CN106508679A - 一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基及其制备方法，包括以下原料：苹果汁、柠檬酸、邻苯甲酰磺酰亚胺钠、茶多酚、钾盐、磷盐、氮盐、钙盐、镁盐、碘盐、硼盐、钼盐、锌盐、锰盐、铜盐、铁盐、维生素、氨基酸、吲哚丁酸、赤霉素、6‑苄基腺膘呤、萘乙酸、激动素、天冬门素、调理剂、助溶剂、分散剂、相容剂、稳定剂、抗菌剂、水。采用本发明的铁皮石斛组培苗培养基组培铁皮石斛所获得的种苗质量好，成活率高，能有效提高生物碱、多糖、氨基酸的含量。

Description

一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基及其制备方法

【技术领域】

本发明属于铁皮石斛种植技术领域，具体涉及一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基及其制备方法。

【背景技术】

铁皮石斛是兰科植物，石斛可分为黄草、金钗、马鞭等数十种，主要有效成分为生物碱、多糖、氨基酸。铁皮石斛为石斛之极品，它因表皮呈铁绿色而得名，它生长在悬崖峭壁的背阴之处，根不入土，具有滋养阴津、增强体质、补益脾胃、护肝利胆、强筋降脂、降低血糖、抑制肿瘤、明亮眼目、滋养肌肤以及延年益寿等功效。《中国药学大词典》称铁皮石斛“专治肺胃之气液、气液冲旺、肾水自生”。善于滋阴生津，治疗阴虚津亏诸症。《神农本草经》记载：“石斛除痹下气、补五脏虚劳瀛瘦，强阴益精，久服，厚肠胃”，称其有“主伤中，除痹下气，补五脏虚劳”的功效。

目前，在铁皮石斛试管苗的繁殖体系中，生根培养基采用的多是固体培养基，如发明专利“铁皮石斛的人工大面积栽培方法(专利号：ZL200410084496.1)”公开了一种固体练苗培养基，是以刨木花、珍珠岩、草炭土按体积比1:1:1组成的，采用该培养基组培苗，移栽存活率90％以上；又如发明专利“铁皮石斛的快速繁殖方法(专利号：ZL201310156723.6)”公开了一种固体培养基，是以树皮粉、腐殖质、珍珠岩按体积比1:0.5:0.5组成的，采用该培养基组培苗，移栽存活率94.8％。以上现有技术中固体培养基的应用，存在着取苗时容易造成根部伤害，降低了移栽存活率，从而提高了生产成本。

在培养基制备方法中，现有技术对制备好的培养基多采用高压灭菌，如发明专利“一种应用铁皮石斛激素自养型茎尖培养生产药材的方法(专利号：ZL02136925.9)”公开了一种培养基高压灭菌的方法，是在压力为100-120KPa下进行的，灭菌时间为15-25min；又如发明专利“提高铁皮石斛原球茎增殖倍数的方法(专利号：ZL201110200498.2)”也公开了一种培养基高压灭菌的方法，是在压力为70-135KPa下进行的，灭菌时间为20-25min。以上现有技术由于灭菌压力普遍不高，存在着消毒时间长、灭菌效果可靠性差等问题，造成产业化生产效率低下，生产成本高。

专利文献“一种铁皮石斛组培苗培养基(公开号：CN104509438B)”公开了一种铁皮石斛组培苗培养基，所述的培养基由以下组成：苹果泥、香蕉泥、白糖、硫酸亚铁、硝酸铵、硝酸钾、硫酸镁、磷酸二氢钾、硼酸、甘氨酸、维生素B1、维生素B2、糖氨基酸、萘乙酸、自来水，该发明的铁皮石斛组培苗培养基，搭配合理，营养全面，能够快速促根生茎，提高铁皮石斛多糖含量和氨基酸含量，缩短铁皮石斛培养周期，提高铁皮石斛移栽存活率；专利文献“一种铁皮石斛组培苗培养基及其制备方法(公开号：CN104509440B)”公开了一种铁皮石斛组培苗培养基，包括以下组分：土豆泥、苹果泥、香蕉泥、白糖、硝酸铵、硝酸钾、磷酸二氢钾、硼酸、氨基酸、维生素、IBA、GA、6-BA、纯净水，该发明的铁皮石斛组培苗培养基营养全面，能够缩短铁皮石斛培养周期，提高铁皮石斛移栽存活率。

铁皮石斛的主要有效成分为生物碱、多糖、氨基酸，如何同时提高这三种有效成份的量，提高经济效益，现有技术未公开报道。

【发明内容】

本发明提供一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基及其制备方法，以解决现有组织培养基如何提高铁皮石斛的主要有效成分生物碱、多糖、氨基酸的含量，提高经济效益等问题。采用本发明的铁皮石斛组培苗培养基组培铁皮石斛所获得的种苗质量好，成活率高，能有效提高生物碱、多糖、氨基酸的含量。

为解决以上技术问题，本发明采用以下技术方案：

一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，以重量份为单位，包括以下原料：苹果汁162-395份、柠檬酸2.6-3.4份、邻苯甲酰磺酰亚胺钠0.02-0.05份、茶多酚1.5-2.8份、钾盐2.6-4.2份、磷盐1.5-3.8份、氮盐1.2-2.6份、钙盐0.8-1.3份、镁盐0.7-1.2份、碘盐0.4-0.6份、硼盐0.2-0.4份、钼盐0.2-0.3份、锌盐0.3-0.4份、锰盐0.1-0.3份、铜盐0.1-0.2份、铁盐0.1-0.2份、维生素0.12-0.28份、氨基酸0.1-0.22份、吲哚丁酸0.08-0.14份、赤霉素0.08-0.12份、6-苄基腺膘呤0.07-0.09份、萘乙酸0.08-0.14份、激动素0.05-0.09份、天冬门素0.14-0.26份、调理剂0.19-0.26份、助溶剂1.6-3.2份、分散剂1.4-2.5份、相容剂1.3-1.9份、稳定剂1-1.6份、抗菌剂1.4-2.7份、水2800-4000份。

进一步地，所述钾盐为硫酸钾；所述磷盐为磷酸钠；所述氮盐为碳酸铵；所述钙盐为氯化钙；所述镁盐为甘氨酸镁；所述碘盐为碘化钾；所述硼盐为硼酸钾；所述钼盐为钼酸钾；所述锌盐为氯化锌；所述锰盐为甘氨酸锰；所述铜盐为甘氨酸铜；所述铁盐为硫酸亚铁。

进一步地，所述维生素为维生素B；所述氨基酸为甘氨酸。

进一步地，所述调理剂为腐殖酸。

进一步地，所述助溶剂为聚乙烯吡咯烷酮。

进一步地，所述分散剂以重量份为单位，包括以下原料：羧甲基纤维素钠8-13份、琼脂5-7份、改性淀粉6-9份、聚丙烯酸钾5-7份、海藻酸钾3-5份。

进一步地，所述相容剂为美国杜邦EEA2112AC。

进一步地，所述稳定剂为卡拉胶。

进一步地，所述抗菌剂为富马酸糠醇甲酯。

本发明还提供一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1：将苹果用搅碎机将苹果搅碎，加800-1500份水，所得榨汁过3000-5000目筛，制得苹果汁；

S2：将步骤S1制得的苹果汁、柠檬酸、邻苯甲酰磺酰亚胺钠、茶多酚、钾盐、磷盐、氮盐、钙盐、镁盐、碘盐、硼盐、钼盐、锌盐、锰盐、铜盐、铁盐、维生素、氨基酸、吲哚丁酸、赤霉素、6-苄基腺膘呤、萘乙酸、激动素、天冬门素、助溶剂、分散剂、相容剂、2000-2500份水混合，在微波功率为132-175W，温度为55-60℃，转速为200-400r/min下搅拌25-53min，制得混合液A；

S3：向步骤S2制得的混合液A中加入调理剂、稳定剂、抗菌剂，在温度为42-52℃，转速为100-300r/min下搅拌13-21min，制得混合液B；

S4：将步骤S3制得的混合液B的pH值调节至5.3-5.8，接着在温度为134-136℃，压力为210-230KPa下，灭菌4-6min，制得提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基。

本发明培养基成分的作用如下：

苹果汁的添加有利于多糖含量的积累。

柠檬酸的存在有利于植物的吸收。

邻苯甲酰磺酰亚胺钠有利于多糖含量的积累。

茶多酚作为一种抗氧剂，既能使细胞生长缓慢，也可以促进黄酮类化合物等有效成分的积累。

钾元素的营养功效可以提高光合作用的强度，促进作物体内淀粉和糖的形成，增强作物的抗逆性和抗病能力，还能提高作物对氮的吸收利用。

磷是形成细胞核蛋白、卵磷脂等不可缺少的元素。磷元素能加速细胞分裂，促使根系和地上部加快生长，促进花芽分化，提早成熟，提高果实品质。

氮是蛋白质构成的主要元素，蛋白质是细胞原生质组成中的基本物质。氮元素能促进蛋白质和叶绿素的形成，使叶色深绿，叶面积增大，促进碳的同化，有利于产量增加，品质改善。

缺少钙植物分生组织的生长变慢，缺钙和症初在生长点和幼叶，严重时，叶子变形和失绿，在叶子的边缘出现坏死斑点。

镁是叶绿素的组成成分。如果缺少镁，叶片失去了绿色，不能制造营养物质。碘是植物生长不可缺少的元素，被誉为生命元素、智慧元素。

硼在植物体内比较集中于茎尖、根尖、叶片和花器官中，双子叶植物中的含量常常高于单子叶植物。硼可以提高豆科作物根瘤菌的固氮活性，增加固氮量，缺硼时，根留不发达，影响固氮量。硼还能增强作物抗逆性。

钼是固氮微生物，特别是与豆科作物共生的根瘤菌固定大气氮素时所必需的。同时又能增进叶片光合作用强度。缺钼时植株矮小，叶片脉间失绿，叶缘枯焦，向内卷曲，成萎蔫态。

锌能促进作物进行光合作用，它是多种酶的组成成分，缺锌时作物生长发育出现停滞。

植物叶绿体中含有锰，锰能促进种子发芽和幼苗时期生长，缺锰时影响作物的光合作用、呼吸作用、硝态氮在体内的积累。表现为叶片脉间失绿黄化，有褐色斑点。

铜参加植物的光合作用、呼吸作用、氮代谢、增强植物的抗性。缺铜时植株生长瘦弱，新叶发黄，凋萎干枯，叶尖卷曲发白，有坏死斑点。

铁是叶绿素形成不可缺少的，在植株体内很难转移，所以叶片“失绿症”是植物缺铁的表现，并且这种失绿首先表现在幼嫩叶片上。

维生素对植物的生根有效应，能够促进植物生根。

氨基酸是植物生长所必需的营养物质，由于氨基酸本身的特性，对植物生长特别是光合作用具有独特的促进作用，它可以增加植物叶绿素含量，提高酶的活性，促进二氧化碳的渗透，使光合作用更加旺盛，对提高作物品质，增加Vc和糖的含量都有着重要作用。

吲哚丁酸主要用于插条生根，可诱导根原体的形成，促进细胞分化和分裂，有利于新根生成和维管束系统的分化，促进插条不定根的形成。

赤霉素，是广泛存在的一类植物激素。其化学结构属于二萜类酸，由四环骨架衍生而得，可刺激叶和芽的生长。

6-苄基腺嘌呤，中文别名为2-苄氨基嘌呤，N-苄基腺苷，丙烯酸正丁酯，白色或类白色晶体，难溶于水，微溶于乙醇，在酸、碱中稳定，属广谱性植物生长调节剂，可促进植物细胞生长，抑制植物叶绿素的降解，提高氨基酸的含量，延缓叶片衰老等。

萘乙酸(1-Naphthaleneacetic acid)，简称NAA，是一种有机化合物，是一种易溶于有机溶剂的无色固体，它的结构为萘的1号位置以羧甲基取代，它是一种植物激素生长素，常用于商用的发根粉或发根剂中，在植物使用扦插法繁殖时使用。它也可用于植物组织培养。

激动素是一种非天然的细胞分裂素，化学名称为6-糖基氨基嘌呤(或N6-呋喃甲基腺嘌呤)。不溶于水，溶于强酸、碱及冰醋酸中；除具有促进细胞分裂的作用外，还具有延缓离体叶片和切花衰老，诱导芽分化和发育及增加气孔开度的作用。

天冬门素对植物生长特别是光合作用具有独特的促进作用，它可以提高酶的活性，促进二氧化碳的渗透，使光合作用更加旺盛，对提高作物品质，增加Vc、糖、生物碱、氨基酸的含量都有着重要作用。

调理剂可以促进根系的发育和有益微生物的活动。

助溶剂增加培养基在溶剂中的溶解度。

分散剂可防止絮凝，防止沉降。

相容剂是指借助于分子间的键合力，促使不相容的两种聚合物结合在一体，进而得到稳定的共混物的助剂。

稳定剂能增加溶液、胶体、固体、混合物的稳定性。

抗菌剂是能够在一定时间内，使某些微生物(细菌、真菌、酵母菌、藻类及病毒等)的生长或繁殖保持在必要水平以下的化学物质。

本发明具有以下有益效果：

(1)采用本发明的铁皮石斛组培苗培养基组培铁皮石斛所获得的种苗质量好，成活率高，能有效提高生物碱、多糖、氨基酸的含量；

(2)采用本发明的铁皮石斛组培苗培养基制备方法，能够缩短消毒时间，提高灭菌效果可靠性和产业化生产效率，降低生产成本；

(3)本发明的铁皮石斛组培苗培养基制备方法，操作简单，易于实现产业化、规范化和标准化生产。

【具体实施方式】

为便于更好地理解本发明，通过以下实施例加以说明，这些实施例属于本发明的保护范围，但不限制本发明的保护范围。

在实施例中，所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，以重量份为单位，包括以下原料：苹果汁162-395份、柠檬酸2.6-3.4份、邻苯甲酰磺酰亚胺钠0.02-0.05份、茶多酚1.5-2.8份、钾盐2.6-4.2份、磷盐1.5-3.8份、氮盐1.2-2.6份、钙盐0.8-1.3份、镁盐0.7-1.2份、碘盐0.4-0.6份、硼盐0.2-0.4份、钼盐0.2-0.3份、锌盐0.3-0.4份、锰盐0.1-0.3份、铜盐0.1-0.2份、铁盐0.1-0.2份、维生素0.12-0.28份、氨基酸0.1-0.22份、吲哚丁酸0.08-0.14份、赤霉素0.08-0.12份、6-苄基腺膘呤0.07-0.09份、萘乙酸0.08-0.14份、激动素0.05-0.09份、天冬门素0.14-0.26份、调理剂0.19-0.26份、助溶剂1.6-3.2份、分散剂1.4-2.5份、相容剂1.3-1.9份、稳定剂1-1.6份、抗菌剂1.4-2.7份、水2800-4000份。

所述钾盐为硫酸钾；所述磷盐为磷酸钠；所述氮盐为碳酸铵；所述钙盐为氯化钙；所述镁盐为甘氨酸镁；所述碘盐为碘化钾；所述硼盐为硼酸钾；所述钼盐为钼酸钾；所述锌盐为氯化锌；所述锰盐为甘氨酸锰；所述铜盐为甘氨酸铜；所述铁盐为硫酸亚铁。

所述维生素为维生素B；所述氨基酸为甘氨酸。

所述调理剂为腐殖酸。

所述助溶剂为聚乙烯吡咯烷酮。

所述分散剂以重量份为单位，包括以下原料：羧甲基纤维素钠8-13份、琼脂5-7份、改性淀粉6-9份、聚丙烯酸钾5-7份、海藻酸钾3-5份。

所述相容剂为美国杜邦EEA2112AC。

所述稳定剂为卡拉胶。

所述抗菌剂为富马酸糠醇甲酯。

所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1：将苹果用搅碎机将苹果搅碎，加800-1500份水，所得榨汁过3000-5000目筛，制得苹果汁；

S2：将步骤S1制得的苹果汁、柠檬酸、邻苯甲酰磺酰亚胺钠、茶多酚、钾盐、磷盐、氮盐、钙盐、镁盐、碘盐、硼盐、钼盐、锌盐、锰盐、铜盐、铁盐、维生素、氨基酸、吲哚丁酸、赤霉素、6-苄基腺膘呤、萘乙酸、激动素、天冬门素、助溶剂、分散剂、相容剂、2000-2500份水混合，在微波功率为132-175W，温度为55-60℃，转速为200-400r/min下搅拌25-53min，制得混合液A；

S3：向步骤S2制得的混合液A中加入调理剂、稳定剂、抗菌剂，在温度为42-52℃，转速为100-300r/min下搅拌13-21min，制得混合液B；

S4：将步骤S3制得的混合液B的pH值调节至5.3-5.8，接着在温度为134-136℃，压力为210-230KPa下，灭菌4-6min，制得提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基。

实施例1

一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，以重量份为单位，包括以下原料：苹果汁280份、柠檬酸3份、邻苯甲酰磺酰亚胺钠0.04份、茶多酚2.2份、钾盐3.5份、磷盐2.6份、氮盐2.2份、钙盐1份、镁盐1份、碘盐0.5份、硼盐0.3份、钼盐0.25份、锌盐0.35份、锰盐0.2份、铜盐0.15份、铁盐0.16份、维生素0.2份、氨基酸0.16份、吲哚丁酸0.1份、赤霉素0.1份、6-苄基腺膘呤0.08份、萘乙酸0.12份、激动素0.08份、天冬门素02份、调理剂0.22份、助溶剂2.5份、分散剂2份、相容剂1.6份、稳定剂1.3份、抗菌剂2份、水3500份。

所述钾盐为硫酸钾；所述磷盐为磷酸钠；所述氮盐为碳酸铵；所述钙盐为氯化钙；所述镁盐为甘氨酸镁；所述碘盐为碘化钾；所述硼盐为硼酸钾；所述钼盐为钼酸钾；所述锌盐为氯化锌；所述锰盐为甘氨酸锰；所述铜盐为甘氨酸铜；所述铁盐为硫酸亚铁。

所述维生素为维生素B；所述氨基酸为甘氨酸。

所述调理剂为腐殖酸。

所述助溶剂为聚乙烯吡咯烷酮。

所述分散剂以重量份为单位，包括以下原料：羧甲基纤维素钠10份、琼脂6份、改性淀粉8份、聚丙烯酸钾6份、海藻酸钾4份。

所述相容剂为美国杜邦EEA2112AC。

所述稳定剂为卡拉胶。

所述抗菌剂为富马酸糠醇甲酯。

所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1：将苹果用搅碎机将苹果搅碎，加1200份水，所得榨汁过4000目筛，制得苹果汁；

S2：将步骤S1制得的苹果汁、柠檬酸、邻苯甲酰磺酰亚胺钠、茶多酚、钾盐、磷盐、氮盐、钙盐、镁盐、碘盐、硼盐、钼盐、锌盐、锰盐、铜盐、铁盐、维生素、氨基酸、吲哚丁酸、赤霉素、6-苄基腺膘呤、萘乙酸、激动素、天冬门素、助溶剂、分散剂、相容剂、2300份水混合，在微波功率为150W，温度为58℃，转速为300r/min下搅拌40min，制得混合液A；

S3：向步骤S2制得的混合液A中加入调理剂、稳定剂、抗菌剂，在温度为48℃，转速为200r/min下搅拌18min，制得混合液B；

S4：将步骤S3制得的混合液B的pH值调节至5.6，接着在温度为135℃，压力为220KPa下，灭菌5min，制得提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基。

实施例2

一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，以重量份为单位，包括以下原料：苹果汁162份、柠檬酸2.6份、邻苯甲酰磺酰亚胺钠0.02份、茶多酚1.5份、钾盐2.6份、磷盐1.5份、氮盐1.2份、钙盐0.8份、镁盐0.7份、碘盐0.4份、硼盐0.2份、钼盐0.2份、锌盐0.3份、锰盐0.1份、铜盐0.1份、铁盐0.1份、维生素0.12份、氨基酸0.1份、吲哚丁酸0.08份、赤霉素0.08份、6-苄基腺膘呤0.07份、萘乙酸0.08份、激动素0.05份、天冬门素0.14份、调理剂0.19份、助溶剂1.6份、分散剂1.4份、相容剂1.3份、稳定剂1份、抗菌剂1.4份、水2800份。

所述钾盐为硫酸钾；所述磷盐为磷酸钠；所述氮盐为碳酸铵；所述钙盐为氯化钙；所述镁盐为甘氨酸镁；所述碘盐为碘化钾；所述硼盐为硼酸钾；所述钼盐为钼酸钾；所述锌盐为氯化锌；所述锰盐为甘氨酸锰；所述铜盐为甘氨酸铜；所述铁盐为硫酸亚铁。

所述维生素为维生素B；所述氨基酸为甘氨酸。

所述调理剂为腐殖酸。

所述助溶剂为聚乙烯吡咯烷酮。

所述分散剂以重量份为单位，包括以下原料：羧甲基纤维素钠8份、琼脂5份、改性淀粉6份、聚丙烯酸钾5份、海藻酸钾3份。

所述相容剂为美国杜邦EEA2112AC。

所述稳定剂为卡拉胶。

所述抗菌剂为富马酸糠醇甲酯。

所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1：将苹果用搅碎机将苹果搅碎，加800份水，所得榨汁过3000目筛，制得苹果汁；

S2：将步骤S1制得的苹果汁、柠檬酸、邻苯甲酰磺酰亚胺钠、茶多酚、钾盐、磷盐、氮盐、钙盐、镁盐、碘盐、硼盐、钼盐、锌盐、锰盐、铜盐、铁盐、维生素、氨基酸、吲哚丁酸、赤霉素、6-苄基腺膘呤、萘乙酸、激动素、天冬门素、助溶剂、分散剂、相容剂、2000份水混合，在微波功率为132W，温度为55℃，转速为200r/min下搅拌53min，制得混合液A；

S3：向步骤S2制得的混合液A中加入调理剂、稳定剂、抗菌剂，在温度为42℃，转速为100r/min下搅拌21min，制得混合液B；

S4：将步骤S3制得的混合液B的pH值调节至5.3，接着在温度为134℃，压力为210KPa下，灭菌6min，制得提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基。

实施例3

一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，以重量份为单位，包括以下原料：苹果汁395份、柠檬酸3.4份、邻苯甲酰磺酰亚胺钠0.05份、茶多酚2.8份、钾盐4.2份、磷盐3.8份、氮盐2.6份、钙盐1.3份、镁盐1.2份、碘盐0.6份、硼盐0.4份、钼盐0.3份、锌盐0.4份、锰盐0.3份、铜盐0.2份、铁盐0.2份、维生素0.28份、氨基酸0.22份、吲哚丁酸0.14份、赤霉素0.12份、6-苄基腺膘呤0.09份、萘乙酸0.14份、激动素0.09份、天冬门素0.26份、调理剂0.26份、助溶剂3.2份、分散剂2.5份、相容剂1.9份、稳定剂1.6份、抗菌剂2.7份、水4000份。

所述钾盐为硫酸钾；所述磷盐为磷酸钠；所述氮盐为碳酸铵；所述钙盐为氯化钙；所述镁盐为甘氨酸镁；所述碘盐为碘化钾；所述硼盐为硼酸钾；所述钼盐为钼酸钾；所述锌盐为氯化锌；所述锰盐为甘氨酸锰；所述铜盐为甘氨酸铜；所述铁盐为硫酸亚铁。

所述维生素为维生素B；所述氨基酸为甘氨酸。

所述调理剂为腐殖酸。

所述助溶剂为聚乙烯吡咯烷酮。

所述分散剂以重量份为单位，包括以下原料：羧甲基纤维素钠13份、琼脂7份、改性淀粉9份、聚丙烯酸钾7份、海藻酸钾5份。

所述相容剂为美国杜邦EEA2112AC。

所述稳定剂为卡拉胶。

所述抗菌剂为富马酸糠醇甲酯。

所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1：将苹果用搅碎机将苹果搅碎，加1500份水，所得榨汁过5000目筛，制得苹果汁；

S2：将步骤S1制得的苹果汁、柠檬酸、邻苯甲酰磺酰亚胺钠、茶多酚、钾盐、磷盐、氮盐、钙盐、镁盐、碘盐、硼盐、钼盐、锌盐、锰盐、铜盐、铁盐、维生素、氨基酸、吲哚丁酸、赤霉素、6-苄基腺膘呤、萘乙酸、激动素、天冬门素、助溶剂、分散剂、相容剂、2500份水混合，在微波功率为175W，温度为60℃，转速为400r/min下搅拌25min，制得混合液A；

S3：向步骤S2制得的混合液A中加入调理剂、稳定剂、抗菌剂，在温度为52℃，转速为300r/min下搅拌13min，制得混合液B；

S4：将步骤S3制得的混合液B的pH值调节至5.8，接着在温度为136℃，压力为230KPa下，灭菌4min，制得提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基。

分别采用本发明实施例1-3的铁皮石斛组培苗培养基与现有技术“一种铁皮石斛组培苗培养基(公开号：CN104509438B)”的培养基(对照组1，设生物碱、多糖、氨基酸提高率均为0，其他组与其对比)、“一种铁皮石斛组培苗培养基及其制备方法(公开号：CN104509440B)”的培养基(对照组2)组培铁皮石斛苗，培养基组分不同，量相同，其他组培条件基本一致，每个实施例或对照组组培100株，结果如下表所示。

由表可知，采用本发明的铁皮石斛组培苗培养基组培铁皮石斛所获得的种苗质量好，成活率高，能有效提高生物碱、多糖、氨基酸的含量。

以上内容不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明，对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明由所提交的权利要求书确定的专利保护范围。

Claims (10)

1.一种提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，以重量份为单位，包括以下原料：苹果汁162-395份、柠檬酸2.6-3.4份、邻苯甲酰磺酰亚胺钠0.02-0.05份、茶多酚1.5-2.8份、钾盐2.6-4.2份、磷盐1.5-3.8份、氮盐1.2-2.6份、钙盐0.8-1.3份、镁盐0.7-1.2份、碘盐0.4-0.6份、硼盐0.2-0.4份、钼盐0.2-0.3份、锌盐0.3-0.4份、锰盐0.1-0.3份、铜盐0.1-0.2份、铁盐0.1-0.2份、维生素0.12-0.28份、氨基酸0.1-0.22份、吲哚丁酸0.08-0.14份、赤霉素0.08-0.12份、6-苄基腺膘呤0.07-0.09份、萘乙酸0.08-0.14份、激动素0.05-0.09份、天冬门素0.14-0.26份、调理剂0.19-0.26份、助溶剂1.6-3.2份、分散剂1.4-2.5份、相容剂1.3-1.9份、稳定剂1-1.6份、抗菌剂1.4-2.7份、水2800-4000份。

2.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述钾盐为硫酸钾；所述磷盐为磷酸钠；所述氮盐为碳酸铵；所述钙盐为氯化钙；所述镁盐为甘氨酸镁；所述碘盐为碘化钾；所述硼盐为硼酸钾；所述钼盐为钼酸钾；所述锌盐为氯化锌；所述锰盐为甘氨酸锰；所述铜盐为甘氨酸铜；所述铁盐为硫酸亚铁。

3.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述维生素为维生素B；所述氨基酸为甘氨酸。

4.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述调理剂为腐殖酸。

5.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述助溶剂为聚乙烯吡咯烷酮。

6.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述分散剂以重量份为单位，包括以下原料：羧甲基纤维素钠8-13份、琼脂5-7份、改性淀粉6-9份、聚丙烯酸钾5-7份、海藻酸钾3-5份。

7.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述相容剂为美国杜邦EEA2112AC。

8.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述稳定剂为卡拉胶。

9.根据权利要求1所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基，其特征在于，所述抗菌剂为富马酸糠醇甲酯。

10.一种根据权利要求1-9任一项所述提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基的制备方法，包括以下步骤：

S1：将苹果用搅碎机将苹果搅碎，加800-1500份水，所得榨汁过3000-5000目筛，制得苹果汁；

S2：将步骤S1制得的苹果汁、柠檬酸、邻苯甲酰磺酰亚胺钠、茶多酚、钾盐、磷盐、氮盐、钙盐、镁盐、碘盐、硼盐、钼盐、锌盐、锰盐、铜盐、铁盐、维生素、氨基酸、吲哚丁酸、赤霉素、6-苄基腺膘呤、萘乙酸、激动素、天冬门素、助溶剂、分散剂、相容剂、2000-2500份水混合，在微波功率为132-175W，温度为55-60℃，转速为200-400r/min下搅拌25-53min，制得混合液A；

S3：向步骤S2制得的混合液A中加入调理剂、稳定剂、抗菌剂，在温度为42-52℃，转速为100-300r/min下搅拌13-21min，制得混合液B；

S4：将步骤S3制得的混合液B的pH值调节至5.3-5.8，接着在温度为134-136℃，压力为210-230KPa下，灭菌4-6min，制得提高生物碱的铁皮石斛组培苗培养基。