CN110927321A - 一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其中，检测过程包括如下步骤：(1)制备舒咽清喷雾剂供试品溶液和射干对照药材溶液；(2)吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液和射干对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的混合溶液或者乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视，根据检视结果判断舒咽清喷雾剂的质量是否合格。本发明的舒咽清喷雾剂的质量检测方法是一套专属于舒咽清产品，并对其中具体有效物质成分具有专属性的检测方法，其实现了对舒咽清喷雾剂质量的检测，保证了最终产品质量稳定，同时还提高了检测结果的准确性。
Description
技术领域
本发明属于中药制剂的质量检测领域，具体地说，涉及一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法。
背景技术
舒咽清喷雾剂成份为：西瓜霜、黄芩、射干、山豆根、金银花、防风、薄荷脑、冰片、硼砂、玄参、麦冬、甘草；性状为：棕色的液体；气香，味甘，微苦而辛凉。舒咽清喷雾剂性状为：棕色的液体；气香，味甘，微苦而辛凉；功能主治为：清热疏风，消肿利咽。用于急喉痹(急性咽炎或慢性咽炎急性发作)，症见：咽痛，咽干灼热，咽粘膜悬雍垂红肿，或吞咽不利等。舒咽清喷雾剂的生产过程中，需要对处方的有效物质进行严格的质量检测，以保证最终产品质量稳定及其显著的疗效，舒咽清处方中共有12味有效物质，现有的质量标准对其中用量较大的射干、防风以及山银花没有相关质量控制和检测要求，与现代的药品标准不相符。
药物的质量检测方法常采用薄层色谱法和高效液相色谱法，薄层色谱法(TLC)，系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。待点样、展开后，根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。高效液相色谱法，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。不同的质量控制方法在药品质量控制过程中起到的作用不同，并还需要根据具体药品有效物质成分进行调整，以提高该方法适用性和针对性，具体到舒咽清，若简单套用现有方法对舒咽清喷雾剂进行质量检测，会存在检测结果的准确性差的问题，因此，需要建立一套专属于舒咽清产品，并对其中具体有效物质成分具有专属性的检测方法，以提高检测结果的准确性。
有鉴于此特提出本发明。
发明内容
本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，以解决简单套用现有方法存在的检测结果的准确性差的技术问题。
为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：
本发明提供了一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，检测过程包括如下步骤：
(1)制备舒咽清喷雾剂供试品溶液和射干对照药材溶液；
(2)吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液和射干对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的混合溶液或者乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视，根据检视结果判断舒咽清喷雾剂的质量是否合格。
其中，舒咽清喷雾剂的原料药如下：
西瓜霜40g、黄芩150g、射干150g、山豆根100g、山银花160g、防风80g、薄荷脑3g、冰片2g、硼砂25g、玄参80g、麦冬80g、甘草80g
舒咽清喷雾剂的制备过程如下：
以上十二味，山银花、防风二味加水蒸馏，收集蒸馏液约200ml，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；药渣与黄芩、射干、山豆根、玄参、麦冬、甘草等六味，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.17(60℃)，加85％乙醇使含醇量达60％，充分搅拌，静置，取上清液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20～1.22(60℃)的清膏。薄荷脑、冰片加乙醇15ml溶解，再加30ml聚山梨酯80，搅匀，缓缓加入上述蒸馏液中，边加边搅拌，再加入上述清膏，搅匀。西瓜霜、硼砂加热水适量溶解，滤过；甜菊素3g加热水适量溶解，冷至室温，加入上述药液中，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得舒咽清喷雾剂。
具体地，判断舒咽清喷雾剂供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的主斑点，若是，则合格，否则不合格。
进一步的方案，步骤(2)中，乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的混合溶液中，乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的体积比为20:2:1；乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液中，乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为20:2:1。
进一步的方案，步骤(1)中，舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备过程为：向取得的舒咽清喷雾剂中加入乙酸乙酯，振摇提取，得到乙酸乙酯层和水层，弃去乙酸乙酯层；向水层中加入水饱和的正丁醇溶液，振摇提取，弃去水层；向正丁醇层中加入正丁醇的饱和水溶液，振摇提取，取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇溶解，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液；
优选地，步骤(1)中，射干对照药材溶液的制备过程为：向取得的0.5g射干对照药材中加入10ml甲醇，超声处理，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为射干对照药材溶液。
进一步的方案，步骤(2)中，晾干后喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下检视。其中，舒咽清喷雾剂采用水提工艺，提取出的有效成分中含有黄酮类化合物，黄酮类化合物分子中含有酚羟基，故可与三氯化铁水溶液发生显色反应。
进一步的方案，检测过程还包括如下步骤：
(1)制备舒咽清喷雾剂供试品溶液和防风对照药材溶液；
(2)吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液和防风对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视，根据检视结果判断舒咽清喷雾剂的质量是否合格。
具体地，判断舒咽清喷雾剂供试品色谱中，在与防风对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光主斑点，若是，则合格，否则不合格。
进一步的方案，步骤(2)中，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液中，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的体积比为10:3:1。
进一步的方案，步骤(1)中，舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备过程为：向取得的舒咽清喷雾剂中加入乙酸乙酯，振摇提取，得到乙酸乙酯层和水层，弃去乙酸乙酯层；向水层中加入水饱和的正丁醇溶液，振摇提取，弃去水层；向正丁醇层中加入氨试液，振摇提取，取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇溶解，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液；
优选地，防风对照药材溶液的制备过程为：向取得的0.5g防风对照药材中加入10ml甲醇，超声处理，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为防风对照药材溶液；
进一步的方案，步骤(2)中，晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹干，在紫外光灯下检视。其中，10％硫酸乙醇溶液为显色剂，有效成分在酸性条件下反应，生成物质具有紫外吸收。
进一步的方案，检测过程还包括如下步骤：
(1)制备舒咽清喷雾剂供试品溶液以及灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液；确定液相色谱条件；
(2)吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液以及灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算舒咽清喷雾剂中山银花以灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量计的浓度，根据计算结果判断舒咽清喷雾剂的质量是否合格。
进一步的方案，步骤(1)中，舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备过程为：精密量取舒咽清喷雾剂2ml置25ml量瓶中，加入50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液；
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液的制备过程为：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加入50％甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.3mg、川续断皂苷乙0.15mg的混合溶液，即得灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液；
优选地，步骤(2)中，液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.4％醋酸溶液为流动相B，流动相的梯度洗脱条件为：从0～10min，流动相A的体积百分含量由12％提高到15％，流动相B的体积百分含量由88％降低到85％；从10～12min，流动相A的体积百分含量由15％提高到29％，流动相B的体积百分含量由85％降低到71％；从12～30min，流动相A的体积百分含量由29％提高到33％，流动相B的体积百分含量由71％降低到67％；从30～35min，流动相A的体积百分含量由33％提高到70％，流动相B的体积百分含量由67％降低到30％；从35～38min，流动相A的体积百分含量由70％提高到12％，流动相B的体积百分含量由30％降低到88％；从38～40min，流动相A的体积百分含量为12％，流动相B的体积百分含量为88％；柱温为35℃；用蒸发光散射检测器检测，理论板数按灰毡毛忍冬皂苷乙计算大于或等于50000；
精密吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液10μl以及灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液5μl、10μl，注入液相色谱仪。
具体地，判断舒咽清喷雾剂每1ml含山银花以灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量计是否大于或等于3.0mg，若是，则合格，否则不合格。
采用上述技术方案后，本发明与现有技术相比具有以下有益效果：
本发明的舒咽清喷雾剂的质量检测方法是一套专属于舒咽清产品，并对其中具体有效物质成分具有专属性的检测方法，其实现了对舒咽清喷雾剂质量的检测，保证了最终产品质量稳定，同时还提高了检测结果的准确性。
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的描述。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例一舒咽清喷雾剂的制备
原料药如下：
西瓜霜40g、黄芩150g、射干150g、山豆根100g、山银花160g、防风80g、薄荷脑3g、冰片2g、硼砂25g、玄参80g、麦冬80g、甘草80g
制备方法如下：
以上十二味，山银花、防风二味加水蒸馏，收集蒸馏液约200ml，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；药渣与黄芩、射干、山豆根、玄参、麦冬、甘草等六味，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.17(60℃)，加85％乙醇使含醇量达60％，充分搅拌，静置，取上清液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20～1.22(60℃)的清膏。薄荷脑、冰片加乙醇15ml溶解，再加30ml聚山梨酯80，搅匀，缓缓加入上述蒸馏液中，边加边搅拌，再加入上述清膏，搅匀。西瓜霜、硼砂加热水适量溶解，滤过；甜菊素3g加热水适量溶解，冷至室温，加入上述药液中，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得。
实施例二舒咽清喷雾剂的质量检测
(1)取舒咽清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯20ml，其中，振摇提取时弃去乙酸乙酯层，保留水层；水层用水饱和的正丁醇溶液振摇提取2次，每次水饱和的正丁醇溶液20ml，其中，振摇提取时弃去水层，保留正丁醇层，并合并的正丁醇层；正丁醇层用正丁醇的饱和水溶液振摇提取2次，每次正丁醇的饱和水溶液20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇5ml溶解，作为舒咽清喷雾剂供试品溶液。
取射干对照药材0.5g，向射干对照药材中加入甲醇10ml，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为射干对照药材溶液。
(2)分别吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液1～3μl、射干对照药材溶液2μl并分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的混合溶液(乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的体积比为20:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下检视，判断舒咽清喷雾剂供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的主斑点，若是，则合格，否则不合格。
实施例三舒咽清喷雾剂的质量检测
(1)取舒咽清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯20ml，其中，振摇提取时弃去乙酸乙酯层，保留水层；水层用水饱和的正丁醇溶液振摇提取2次，每次水饱和的正丁醇溶液20ml，其中，振摇提取时弃去水层，保留正丁醇层，并合并的正丁醇层；正丁醇层用正丁醇的饱和水溶液振摇提取2次，每次正丁醇的饱和水溶液20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇5ml溶解，作为舒咽清喷雾剂供试品溶液。
取射干对照药材0.5g，向射干对照药材中加入甲醇10ml，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为射干对照药材溶液。
(2)分别吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液1～3μl、射干对照药材溶液2μl并分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液(乙酸乙酯、甲醇、水的体积比为20:2:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下检视，判断舒咽清喷雾剂供试品色谱中，在与射干对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的主斑点，若是，则合格，否则不合格。
实施例四舒咽清喷雾剂的质量检测
(1)取舒咽清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯20ml，其中，振摇提取时弃去乙酸乙酯层，保留水层；水层用水饱和的正丁醇溶液振摇提取2次，每次水饱和的正丁醇溶液20ml，其中，振摇提取时弃去水层，保留正丁醇层，并合并的正丁醇层；正丁醇层用氨试液振摇提取2次，每次氨试液20ml，分取氨试液，蒸干，残渣加入甲醇5ml溶解，作为舒咽清喷雾剂供试品溶液。
取防风对照药材0.5g，向防风对照药材中加入甲醇10ml，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为防风对照药材溶液。
(2)分别吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液1～3μl、防风对照药材溶液1μl并分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的体积比为10:3:1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹干，在紫外光灯(365nm)下检视，判断舒咽清喷雾剂供试品色谱中，在与防风对照药材色谱相应的位置上，是否显相同颜色的荧光主斑点，若是，则合格，否则不合格。
实施例五舒咽清喷雾剂的质量检测
(1)精密量取舒咽清喷雾剂2ml置25ml量瓶中，加入50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液。
取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加入50％甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.3mg、川续断皂苷乙0.15mg的混合溶液，即得灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液。
(2)以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以0.4％醋酸溶液为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；柱温为35℃；用蒸发光散射检测器检测；理论板数按灰毡毛忍冬皂苷乙计算大于或等于50000；
分别精密吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液10μl以及灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液5μl、10μl，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算舒咽清喷雾剂中山银花以灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量计的浓度，判断舒咽清喷雾剂每1ml含山银花以灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量计是否大于或等于3.0mg，若是，则合格，否则不合格。
本发明的技术方案具体描述如下：
试验例1
舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备：取舒咽清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯20ml，其中，振摇提取时弃去乙酸乙酯层，保留水层；水层用水饱和的正丁醇溶液振摇提取2次，每次水饱和的正丁醇溶液20ml，其中，振摇提取时弃去水层，保留正丁醇层，并合并的正丁醇层；正丁醇层用正丁醇的饱和水溶液振摇提取2次，每次正丁醇的饱和水溶液20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇5ml溶解，作为舒咽清喷雾剂供试品溶液。
射干对照药材溶液的制备：取射干对照药材0.5g，向射干对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120994-200504)中加入甲醇10ml，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为射干对照药材溶液。
缺射干阴性对照样品的制备：原料药如下：
西瓜霜40g、黄芩150g、山豆根100g、山银花160g、防风80g、薄荷脑3g、冰片2g、硼砂25g、玄参80g、麦冬80g、甘草80g
制备方法如下：
以上十一味，山银花、防风二味加水蒸馏，收集蒸馏液约200ml，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；药渣与黄芩、山豆根、玄参、麦冬、甘草等五味，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.17(60℃)，加85％乙醇使含醇量达60％，充分搅拌，静置，取上清液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20～1.22(60℃)的清膏。薄荷脑、冰片加乙醇15ml溶解，再加30ml聚山梨酯80，搅匀，缓缓加入上述蒸馏液中，边加边搅拌，再加入上述清膏，搅匀。西瓜霜、硼砂加热水适量溶解，滤过；甜菊素3g加热水适量溶解，冷至室温，加入上述药液中，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得。
缺射干阴性对照样品溶液的制备：与舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备的区别在于，将舒咽清喷雾剂替换为缺射干阴性对照样品，即得缺射干阴性对照样品溶液。
1.1考察展开剂的影响
色谱条件：温度：20℃ 相对湿度：70％ 展距：8.0cm
对照药材点样量：2μl 供试品点样量：2μl
薄层板：青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
显色与检视：喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下检视
在上述条件下考察展开剂的影响：
展开剂：图1a、三氯甲烷、丁酮、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、丁酮、甲醇的体积比为3:1:1)
图1b、乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的混合溶液(乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的体积比为20:2:1)
图1c、乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液(乙酸乙酯、甲醇、水的体积比为20:2:1)
每个图中，第一个为射干对照药材溶液，第二个为缺射干阴性对照样品溶液，第三个到第五个为三批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140501、130602、151001)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
1.2考察薄层板的影响
色谱条件：温度：20℃ 相对湿度：70％ 展距：8.0cm
对照药材点样量：2μl 供试品点样量：2μl
显色与检视：喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下检视
展开剂：乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液(乙酸乙酯、甲醇、水的体积比为20:2:1)
在上述条件下考察薄层板的影响：
薄层板:图2a、国药集团化学试剂有限公司硅胶预制G板(批号：20161027)
图2b、青岛海洋化工厂分厂硅胶预制G板(批号：20150318)
图2c、青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
其中，每个图中，第一个为射干对照药材溶液，第二个为缺射干阴性对照样品溶液，第三个到第五个为三批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140501、130602、151001)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
结果显示各斑点均明显，分离度均良好，说明本发明的检测方法耐用性良好。
1.3考察温度、湿度的影响
色谱条件：展距：8.0cm 对照药材点样量：2μl 供试品点样量：2μl
显色与检视：喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下检视
展开剂：乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液(乙酸乙酯、甲醇、水的体积比为20:2:1)
薄层板:青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
在上述条件下考察温度、湿度的影响：
图3a、温度：10℃、相对湿度：70％ 图3b、温度：20℃、相对湿度：70％
图3c、温度：35℃、相对湿度：70％ 图3d、温度：20℃、相对湿度：30％
图3e、温度：20℃、相对湿度：70％ 图3f、温度：20℃、相对湿度：90％
其中，每个图中，第一个为射干对照药材溶液，第二个为缺射干阴性对照样品溶液，第三个到第五个为三批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140501、130602、151001)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
结果显示各斑点均明显，分离度均良好，说明本发明的检测方法耐用性良好。
1.4
色谱条件：温度：20℃ 相对湿度：70％ 展距：8.0cm
对照药材点样量：2μl 供试品点样量：2μl
薄层板：青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
显色与检视：喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下检视
展开剂：乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液(乙酸乙酯、甲醇、水的体积比为20:2:1)
图4中，第一个到第五个为五批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140701、140702、140703、140901、140902)，第六个为射干对照药材溶液，第七个为缺射干阴性对照样品溶液，第八个到第十三个为五批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：141201、141202、151001、161201、170101、70102)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
结果显示薄层色谱分离效果好，斑点圆整清晰，比移值适中，重现性好。
经以上方法验证，结果显示射干薄层色谱分离效果好，斑点清晰明显，成型好，重现性、专属性好，阴性对照无干扰。
试验例2
舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备：取舒咽清喷雾剂20ml，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯20ml，其中，振摇提取时弃去乙酸乙酯层，保留水层；水层用水饱和的正丁醇溶液振摇提取2次，每次水饱和的正丁醇溶液20ml，其中，振摇提取时弃去水层，保留正丁醇层，并合并的正丁醇层；正丁醇层用氨试液振摇提取2次，每次氨试液20ml，分取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇5ml溶解，作为舒咽清喷雾剂供试品溶液；
防风对照药材溶液的制备：取防风对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：120947-201108)0.5g，向防风对照药材中加入甲醇10ml，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为防风对照药材溶液；
缺防风阴性对照样品的制备：原料药如下：
西瓜霜40g、黄芩150g、射干150g、山豆根100g、山银花160g、薄荷脑3g、冰片2g、硼砂25g、玄参80g、麦冬80g、甘草80g
制备方法如下：
以上十一味，山银花一味加水蒸馏，收集蒸馏液约200ml，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；药渣与黄芩、射干、山豆根、玄参、麦冬、甘草等六味，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.17(60℃)，加85％乙醇使含醇量达60％，充分搅拌，静置，取上清液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20～1.22(60℃)的清膏。薄荷脑、冰片加乙醇15ml溶解，再加30ml聚山梨酯80，搅匀，缓缓加入上述蒸馏液中，边加边搅拌，再加入上述清膏，搅匀。西瓜霜、硼砂加热水适量溶解，滤过；甜菊素3g加热水适量溶解，冷至室温，加入上述药液中，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得。
缺防风的阴性对照溶液的制备：与舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备的区别在于，将舒咽清喷雾剂替换为缺防风阴性对照样品，即得缺防风阴性对照样品溶液。
2.1考察展开剂的影响
色谱条件：温度：20℃ 相对湿度：70％ 展距：8.0cm
对照药材点样量：1μl 供试品点样量：2μl
薄层板：青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
显色与检视：喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹干，紫外光灯(365nm)下检视
在上述条件下考察展开剂的影响：
展开剂：图5a、三氯甲烷、冰醋酸、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、冰醋酸、甲醇的体积比为10:3:1)
图5b、三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的体积比为10:3:1)
图5c、乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸、水的混合溶液(乙酸乙酯、甲酸、冰醋酸、水的体积比为15:1:1:1.5)
图5d、三氯甲烷、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、甲醇的体积比为4:1)
其中，每个图中，第一个为防风对照药材溶液，第二个为缺防风阴性对照样品溶液，第三个到第六个为四批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140501、130602、141202、151001)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
相比于三氯甲烷、甲醇的混合溶液，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液阴性无干扰，斑点清晰，分离度适宜(0.2-0.8)。
2.2考察薄层板的影响
色谱条件：温度：20℃ 相对湿度：70％ 展距：8.0cm
对照药材点样量：1μl 供试品点样量：2μl
显色与检视：喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹干，紫外光灯(365nm)下检视
展开剂：三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的体积比为10:3:1)
在上述条件下考察薄层板的影响：
薄层板:图6a、国药集团化学试剂有限公司硅胶预制G板(批号：20161027)
图6b、青岛海洋化工厂分厂硅胶预制G板(批号：20150318)
图6c、青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
其中，每个图中，第一个为防风对照药材溶液，第二个为缺防风阴性对照样品溶液，第三个到第五个为三批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140501、130602、141202)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
结果显示各斑点均明显，分离度均良好，说明本发明的检测方法耐用性良好。
2.3考察温度、湿度的影响
色谱条件：展距：8.0cm对照药材点样量：1μl供试品点样量：2μl
显色与检视：喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹干，紫外光灯(365nm)下检视
展开剂：三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的体积比为10:3:1)
薄层板:青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
在上述条件下考察展开剂的影响：
图7a、温度：10℃、相对湿度：70 ％图7b、温度：35℃、相对湿度：70％
图7c、温度：20℃、相对湿度：70 ％图7d、温度：20℃、相对湿度：30％
图7e、温度：20℃、相对湿度：90％
其中，每个图中，第一个为防风对照药材溶液，第二个为缺防风阴性对照样品溶液，第三个到第五个为三批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140501、130602、141202)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
结果显示各斑点均明显，分离度均良好，说明本发明的检测方法耐用性良好。
2.4
色谱条件：温度：20℃ 相对湿度：70％ 展距：8.0cm
对照药材点样量：1μl 供试品点样量：2μl
薄层板：青岛裕民源硅胶试剂厂硅胶预制G板(批号：150401)
显色与检视：喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹干，紫外光灯(365nm)下检视
展开剂：三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液(三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的体积比为10:3:1)
图8中，第一个到第五个为五批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：130602、140501、140701、140702、140703)，第六个为防风对照药材溶液，第七个为缺防风阴性对照样品溶液，第八个到第十二个为五批舒咽清喷雾剂供试品溶液(批号：140901、140902、141201、141202、151001)，上横线为展开前沿，下横线为原点。
结果显示薄层色谱分离效果好，斑点圆整清晰，比移值适中，重现性好。
经以上方法验证，结果显示防风薄层色谱分离效果好，斑点清晰明显，重现性、专属性好，阴性对照无干扰。
试验例3
山银花是舒咽清喷雾剂中的主要药味，主要含有有机酸类、皂苷类、黄酮类等化学成分，其中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙是皂苷类中的主要成分，故选择二者作为控制舒咽清喷雾剂质量的指标成分。参照文献“国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部(2015年版).北京:中国医药科技出版社,2015,30～31”，建立高效液相色谱法测定舒咽清喷雾剂灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量的方法，具有分离效果好、灵敏、准确等优点。
一、仪器与试药
WATERS 2695高效液相色谱仪；ELSD 6000蒸发光散射检测器检测。
乙腈为色谱纯，水为超纯化水，其它试剂均为分析纯。
灰毡毛忍冬皂苷乙对照药材(批号：111814-201604，含量94.4％)，中国食品药品检定研究院提供，含量测定用。
川续断皂苷乙对照药材(批号：111813-201403，含量92.2％)，中国食品药品检定研究院提供，含量测定用。
二、方法学考察与结果
舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备：精密量取舒咽清喷雾剂2ml置25ml量瓶中，加入50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液。
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液的制备：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加入50％甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.3mg、川续断皂苷乙0.15mg的混合溶液，即得灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液。
缺山银花阴性对照样品的制备：
原料药如下：
西瓜霜40g、黄芩150g、射干150g、山豆根100g、防风80g、薄荷脑3g、冰片2g、硼砂25g、玄参80g、麦冬80g、甘草80g
制备方法如下：
以上十二味，防风一味加水蒸馏，收集蒸馏液约200ml，蒸馏后的水溶液滤过，另器收集；药渣与黄芩、射干、山豆根、玄参、麦冬、甘草等六味，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述蒸馏后的水溶液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.17(60℃)，加85％乙醇使含醇量达60％，充分搅拌，静置，取上清液，滤过，滤液回收乙醇，浓缩至相对密度为1.20～1.22(60℃)的清膏。薄荷脑、冰片加乙醇15ml溶解，再加30ml聚山梨酯80，搅匀，缓缓加入上述蒸馏液中，边加边搅拌，再加入上述清膏，搅匀。西瓜霜、硼砂加热水适量溶解，滤过；甜菊素3g加热水适量溶解，冷至室温，加入上述药液中，加水至1000ml，搅匀，滤过，灌装，即得。
缺山银花阴性对照样品溶液的制备：与舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备的区别在于，将舒咽清喷雾剂替换为缺山银花阴性对照样品，即得缺山银花阴性对照样品溶液。
1、色谱条件
1.1色谱柱：参照文献“国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部(2015年版).北京:中国医药科技出版社,2015,30～31”，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
1.2流动相的选择
1.2.1以乙腈为流动相A，以0.4％醋酸溶液为流动相B，参照文献“国家药典委员会编.中华人民共和国药典一部(2015年版).北京:中国医药科技出版社,2015,30～31”，对流动相的梯度洗脱条件进行了适度调整，具体见下表1：
表1流动相梯度洗脱条件表
色谱柱：YMC-Triart C18 5μm(150×4.6mm)
漂移管温度：110℃流动相流速：1.0ml/min柱温：35℃
将舒咽清喷雾剂供试品溶液、灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液以及缺山银花对照样品溶液注入液相色谱仪，测定，结果为：缺山银花阴性对照样品在灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品峰相应的位置上无吸收峰，表明阴性没有干扰，供试品色谱峰分离效果好。
流动相、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品、缺山银花阴性对照样品、供试品的高效液相色谱图分别见图9～12。图9中为乙腈-0.4％醋酸溶液高效液相色谱图，图10对照品混合溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.629T＝1.049n＝8.793×104；川续断皂苷乙tR＝22.762R＝11.097T＝1.059n＝9.100×104)，图11为山银花阴性对照样品溶液高效液相色谱图，图12为供试品161201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.527R＝2.645T＝1.093n＝8.476×104；川续断皂苷乙tR＝22.642R＝2.987T＝1.076n＝8.103×104)。
相比于文献中的流动相梯度洗脱条件(图28a)，本发明的流动相梯度洗脱条件(图28b)，使灰毡毛忍冬皂苷乙的色谱峰分离度符合要求(≥1.5)。
1.2.2以乙腈为流动相A，以水为流动相B，流动相采用1.2.1的梯度洗脱条件，山银花对照药材溶液、缺山银花阴性对照样品溶液、舒咽清喷雾剂供试品溶液注入液相色谱仪，测定，结果为：缺山银花阴性对照样品在灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品峰相应的位置上无吸收峰，表明阴性没有干扰，但是供试品中灰毡毛忍冬皂苷乙峰面积明显增大，色谱峰可能有杂质峰重叠。
灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品、缺山银花阴性对照样品、供试品的高效液相色谱图分别见图13～15。图13为对照品混合溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.650T＝1.065n＝8.741×104；川续断皂苷乙tR＝22.797R＝11.096T＝1.067n＝8.797×104)，图14为山银花阴性对照样品溶液高效液相色谱图，图15为供试品161201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.603R＝2.235T＝1.067n＝8.454×104；川续断皂苷乙tR＝22.728R＝2.967T＝1.046n＝8.589×104)。
1.2.3以乙腈为流动相A，以0.1％甲酸溶液为流动相B，流动相采用1.2.1的梯度洗脱条件，山银花对照药材溶液、缺山银花阴性对照样品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，测定，结果为：缺山银花阴性对照样品在灰毡毛忍冬皂苷乙对照品峰相应的位置上有吸收峰干扰，在川续断皂苷乙对照药材峰相应的位置上无吸收峰干扰。灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品、缺山银花阴性对照样品、供试品的高效液相色谱图分别见图16～18，图16为对照品混合溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.722T＝1.060n＝8.634×104；川续断皂苷乙tR＝22.891R＝10.640T＝1.053n＝7.938×104)，图17为山银花阴性对照样品溶液高效液相色谱图，图18为供试品161201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.675R＝3.970T＝0.884n＝4.806×104；川续断皂苷乙tR＝22.833R＝2.822T＝1.047n＝7.620×104)。
综上，将流动相确定为以乙腈为流动相A，以0.4％醋酸溶液为流动相B，按上述拟定的梯度洗脱条件和色谱条件开展方法学研究。
1.3理论板数的确定
分别采用柱1：YMC-Triart C18 5μm 150×4.6mm、柱2：Agilent ZORBAX SB-C18 5μm 4.6×150mm、柱3：SunFireTM C18 5μm 4.60×150mm等3个品牌色谱柱进行试验，其分离结果均较好，分别以被测组分灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙峰计算理论塔板数，其结果见表2，色谱图分别见图19、20、21。YMC-Triart C18图19为供试品141201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.896R＝1.677T＝1.060n＝8.236×104；川续断皂苷乙tR＝23.113R＝2.086T＝1.087n＝5.418×104)，Agilent ZORBAX SB-C18图20为供试品141201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝17.782R＝2.027T＝1.046n＝8.758×104；川续断皂苷乙tR＝20.342R＝9.216T＝1.108n＝6.130×104)，SunFireTM C18图21为供试品141201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.645R＝3.851T＝1.010n＝9.302×104；川续断皂苷乙tR＝22.813R＝3.331T＝1.019n＝8.022×104)
表2理论塔板数的确定
根据试验结果，当理论板数N低于50000时，灰毡毛忍冬皂苷乙峰与其相邻色谱峰的分离度＜1.5，达不到分析要求，故规定理论板数按灰毡毛忍冬皂苷乙峰计大于或等于50000。
2、专属性试验
阴性干扰试验：以乙腈为流动相A，以0.4％醋酸溶液为流动相B，流动相采用1.2.1的梯度洗脱条件，山银花对照药材溶液、缺山银花阴性对照样品溶液、供试品溶液注入液相色谱仪，测定，结果为：缺山银花阴性对照样品在灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品峰相应的位置上无吸收峰，表明阴性没有干扰，色谱图分别见图10～12。
3、线性范围的考察
3.1对照品混合溶液的制备：精密称取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品20mg(实际取样21.64mg)、川续断皂苷乙对照品10mg(实际取样10.94mg)，置同一25ml量瓶中，加50％甲醇适量使溶解，并用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3.2标准曲线的测定：精密吸取灰毡毛忍冬皂苷乙(0.8171mg/ml)、川续断皂苷乙(0.4035mg/ml)对照品混合溶液0.5、1、2、3、5ml，分别置10ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密吸取上述溶液及母液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录各份样品的峰面积，以平均峰面积的对数为横坐标，以进样量的对数为纵坐标，进行回归处理，得一直线，结果见表3、表4。
表3灰毡毛忍冬皂苷乙标准曲线测定结果
图19标准曲线回归方程为Y＝0.6266X－7.8759r＝0.9995
结果表明，灰毡毛忍冬皂苷乙在进样量0.4086～8.1710μg范围内，灰毡毛忍冬皂苷乙峰面积值对数与进样量对数有良好的线性关系。
表4川续断皂苷乙标准曲线测定结果
图20标准曲线回归方程为Y＝0.6192X－7.7789r＝0.9997
结果表明，川续断皂苷乙在进样量0.2018～4.0350μg范围内，川续断皂苷乙峰面积值对数与进样量对数有良好的线性关系。
4、精密度试验
取舒咽清喷雾剂(批号：161201)，制成供试品溶液，进样量10μl，连续进样6次，分别计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，结果见表5。从表中看出，供试品溶液在同一仪器上测定，RSD＜3％，说明所使用的高效液相色谱仪，精密度可以满足试验检测要求。
表5精密度试验结果
5、重复性试验
取同一批号舒咽清喷雾剂(批号：161201)混合均匀，精密量取6份，制成供试品溶液，进样量10μl，分别测定灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，测定结果见表6。试验结果表明，方法重现性较好。
表6重复性试验结果
6、加样回收试验
取与重复性试验同一批号舒咽清喷雾剂(批号：161201，灰毡毛忍冬皂苷乙含量为：3.099mg/ml，川续断皂苷乙含量为：1.656mg/ml)，精密量取1ml，平行取6份，分别精密加入灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙对照品混合溶液(灰毡毛忍冬皂苷乙浓度为3.3871mg/ml、川续断皂苷乙浓度为1.7914mg/ml)1ml，制成加样回收供试品溶液，并注入液相色谱仪，以下列公式计算回收率，结果灰毡毛忍冬皂苷乙平均回收率为103.87％，RSD＝1.85％，川续断皂苷乙平均回收率为103.64％，RSD＝2.23％，测定结果见表7、表8。试验结果表明：回收率在90％～108％之间，加样回收良好。上述拟定的含量测定方法可行。
表7灰毡毛忍冬皂苷乙加样回收试验结果
表8川续断皂苷乙加样回收试验结果
7、范围
取同一批号舒咽清喷雾剂(批号：161201)，取样量为2ml，再取上述0.2倍量的舒咽清喷雾剂作为低限样品的含量考察范围，取上述2.5倍量的舒咽清喷雾剂作为高限样品的含量考察范围，每个浓度3份共9份样品，制成供试品溶液，分别注入液相色谱仪。分别计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的进样含量和样品含量，测定结果见表9、表10。试验结果表明，供试品中灰毡毛忍冬皂苷乙进样含量在在0.4812～5.9081μg的低限与高限范围内，川续断皂苷乙进样含量在0.2511～3.4412μg的低限与高限范围内，同时满足线性范围的要求，测定结果均能达到分析要求，且无显著性差异。
表9灰毡毛忍冬皂苷乙范围测定结果
表10川续断皂苷乙范围测定结果
8、耐用性试验
8.1稳定性试验：
取供试品溶液(批号：161201)，分别于0、2、4、6、8、12、24小时的时间间隔，分别进样10μl，分别计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，结果见表11。从表中看出，供试品溶液在24小时内测定，灰毡毛忍冬皂苷乙RSD为1.59％，川续断皂苷乙RSD为1.20％，试验结果表明，供试品溶液在24小时内测定，结果较稳定。
表11稳定性试验结果
8.2不同色谱柱的考察：
取舒咽清喷雾剂3批(批号：141201、151001、161201)，制成供试品溶液，分别采用柱1：YMC-Triart C18 5μm 150×4.6mm、柱2：Agilent ZORBAX SB-C18 5μm 4.6×150mm、柱3：SunFireTM C18 5μm 4.60×150mm等3个品牌色谱柱进行试验，分别计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，测定结果见表12。结果表明，上述所选用的三种色谱柱均达到方法系统适用性的要求。
表12不同厂家/品牌的色谱柱的考察结果
8.3流动相pH值的考察：
取同一批号舒咽清喷雾剂(批号：161201)，制成供试品溶液，分别以乙腈-0.2％醋酸溶液(测定pH值为3.10)、乙腈-0.4％醋酸溶液(测定pH值为2.97)和乙腈-0.6％醋酸溶液(测定pH值为2.87)为流动相，分别注入液相色谱仪。分别计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，测定结果见表13。试验结果表明，流动相pH值在2.87～3.10范围内波动，测定结果均能达到分析要求，且无显著性差异。
表13流动相不同pH值比较试验结果
8.4不同柱温的考察：
取同一批号舒咽清喷雾剂(批号：161201)，制成供试品溶液，分别设定柱温为33℃、35℃、37℃，分别注入液相色谱仪，分别计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，测定结果见表14。试验结果表明，柱温在33～37℃的微小范围内波动，测定结果均能达到分析要求，且无显著性差异。通过试验比较，柱温超出此波动范围，对色谱峰的分离效果有一定影响，色谱图详见图22～27。考虑到柱温对舒咽清喷雾剂分离效果的影响，故在上述规定柱温为35℃。乙腈-0.4％醋酸(33℃)：图22为对照品混合溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.887T＝1.064n＝8.333×104；川续断皂苷乙tR＝23.084R＝10.980T＝1.061n＝9.053×104)，图23为供试品161201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.874R＝2.938T＝1.059n＝8.010×104；川续断皂苷乙tR＝23.063R＝2.908T＝1.045n＝7.810×104)；乙腈-0.4％醋酸(35℃)：图24为对照品混合溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.908T＝1.060n＝8.337×104；川续断皂苷乙tR＝23.135R＝11.000T＝1.060n＝8.728×104)，图25为供试品161201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝19.902R＝3.596T＝1.085n＝8.158×104；川续断皂苷乙tR＝23.121R＝2.950T＝1.080n＝8.276×104)；乙腈-0.4％醋酸(37℃)：图26为对照品混合溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝21.222T＝1.085n＝9.748×104；川续断皂苷乙tR＝24.807R＝13.195T＝1.088n＝9.079×104)，图27为供试品161201批溶液高效液相色谱图(灰毡毛忍冬皂苷乙tR＝21.264R＝4.310T＝1.097n＝9.742×104；川续断皂苷乙tR＝24.859R＝3.256T＝1.124n＝9.956×104)
表14不同柱温比较试验结果
8.5不同流速的考察：
取同一批号舒咽清喷雾剂(批号：161201)，制成供试品溶液，分别设定流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min，分别注入液相色谱仪，分别计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，测定结果见表15，流速对分离度和保留时间有影响。结果表明流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.1ml/min均有较好的分离能力，测定结果均能达到分析要求，且无显著性差异，说明流速微小变化不会影响方法的有效性。
表15不同流速比较试验结果
9、样品测定
测定15批舒咽清喷雾剂中灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，并计算灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的总量，测定结果见表16。
表1615批舒咽清喷雾剂测定结果
10、转移率
测定药材制成成品灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的含量，并计算以灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙总量计的转移率，测定结果见表17。
表17山银花药材转移率考察
11、含量限度的制订
上述测定三批舒咽清喷雾剂的平均转移率为47.64％，2015年版药典一部规定，山银花药材中灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙总量不得少于5.0％，将平均转移率和山银花药材的最低含量进行折算，舒咽清喷雾剂每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙总量的理论含量不得少于3.81mg，再综合考虑大生产15批样品的测定结果，以及生产工艺、转移率等因素的波动，以最低理论含量(3.81mg)下浮20％，将舒咽清喷雾剂的含量限度定为3.0mg/ml。
因此，上述规定“舒咽清喷雾剂每1ml含山银花以灰毡毛忍冬皂苷乙(C65H106O32)和川续断皂苷乙(C53H86O22)的总量计，不得少于3.0mg”。
以上所述仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，然而并非用以限定本发明，任何熟悉本专利的技术人员在不脱离本发明技术方案范围内，当可利用上述提示的技术内容作出些许更动或修饰为等同变化的等效实施例，但凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明方案的范围内。
Claims (10)
1.一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于，检测过程包括如下步骤：
(1)制备舒咽清喷雾剂供试品溶液和射干对照药材溶液；
(2)吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液和射干对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的混合溶液或者乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视，根据检视结果判断舒咽清喷雾剂的质量是否合格。
2.根据权利要求1所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：步骤(2)中，乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的混合溶液中，乙酸乙酯、甲醇、冰醋酸的体积比为20:2:1；乙酸乙酯、甲醇、水的混合溶液中，乙酸乙酯-甲醇-水的体积比为20:2:1。
3.根据权利要求1所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：步骤(1)中，舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备过程为：向取得的舒咽清喷雾剂中加入乙酸乙酯，振摇提取，得到乙酸乙酯层和水层，弃去乙酸乙酯层；向水层中加入水饱和的正丁醇溶液，振摇提取，弃去水层；向正丁醇层中加入正丁醇的饱和水溶液，振摇提取，取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇溶解，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液；
优选地，步骤(1)中，射干对照药材溶液的制备过程为：向取得的0.5g射干对照药材中加入10ml甲醇，超声处理，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为射干对照药材溶液。
4.根据权利要求1所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：步骤(2)中，晾干后喷以5％三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，在日光下检视。
5.根据权利要求1-4任一所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：检测过程还包括如下步骤：
(1)制备舒咽清喷雾剂供试品溶液和防风对照药材溶液；
(2)吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液和防风对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液为展开剂，展开，取出，晾干，检视，根据检视结果判断舒咽清喷雾剂的质量是否合格。
6.根据权利要求5所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：步骤(2)中，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的混合溶液中，三氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇的体积比为10:3:1。
7.根据权利要求5所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：步骤(1)中，舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备过程为：向取得的舒咽清喷雾剂中加入乙酸乙酯，振摇提取，得到乙酸乙酯层和水层，弃去乙酸乙酯层；向水层中加入水饱和的正丁醇溶液，振摇提取，弃去水层；向正丁醇层中加入氨试液，振摇提取，取正丁醇液，蒸干，残渣加入甲醇溶解，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液；
优选地，防风对照药材溶液的制备过程为：向取得的0.5g防风对照药材中加入10ml甲醇，超声处理，超声处理的功率为300W，频率为40kHz，时间为30分钟，滤过，滤液作为防风对照药材溶液。
8.根据权利要求5所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：步骤(2)中，晾干后喷以10％硫酸乙醇溶液，热风吹干，在紫外光灯下检视。
9.根据权利要求1-4任一所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：检测过程还包括如下步骤：
(1)制备舒咽清喷雾剂供试品溶液以及灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液；确定液相色谱条件；
(2)吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液以及灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液，注入液相色谱仪，测定，以外标两点法对数方程计算舒咽清喷雾剂中山银花以灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总量计的浓度，根据计算结果判断舒咽清喷雾剂的质量是否合格。
10.根据权利要求9所述的一种舒咽清喷雾剂的质量检测方法，其特征在于：步骤(1)中，舒咽清喷雾剂供试品溶液的制备过程为：精密量取舒咽清喷雾剂2ml置25ml量瓶中，加入50％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得舒咽清喷雾剂供试品溶液；
灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液的制备过程为：取灰毡毛忍冬皂苷乙对照品、川续断皂苷乙对照品适量，精密称定，加入50％甲醇制成每1ml含灰毡毛忍冬皂苷乙0.3mg、川续断皂苷乙0.15mg的混合溶液，即得灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液；
优选地，步骤(2)中，液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相A，以0.4％醋酸溶液为流动相B，流动相的梯度洗脱条件为：从0～10min，流动相A的体积百分含量由12％提高到15％，流动相B的体积百分含量由88％降低到85％；从10～12min，流动相A的体积百分含量由15％提高到29％，流动相B的体积百分含量由85％降低到71％；从12～30min，流动相A的体积百分含量由29％提高到33％，流动相B的体积百分含量由71％降低到67％；从30～35min，流动相A的体积百分含量由33％提高到70％，流动相B的体积百分含量由67％降低到30％；从35～38min，流动相A的体积百分含量由70％提高到12％，流动相B的体积百分含量由30％降低到88％；从38～40min，流动相A的体积百分含量为12％，流动相B的体积百分含量为88％；柱温为35℃；用蒸发光散射检测器检测，理论板数按灰毡毛忍冬皂苷乙计算大于或等于50000；
精密吸取舒咽清喷雾剂供试品溶液10μl以及灰毡毛忍冬皂苷乙对照品和川续断皂苷乙对照品混合溶液5μl、10μl，注入液相色谱仪。
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