CN111154699A - 一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂及其制备方法和其在制备功能性酸奶中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂及其制备方法和其在制备功能性酸奶中的应用，涉及益生菌发酵剂技术领域，所述具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，包括如下重量份原料：干酪乳杆菌1.5‑2％、鼠李糖乳杆菌0.2‑0.5％、嗜热链球菌8‑10％、保加利亚乳杆菌0.5‑1％、麦芽糊精57.0‑66.4％和葛根粉22.1‑29.5％。本发明采用的干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝的功效；嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌均具有很好的乙醇耐受能力，可以降解乙醇。
Description
技术领域
本发明涉及益生菌发酵剂技术领域，特别涉及一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂及其制备方法和其在制备功能性酸奶中的应用。
背景技术
中国是一个历史悠久的酒文化国家，酒已经成为人们日常生活中常用的饮品，但饮酒在给人们带来欢乐的同时，也对人的身体健康和社会安定带来一定的危害。人在过量饮酒后，堆积的乙醇会在体内代谢会产生许多有害物质并发生大量自由基的沉积，给人体造成不同程度的伤害，尤其是会容易致使肝脏发生病变。
目前随着经济和社会的不断发展，肝病已经成为威胁人类的健康的重大疾病之一，肝癌成为位居人类生命健康的世界三大癌症之首。而由于人类过量饮酒导致的酒精性肝损伤则成为患肝病的最主要因素之一。目前，国内外市售的解酒护肝产品多为利尿类的化学合成药，护肝养胃类中药，醒酒肽饮料或提高酒精代谢相关酶活性的药物。发挥其功效多是基于该类产品在人体服用后能够影响乙醇代谢或抑制乙醇吸收，从而减轻其对肝脏等其他器官的损伤。很多解酒护肝的药虽具有一定的解酒、醒酒功效，但也会伴随着不同的副作用，对人体的健康不利，尤其是不同体质的人，对于不同的解酒药的反应并不相同。
国内外对于解酒微生物有一定的研究，主要集中在高产乙醇脱氢酶菌株的筛选，碳源是微生物生长过程必须的营养元素，若能筛选到可以利用乙醇作为碳源之一，同时又能高产乙醇脱氢酶的菌株，就能起到降解乙醇的作用，进而达到保护肝脏的目的。目前酸奶市场日趋成熟，若能利用这些菌株进行复配，制备家用发酵剂，并将其应用于酸奶中制备功能性发酵乳，可以让消费者在家即可食用到解酒护肝的食品，前景广阔。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂及其制备方法和其在制备功能性酸奶中的应用，解决现有解酒产品会对人体产生副作用的问题。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：
一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，包括如下重量份原料：
干酪乳杆菌1.5-2％、鼠李糖乳杆菌0.2-0.5％、嗜热链球菌8-10％、保加利亚乳杆菌0.5-1％、麦芽糊精57.0-66.4％和葛根粉22.1-29.5％；所述干酪乳杆菌命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.15409；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌；所述干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝功效。
优选的，所述干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的活菌数达到1*1011CFU/g。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
(S1)将干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌分别接种于试管培养基中，分别得到一级种子液，再将各菌种的一级种子液分别转接入MRS种子培养基中分别得到二级种子液，再将各二级种子液分别转接入发酵培养基中进行高密度发酵，分别收集得到的发酵液；
(S2)将各所述发酵液离心后，分别收集菌泥加入保护剂乳化，真空冷冻干燥得到各冻干菌粉；
(S3)将麦芽糊精和葛根粉烘干，保证水分低于1％；
(S4)将各所述冻干菌粉与烘干的麦芽糊精和葛根粉按比例复配、混匀后得到所需的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂。
优选的，步骤(S1)中耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌的制备方法包括如下步骤：
(S1-1)将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌采用涂平板的方法分别接种到含不同乙醇浓度的MRS固体培养基中，分别确定其乙醇的耐受性；
(S1-2)以确定的乙醇耐受浓度为起始浓度，将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌分别接种到含乙醇的改良MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为一代；挑取固体平板上较大的菌落接入相同乙醇浓度的MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为二代；如此传代驯化培养15-30代；
(S1-3)将驯化后的菌株分别进行分离筛选，接种到MRS液体培养基中培养，筛选出经过驯化后耐乙醇能力强的菌种并分别保藏，即得到耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌。
优选的，步骤(S1)中所述的一级种子液按照1-5％的接种量转接入MRS种子培养基中，培养条件为30-40℃，厌氧培养8-24h；所述高密度发酵的条件为30-40℃，厌氧培养8-18h，OD600达到5.0-15.0后降温。
优选的，步骤(S2)中离心温度为3-5℃，离心转速为6000-8000rpm，离心时间为12-20min；所述菌泥与保护剂的质量比为1:1-1:2；所述保护剂包括海藻糖10-15％，甘油1-2％，甘露醇0.02-0.1％和吐温0.02-0.1％。
优选的，步骤(S3)中所述麦芽糊精的烘干条件为：115℃烘干2-3h；所述葛根粉的烘干条件为：85℃烘干6-7h。
优选的，步骤(S4)中所述葛根粉与麦芽糊精的复配比例为1：2-1：3，所述葛根粉与麦芽糊精复配得到辅料；所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉的复配比例为(20-40)：(2-2.5)：(7.5-10)：1，所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉复配后得到混合菌粉；所述混合菌粉与辅料复配比例为1：6-1：8。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂在制备功能性酸奶中的应用，包括如下步骤：
(1)将稀奶油加入到加热至70-80℃的牛奶中得到奶液；将稳定剂、白砂糖和乳清蛋白粉混匀后加入所述奶液中搅拌溶解均匀后得到混合料；
(2)将所述混合料均质、杀菌和冷却，获得冷却后的基料；
(3)向所述基料接种所述具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，37-43℃静置发酵8-10h，即获得具有解酒护肝功效的酸奶。
采用上述技术方案，本发明采用的干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝的功效；嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌均具有很好的乙醇耐受能力，可以降解乙醇，同时添加功能性原料葛根粉赋予所述的益生菌发酵剂更好的解酒护肝功效，利用此益生菌发酵剂制备的功能性发酵乳可以加快乙醇的代谢，降解体内的乙醇含量，有效清除自由基，达到解酒护肝的功效。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例1
一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，包括如下重量份原料：
活菌数达到1*1011CFU/g的干酪乳杆菌1.8％、鼠李糖乳杆菌0.4％、嗜热链球菌9％和保加利亚乳杆菌0.8％，以及麦芽糊精60.0％和葛根粉25.0％；所述干酪乳杆菌命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.15409；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌；所述干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝功效。
所述干酪乳杆菌保藏单位代码：CGMCC-中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述干酪乳杆菌检测结果为：存活；保藏日期为：2018年03月05日；保藏编号为：CGMCC No.15409；分类命名：干酪乳杆菌Lactobacillus casei；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
(S1)将干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌分别接种于试管培养基中，分别得到一级种子液，再将各菌种的一级种子液按照3％的接种量转分别转接入MRS种子培养基中，培养条件为35℃，厌氧培养15h分别得到二级种子液，再将各二级种子液分别转接入发酵培养基中进行高密度发酵，发酵的条件为35℃，厌氧培养12h，OD600达到10.0后降温，分别收集得到的发酵液；
(S2)将各所述发酵液离心，离心温度为45℃，离心转速为7000rpm，离心时间为16min；分别收集菌泥加入保护剂乳化，菌泥与保护剂的质量比为1:1.5，保护剂包括海藻糖13％，甘油1.5％，甘露醇0.06％和吐温0.06％，真空冷冻干燥得到各冻干菌粉；
(S3)将麦芽糊精和葛根粉烘干，烘干条件为：115℃烘干2.5h；所述葛根粉的烘干条件为：85℃烘干6.5h，保证水分低于1％；
(S4)将各所述冻干菌粉与烘干的麦芽糊精和葛根粉按比例复配、混匀后得到所需的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，具体的，葛根粉与麦芽糊精的复配比例为1：2.5，所述葛根粉与麦芽糊精复配得到辅料；所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉的复配比例为30：2.3：8.8：1，所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉复配后得到混合菌粉；所述混合菌粉与辅料复配比例为1：7。
具体的，步骤(S1)中耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌的制备方法包括如下步骤：
(S1-1)将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌采用涂平板的方法分别接种到含不同乙醇浓度的MRS固体培养基中，分别确定其乙醇的耐受性；
(S1-2)以确定的乙醇耐受浓度为起始浓度，将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌分别接种到含乙醇的改良MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为一代；挑取固体平板上较大的菌落接入相同乙醇浓度的MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为二代；如此传代驯化培养15-30代；
(S1-3)将驯化后的菌株分别进行分离筛选，接种到MRS液体培养基中培养，筛选出经过驯化后耐乙醇能力强的菌种并分别保藏，即得到耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂在制备功能性酸奶中的应用，包括如下步骤：
(1)将稀奶油加入到加热至75℃的牛奶中得到奶液；将稳定剂、白砂糖和乳清蛋白粉混匀后加入所述奶液中搅拌溶解均匀后得到混合料；
(2)将所述混合料均质、杀菌和冷却，获得冷却后的基料；
(3)向所述基料接种所述具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，40℃静置发酵9h，即获得具有解酒护肝功效的酸奶。
实施例2
一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，包括如下重量份原料：
活菌数达到1*1011CFU/g的干酪乳杆菌1.5％、鼠李糖乳杆菌0.2％、嗜热链球菌8％和保加利亚乳杆菌0.5％，以及麦芽糊精57.0％和葛根粉22.1％；所述干酪乳杆菌命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.15409；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌；所述干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝功效。
所述干酪乳杆菌保藏单位代码：CGMCC-中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述干酪乳杆菌检测结果为：存活；保藏日期为：2018年03月05日；保藏编号为：CGMCC No.15409；分类命名：干酪乳杆菌Lactobacillus casei；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
(S1)将干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌分别接种于试管培养基中，分别得到一级种子液，再将各菌种的一级种子液按照1％的接种量分别转接入MRS种子培养基中，培养条件为30℃，厌氧培养8h，分别得到二级种子液，再将各二级种子液分别转接入发酵培养基中进行高密度发酵，发酵的条件为30℃，厌氧培养8h，OD600达到5.0后降温，分别收集得到的发酵液；
(S2)将各所述发酵液离心，离心温度为3℃，离心转速为6000rpm，离心时间为12min；分别收集菌泥加入保护剂乳化，菌泥与保护剂的质量比为1:1，保护剂包括海藻糖10％，甘油1％，甘露醇0.02％和吐温0.02％，真空冷冻干燥得到各冻干菌粉；
(S3)将麦芽糊精和葛根粉烘干，烘干条件为：115℃烘干2h；所述葛根粉的烘干条件为：85℃烘干6h，保证水分低于1％；
(S4)将各所述冻干菌粉与烘干的麦芽糊精和葛根粉按比例复配、混匀后得到所需的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，具体的，葛根粉与麦芽糊精的复配比例为1：2，所述葛根粉与麦芽糊精复配得到辅料；所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉的复配比例为20：2：7.5：1，所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉复配后得到混合菌粉；所述混合菌粉与辅料复配比例为1：6。
具体的，步骤(S1)中耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌的制备方法包括如下步骤：
(S1-1)将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌采用涂平板的方法分别接种到含不同乙醇浓度的MRS固体培养基中，分别确定其乙醇的耐受性；
(S1-2)以确定的乙醇耐受浓度为起始浓度，将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌分别接种到含乙醇的改良MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为一代；挑取固体平板上较大的菌落接入相同乙醇浓度的MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为二代；如此传代驯化培养15-30代；
(S1-3)将驯化后的菌株分别进行分离筛选，接种到MRS液体培养基中培养，筛选出经过驯化后耐乙醇能力强的菌种并分别保藏，即得到耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂在制备功能性酸奶中的应用，包括如下步骤：
(1)将稀奶油加入到加热至70℃的牛奶中得到奶液；将稳定剂、白砂糖和乳清蛋白粉混匀后加入所述奶液中搅拌溶解均匀后得到混合料；
(2)将所述混合料均质、杀菌和冷却，获得冷却后的基料；
(3)向所述基料接种所述具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，37℃静置发酵8h，即获得具有解酒护肝功效的酸奶。
实施例3
一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，包括如下重量份原料：
活菌数达到1*1011CFU/g的干酪乳杆菌2％、鼠李糖乳杆菌0.5％、嗜热链球菌10％和保加利亚乳杆菌1％，以及麦芽糊精66.4％和葛根粉29.5％；所述干酪乳杆菌命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.15409；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌；所述干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝功效。
所述干酪乳杆菌保藏单位代码：CGMCC-中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号；所述干酪乳杆菌检测结果为：存活；保藏日期为：2018年03月05日；保藏编号为：CGMCC No.15409；分类命名：干酪乳杆菌Lactobacillus casei；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，包括如下步骤：
(S1)将干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌分别接种于试管培养基中，分别得到一级种子液，再将各菌种的一级种子液按照5％的接种量分别转接入MRS种子培养基中，培养条件为40℃，厌氧培养24h，分别得到二级种子液，再将各二级种子液分别转接入发酵培养基中进行高密度发酵，发酵的条件为40℃，厌氧培养18h，OD600达到15.0后降温，分别收集得到的发酵液；
(S2)将各所述发酵液离心，离心温度为5℃，离心转速为8000rpm，离心时间为20min，分别收集菌泥加入保护剂乳化，菌泥与保护剂的质量比为1:2，保护剂包括海藻糖15％，甘油2％，甘露醇0.1％和吐温0.1％，真空冷冻干燥得到各冻干菌粉；
(S3)将麦芽糊精和葛根粉烘干，烘干条件为：115℃烘干3h；所述葛根粉的烘干条件为：85℃烘干7h，保证水分低于1％；
(S4)将各所述冻干菌粉与烘干的麦芽糊精和葛根粉按比例复配、混匀后得到所需的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，葛根粉与麦芽糊精的复配比例为1：3，所述葛根粉与麦芽糊精复配得到辅料；所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉的复配比例为40：2.5：10：1，所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉复配后得到混合菌粉；所述混合菌粉与辅料复配比例为1：8。
具体的，步骤(S1)中耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌的制备方法包括如下步骤：
(S1-1)将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌采用涂平板的方法分别接种到含不同乙醇浓度的MRS固体培养基中，分别确定其乙醇的耐受性；
(S1-2)以确定的乙醇耐受浓度为起始浓度，将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌分别接种到含乙醇的改良MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为一代；挑取固体平板上较大的菌落接入相同乙醇浓度的MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为二代；如此传代驯化培养15-30代；
(S1-3)将驯化后的菌株分别进行分离筛选，接种到MRS液体培养基中培养，筛选出经过驯化后耐乙醇能力强的菌种并分别保藏，即得到耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌。
一种所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂在制备功能性酸奶中的应用，包括如下步骤：
(1)将稀奶油加入到加热至80℃的牛奶中得到奶液；将稳定剂、白砂糖和乳清蛋白粉混匀后加入所述奶液中搅拌溶解均匀后得到混合料；
(2)将所述混合料均质、杀菌和冷却，获得冷却后的基料；
(3)向所述基料接种所述具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，43℃静置发酵10h，即获得具有解酒护肝功效的酸奶。
本发明采用的干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillus rhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝的功效；嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌均具有很好的乙醇耐受能力，可以降解乙醇，同时添加功能性原料葛根粉赋予所述的益生菌发酵剂更好的解酒护肝功效，利用此益生菌发酵剂制备的功能性发酵乳可以加快乙醇的代谢，降解体内的乙醇含量，有效清除自由基，达到解酒护肝的功效。
以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。
Claims (9)
1.一种具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，其特征在于：包括如下重量份原料：
干酪乳杆菌1.5-2％、鼠李糖乳杆菌0.2-0.5％、嗜热链球菌8-10％、保加利亚乳杆菌0.5-1％、麦芽糊精57.0-66.4％和葛根粉22.1-29.5％；所述干酪乳杆菌命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei，保藏编号为CGMCC No.15409；所述鼠李糖乳杆菌为Lactobacillusrhamnosus鼠李糖乳杆菌；所述干酪乳杆菌Lactobacillus casei和Lactobacillusrhamnosus鼠李糖乳杆菌具有解酒护肝功效。
2.根据权利要求1所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，其特征在于：所述干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的活菌数达到1*1011CFU/g。
3.一种如权利要求1-2任一所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
(S1)将干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌分别接种于试管培养基中，分别得到一级种子液，再将各菌种的一级种子液分别转接入MRS种子培养基中分别得到二级种子液，再将各二级种子液分别转接入发酵培养基中进行高密度发酵，分别收集得到的发酵液；
(S2)将各所述发酵液离心后，分别收集菌泥加入保护剂乳化，真空冷冻干燥得到各冻干菌粉；
(S3)将麦芽糊精和葛根粉烘干，保证水分低于1％；
(S4)将各所述冻干菌粉与烘干的麦芽糊精和葛根粉按比例复配、混匀后得到所需的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂。
4.根据权利要求3所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，其特征在于：步骤(S1)中耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌的制备方法包括如下步骤：
(S1-1)将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌采用涂平板的方法分别接种到含不同乙醇浓度的MRS固体培养基中，分别确定其乙醇的耐受性；
(S1-2)以确定的乙醇耐受浓度为起始浓度，将嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌分别接种到含乙醇的改良MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为一代；挑取固体平板上较大的菌落接入相同乙醇浓度的MRS液体培养基上进行培养，然后用接种环挑菌液在含相同乙醇浓度的MRS固体平板培养基上进行划线培养，此为二代；如此传代驯化培养15-30代；
(S1-3)将驯化后的菌株分别进行分离筛选，接种到MRS液体培养基中培养，筛选出经过驯化后耐乙醇能力强的菌种并分别保藏，即得到耐乙醇的嗜热链球菌和耐乙醇的保加利亚乳杆菌。
5.根据权利要求3所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，其特征在于：步骤(S1)中所述的一级种子液按照1-5％的接种量转接入MRS种子培养基中，培养条件为30-40℃，厌氧培养8-24h；所述高密度发酵的条件为30-40℃，厌氧培养8-18h，OD600达到5.0-15.0后降温。
6.根据权利要求3所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，其特征在于：步骤(S2)中离心温度为3-5℃，离心转速为6000-8000rpm，离心时间为12-20min；所述菌泥与保护剂的质量比为1:1-1:2；所述保护剂包括海藻糖10-15％，甘油1-2％，甘露醇0.02-0.1％和吐温0.02-0.1％。
7.根据权利要求3所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，其特征在于：步骤(S3)中所述麦芽糊精的烘干条件为：115℃烘干2-3h；所述葛根粉的烘干条件为：85℃烘干6-7h。
8.根据权利要求3所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂的制备方法，其特征在于：步骤(S4)中所述葛根粉与麦芽糊精的复配比例为1：2-1：3，所述葛根粉与麦芽糊精复配得到辅料；所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉的复配比例为(20-40)：(2-2.5)：(7.5-10)：1，所述嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌、干酪乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的冻干菌粉复配后得到混合菌粉；所述混合菌粉与辅料复配比例为1：6-1：8。
9.一种如权利要求1-2任一所述的具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂在制备功能性酸奶中的应用，其特征在于：包括如下步骤：
(1)将稀奶油加入到加热至70-80℃的牛奶中得到奶液；将稳定剂、白砂糖和乳清蛋白粉混匀后加入所述奶液中搅拌溶解均匀后得到混合料；
(2)将所述混合料均质、杀菌和冷却，获得冷却后的基料；
(3)向所述基料接种所述具有解酒护肝功效的益生菌发酵剂，37-43℃静置发酵8-10h，即获得具有解酒护肝功效的酸奶。
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2020
- 2020-02-20 CN CN202010104309.0A patent/CN111154699A/zh active Pending
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