CN112538440B - 一种复合益生菌制剂及其制备方法和在促进人体乙醇代谢中的应用 - Google Patents
一种复合益生菌制剂及其制备方法和在促进人体乙醇代谢中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了复合益生菌制剂及其制备方法和在促进人体乙醇代谢中的应用。该益生菌制剂可提高身体对酒精的耐受力，而且还具有良好的益生功能。益生菌制剂在身体中可以有效发挥益生菌的功效，缓解酒精对身体造成伤害，促进机体酒精代谢能力。本发明通过提高乳酸杆菌乙醇胁迫后的活力，解决了发酵工业亟待解决的首要问题，可以有效发挥益生菌的功效，缓解酒精对身体造成伤害，促进机体酒精代谢能力，是一种安全、原生态、无副作用，且促进乙醇代谢能力的复合益生菌制剂，可作为酒伴侣食用。
Description
技术领域
本发明属于微生物领域，具体涉及一种复合益生菌制剂及其制备方法和在促进人体乙醇代谢中的应用。
背景技术
经研究，酒精对肝脏的损害最大。在酒精代谢过程中，酒精在肝脏氧化时生成过量还原型烟酰胺二核苷酸，激活黄嘌呤氧化酶并诱导CYP 2El成为酒精代谢的主要酶系，产生过量活性氧簇。同时，酒精也会引起肠道屏障功能损伤，肠道内毒素泄露，导致血液中LPS(脂肪酶)显著增加。LPS与肝脏细胞上表面CD14受体结合的LPS结合蛋白(LBP)形成复合物，该复合物经NADPH氧化产生ROS导致氧化应激。这个过程中会产生大量自由基，当自由基的产生超过其清除能力时，肝内自由基明显增多，自由基引起肝细胞微粒体膜磷脂中多价不饱和脂肪酸发生脂质过氧化，破坏细胞膜及内膜结构，使肝脏细胞受损，导致肝脏疾病。
半个世纪前就有学者认识到肠道、肝脏、免疫系统之间的相互作用在肝脏疾病的发生发展中起一定的作用，近年来这一观念重新引起学者们的兴趣。肠道菌群的改变及其相关的内毒素血症在酒精性肝病(ALD)的发病中起着重要作用。当前益生菌已被应用于多种疾病的预防和治疗中，其中也包括肝脏疾病。益生菌对肠道健康及肠肝轴的影响有很多机制，包括调节肠道菌群，改善肠道屏障功能和免疫调节。
目前，市场上针对益生菌的很多机制，仅局限于实验室研究。因此，市场亟需开发一种安全、原生态、无副作用，且促进乙醇代谢能力的复合益生菌制剂。
发明内容
本发明针对上述现有益生菌技术所存在的不足，提供一种能缓解酒精对身体造成伤害，促进机体酒精代谢能力，安全、原生态、无副作用，且促进乙醇代谢能力的复合益生菌制剂。
本发明以乳酸杆菌为研究对象，探究乳酸杆菌乙醇胁迫过程中的损伤机制，确定乙醇胁迫影响菌体正常代谢的关键酶，通过适应性驯化获得乙醇胁迫耐受性较好的驯化菌株。
双歧杆菌V9，即动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号：CGMCCNo.4473，保藏日期：2010年12月14日，保藏地址：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏结果：存活。
嗜酸乳杆菌NM菌株(Lactobacillus acidophilus)于2010年12月14日保藏在中国微生物菌种保藏中心，保藏号：CGMCC No.4472，保藏地址：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏结果：存活。
嗜热链球菌PZST5(Streptococcus thermophilus)于2020年09月01日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCCNo.20583，保藏地址：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏结果：存活。
保加利亚乳杆菌PZLB，即德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckiisubsp.bulgaricus)于2014年02月27日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.8872，保藏地址：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏结果：存活。
根据本发明的一个方面，提供了一种能提高乙醇代谢能力效果的复合益生菌制剂，按重量百分比计，所述制剂包含以下组分：双歧杆菌V90.5-1％、嗜酸乳杆菌NM 0.5-1％、嗜热链球菌PZST5 0.5-1％、保加利亚乳杆菌PZLB 0.5-1％、益生元基质90％-98％。
进一步，按重量百分比计，该益生菌制剂主要包含以下组分：双歧杆菌V9 0.7％、嗜酸乳杆菌NM 0.5％、嗜热链球菌PZST5 0.5％、保加利亚乳杆菌PZLB 0.3％、益生元基质98％。
根据本发明的另一方面，提供了复合益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
对双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB菌株驯化，将驯化菌株的工作种子进行生产，得到原料菌粉(双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB)，对菌粉进行检验，向菌粉中添加益生元辅料，进行混料，制成制剂，最后检验，包装，得到成品。
本发明首次利用改良筛选培养基驯化筛选出繁殖快、生长周期短的新型耐受乙醇菌株，包括双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB，分离纯化并保存。通过定性定量检测初步确定其解酒效果，为进一步提高其解酒效果的研究及其解酒机理的探究做基础。对确定解酒效果的菌株进行耐受力的分析，发现其具有益生菌的部分特性，为体内快速解酒的研究提供依据和保障。在进行活菌小鼠体内解酒实验中，确定厌氧菌的安全性及对动物解酒的效果，为开发新型解酒活菌制剂提供依据。
益生菌作为肠道主力军，乳酸杆菌应具有活性高、数量多等特点。同时要求菌体具有益生功效，将乳酸杆菌的有效地运用于食品工业生产中，利于其生理功能的提升。
本发明提供的复合益生菌制剂制备的具有提高身体对酒精的耐受力，具有良好的益生功能。益生菌制剂在身体中可以有效发挥益生菌的功效，缓解酒精对身体造成伤害，促进机体酒精代谢能力。
本发明通过提高乳酸杆菌乙醇胁迫后的活力，解决了发酵工业亟待解决的首要问题。通过试验证明，可以有效发挥益生菌的功效，缓解酒精对身体造成伤害，促进机体酒精代谢能力，是一种安全、原生态、无副作用，且促进乙醇代谢能力的复合益生菌制剂，可作为酒伴侣食用。
附图说明
图1为不同乙醇浓度胁迫对乳酸杆菌存活率的影响；
图2为不同乙醇浓度胁迫处理对乳酸杆菌己糖激酶活力的影响；
图3为不同乙醇浓度胁迫处理对乳酸杆菌丙酮酸激酶活力的影响；
图4为不同乙醇浓度胁迫处理对乳酸杆菌乳酸脱氢酶活力的影响；
图5为本发明的益生菌菌株对乙醇的降解率，乙醇浓度为10％；
图6为本发明的益生菌菌株对乙醇的降解率，乙醇浓度为20％；
图7为本发明的益生菌菌株对乙醇的降解率，乙醇浓度为40％。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步详细的说明。
本发明提供了一种能提高乙醇代谢能力效果的复合益生菌制剂，按重量百分比计，该益生菌制剂主要包含以下组分：双歧杆菌V9 0.7％、嗜酸乳杆菌NM 0.5％、嗜热链球菌PZST5 0.5％、保加利亚乳杆菌PZLB 0.3％、益生元基质98％。
本发明中复合益生菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
对双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB菌株驯化，将驯化菌株的工作种子进行生产，得到原料菌粉(双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB)，对菌粉进行检验，向菌粉中添加益生元辅料，进行混料，制成制剂，最后检验，包装，得到成品。
以上菌株的单菌株在温度为37-42℃、湿度为45-65％条件下进行发酵，发酵培养基为葡萄糖18份、牛肉膏9份、牛肉蛋白胨9份、酵母粉4.5份、无水乙酸钠4.5份，经过一级发酵、二级发酵和三级发酵后，7200rmp进行离心，制备冻干上机液，在-65℃进行冻干得到原料菌粉。
实施例1
乳酸杆菌驯化后菌体对乙醇适应性提高
以双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB为原始菌株，通过适应性驯化获得具有一定乙醇胁迫耐受性的驯化菌株，采用不同乙醇浓度胁迫驯化菌株与原始菌株，测定乳酸杆菌的生长曲线，研究乙醇胁迫驯化菌株存活率、关键酶活、膜通透性、完整性的变化，对其机理进行探究。
1、乙醇胁迫对乳酸杆菌代谢活力的影响
分别选取乙醇浓度为5％(v/v)和8％(v/v)进行胁迫处理，与未经胁迫的对照，进行菌种活力的对比，测定乙醇胁迫处理后菌体存活率及乙醇胁迫对糖酵解途径中关键酶的影响，通过对菌体胞外β-半乳糖苷酶、细胞膜完整性及电镜观察测定细胞膜膜特性的变化，分析乙醇胁迫造成菌体损伤的主要因素，并对其机理进行探究。具体实验条件如下：
MRS肉汤成分：蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母膏5g、葡萄糖20g、硫酸镁0.58g、柠檬酸氢二铵2g、乙酸钠5g、硫酸锰0.25g，加入吐温-801mL，去离子水1000mL，调节pH至6.4，在121℃高压下进行灭菌20分钟。
乙醇MRS培养基：在MRS基础上，用无水乙醇调节培养基乙醇含量，配制成5％、8％(v/v)两种培养基，以不添加乙醇含量的培养基作为对照。
2、分析不同乙醇浓度胁迫对乳酸杆菌存活率的影响。
经不同乙醇浓度胁迫培养条件下，收集对数末期的菌体，观察菌体的生长情况，如图1所示。通过乙醇浓度分别为5％(v/v)、8％(v/v)胁迫处理后，以不加乙醇的样品作为对照。结果由图1可以看出，乳酸杆菌在5％(v/v)乙醇胁迫处理后，存活率提高了27.11％，同时pH有所下降，说明菌种产酸能力增强，但是效果不显著。由于菌种之间存在差异性，胁迫处理后乳酸杆菌存活率却下降了26.76％。对于浓度为8％(v/v)乙醇胁迫处理来说，存活率明显下降，乳酸杆菌存活率下降至26.61％、23.50％和34.20％，pH呈上升趋势，说明菌体产酸能力下降，菌体活力降低。这一结果说明，5％(v/v)乙醇胁迫处理有助于提高菌体的存活率，使细胞膜的通透性增加，促进细胞内外质子或其他离子的交换，增强了菌体新陈代谢的能力，进而使得菌体存活率提高。而8％(v/v)乙醇胁迫处理对菌体的生长产生明显的抑制作用，存活率和活力明显降低。这说明，高浓度乙醇胁迫乳酸杆菌的生长代谢明显抑制，乙醇胁迫可能同时作用或者连续作用，抑制菌体生长及发酵能力，影响菌体的存活率，降低发酵效率。
3、不同乙醇浓度胁迫处理对乳酸杆菌己糖激酶(HK)的影响
HK广泛存在于动植物及微生物体内，主要针对于D-葡萄糖、甘露糖等的反应，是糖酵解过程中的第一个调节酶，其活性大小与乳酸杆菌的糖代谢速率相关。本实施例测定不同乙醇浓度胁迫处理后对其活力的影响，研究结果如图2所示。
由图2可以看出，不同乙醇浓度胁迫的乳酸杆菌随着乙醇浓度的升高，己糖激酶活力有所下降，但效果较微。不同的乳酸杆菌之间存在个体差异性，在5％(v/v)乙醇胁迫处理条件下，双歧杆菌酶活力稍微高于对照。乙醇胁迫处理之前己糖激酶活力为5.31±0.50U,而胁迫之后为5.52±0.94U，相对于对照组来说，均不具有显著性。酶活力的变化与菌体活力相关，在8％(v/v)乙醇胁迫处理条件下，乳酸杆菌均具有极显著性差异(P<0.01)，双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB酶活分别为4.84±0.75U、3.9±0.19U、3.9±0.43U、4.4±0.33U。
8％(v/v)胁迫处理后细胞明显受到损伤，致使其活力下降，这一结果表明己糖激酶不是乙醇胁迫乳酸杆菌代谢损伤的主要酶。
4、不同乙醇浓度胁迫处理对乳酸杆菌丙酮酸激酶(PK)的影响
丙酮酸激酶，作为一个限速酶，用于催化PEP生成丙酮酸，PEP的高能磷酸键在反应过程中将其传递于ADP后转变为ATP，而它本身生成PEP后自动转化成丙酮酸。此反应不可逆，是EMP途径中又一个生成ATP的反应。本研究测定不同乙醇浓度胁迫处理后对其活力的影响，研究结果如图3所示。
可以看出，在不同乙醇浓度胁迫条件下丙酮酸激酶活力有显著性差异，对于双歧杆菌和嗜酸乳杆菌来说，5％(v/v)乙醇胁迫后的酶活力明显高于对照。胁迫处理后酶活分别约为16.70±1.65U、16.13±1.46U，而对照组分别约为9.21±0.92U、12.18±1.05U，其活力提高了约80.30％、29.81％。不同菌株耐乙醇能力的不同，有些菌株在5％乙醇胁迫条件下能促进菌体的生长，增加细胞膜的通透性，加快物质的代谢能力，使其酶活力增强。而对于乳酸杆菌来说，胁迫处理后的菌体酶活下降了45.96％，乙醇胁迫处理影响细胞膜选择性维护功能，抑制相关物质代谢的运输过程，导致酶活力下降。在8％(v/v)乙醇胁迫条件下，对于双歧杆菌和嗜酸乳杆菌来说，胁迫处理后酶活分别约为5.62±0.35U、9.51±0.69U，菌体酶活下降明显。这一结果说明，丙酮酸激酶是乙醇胁迫造成菌体损伤的关键代谢酶。
5、乙醇浓度胁迫处理对乳酸杆菌乳酸脱氢酶(LDH)的影响
脱氢酶，通常存在于一些生物体中，主要与丙酮酸反应生成乳酸。LDH活力强弱，反映菌株的产酸能力的大小。本实施例测定不同乙醇胁迫处理后乳酸脱氢酶活力的影响，结果如图4所示。
由图4可知，不同乙醇浓度胁迫乳酸杆菌乳酸脱氢酶活明显低于胁迫之前，并随着乙醇浓度的升高而降低。与对照组相比，在5％(v/v)乙醇胁迫条件下，乳杆菌酶活分别降低了21.88％、20.00％、22.73％、19.65％。而经8％(v/v)乙醇胁迫后，乳杆菌酶活分别降低了更多。通过方差分析可知，不同乙醇浓度胁迫均对乳酸脱氢酶影响极显著(P<0.01)。这一结果说明乳酸脱氢酶是乙醇胁迫过程中造成乳酸杆菌损伤的关键酶。
上述结果显示：与原始菌株的胁迫情况相比，随着乙醇浓度的增大，驯化菌株pH值下降而存活率明显提高，其中双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB存活率分别提高了21.10％、23.11％、32.01％、24.11％，关键酶活力均有所提高，且对丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶及ATP酶胁迫效果具有显著性影响，胞外β-半乳糖苷酶活明显降低，细胞膜的完整性有所维持，这一结果说明丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶及ATP酶是乙醇胁迫造成驯化菌株损伤的关键酶，适应性驯化有利于维持菌体细胞膜的完整性和通透性。
利用适应性驯化有助于乳酸杆菌耐乙醇胁迫代谢活力的提高。驯化后菌株在产品中更能发挥效果，产生相应的代谢酶，发生乙醇降解作用。
实施例2
本实施例研究了在10％、20％和40％的乙醇浓度条件下，乳酸杆菌1h内不同时间对乙醇的作用效果，初步确定其快速解酒能力；利用气相色谱法通过测定菌体、菌体发酵上清、菌体破碎沉淀和菌体破碎上清液的乙醇降解效果，确定有效解酒成分。
检测菌株的快速解酒效果，选择10％、20％和40％三个乙醇浓度，采用重铬酸钾－浓硫酸法测定在不同时间点15min、30min、45min、60min时的乙醇残留量，根据残留量的多少来判断菌株快速解酒的效果。菌株的解酒实验采取两种方式，一种是向配制好的乙醇MRS培养液内加入菌液，一种是向培养好的菌液内加入乙醇溶液。然后，采用气相色谱法对菌株有效解酒成分进行确定，分别选择菌体、菌体发酵上清液、菌体破碎沉淀、菌体破碎上清液与不同浓度乙醇溶液进行混合，根据峰面巧来确定不同时间点己醇的残留量，根据乙醇代谢产物乙醛和乙酸的含量变化，推测其解酒机理。
结果如图5、图6和图7所示，在三个乙醇浓度下，随着时间的推移，乙醇浓度都有所减少，在10％、20％、40％的乙醇浓度下，1h内的降解率分别为20.20％，21.10％和17.92％，与空白对照相比具有显著性差异(p＜0.05)。
向乙醇MRS培养液内加入菌液后测定的解酒效果，向培养好的菌液内加入乙醇后，复合益生菌制剂具有更好的快速解酒效果。
采用气相色谱法对其有效解酒成分进行确定，分别测定菌体、菌体发酵上清、菌体破碎沉淀、破碎沉淀上清与乙醇溶液混合后乙醇的残留量，根据峰面积与物质含量成正比的关系，更进一步确定菌株的有效解酒成分，以及快速解酒效果。对比实验结果可确定有效解酒的是菌体本身，为产品实验提供依据。对比发现，菌株中的双歧杆菌具有更好的解酒效果。其在高浓度的乙醇溶液内解酒率仍能达到20％以上。
实施例3
通过动物实验，进一步确定产品的快速解酒效果。
进行小鼠的体内实验，为确保老鼠的饮酒量，采用灌胃的方式。首先确定灌胃的酒液浓度，保证小鼠的安全性，其次确定小鼠灌胃的乙醇浓度，选择未醉率与死亡率都较低，醉酒时间与醒酒时间适中的给酒量进行实验。最后进行小鼠分組实验，根据测定血清中乙醇的浓度及血清中氧化酶和转氨酶的活性，确定复合益生菌制剂产品的体内解酒效果和对肝脏的预防保护作用。
1、灌胃产品菌粉含量的确定，如表1所示，菌液浓度在1*109cfu/ml以下时，小鼠均能正常存活，为安全浓度。
表1不同菌粉浓度对小鼠生存的影响
2、灌胃乙醇浓度的确定，如表2所示，为不同乙醇浓度下的小鼠醉酒时间。
表2不同乙醇剂量对小鼠醉酒醒酒时间的影响
3、小鼠灌胃取血实验结果
表3复合益生菌制剂对小鼠质量的影响
通过毎天给小鼠灌胃两次来确定产品的解酒效果，灌胃前称量小鼠的体重，验证菌株对小鼠的生长是否有影响。由表3可知，各组小鼠体重无明显差异(p＞0.05)。阴性对照組小鼠的体重上下稍有浮动，无明显改变，5天后平均体重减少化6g。40％乙醇浓度处理组的小鼠5天后平均体重减少2.16g；60％乙醇浓度处理组小鼠质量不断减低，5天后平均体重减少2.38g；产品+40％乙醇浓度处理组的小鼠的体重上下稍有浮动，5天后平均体重减少0.4g；产品+60％乙醉浓度处理組5天后平均体重减少0.15g；产品处理组的小鼠体重稍有增加，5天后平均体重增加了6g。综上可知，复合益生菌制剂对小鼠的生长无负面影响，各组的小鼠质量无明显变化。
表4不同处理組对小鼠醉酒醒酒时间的影响
由表4可知，对比第二组40％乙醇灌胃组和第三组60％的乙醇灌胃组，乙醇浓度越高，醉酒时间和醒酒时间越长，说明乙醇浓度越大，机体代谢的负荷越大。第四组的产品+40％乙醇处理组与第二组40％乙醇灌胃组相比，醉酒时间延长、醒酒时间缩短，第五组产品+60％乙醇处理组与第三组60％乙醇灌胃组对比也出现了相似的结果，说明产品有明显的防醉功效。与此同时，对比第五组和第六组发现两组的醉酒时间相差不明显，醒酒时间明显延长，分析其原因，可能因为60％的乙醇对产品定植有一定的影响。第六组的产品组与第一组的生理盐水处理组对比，小鼠表现正常，未出现死亡或者入睡的现象，更进一步说明了复合益生菌制剂产品的食用安全性。
4、复合益生菌制剂产品对灌胃小鼠血清抗氧化能力的影响
表5产品对酒精灌胃小鼠血清抗氧化能为的影响
由表5可知，与第一组对照组小鼠相比，其他五组小鼠的血清丙二醛(MDA)含量无显著差异评＞0.05)，但是第二组和第三组的乙醇灌胃组的小鼠血清MDA含量高于阴性对照组，说明饮酒可提高小鼠脂质过氧化的风险，而先灌胃产品后灌胃乙醇的第四组和第五组小鼠血清MDA含量相比于只灌胃乙醇的小鼠有所降低，说明产品可以稍微缓解小鼠因饮酒引起的脂质过氧化。对于超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性，与阴性对照相比，小鼠饮酒会显著降低血清两种酶的活性(P＜0.05)，但是与产品处理组的小鼠相比，先灌胃产品后灌胃乙醇，使得小鼠血清SOD和CAT两种酶的活性虽然比阴性对照组的低但是显著高于只灌胃乙醇的处理组，40％和60％两种乙醇浓度处理组的结果具有相同的趋势。对于谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性，乙醇灌胃组小鼠血清内的酶活显著低于阴性对照组CP＜0.05)，而产品灌胃组与只灌胃乙醇的小鼠对比，可提高GSH-Px的活性，不具有显著性差异(P>0.05)，而第六组只灌胃产品的处理组与阴性对照组相比可提高GSH-Px的酶活性。
综上可知，产品可提高饮酒小鼠体内的的活力，减少体内氧化自由基的形成，减少器官或者细胞的损伤。
5、产品对乙醇灌胃小鼠谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的活力影响
表6产品对灌胃乙醇小鼠血清内ALT和AST活性的影响
体内90％以上乙醇在肝脏中代谢，急性乙醇中毒时，酒精直接刺激、损害肝细胞，肝细胞发生变化、坏死，影响肝脏对蛋白质、脂肪的正常代谢及解毒功能。ALT主要存在于肝细胞浆内，当肝细胞损伤时。细胞内转氨酶进入血液中，引起血清ALT升高；AST也存在于线粒体内，当肝细胞振伤严重时，线粒体内AST释放进入血液，使血清AST升高。本试验结果如表6所示，第二组和第三组的小鼠受到酒精刺激后使肝细胞受到一定程度的损伤，且浓度越高，对肝脏的损伤威胁越大，与阴性对照相比，ALT、AST活性明显上升；而第四组和第五组的产品+乙醇处理组的小鼠血清ALT、AST含量明显低于乙醇灌胃处理组，具有显著性差异(P＜0.05)，说明大量饮酒对肝脏造成一定的损伤，产品具有预防肝细胞损伤的功能。
本发明中，通过自有乳酸杆菌驯化，提高菌体对乙醇适应性。从根本上解决菌株对乙醇的适应性，保证在高乙醇浓度条件下，菌株正常代谢。通过研究10％、20％和40％的乙醇浓度条件下，乳酸杆菌1h内不同时间对乙醇的作用效果，确定产品中菌株的快速解酒能为；利用气相色谱法通过测定菌体、菌体发酵上清、菌体破碎沉淀和菌体破碎上清液的乙醇降解效果，确定有效解酒成分。
以上所述的仅是本发明的一些实施方式。对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种复合益生菌制剂，其特征在于，按重量百分比计，所述制剂包含以下组分：双歧杆菌V9 0.7％、嗜酸乳杆菌NM 0.5％、嗜热链球菌PZST50.5％、保加利亚乳杆菌PZLB0.3％、益生元基质98％；
双歧杆菌V9保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号：CGMCCNo.4473；
嗜酸乳杆菌NM保藏在中国微生物菌种保藏中心，保藏号：CGMCCNo.4472；
嗜热链球菌PZST5保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.20583；
保加利亚乳杆菌PZLB保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.8872。
2.根据权利要求1所述的一种复合益生菌制剂，其特征在于，所述制剂为粉剂。
3.根据权利要求1所述的复合益生菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
对双歧杆菌V9、嗜酸乳杆菌NM、嗜热链球菌PZST5、保加利亚乳杆菌PZLB菌株驯化，将驯化菌株的工作种子进行生产，得到原料菌粉，对菌粉进行检验，向菌粉中添加益生元基质，进行混料，制成制剂，最后检验，包装，得到成品。
4.根据权利要求1所述的复合益生菌制剂在制备促进乙醇代谢的产品中的应用。
5.根据权利要求1所述的复合益生菌制剂在制备促进乙醇代谢的药品中的应用。
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