CN109239225B - 一种浓缩活心丸的质量检测方法 - Google Patents

一种浓缩活心丸的质量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种浓缩活心丸的质量检测方法，所述浓缩活心丸的质量检测方法包括以下有效成分的鉴别和含量测定，鉴别：先取浓缩活心丸制成供试品溶液，另取麝香酮、冰片、蟾酥、熊胆、人参对照品制成对照品溶液，然后按照薄层色谱法试验，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；含量测定：按照高效液相色谱法测定，所述浓缩活心丸每1g含体外培育牛黄以胆红素计，不得少于5.5mg；每1g含蟾酥以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总量计，不得少于1.8mg；按照气相色谱法测定，所述浓缩活心丸每1g含人工麝香以麝香酮计，不得少于1.0mg；每1g含冰片以异龙脑与龙脑的总量计，不得少于13.5mg。

Description

一种浓缩活心丸的质量检测方法
技术领域
本发明涉及属于药物检测领域，具体涉及一种浓缩活心丸的质量检测方法。
背景技术
活心丸为2010年度国家药品标准提高品种，由广州悦康生物制药有限公司生产。
浓缩活心丸具有益气活血，温经通脉的功效。主治胸痹、心痛，适用于冠心病、心绞痛。
浓缩活心丸为黑色或金黄色的包衣浓缩水丸，除去包衣后显褐色至黑褐色；气香，味辛、麻。
处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g。
制法是：以上十味，人参、灵芝、红花分别用75％乙醇提取二次，第一次、第二次各2.5小时，分别合并提取液，滤过，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，备用；附子(黑顺片)分别用75％乙醇提取二次，第一次、第二次各2.5小时，分别滤过，合并滤液，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉；药渣用水提取2小时，滤液滤过浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，与附子醇提干膏粉，混匀，备用；珍珠水飞或粉碎成细粉；人工麝香、蟾酥、体外培育牛黄、熊胆与冰片分别粉碎成细粉，与上述四种干膏粉混匀，加入微晶纤维素及淀粉适量混匀，加水制成1000丸，包衣，干燥，即得。
现行标准收载于部颁标准中药成方制剂第十八册(标准文号：WS3-B-3452-98)。检验项目包括有冰片、蟾酥、牛黄、人参及熊胆的薄层色谱鉴别项和麝香的气相鉴别、丸剂检查项，方法上存在一定的缺陷，同时缺乏对各成分的定量测定，在很大程度上存在较大的片面性，需要更全面的检测方法对活心丸的质量进行有效的控制。
发明内容
本发明目的在于提供一种浓缩活心丸的质量检测方法，解决现有浓缩活心丸质量标准检测存在片面性、不够全面的问题，实现对该产品的质量进行全面有效的控制。
本发明提供的浓缩活心丸的质量检测方法，所述浓缩活心丸的处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子(黑顺片)9g，冰片1.2g，红花2.0g；所述浓缩活心丸的质量检测方法包括如下鉴别和含量测定方法：
(一)鉴别方法：
(1)麝香酮的薄层鉴别:取所述浓缩活心丸0.8g，研细，加乙醚15ml，超声处理15分钟，滤过，滤渣备用，滤液挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，石油醚(60--90℃)-乙酸乙酯＝20:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)冰片的薄层鉴别:取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取(一)鉴别方法(1)麝香酮的薄层鉴别项下的供试品溶液及上述对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯＝17:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)蟾酥的薄层鉴别:取(一)鉴别方法(1)麝香酮的薄层鉴别项下的备用滤渣，挥尽乙醚，加乙醇15ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蟾酥对照药材20mg，自“加乙醇15ml”起，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-丙酮＝4:3:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在紫外光(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)熊胆的薄层鉴别:取所述浓缩活心丸0.4g，研细，加乙醚，密塞，冷浸3次，每次10ml，每次浸渍30分钟，药渣挥去乙醚，加甲醇20ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加20％氢氧化钠溶液0.5ml，置水浴中加热10小时，取出后，用盐酸调节pH值至显酸性，放冷，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊胆对照药材100mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水＝10∶5∶5∶3∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以30％硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点；
(5)人参的薄层鉴别:取所述浓缩活心丸0.8g，研细，加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，滤过，滤渣挥干溶剂，加水饱和的正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一Merck硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝65：35：10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点；
(二)含量测定方法：
(1)体外培育牛黄：按照高效液相色谱法测定；
对照品溶液的制备：取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含15μg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：取供试品，研细，取约50mg，精密称定，置具塞容器中，加入含0.15％十六烷基三甲基氯化铵的10％草酸溶液3ml，涡旋至充分混匀，精密加入水饱和的二氯甲烷25ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用水饱和的二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心，取二氯甲烷液，用孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
所述浓缩活心丸每1g含体外培育牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于5.5mg；
(2)蟾酥：按照高效液相色谱法测定：
对照品溶液的制备：取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含华蟾酥毒基30μg、脂蟾毒配基20μg的混合溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：取供试品，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞容器中，精密加入乙醇20ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得：
所述浓缩活心丸每1g含蟾酥以华蟾酥毒基(C26H34O6)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的总量计，不得少于1.8mg；
(3)人工麝香、冰片照气相色谱法测定：
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品、异龙脑对照品与龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含麝香酮0.01mg、异龙脑0.08mg及龙脑0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：取供试品，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞容器中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得：
所述浓缩活心丸每1g含人工麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于1.0mg；含冰片以异龙脑(C10H18O)与龙脑(C10H18O)的总量计，不得少于13.5mg。
进一步优化为，在步骤(二)(1)中体外培育牛黄含量测定的色谱条件与系统适用性为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-1％冰醋酸溶液＝95:5为流动相；检测波长为450±2nm，优选450nm；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000。
进一步优化为，在(二)含量测定方法(1)体外培育牛黄项中供试品溶液制备时超声处理条件为功率350W，频率37kHz，时间为45min。
进一步优化为，在(二)含量测定方法(2)蟾酥项中蟾酥含量测定的色谱条件与系统适用性为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为乙腈-0.5％磷酸二氢钾溶液＝44:56，用磷酸调节pH值至3.2；检测波长为296nm，理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于3000。
进一步优化为，在(二)含量测定方法(2)蟾酥项中供试品溶液制备时超声处理条件为：功率350W,频率37kHz，处理15分钟。
进一步优化为，在(二)含量测定方法(3)人工麝香、冰片项中色谱条件与系统适用性试验为：聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱，柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温：初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟；理论板数按龙脑峰计算应不低于2000；
进一步优化为，在(二)含量测定方法(3)人工麝香、冰片项中供试品溶液制备时超声处理条件为：功率350W,频率37kHz，处理20min。
所述浓缩活心丸的制法是：如上所述浓缩活心丸的处方中的原料，人参、灵芝、红花分别用75％乙醇提取二次，第一次、第二次各2.5小时，分别合并提取液，滤过，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，备用；附子(黑顺片)分别用75％乙醇提取二次，第一次、第二次各2.5小时，分别滤过，合并滤液，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉；药渣用水提取2小时，滤液滤过浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，与附子醇提干膏粉，混匀，备用；珍珠水飞或粉碎成细粉；人工麝香、蟾酥、体外培育牛黄、熊胆与冰片分别粉碎成细粉，与以人参、灵芝、红花及附子制得的四种干膏粉混匀，加入微晶纤维素及淀粉适量混匀，加水制成1000丸，包衣，干燥，即得。
优点：本发明所述浓缩活心丸的质量检测方法与活心丸质量检测原标准相比优化了冰片、蟾酥和人参的薄层色谱鉴别；新增了人工麝香的薄层色谱鉴别；建立多指标含量测定，具体通过增加对体外培育牛黄、蟾酥及冰片和麝香的含量测定，配合原有的质量标准量能更全面的检测药物的成分，了解其含量和稳定性，也有助于说明药物的药用物质基础。
附图说明
图1是人工麝香薄层色谱鉴别图；
图2是蟾酥的薄层色谱图；
图3冰片薄层色谱鉴别图；
图4人参的薄层色谱鉴别图。
具体实施方式
所述浓缩活心丸的质量检测方法包括如下鉴别方法和含量测定方法：
(一)鉴别方法
1、麝香酮的薄层色谱鉴别
①材料与试剂：Merck硅胶G薄层板。其它试剂均为分析纯。
②对照物质：麝香酮对照品，批号为110719-201014，购自中检院。
③供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。
取5批供试品各0.8g，研细，分别加乙醚15ml，超声处理15分钟，滤过，滤渣备用，滤液挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯＝20:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图1。
2、蟾酥的薄层色谱鉴别
①材料与试剂：Merck硅胶G预制板。其它试剂均为分析纯。
②对照物质：蟾酥对照药材，批号为110721－200613，购自中检院。
③供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。
取(一)鉴别方法(1)麝香酮的薄层鉴别项下的备用滤渣，挥尽乙醚，加乙醇15ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取蟾酥对照药材20mg，自“加乙醇15ml”起，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2015年版通则0502)试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-丙酮＝4:3:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在紫外光365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果见图2。
3、冰片的薄层色谱鉴别
①材料与试剂：Merck硅胶G预制板。其它试剂均为分析纯。
②对照物质：冰片对照品：批号为110743-200303，购自中检院。
③供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。
取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取(一)鉴别方法(1)麝香酮的薄层鉴别项下的供试品溶液及上述对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯＝17:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。结果见图3。
4、人参的薄层色谱鉴别
①材料与试剂：Merck硅胶G预制板。其它试剂均为分析纯。
②对照物质：人参对照药材，批号为120917-201110，人参皂苷Rg1，批号110703－201128，含量以93.4％计；人参皂苷Re，批号110754－201324，含量以92.7％计；人参皂苷Rb1，批号110704－201223，含量以95.9％计；均购自中检院。
③供试品：批号为12030101、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，均由广州悦康生物制药有限公司提供。
取上述5批供试品0.8g，研细，分别加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，滤过，滤渣挥干溶剂，加水饱和的正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取人参对照药材1g，同法制成对照药材溶液。再取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一Merck硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝65：35：10在10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。结果见图4。
5、熊胆的薄层色谱鉴别
①材料与试剂：Merck硅胶G预制板。其它试剂均为分析纯。
②对照物质：熊去氧胆酸对照品，批号为110755-9003；鹅去氧胆酸对照品，批号为110806-201105，均购自中检院。
③供试品：批号为12030201、12050101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。
取上述2批供试品0.4g，研细，加乙醚，密塞，冷浸3次，每次10ml，每次浸渍30分钟，药渣挥去乙醚，加甲醇20ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加20％氢氧化钠溶液0.5ml，置水浴中加热10小时，取出后，用盐酸调节pH值至显酸性，放冷，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊胆对照药材100mg，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水＝10∶5∶5∶3∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以30％硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光365nm下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点。
所述熊胆的薄层色谱鉴别方法实在原标准的基础上进行了修订，因原标准的“加甲醇4ml，置水浴上回流1小时”具有不可操作性，本发明所述浓缩活心丸的质量检测方法将之修改为“加甲醇20ml，置水浴上回流1小时”。
(二)含量测定方法：
1、体外培育牛黄含量测定
(1)仪器：高效液相色谱仪：安捷伦1100；超声仪：Elmasonic S 300H超声波清洗器，功率350W，频率37kHz；色谱柱：Ultimate AQ-C18(250mm×4.6mm，5μm)；天平SartoriusCP224S、CP225D；
(2)试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
(3)对照品：胆红素，批号100077－200805，含量以99.6％计，购自中检院。
(4)供试品：批号为12030101、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-1％冰醋酸溶液＝95:5为流动相；检测波长为450nm。理论板数按胆红素峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含15μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取上述5批供试品，研细，各取约50mg，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，加入含0.15％十六烷基三甲基氯化铵的10％草酸溶液3ml，涡旋至充分混匀，精密加入水饱和的二氯甲烷25ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理45分钟，放冷，再称定重量，用水饱和的二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心，取二氯甲烷液，用孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得各批供试品中胆红素含量，如表1。
表1各供试品中胆红素含量鉴定结果
Figure GDA0002934067580000111
含量限度的制订：中国药典2010年版一部中“体外培育牛黄”的胆红素含量限度为“本品按干燥品计算，含胆红素(C33H36N4O6)不得少于35.0％”，水分限度均为不得过9.0％。本发明所述浓缩活心丸中胆红素含量测定方法采用高效液相色谱法，中国药典2010年版一部中“体外培育牛黄”的胆红素含量方法为紫外—可见分光光度法，二者方法不具有可比性。
紫外—可见分光光度法的结果要高于高效液相色谱法，两种方法的差值在5～8％之间，以10％的差值计算，则采用高效液相色谱法，体外培育牛黄的胆红素含量限度为不得少于25.0％。则本发明所述浓缩活心丸中胆红素理论含量限度应为每1g不少于15mg。考虑到原料来源及大生产等因素的影响，且胆红素易分解，以测得5批样品的平均值的75％制订含量限度。即“本发明所述浓缩活心丸每1g含体外培育牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于5.5mg”。
2、蟾酥含量测定
(1)仪器：高效液相色谱仪：安捷伦1100；超声波清洗仪：Elmasonic S 300H超声波清洗器，功率350W，频率37kHz；电子天平：Sartorius-CP225D，Sartorius-CP224S；色谱柱Ultimate AQ-C18(250mm×4.6mm，5μm)。
(2)试剂：乙腈为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
(3)对照品：华蟾酥毒基，批号为110803-200605；脂蟾毒配基，批号为110718-201108，含量以98.9％计，均购自中检院。
(4)供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。
色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相为乙腈-0.5％磷酸二氢钾溶液＝44:56，用磷酸调节pH值至3.2；检测波长为296nm。理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备：取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含华蟾酥毒基30μg、脂蟾毒配基20μg的混合溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取上述5批供试品，研细，各取约0.4g，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入乙醇20ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得各批号样品中蟾酥含量，如表2。
表2各样品中蟾酥含量的鉴定结果
Figure GDA0002934067580000121
含量限度的制订：由于未收集到对应批次的药材作转移率考察，仅对收集到的广州悦康生物制药有限公司提供的5批样品进行含量测定。根据本发明所述浓缩活心丸处方量(1.8g/千丸)及蟾酥药材的含量(中国药典2010年版规定蟾酥含量为以干燥品计，含华蟾酥毒基和脂蟾毒配基不得少于6.0％，水分不得过13.0％)，并根据5批样品的华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总含量平均测定结果为2.28mg/g，考虑到药材来源及大生产等因素影响，将平均值下浮20％，暂定本发明所述浓缩活心丸含量测定的限度为每1g含蟾酥以华蟾酥毒基(C26H34O6)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的总量计应不得少于1.8mg。
3、人工麝香、冰片含量测定
(1)仪器：日本SHIMADZU气相色谱仪系统、FID检测器；色谱柱：弹性石英毛细管柱Agilent DB-WAX，柱长30m，内径0.25mm，膜厚度0.25μm；天平：Sartorius CP224S电子天平、Sartorius CP225D电子天平。超声仪：Elmasionic S 300H超声波清洗器，功率350W，频率37kHz。
(2)试剂：无水乙醇为分析纯。
(3)对照品：龙脑对照品，批号为110881-201107，含量为99.3％、异龙脑对照品，批号为：111512-200201；111512-200802，含量为97.5％、麝香酮对照品，批号为110719-201215，含量为99.6％，均购自中国药品生物制品检定研究院。
(4)供试品：批号为12030201、12050101、12060101、12070101、12080101的浓缩活心丸，由广州悦康生物制药有限公司提供。
色谱条件与系统适用性试验：聚乙二醇20000(PEG-20M)毛细管柱，柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温：初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟。理论板数按龙脑峰计算应不低于2000。
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品、异龙脑对照品与龙脑对照品适量，精称定，加无水乙醇制成每1ml含麝香酮0.01mg、异龙脑0.08mg及龙脑0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备：取上述5批供试品，研细，各取约0.2g，精密称定，分别置于具塞锥形瓶中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，以功率350W、频率37kHz超声处理20分钟，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，测定，即得各批号供试品中冰片和麝香酮的含量测定，结果如表3。
表3各供试品中冰片和麝香酮的含量测定结果
Figure GDA0002934067580000141
含量限度的制订：由于未收集到对应批次的药材作转移率考察，仅对收集到的广州悦康生物制药有限公司提供的5批样品进行含量测定。现根据5批样品冰片中的异龙脑和龙脑的总含量及人工麝香中的麝香酮的平均测定结果分别为19.3mg/g及1.4mg/g，考虑到药材来源及大生产等因素影响，将平均值下浮30％，暂定本发明所述浓缩活心丸含量测定的限度为每1g含冰片以异龙脑(C10H18O)与龙脑(C10H18O)的总量计应不得少于13.5mg，含人工麝香以麝香酮(C16H30O)计应不得少于1.0mg。
以上通过实例和方法学验证对本发明所述浓缩活心丸的质量检测方法进行了详细介绍，但不应将之理解为本发明仅限于实例，因为根据上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可做出其他多种形式的修改、替换和变更，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明。
本发明提供的浓缩活心丸质量检测方法，活心丸为2010年度国家药品标准提高品种，由广州悦康生物制药有限公司生产。现行标准收载于部颁标准中药成方制剂第十八册(标准文号：WS3-B-3452-98)。检验项目包括有冰片、蟾酥、牛黄、人参及熊胆的薄层色谱鉴别项和麝香的气相鉴别；丸剂检查项。现根据《国家药品标准行动计划项目任务表》的要求，明确了处方中麝香为人工麝香，牛黄为体外培育牛黄，附子规范为附子(黑顺片)。本发明所述浓缩活心丸的质量检测方法优化了冰片、蟾酥和人参的薄层色谱鉴别；新增了人工麝香的薄层色谱鉴别；删去了体外培育牛黄的薄层鉴别及人工麝香的气相鉴别；新增了体外培育牛黄、蟾酥及冰片和麝香的含量测定；所有检查符合丸剂项下有关的各项规定(中国药典2015年版通则0108)，能更加全面的控制浓缩活心丸质量。依据本发明标准，浓缩活心丸每1g含体外培育牛黄以胆红素(C33H36N4O6)计，不得少于5.5mg；每1g含蟾酥以华蟾酥毒基(C26H34O6)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的总量计，不得少于1.8mg；每1g含人工麝香以麝香酮(C16H30O)计，不得少于1.0mg；含冰片以异龙脑(C10H18O)与龙脑(C10H18O)的总量计，不得少于13.5mg。

Claims (6)

1.一种浓缩活心丸的质量检测方法，所述浓缩活心丸的处方为：灵芝20g，人工麝香1.2g，熊胆2.4g，体外培育牛黄1.2g，珍珠2.4g，人参18g，蟾酥1.8g，附子9g，冰片1.2g，红花2.0g；其特征在于所述浓缩活心丸的质量检测方法包括如下鉴别和含量测定方法：
(一)鉴别方法：
(1)麝香酮的薄层鉴别:取所述浓缩活心丸0.8g，研细，加乙醚15ml，超声处理15分钟，滤过，滤渣备用，滤液挥干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取麝香酮对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以60～90℃的石油醚-乙酸乙酯＝20:1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼试液，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(2)冰片的薄层鉴别:取冰片对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取(一)鉴别方法(1)麝香酮的薄层鉴别项下的供试品溶液及上述对照品溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯＝17:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
(3)蟾酥的薄层鉴别:取(一)鉴别方法(1)麝香酮的薄层鉴别项下的备用滤渣，挥尽乙醚，加乙醇15ml，超声处理15分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取蟾酥对照药材20mg，自“加乙醇15ml”起，同法制成对照药材溶液；吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-二氯甲烷-丙酮＝4:3:3为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，在紫外光365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(4)熊胆的薄层鉴别:取所述浓缩活心丸0.4g，研细，加乙醚，密塞，冷浸3次，每次10ml，每次浸渍30分钟，药渣挥去乙醚，加甲醇20ml，置水浴上加热回流1小时，滤过，取续滤液10ml，蒸干，残渣加20％氢氧化钠溶液0.5ml，置水浴中加热10小时，取出后，用盐酸调节pH值至显酸性，放冷，用乙醚振摇提取3次，每次10ml，合并乙醚提取液，挥干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊胆对照药材100mg，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水＝10∶5∶5∶3∶1的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以30％硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点；
(5)人参的薄层鉴别:取所述浓缩活心丸0.8g，研细，加三氯甲烷30ml，加热回流1小时，滤过，滤渣挥干溶剂，加水饱和的正丁醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液用氨试液洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参对照药材1g，同法制成对照药材溶液；再取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品及人参皂苷Rb1对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作为对照品溶液；吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一Merck硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水＝65：35：10在10℃以下放置形成的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别在日光和紫外光365nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点和荧光斑点；
(二)含量测定方法：
(1)体外培育牛黄：
对照品溶液的制备：取胆红素对照品适量，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含胆红素对照品15μg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：取供试品，研细，取约50mg，精密称定，置具塞容器中，加入含0.15％十六烷基三甲基氯化铵的10％草酸溶液3ml，涡旋至充分混匀，精密加入水饱和的二氯甲烷25ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用水饱和的二氯甲烷补足减失的重量，摇匀，离心，取二氯甲烷液，用孔径为0.22μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，色谱条件与系统适用性为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，一乙腈-1％冰醋酸溶液＝95:5为流动相，检测波长为450±2nm；测定，即得；
所述浓缩活心丸每1g含体外培育牛黄以胆红素计，不得少于5.5mg；
(2)蟾酥：
对照品溶液的制备：取华蟾酥毒基、脂蟾毒配基对照品适量，精密称定，加乙醇制成每1ml含华蟾酥毒基30μg、脂蟾毒配基20μg的混合溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：取供试品，研细，取约0.4g，精密称定，置具塞容器中，精密加入乙醇20ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，色谱条件与系统适用性为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以用磷酸调节pH值至3.2的乙腈-0.5％磷酸二氢钾溶液＝44:56为流动相；检测波长为296nm，理论板数按华蟾酥毒基峰计算应不低于3000；测定，即得：
所述浓缩活心丸每1g含蟾酥以华蟾酥毒基和脂蟾毒配基的总量计，不得少于1.8mg；
(3)人工麝香、冰片：
对照品溶液的制备：取麝香酮对照品、异龙脑对照品与龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成每1ml含麝香酮0.01mg、异龙脑0.08mg及龙脑0.1mg的混合溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备：取供试品，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞容器中，精密加入无水乙醇20ml，称定重量，超声处理后，放冷，再称定重量，用无水乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液；
测定法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液各1μl，注入气相色谱仪，色谱条件与系统适用性试验为：聚乙二醇20000毛细管柱，柱长为30m，内径为0.25mm，膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温：初始温度为110℃，保持11分钟，以每分钟30℃的速率升温至200℃，保持9分钟；理论板数按龙脑峰计算应不低于2000；测定，即得：
所述浓缩活心丸每1g含人工麝香以麝香酮计，不得少于1.0mg；含冰片以异龙脑与龙脑的总量计，不得少于13.5mg。
2.如权利要求1所述的浓缩活心丸的质量检测方法，其特征在于，(二)含量测定方法(1)体外培育牛黄项中体外培育牛黄含量测定的检测波长为450nm；理论板数按胆红素峰计算应不低于2000。
3.如权利要求1所述的浓缩活心丸的质量检测方法，其特征在于，(二)含量测定方法(1)体外培育牛黄项中供试品溶液制备时超声处理条件为功率350W，频率37kHz，时间为45min。
4.如权利要求1所述的浓缩活心丸的质量检测方法，其特征在于，(二)含量测定方法(2)蟾酥项中供试品溶液制备时超声处理条件为：
功率350W,频率37kHz，处理15分钟。
5.如权利要求1所述的浓缩活心丸的质量检测方法，其特征在于，(二)含量测定方法(3)人工麝香、冰片项中供试品溶液制备时超声处理条件为：
功率350W,频率37kHz，处理20min。
6.如权利要求1所述的浓缩活心丸的质量检测方法，其特征在于，所述浓缩活心丸的制法是：如权利要求1中所述的浓缩活心丸的处方中的原料，人参、灵芝、红花分别用75％乙醇提取二次，第一次、第二次各2.5小时，分别合并提取液，滤过，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，备用；附子分别用75％乙醇提取二次，第一次、第二次各2.5小时，分别滤过，合并滤液，滤液浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉；药渣用水提取2小时，滤液滤过浓缩成稠膏，干燥，粉碎成细粉，与附子醇提干膏粉，混匀，备用；珍珠水飞或粉碎成细粉；人工麝香、蟾酥、体外培育牛黄、熊胆与冰片分别粉碎成细粉，与以人参、灵芝、红花及附子制得的四种干膏粉混匀，加入微晶纤维素及淀粉适量混匀，加水制成1000丸，包衣，干燥，即得。
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