CN109655572A - 一种快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其包括以下步骤：取玉屏风颗粒，加入甲醇，超声处理，过滤，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙酸乙酯萃取，水洗得到乙酸乙酯层和水层，蒸干乙酸乙酯层，即得供试品1溶液；用水饱和的正丁醇溶液萃取水层，用正丁醇饱和的水溶液洗涤正丁醇层，蒸干正丁醇层，即为供试品2溶液；制备混合对照品溶液和各单味药材对照品溶液；取供试品溶液及对照品溶液，按照薄层色谱条件展开，指认各成分的斑点。本发明采用高效薄层色谱，色谱条带清晰，相似成分分离度好，呈现出指纹性，操作简单快速，稳定可靠，重现性和专属性良好，便于对玉屏风颗粒进行定性鉴别，为玉屏风颗粒的质量控制提供参考依据。

Description

一种快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法

技术领域

本发明涉及药材检测领域，具体涉及一种快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法。

背景技术

玉屏风颗粒源于元代《丹溪心法》中的玉屏风散，是治疗表虚自汗的经世名方，由黄芪、炒白术、防风三味药组成，其功能主要为益气、固表、止汗；一般用于表虚不固，自汗恶风，面色皓白，或体虚易感风邪者。黄芪、炒白术、防风含有丰富的化学成分，具有广泛的药理活性。玉屏风散经过现代研究，已发展成为一个具有多剂型的方剂，而玉屏风颗粒作为全国独家品种，较于其他剂型，拥有其独特的优势。

目前对玉屏风颗粒的薄层质量控制方面，虽然现行药典对黄芪、炒白术、防风三味药材分别进行了薄层鉴别，但其步骤与方法冗长复杂，且得到的色谱条带不够多，指纹性不强，同时并未有相关对照品指认。此外，由于薄层色谱鉴别时间长、测定结果存在偏差以及显色不明显的缺陷，从而导致实际应用效果不佳。

发明内容

为了克服上述技术问题，本发明公开了一种快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：

一种快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其包括以下步骤：

步骤1，供试品溶液的制备：取玉屏风颗粒，加入甲醇，超声处理，过滤，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙酸乙酯萃取，水洗得到乙酸乙酯层和水层，蒸干乙酸乙酯层，即得供试品1溶液；用水饱和的正丁醇溶液萃取水层，用正丁醇饱和的水溶液洗涤正丁醇层，蒸干正丁醇层，即为供试品2溶液；

步骤2，对照品溶液的制备：制备混合对照品溶液和各单味药材对照品溶液；

步骤3，薄层色谱分析：取供试品溶液及对照品溶液，按照薄层色谱条件展开，指认各成分的斑点。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中在步骤1中，取玉屏风颗粒约1g，加入甲醇20mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水15mL溶解，用乙酸乙酯振揺提取4次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，用水洗涤2次，每次40mL，收集得到乙酸乙酯层和水层。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中蒸干乙酸乙酯层，定容至5mL，即得供试品1溶液；水层用水饱和的正丁醇溶液振揺提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水溶液洗涤2次，每次40mL，收集并蒸干正丁醇层，定容至5mL，即得供试品2溶液。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中在步骤2中，分别取适量升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷对照品，精密称定，加甲醇制成1mg·mL^-1的混合对照品溶液。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中在步骤2中，取黄芪、白术、防风对照药材粉末，分别按处方比例，精密称定其质量，按照步骤1的方法制备各单味药材对照品溶液。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中在步骤3中的薄层色谱条件：采用Mecrk预制硅胶G板为薄层板，点样量为10mL，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水，在10℃下展开，显色剂为10％硫酸乙醇溶液，在105℃下烘至斑点显色清晰，在日光、紫外灯254nm和紫外灯365nm下检视。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中展开剂三氯甲烷-甲醇-水的体积比为20：8：3。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中在步骤3中，将供试品溶液与对照品溶液的薄层色谱图进行比对，观察各斑点在未显色前和显色后烘板10分钟时的形态，指认各成分的斑点。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中在供试品1溶液的薄层图谱中，未显色前可指认毛蕊异黄酮、升麻素、芒柄花苷三种成分，在显色后烘板10分钟时，可指认黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ四种成分。

上述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其中在供试品2溶液的薄层图谱中，未显色前可指认毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷三种成分，在显色后烘板10分钟时，可指认黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷两种成分。

本发明的有益效果为：本发明采用高效薄层色谱，色谱条带清晰，相似成分分离度好，呈现出指纹性，操作简单快速，稳定可靠，重现性和专属性良好，便于对玉屏风颗粒进行定性鉴别，为玉屏风颗粒的质量控制提供参考依据。

附图说明

下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

图1为供试品1溶液未显色薄层图谱(紫外灯254nm)，其中A为毛蕊异黄酮，B为升麻素，C为芒柄花苷；

图2为供试品1溶液显色后烘板3分钟薄层图谱(紫外灯365nm)，其中A为毛蕊异黄酮，B为升麻素，C为芒柄花苷；

图3为供试品1溶液显色后烘板10分钟薄层图谱(紫外灯365nm)，其中A为毛蕊异黄酮，B为升麻素，C为芒柄花苷，D为黄芪皂苷Ⅰ，E为异黄芪皂苷Ⅰ，F为异黄芪皂苷Ⅱ，G为黄芪皂苷Ⅱ；

图4为供试品2溶液未显色薄层图谱(紫外灯254nm)，其中H为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，I为5-O-甲基维斯阿米醇苷，J为升麻素苷；

图5为供试品2溶液显色后烘板3分钟薄层图谱(紫外灯365nm)，其中H为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，I为5-O-甲基维斯阿米醇苷，J为升麻素苷，K为黄芪皂苷Ⅲ，L为黄芪甲苷；

图6为供试品2溶液显色后烘板10分钟薄层图谱(紫外灯365nm)，其中H为毛蕊异黄酮葡萄糖苷，I为5-O-甲基维斯阿米醇苷，J为升麻素苷，K为黄芪皂苷Ⅲ，L为黄芪甲苷。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明的方法作进一步说明，以使本发明技术方案更易于理解、掌握，而非对本发明进行限制。

实施例：

1仪器与实验材料

1.1仪器

CAMAG TLC SAMPLER 4型自动点样仪(瑞士)，CAMAG TLC Visualizer薄层色谱数码成像系统(瑞士)，XS205DU梅特勒电子分析天平(瑞士)，KQ700-DE型数控超声波清洗机(江苏昆山)，JP-150A高速多功能粉碎机(浙江永康)，DHG—9070A电热鼓风干燥箱(上海精宏)。

1.2材料

Mecrk预制硅胶G板(德国)；甲醇、正丁醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、硫酸、乙醇为分析纯(广州化学试剂厂)；毛蕊异黄酮葡萄糖苷(111920-201203)对照品、黄芪对照药材(120974-201612)、白术对照药材(120925-201310)、防风对照药材(120947-201409)均购自中国食品药品检定研究院；升麻素苷(S-004-180110)、升麻素(S-007-170426)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(J-002-170731)、芒柄花苷(M-013-160906)、毛蕊异黄酮(M-021-170614)、黄芪甲苷(H-013-170614)、黄芪皂苷Ⅰ(H-038-160905)、黄芪皂苷Ⅱ(H-037-161216)、黄芪皂苷Ⅲ(H-036-160908)对照品均购自成都瑞芬思生物科技有限公司；异黄芪皂苷Ⅰ(AF-8051838)、异黄芪皂苷Ⅱ(AF-8051839)对照品均购自成都埃法生物科技有限公司；4批玉屏风颗粒由国药集团广东环球制药有限公司提供，批号分别为171102、171219、180111、180203；水为去离子水。

2方法与结果

2.1玉屏风颗粒薄层指纹图谱

2.1.1薄层色谱条件：薄层板：Mecrk预制硅胶G板；点样量：10μL；展开剂：三氯甲烷-甲醇-水(体积比为20：8：3)，在10℃下展开；显色：10％硫酸乙醇溶液，在105℃下烘至斑点显色清晰；检视：在日光、紫外灯254nm、紫外灯365nm下检视。

2.1.2供试品溶液的制备：取玉屏风颗粒约1g，加入甲醇20mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水15mL溶解，用乙酸乙酯振揺提取4次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，用水洗涤2次，每次40mL，收集得到乙酸乙酯层和水层；蒸干乙酸乙酯层，定容至5mL，即为供试品1溶液；水层用水饱和的正丁醇溶液振揺提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水溶液洗涤2次，每次40mL，收集正丁醇层，蒸干，定容至5mL，即为供试品2溶液。

2.1.3混合对照品溶液的制备：分别取适量升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷对照品，精密称定，加甲醇制成1mg·mL^-1的混合对照品溶液。

2.1.4各单味药材对照品溶液的制备：取黄芪、白术、防风对照药材粉末，分别按处方比例及制剂工艺制备，精密称定其质量，置于具塞锥形瓶中，按照“2.1.2”项下的方法制备各单味药材对照品溶液。

2.1.5指纹图谱斑点指认：按照“2.1.3”、“2.1.4”制备的混合对照品溶液及各单味药材对照品溶液，再按“2.1.1”项下薄层色谱条件展开，对各斑点进行指认，供试品1溶液指认结果见图1、图2、图3，供试品2溶液指认结果见图4、图5、图6，其中S为混合对照品溶液；1-4为供试品溶液；5-7分别为黄芪、白术、防风对照品溶液；8-10为黄芪、白术、防风阴性对照。

3.讨论

在供试品1溶液的薄层图谱中，在未显色前可指认毛蕊异黄酮、升麻素、芒柄花苷三种成分，在显色后烘板3分钟时，毛蕊异黄酮斑点消失，黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ四种成分斑点渐清晰，在显色后烘板10分钟时，黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ四种成分斑点清晰、明亮，从而可指认黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ四种成分。

在供试品2溶液的薄层图谱中，在未显色前可指认毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷三种成分，在显色后烘板3分钟时，毛蕊异黄酮葡萄糖苷斑点消失，黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷两种成分斑点渐清晰，在显色后烘板10分钟时，黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷两种成分斑点清晰、明亮，从而可指认黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷两种成分。

综合供试品1溶液、供试品2溶液的结果，使用同一种展开剂的展开方法，共对升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷12种成分进行鉴别，提高了玉屏风颗粒薄层鉴别的专属性。

本发明采用高效薄层色谱，色谱条带清晰，相似成分分离度好，呈现出指纹性，操作简单快速，稳定可靠，重现性和专属性良好，便于对玉屏风颗粒进行定性鉴别，为玉屏风颗粒的质量控制提供参考依据。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术手段和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。故凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明之形状、构造及原理所作的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，其包括以下步骤：

步骤1，供试品溶液的制备：取玉屏风颗粒，加入甲醇，超声处理，过滤，滤液蒸干，残渣加水溶解，用乙酸乙酯萃取，水洗得到乙酸乙酯层和水层，蒸干乙酸乙酯层，即得供试品1溶液；用水饱和的正丁醇溶液萃取水层，用正丁醇饱和的水溶液洗涤正丁醇层，蒸干正丁醇层，即为供试品2溶液；

步骤2，对照品溶液的制备：制备混合对照品溶液和各单味药材对照品溶液；

步骤3，薄层色谱分析：取供试品溶液及对照品溶液，按照薄层色谱条件展开，指认各成分的斑点。

2.根据权利要求1所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，在步骤1中，取玉屏风颗粒约1g，加入甲醇20mL，超声处理30min，过滤，滤液蒸干，残渣加水15mL溶解，用乙酸乙酯振揺提取4次，每次20mL，合并乙酸乙酯液，用水洗涤2次，每次40mL，收集得到乙酸乙酯层和水层。

3.根据权利要求2所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，蒸干乙酸乙酯层，定容至5mL，即得供试品1溶液；水层用水饱和的正丁醇溶液振揺提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水溶液洗涤2次，每次40mL，收集并蒸干正丁醇层，定容至5mL，即得供试品2溶液。

4.根据权利要求1所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，在步骤2中，分别取适量升麻素苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、升麻素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷对照品，精密称定，加甲醇制成1mg·mL^-1的混合对照品溶液。

5.根据权利要求1所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，在步骤2中，取黄芪、白术、防风对照药材粉末，分别按处方比例，精密称定其质量，按照步骤1的方法制备各单味药材对照品溶液。

6.根据权利要求1所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，在步骤3中的薄层色谱条件：采用Mecrk预制硅胶G板为薄层板，点样量为10mL，展开剂为三氯甲烷-甲醇-水，在10℃下展开，显色剂为10％硫酸乙醇溶液，在105℃下烘至斑点显色清晰，在日光、紫外灯254nm和紫外灯365nm下检视。

7.根据权利要求6所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，展开剂三氯甲烷-甲醇-水的体积比为20：8：3。

8.根据权利要求1所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，在步骤3中，将供试品溶液与对照品溶液的薄层色谱图进行比对，观察各斑点在未显色前和显色后烘板10分钟时的形态，指认各成分的斑点。

9.根据权利要求8所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，在供试品1溶液的薄层图谱中，未显色前可指认毛蕊异黄酮、升麻素、芒柄花苷三种成分，在显色后烘板10分钟时，可指认黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅰ、异黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅱ四种成分。

10.根据权利要求8所述的快速鉴别玉屏风颗粒成分的薄层色谱分析方法，其特征在于，在供试品2溶液的薄层图谱中，未显色前可指认毛蕊异黄酮葡萄糖苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、升麻素苷三种成分，在显色后烘板10分钟时，可指认黄芪皂苷Ⅲ、黄芪甲苷两种成分。