0.4g时，提取的六种合成着色剂：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别是85.36％、92.00％、96.76％、86.40％、91.96％、89.90％。
实施例三：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S1中，步骤a中，将碳酸氢钠试剂添加到1g时，提取的六种合成着色剂：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别是81.72％、73.44％、103.64％、85.84％、87.22％、88.72％；
实施例四：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S1中，步骤a中，将碳酸氢钠试剂添加到2g时，提取的六种合成着色剂：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别是94.60％、72.97％、90.52％、82.44％、82.56％、68.44％；
实施例五：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S1中，步骤a中，将碳酸氢钠试剂添加到5g时，提取的六种合成着色剂：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别是64.72％、40.09、39.78％、51.46％、43.00％、58.00％。
实施例六：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S1中，步骤a和f中，甲醇水溶液提取液替换为35％的甲醇水溶液，提取的六种合成着色剂：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别是：87.03％、87.01％、95.61％、82.07％、89.97％、80.76％。图2显示了当采用35％甲醇提取合成着色剂时，日落黄质控样品色谱图。
实施例七：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S1中，步骤a和f中，甲醇水溶液提取液替换为45％的甲醇水溶液，提取的六种合成着色剂：柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别是：83.09％、92.36％、92.95％、72.91％、83.57％、90.01％。图3显示了当采用45％甲醇提取合成着色剂时的日落黄质控样品色谱图。
实施例八：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S2中，步骤c淋洗过程中用6mL,2％的甲酸水溶液淋洗固相萃取柱,当淋洗液从1mL增加到6mL时的淋洗液的颜色没有明显变化。
实施例九：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S2中，步骤d洗脱：用2mL，25％氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，此时六种合成着色剂柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别为：93.01％、84.18％、92.09％、95.11％、109.07％、90.23％。
实施例十：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于在S2中，步骤d洗脱：用4mL，25％氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱时，六种合成着色剂柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别为：93.00％、84.49％、92.17％、95.01％、110.17％、91.29％。
实施例十一：如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于S2,谷制品中合成着色剂的净化工艺：固相萃取柱型号：Cleanert PWAX
150mg/6mL，
a.活化：用6ml甲醇、6ml水活化，用3mL，2％甲酸水溶液平衡，弃去滤液；
b.上样：将待净化样品1mL加入小柱，弃去滤液；
c.淋洗：用5mL,2％甲酸水溶液淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽干。
d.洗脱：用1mL,25％氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液；
e.氮吹：将收集的洗脱液采用氮吹方式吹干；
f.复容：用1mL的去离子水复容，涡旋混合1min，待样品充分溶解，将样品溶液过0.22um亲水性针式过滤器，待上机分析。
采用该方法，六种合成着色剂柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝的加标回收率分别为：93.12％、83.57％、91.2％、91.96％、107.1％、100.2％。
实施例十二：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于S3，液相色谱法，液相色谱仪型号为岛津LC-20AD，色谱柱采用ODS C184.5*250mm。采用35min检测法，洗脱方式为：
时间在0min-0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01min-10min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在10min-18min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在18min-25min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在25min-25.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在25min-35min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
使用该方法特点是合成着色剂色谱峰距离远，不影响样品定量结果，该方法不能检测亮蓝，检测色谱图如图7。
实施例十二：
如上述实施例一的方法，本实施例的区别在于S3，液相色谱法，液相色谱仪型号为岛津LC-20AD，色谱柱采用ODS C18 4.5*250mm。
采用45min检测法，洗脱方式为：
时间在0-0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01min-10min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在10min-20min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在20min-25min,流速：1.0mL/min，流动相为50％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和50％的甲醇，
时间在25min-30min,流速：1.0mL/min，流动相为40％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和60％的甲醇，
时间在30min-35min,流速：1.0mL/min，流动相为40％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和60％的甲醇，
时间在35-40min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在40min-45min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
使用该方法可以检测六种合成着色剂，图8是测定六种合成着色剂的色谱图。
上述实施例中的甲醇的纯度为分析纯。
由于上述实施例中的检测设备精度高，所以虽然每次实验添加的试剂相同，也会出现检测结果出现较小的数值误差，但这些误差都在合理范围之内。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.提取谷制品中的合成着色剂：
a.称取一定量样品于离心管中，并添加优级纯碳酸氢钠作为辅助提取剂，样品和辅助提取剂的质量比为1:0.04～1：1，
b.将步骤a中加入的试剂充分混合后在离心管中加入35％～45％的甲醇水溶液提取试剂进行合成着色剂的提取，样品的称取量与提取试剂的加入量的质量之比为1:4～1:6,
c.步骤b合成着色剂提取完毕后对提取液进行离心，
d.步骤c充分离心结束后提取上清液，
e.重复c-d步骤，至少提取2次，
f.将上述步骤提取的上清液转移到容量瓶中，并用35％～45％的甲醇水溶液提取试剂将样品提取溶液定容,定容体积与提取次数和提取液体积关系为:定容体积＝提取液体积×提取次数+10mL；
S2.对S1中提取的合成着色剂进行净化；
S3.将上述提取净化后的合成着色剂用液相色谱法进行检测。
2.如权利要求1所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述S1提取谷制品中合成着色剂的步骤a中，样品和优级纯碳酸氢钠试剂的添加比例为1:0.04～1：0.2。
3.如权利要求1所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述S1提取谷制品中合成着色剂的步骤a中，比例为0.04～0.2的优级纯碳酸氢钠试剂辅助剂替换成比例为0.1～0.3的食用小苏打。
4.如权利要求1所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述S1提取谷制品中合成着色剂的甲醇水溶液是40％的甲醇水溶液。
5.如权利要求1所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述步骤S2.对S1中提取的合成着色剂进行净化，包括以下步骤：
a.活化：依次采用一定体积的甲醇、水进行活化，甲醇和水的用量是固相萃取柱柱容量的1～2倍，然后用固相萃取柱柱容量1～2倍的1.5％～2.5％的甲酸水溶液平衡，弃去滤液；
b.上样：将提取工艺中得到提取液的1％～2％体积的提取液作为待净化样品加入到小柱中，弃去滤液；
c.淋洗：用固相萃取柱柱容量1/3～2倍体积的1.5％～2.5％甲酸水溶液淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽干。
d.洗脱：用固相萃取柱柱容量1/3～4/3倍体积的20％～25％氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液；
e.氮吹：将收集的洗脱液采用氮气吹扫方式吹干；
f.复容：用与上样体积相同的去离子水复容，进行混合，待样品充分溶解，将样品溶液过亲水性针式过滤器，待上机分析。
6.如权利要求1或5所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述步骤c淋洗：用固相萃取柱柱容量1/3倍体积的2％甲酸水溶液淋洗固相萃取柱，弃去滤液，将小柱抽干。
7.如权利要求1或5所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述步骤d洗脱：用固相萃取柱柱容量1/3倍体积的25％氨水甲醇溶液洗脱固相萃取柱，收集洗脱液。
8.如权利要求1所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中采用液相色谱法，梯度洗脱条件为：
时间在0～0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液，和5％的甲醇，
时间在0.01min～4min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在4min～8min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在8min～15min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在15min～20min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在20min～22min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
9.如权利要求1或8所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中采用液相色谱法，梯度洗脱条件为：
时间在0min～0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01min～10min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在10min～20min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在20min～25min,流速：1.0mL/min，流动相为50％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和50％的甲醇，
时间在25min～30min,流速：1.0mL/min，流动相为40％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和60％的甲醇，
时间在30min～35min,流速：1.0mL/min，流动相为40％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和60％的甲醇，
时间在35min～40min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在40min～45min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
10.如权利要求1或8所述的谷制品中合成着色剂的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中采用液相色谱法，梯度洗脱条件为：
时间在0-0.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在0.01-10min,流速：1.0mL/min，流动相为80％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和20％的甲醇，
时间在10-18min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和37％的甲醇，
时间在18-25min,流速：1.0mL/min，流动相为63％的0.02mol/L的乙酸铵溶和37％的甲醇，
时间在25-25.01min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇，
时间在25.01-35min,流速：1.0mL/min，流动相为95％的0.02mol/L的乙酸铵溶液和5％的甲醇。
CN202010056850.9A 2020-01-16 2020-01-16 谷制品中合成着色剂的检测方法 Active CN111220729B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010056850.9A CN111220729B (zh) 2020-01-16 2020-01-16 谷制品中合成着色剂的检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010056850.9A CN111220729B (zh) 2020-01-16 2020-01-16 谷制品中合成着色剂的检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111220729A true CN111220729A (zh) 2020-06-02
CN111220729B CN111220729B (zh) 2022-08-05

Family

ID=70829640

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010056850.9A Active CN111220729B (zh) 2020-01-16 2020-01-16 谷制品中合成着色剂的检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111220729B (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1817350A (zh) * 2005-12-09 2006-08-16 南开大学 一种蚕沙总生物碱及其制备方法
CN103235080A (zh) * 2013-05-13 2013-08-07 山东省农业科学院中心实验室 一种利用uplc/ms/ms快速测定黑花生种皮中花色苷的方法
CN105403630A (zh) * 2015-10-27 2016-03-16 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1817350A (zh) * 2005-12-09 2006-08-16 南开大学 一种蚕沙总生物碱及其制备方法
CN103235080A (zh) * 2013-05-13 2013-08-07 山东省农业科学院中心实验室 一种利用uplc/ms/ms快速测定黑花生种皮中花色苷的方法
CN105403630A (zh) * 2015-10-27 2016-03-16 云南瑞升烟草技术（集团）有限公司 一种检测再造烟叶用辅料中九种合成着色剂浓度的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
P. WANG ET AL: "Multi-residue method for determination of seven neonicotinoid insecticides in grains using dispersive solid-phase extraction and dispersive liquid–liquid micro-extraction by high performance liquid chromatography", 《FOOD CHEMISTRY》 *
张大芬 等: "高效液相色谱法同时测定玉米粉和小米粉中的8 种合成着色剂", 《现代预防医学》 *
韩晶: "高效液相色谱法检测食品中常见非食用色素", 《科技分析与检测》 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111220729B (zh) 2022-08-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110824057B (zh) 一种调制乳粉中维生素k1和维生素k2含量的测定方法
CN110658285B (zh) 一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法
CN110243980A (zh) 一种食品中94种禁用工业染料的高通量检测方法
CN103472178B (zh) 液态调味品中丙烯酰胺含量的快速检测方法
CN110514778B (zh) 一种果汁中22种糖、糖醇及醇类同时检测的方法
CN111220729B (zh) 谷制品中合成着色剂的检测方法
CN101776659A (zh) 萝卜红色素中花色苷的高效液相色谱检测方法
CN105974020B (zh) 一种lc‑ms/ms测定果汁、饮料中萘酚黄s和罗丹明b的方法
CN111999411B (zh) 果蔬中矢车菊素及3种花色苷的高效液相色谱检测方法
CN105954413B (zh) 同步快速检测配制酒中8种人工合成着色剂的lc-ms/ms方法
CN115541749A (zh) 一种分离测定丙氨酸酯类盐含量的方法
CN112285233B (zh) 一种检测油脂中大麻素类新精神活性物质的前处理方法
CN111537642A (zh) 利用固相萃取-液相色谱法测定饮料中α-维生素E的方法
CN109061009B (zh) 一种发酵液中衣康酸含量的测定方法
CN106018583B (zh) 一种lc-ms/ms测定食品中亮黑和罗丹明b的方法
CN102565227B (zh) 一种检测肉制品中红曲色素含量的方法
CN111337611A (zh) 水产品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿、结晶紫、隐色结晶紫的检测方法
CN111579675A (zh) 饲料中脂溶性维生素的检测方法
CN113009018B (zh) 一种固相萃取包与检测方法
CN114894918B (zh) 一种复杂食品中酸性染料的快速提取净化方法及检测方法
CN114487189B (zh) 一种基于分散萃取技术测定食品中黄曲霉毒素b1的方法
CN114858943B (zh) 一种食品中动物源天然色素含量检测方法
CN116026971B (zh) 一种用于人血清和血浆中全谱脂溶性维生素及其代谢物检测的试剂盒及检测方法
CN115494176B (zh) 磷虾粉中乙氧喹啉和二聚乙氧喹啉残留量的检测方法
CN115015402B (zh) 食品中3种紫草素类天然色素含量的测定方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant