CN111134013B - 一种开放式抑菌培养基及其制备方法 - Google Patents

一种开放式抑菌培养基及其制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于开放式抑菌培养基的抑菌剂、开放式抑菌培养基及其制备方法，所述用于开放式抑菌培养基的抑菌剂包括：头孢克肟0.1～0.3g/L、链霉素0.1～0.3g/L、多菌灵0.1～0.3g/L、以及代森锰锌灵0.1～0.3g/L，所述浓度为使用时的终浓度。所述开放式抑菌培养基包括所述的抑菌剂，还包括基本培养基、固型剂；本发明其抑菌效果好，整个操作过程比较简单，减少组培成本，可以在室内操作，准入门槛低。操作粗放，便于农村推广，便于批量生产。

Description

一种开放式抑菌培养基及其制备方法
技术领域
本发明涉及培养基的制备技术领域，特别涉及一种开放式抑菌培养基及其制备方法。
背景技术
传统培养基的制备较为繁琐，需要大量元素、微量元素、有机以及铁盐分别取样进行定溶，并添加一些耐高温高压的激素，调节ph，加入琼脂，然后高温灭菌，超净工作台紫外消毒灭菌，才能进行外植体的转接，整个操作流程比较繁琐，耗能耗时，操作规范要求高，一般操作人员难以满足要求。
“植物开放式组织培养”是在抑菌剂的作用下，使植物组织培养脱离严格无菌的操作环境，不需高压灭菌和超净工作台，可以在自然、有菌环境中接种、培养各类植物组织。开放式组织培养可使植物组织培养育苗过程脱离严格无菌的操作环境，在开放的有菌环境中进行植物组织培养育苗，这简化了植物组织培养育苗环节，提高了工作效率，降低了育苗成本。然而一般的抑菌剂其抑菌效果差，细菌污染与真菌污染率高。
因此，如何开发一种抑菌效果好的用于开放培养的抑菌剂以及开放式抑菌培养基，成为亟待解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术之缺陷，提供了一种开放式抑菌培养基及其制备方法，其抑菌效果好，整个操作过程简单，减少组培成本，可以在室内操作，准入门槛低。
本发明是这样实现的：
本发明的目的之一在于提供一种用于开放式抑菌培养基的抑菌剂，其包括：头孢克肟0.1～0.3g/L、链霉素0.1～0.3g/L、多菌灵0.1～0.3g/L、以及代森锰锌灵0.1～0.3g/L，所述浓度为使用时的终浓度。
优选地，其包括：头孢克肟0.2g/L、链霉素0.2g/L、多菌灵0.2g/L、以及代森锰锌灵0.2g/L，所述浓度为使用时的终浓度。
本发明的目的之二在于提供一种开放式抑菌培养基，其包括所述的抑菌剂，还包括基本培养基、固型剂。
所述基本培养基包括MS、或者WPM基本培养基。
所述固型剂包括终浓度为1.5～2.5g/L(优选为2g/L)的琼脂以及终浓度为6.5～7.5g/L(优选为7g/L)的淀粉。
优选地，还包括终浓度为0.05～0.15ml/L(优选为0.1ml/L)的次氯酸钠。
优选地，还包括激素类物质，所述激素类物质包括生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸、乙烯、激动素、玉米素中的一种或多种。
本发明的目的之三在于提供一种开放式植物组织培养育苗的方法，该方法在有菌的室温自然环境条件下进行：在所述开放式抑菌培养基中进行接种培养。
优选地，所述接种培养的为荆半夏外植体。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供的一种用于开放式抑菌培养基的抑菌剂、开放式抑菌培养基及其制备方法，其抑菌效果好，整个操作过程比较简单，减少组培成本，可以在室内操作，准入门槛低。操作粗放，便于农村推广，便于批量生产。
具体实施方式
实施例1
1、用于开放式抑菌培养基的抑菌剂，其包括：头孢克肟0.2g/L、链霉素0.2g/L、多菌灵0.2g/L、以及代森锰锌灵0.2g/L，所述浓度为使用时的终浓度。
2、开放式抑菌培养基：以1L基本培养基计，向基本培养基中加入2g琼脂以及7g淀粉，加热溶解，待温度降到40℃加入终浓度为0.1ml/L的次氯酸钠，以及所述抑菌剂(0.2g头孢克肟、0.2g链霉素、0.2g多菌灵、以及0.2g代森锰锌灵)；
3、向所述开放式抑菌培养基中接种荆半夏外植体进行培养。
实施例2
用于开放式抑菌培养基的抑菌剂，其包括：头孢克肟0.1g/L、链霉素0.1g/L、多菌灵0.1g/L、以及代森锰锌灵0.1g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
实施例3
用于开放式抑菌培养基的抑菌剂，其包括：头孢克肟0.3g/L、链霉素0.3g/L、多菌灵0.3g/L、以及代森锰锌灵0.3g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
实施例4
用于开放式抑菌培养基的抑菌剂，其包括：头孢克肟0.3g/L、链霉素0.2g/L、多菌灵0.1g/L、以及代森锰锌灵0.1g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
实施例5
用于开放式抑菌培养基的抑菌剂，其包括：头孢克肟0.1g/L、链霉素0.3g/L、多菌灵0.3g/L、以及代森锰锌灵0.3g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
实施例6
用于开放式抑菌培养基的抑菌剂，其包括：头孢克肟0.1g/L、链霉素0.3g/L、多菌灵0.1g/L、以及代森锰锌灵0.1g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
实施例7
该实施例中次氯酸钠的终浓度为0.05ml/L，其余步骤同实施例1。
实施例8
该实施例中次氯酸钠的终浓度为0.15ml/L，其余步骤同实施例1。
实施例9
该实施例中所述固型剂包括终浓度为1.5g/L的琼脂以及终浓度为6.5g/L的淀粉，其余步骤均同实施例1。
实施例10
该实施例中所述固型剂包括终浓度为2.5g/L的琼脂以及终浓度为7.5g/L的淀粉，其余步骤均同实施例1。
对比例1
该对比例中用于开放式抑菌培养基的抑菌剂包括：头孢克肟0.05g/L、链霉素0.05g/L、多菌灵0.05g/L、以及代森锰锌灵0.05g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
对比例2
该对比例中用于开放式抑菌培养基的抑菌剂包括：头孢克肟0.5g/L、链霉素0.5g/L、多菌灵0.5g/L、以及代森锰锌灵0.5g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
对比例3
该对比例中用于开放式抑菌培养基的抑菌剂包括：头孢克肟2g/L、链霉素2g/L、多菌灵2g/L、以及代森锰锌灵2g/L，所述浓度为使用时的终浓度。其余步骤同实施例1。
对比例4
该对比例中链霉素的浓度改为1g/L，其余步骤同实施例5。具体地，该抑菌剂包括：头孢克肟0.1g/L、链霉素1g/L、多菌灵0.3g/L、以及代森锰锌灵0.3g/L。
对比例5
该对比例除不加终浓度为0.1％(0.1ml/L)的次氯酸钠外，其余均同实施例1。
对比例6
该对比例中链霉素换为阿奇霉素，其余步骤同实施例5。具体地，该抑菌剂包括：头孢克肟0.1g/L、阿奇霉素0.3g/L、多菌灵0.3g/L、以及代森锰锌灵0.3g/L。
对比例7
该对比例中链霉素换为阿奇霉素，其余步骤同实施例7。具体地，该抑菌剂包括：头孢克肟0.1g/L、阿奇霉素0.3g/L、多菌灵0.1g/L、以及代森锰锌灵0.1g/L
对比例8
该对比例中不含头孢克肟和代森锰锌灵，其余步骤同实施例4。该抑菌剂，其包括：链霉素0.2g/L、多菌灵0.1g/L，所述浓度为使用时的终浓度。
对比例9
该对比例中的固型剂包括终浓度为0.7g/L的琼脂和7g/L的淀粉，其余均同实施例4。
对比例10
该对比例中的固型剂不加淀粉，即为终浓度为2g/L琼脂，其余均同实施例4。
实验例1
分别观察并计算以上实施例1-实施例10以及对比实施例1-对比例10中荆半夏污染情况并统计如下，其中真菌污染率为真菌污染个数除以接种荆半夏外植体的总个数；细菌污染率为细菌污染个数除以接种荆半夏外植体的总个数。
表1
Figure GDA0003333659860000061
Figure GDA0003333659860000071
与对比例1-4相比，本发明实施例1-6的污染率更低，表明抑菌剂为头孢克肟0.1～0.3g/L+链霉素0.1～0.3g/L+多菌灵0.1～0.3g/L+代森锰锌灵0.1～0.3g/L时，可抑制培养基内污染。对比例3(抑菌素浓度将为2g/L)中虽然抑菌率高，但药味较浓，对外植体生长不利。
对比例8(链霉素0.2g/L、多菌灵0.1g/L)中由于只加链霉素和多菌灵，培养基全部污染；实施例4(链霉素0.2g/L、多菌灵0.1g/L、头孢克肟0.3g/L、代森锰锌灵0.1g/L)的抑菌效果更好。
与对比例5(不加次氯酸钠)相比，实施例1、实施例7、实施例8均加次氯酸钠，其抑菌效果更好，且实施1的抑菌效果最好；表明制备开放式抑菌培养基时加入终浓度为0.05～0.15ml/L(优选为0.mlg/L)的次氯酸钠，可抑制真菌污染。
与对比例6(阿奇霉素)相比，实施例5(链霉素)的抑菌效果更好；与对比例7(阿奇霉素)相比，实施例7(链霉素)的抑菌效果更好；表明链霉素较阿奇霉素抑制真菌效果好。
对比例9中琼脂的浓度改为0.7g/L，其细菌污染率达到了14.29％；对比例10中固型剂中不加淀粉，其细菌污染率达到了7.14％；表明制备开放式抑菌培养基时加入固型剂可以提高抑菌率。
所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包括在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种开放式抑菌培养基，其特征在于，包括基本培养基、固型剂以及抑菌剂，抑菌剂包括：头孢克肟0.1～0.3g/L、链霉素0.1～0.3g/L、多菌灵0.1～0.3g/L、以及代森锰锌灵0.1～0.3g/L，所述浓度为使用时的终浓度；所述固型剂包括终浓度为1.5～2.5g/L的琼脂以及终浓度为6.5～7.5g/L的淀粉。
2.如权利要求1所述的开放式抑菌培养基，其特征在于，抑菌剂包括：头孢克肟0.2g/L、链霉素0.2g/L、多菌灵0.2g/L、以及代森锰锌灵0.2g/L，所述浓度为使用时的终浓度。
3.如权利要求1所述的开放式抑菌培养基，其特征在于，所述基本培养基包括MS、或者WPM基本培养基。
4.如权利要求1所述的开放式抑菌培养基，其特征在于，所述固型剂包括终浓度为2g/L的琼脂以及终浓度为7g/L的淀粉。
5.如权利要求1所述的开放式抑菌培养基，其特征在于，还包括激素类物质，所述激素类物质包括生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸、乙烯、激动素、玉米素中的一种或多种。
6.一种权利要求1-5任一所述的开放式抑菌培养基的制备方法，其特征在于，包括：将固型剂加入到基本培养基中，并加热溶解，待温度降到35～45℃，加入权利要求1-2任一所述的抑菌剂。
7.一种开放式植物组织培养育苗的方法，其特征在于，在权利要求1-5任一所述开放式抑菌培养基中进行接种培养。
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