CN103808842A - 一种中药制剂护肝滴丸的质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药制剂护肝滴丸的质量检测方法，包括对护肝滴丸中有效成分柴胡皂苷a、五味子醇甲含量的测定以及对护肝滴丸中五味子、猪胆粉和茵陈的鉴别。检测步骤为：一、以柴胡皂苷a为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸处方中是否含有柴胡成分；二、以五味子醇甲为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸中是否含有五味子成分；三、以五味子乙素为对照，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有五味子成分；四、以猪去氧胆酸为对照品，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有猪胆粉成分；五、以绿原酸为对照品，采用薄层色法鉴别护肝滴丸中是否含有茵陈成分。本发明可以对护肝滴丸的质量进行有效、可靠的控制，该方法科学、可行、可靠。
Description
技术领域
本发明涉及一种质量检测方法，具体涉及一种中药制剂护肝滴丸的质量检测方法，属于生物技术领域。
背景技术
护肝滴丸为柴胡、茵陈、板蓝根、五味子、猪胆粉、绿豆六味中药材，对柴胡、茵陈、板蓝根、五味子、绿豆等有效成分的提取，将各提取物与猪胆粉、聚乙二醇混合均匀制备成滴丸剂，每丸重40mg，该药品的外观为棕黑色至黑色的滴丸；气微，味苦。本制剂的特点是溶散时限短、生物利用度高，经过适宜的方法提取药材中的有效成分及纯化去除杂质后，降低了每次的服用剂量，方便患者服用。
护肝片是我公司70年代自主研发的新药，于80年代初上市。经过三十年的临床应用，证明其用于急、慢性肝炎和早期肝硬化具有良好的临床效果，自上市伊始至今得到社会广泛公认，已入选国家基本药物，为了更好的发挥护肝片组方的治疗优势，我公司于2003年立项对护肝片进行二次开发，即开发护肝滴丸项目，该产品为护肝片的升级产品，是一种滴丸剂2003年国家科委将护肝滴丸列入“863”二次开发项目（课题编号：2003AA2Z3245）。
原剂型为浸膏片，收载于2005版中华人民共和国药典一部，其功能主治为疏肝理气、健脾消食，具有降低转氨酶作用，用于慢性肝炎及早期肝硬化的治疗。之所以改为滴丸剂，是因滴丸剂有比片剂更多的优点。护肝滴丸在提取工艺、剂型选择、质量控制等方面有显著的改进。药理实验表明护肝滴丸与原剂型比较在保肝降酶、对纤维化肝硬化、脂肪肝及提高肝合成蛋白功能等作用都好于护肝片。临床试验结果显示护肝滴丸在治疗病毒性肝炎、早期肝硬化、酒精性慢性肝炎、酒精性脂肪肝、药物性肝炎方面都有很好的疗效，总体上好于护肝片的疗效。
然而，现有技术中尚未有针对护肝滴丸的有效的质量检测方法。
发明内容
本发明为了对护肝滴丸的质量进行有效、可靠的控制，对其成品质量的检测检验方法进行了大量的研究工作，通过大量的实验研究，本发明提供了中药制剂护肝滴丸的质量检测方法，该方法科学、可行、可靠。
本发明的技术方法如下：
一种中药制剂护肝滴丸的质量检测方法，按以下步骤进行：一、以柴胡皂苷a为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸处方中是否含有柴胡成分；二、以五味子醇甲为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸中是否含有五味子成分；三、以五味子乙素为对照，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有五味子成分；四、以猪去氧胆酸为对照品，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有猪胆粉成分；五、以绿原酸为对照品，采用薄层色法鉴别护肝滴丸中是否含有茵陈成分，即完成护肝滴丸的质量检测。
进一步的，护肝滴丸中有效成份含量的测定
（1）检测柴胡成分
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B；检测过程中在0-50分钟期间，流动相A:B以（25→90：75→10）进行梯度洗脱，在50-55分钟期间，以流动相A:B以（90:10）进行洗脱；检测波长为210nm；理论板数按柴胡皂苷a峰计算不低于10000；
对照品溶液的制备：取柴胡皂苷a对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a0.3-0.5mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.2-1.0g，加水饱和的正丁醇10-50ml使溶解，转移至分液漏斗中，用氨试液10-30ml分次洗涤容器，加入分液漏斗中，摇匀，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醚10ml分次洗涤，乙醚液离心，弃去乙醚溶液，不溶物及残渣加甲醇使溶解，定量转移至25ml量瓶中，加甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；用0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比取除柴胡以外的其他药材，按照护肝滴丸的制法制备成滴丸，按照“供试品溶液的制备”方法制备，作为阴性样品溶液。
测定法：分别吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
合格标准：每丸含柴胡以柴胡皂苷a（C42H68O13）计，不得少于0.05mg；
（2）检测五味子成分
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；体积比为63:37的甲醇:水为流动相；检测波长为250nm；流速为0.8ml/min；柱温25℃；理论板数按五味子醇甲峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备：取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.2-0.5g，加适量硅藻土，分散均匀，加环己烷回流提取1-3次，每次20-50ml、30分钟，滤过，用环己烷适量洗涤容器和滤器，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，用甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
阴性样品溶液的制备：按护《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比取除五味子以外的其他药材，按照护肝滴丸的制法制备成滴丸，按照“供试品溶液的制备”方法制备，作为阴性样品溶液。
测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
合格标准：每丸含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)计，不得少于0.038mg；
更进一步的，本发明护肝滴丸的鉴别方法如下：
（1）五味子的鉴别
供试品溶液的制备：取护肝滴丸20-60丸，加甲醇20ml，超声处理20分钟，冷冻2小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加环己烷10-50ml，超声20-40分钟，滤过，药渣备用，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：另取五味子乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除五味子以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；
取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性供试品溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为9:1的甲苯和醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视；
鉴别护肝滴丸处方中含有五味子的条件为：置254nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；，表明供试品中含有五味子成分；
（2）猪胆粉的鉴别
供试品溶液的制备：取鉴别步骤（1）中获得的环己烷提取后的药渣，挥尽环己烷，加质量分数为10%氢氧化钠溶液10ml，120℃加热4-6小时，放冷后用盐酸调节pH值2-3，移至离心管中，离心，弃去上清液，沉淀加甲苯5ml充分搅拌，离心，分取上清液，沉淀再同法操作2次，合并上清液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：另取猪去氧胆酸，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除猪胆粉以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；
吸取上述供试品溶液5-10μl，对照品溶液3-5μl，阴性供试品溶液5-10μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8-12:5:5:3:1的异辛烷、乙醚、冰醋酸、正丁醇和水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数为10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
鉴别护肝滴丸处方中含有猪胆粉的条件为：置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；，表明供试品中含有猪胆粉成分。
（3）茵陈的鉴别
供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-30丸，加丙酮20-40ml，超声处理3-40分钟，冷藏12小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用水5-6ml分两次转移至预先处理的D101型大孔树脂柱（柱长15cm，内径1cm）上，用水50ml洗脱，弃去水洗液，再用体积分数为20%的乙醇40-60ml洗脱，流速为每分钟0.5ml，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备：取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。
阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除茵陈以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；
吸取上述对照品溶液1-3μl、供试品溶液2-5μl与阴性供试品溶液2-5μl分别点于同一聚酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干。
鉴别护肝滴丸处方中含有茵陈的条件为：置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；，表明供试品中含有茵陈成分。
本发明的优点：本发明针对护肝滴丸通过采用高效液相色谱法与薄层色谱法提供了一种有效的质量检测方法，本发明可以有效的检测中药制剂护肝滴丸中的有效成分柴胡、五味子、猪胆粉、茵陈，从而控制护肝滴丸的质量。
附图说明
图1为柴胡皂苷a检测色谱图；
图2为五味子醇甲检测色谱图；
图3为本发明中五味子254nm紫外光灯下薄层色谱图；
图4为本发明中猪胆粉日光下薄层色谱图；
图5为本发明中猪胆粉365nm紫外光灯下薄层色谱图；
图6为本发明中茵陈365nm紫外光灯下薄层色谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1本发明护肝滴丸中有效成份含量的测定
（1）检测柴胡成分
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B；检测过程中在0-50分钟期间，流动相A:B以（25→90：75→10）进行梯度洗脱，在50-55分钟期间，以流动相A:B以（90:10）进行洗脱；检测波长为210nm；理论板数按柴胡皂苷a峰计算不低于10000；
对照品溶液的制备取柴胡皂苷a对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a0.4mg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备取护肝滴丸100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.5g，加水饱和的正丁醇20ml使溶解，转移至分液漏斗中，用氨试液20ml分次洗涤容器，加入分液漏斗中，摇匀，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醚10ml分次洗涤，乙醚液离心，弃去乙醚溶液，不溶物及残渣加甲醇使溶解，定量转移至25ml量瓶中，加甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。用微孔滤膜（0.45μm），取续滤液，即得。
测定法分别吸取对照品溶液与供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
试验结果如表1、图1所示：
表1柴胡皂苷a含量测定结果
（2）检测五味子成分
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇:水（63:37）为流动相；检测波长为250nm；流速为0.8ml/min；柱温25℃；理论板数按五味子醇甲峰计算不低于2000。
对照品溶液的制备取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备取护肝滴丸100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.5g，加适量硅藻土，分散均匀，加环己烷回流提取2次，每次20ml、30分钟，滤过，用环己烷适量洗涤容器和滤器，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，用甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm），取续滤液，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
试验结果如表2、图2所示：
表2五味子醇甲含量测定结果
实施例2本发明护肝滴丸的鉴别方法
（1）五味子的鉴别
取护肝滴丸40丸，加甲醇20ml，超声处理20分钟，冷冻2小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加环己烷30ml，超声30分钟，滤过，药渣备用；滤液置水浴上蒸干，残渣加醋酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液。另取五味子乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯（9:1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，结果如图3所示。
（2）猪胆粉的鉴别
取鉴别步骤（1）中获得的环己烷提取后的药渣，挥尽环己烷，加10%氢氧化钠溶液10ml，120℃加热4小时，放冷后用盐酸调节pH值2-3，移至离心管中，离心，弃去上清液，沉淀加甲苯5ml充分搅拌，离心，分取上清液，沉淀再同法操作2次，合并上清液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取猪去氧胆酸，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法试验，吸取上述供试品溶液5μl，对照品溶液3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异辛烷-乙醚-冰醋酸-正丁醇-水（10:5:5:3:1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的斑点或荧光斑点。结果如图4和图5所示。
3.茵陈的鉴别
取护肝滴丸20丸，加丙酮30ml，超声处理30分钟，冷藏12小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用水5-6ml分两次转移至预先处理的D101型大孔树脂柱（柱长15cm，内径1cm）上，用水50ml洗脱，弃去水洗液，再用体积分数为20%的乙醇50ml洗脱，流速为每分钟0.5ml，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取上述对照品溶液1μl、供试品溶液2μl，分别点于同一聚酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品溶液中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。结果如图6所示。
Claims (3)
1.一种中药制剂护肝滴丸的质量检测方法，其特征在于，所述的质量检测方法，按以下步骤进行：一、以柴胡皂苷a为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸处方中是否含有柴胡成分；二、以五味子醇甲为对照品，采用高效液相色谱法测定护肝滴丸中是否含有五味子成分；三、以五味子乙素为对照，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有五味子成分；四、以猪去氧胆酸为对照品，采用薄层色谱法鉴别护肝滴丸中是否含有猪胆粉成分；五、以绿原酸为对照品，采用薄层色法鉴别护肝滴丸中是否含有茵陈成分，即完成护肝滴丸的质量检测。
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述护肝滴丸的有效成份含量的测定步骤如下：
（1）检测柴胡成分
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B；检测过程中在0-50分钟期间，流动相A:B以（25→90：75→10）进行梯度洗脱，在50-55分钟期间，以流动相A:B以（90:10）进行洗脱；检测波长为210nm；理论板数按柴胡皂苷a峰计算不低于10000；
对照品溶液的制备：取柴胡皂苷a对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含柴胡皂苷a0.3-0.5mg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.2-1.0g，加水饱和的正丁醇10-50ml使溶解，转移至分液漏斗中，用氨试液10-30ml分次洗涤容器，加入分液漏斗中，摇匀，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醚10ml分次洗涤，乙醚液离心，弃去乙醚溶液，不溶物及残渣加甲醇使溶解，定量转移至25ml量瓶中，加甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；用0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片的处方配比取除柴胡以外的其他药材，按照护肝滴丸的制法制备成滴丸，按照“供试品溶液的制备”方法制备，作为阴性样品溶液；
测定法：分别吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
合格标准：每丸含柴胡以柴胡皂苷a（C42H68O13）计，不得少于0.05mg；
（2）检测五味子成分
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；体积比为63:37的甲醇:水为流动相；检测波长为250nm；流速为0.8ml/min；柱温25℃；理论板数按五味子醇甲峰计算不低于2000；
对照品溶液的制备：取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含0.1-0.5mg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-100丸，精密称定，水浴熔融后搅拌均匀，放冷，精密称定0.2-0.5g，加适量硅藻土，分散均匀，加环己烷回流提取1-3次，每次20-50ml、30分钟，滤过，用环己烷适量洗涤容器和滤器，洗液与滤液合并，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，转移至10ml量瓶中，用甲醇适量洗涤容器，洗液并入量瓶中，并加甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液；
阴性样品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比取除五味子以外的其他药材，按照护肝滴丸的制法制备成滴丸，按照“供试品溶液的制备”方法制备，作为阴性样品溶液；
测定法：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与阴性供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
合格标准：每丸含五味子以五味子醇甲(C24H32O7)计，不得少于0.038mg。
3.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，所述的检测方法中还包括护肝滴丸的鉴别方法，步骤如下：
（1）五味子的鉴别
供试品溶液的制备：取护肝滴丸20-60丸，加甲醇20ml，超声处理20分钟，冷冻2小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加环己烷10-50ml，超声20-40分钟，滤过，药渣备用，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：另取五味子乙素对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除五味子以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；
取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性供试品溶液各2-5μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以体积比为9:1的甲苯和醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm的紫外光灯下检视；
鉴别护肝滴丸处方中含有五味子的条件为：置254nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰，表明供试品中含有五味子成分；
（2）猪胆粉的鉴别
供试品溶液的制备：取鉴别步骤（1）中获得的环己烷提取后的药渣，挥尽环己烷，加质量分数为10%氢氧化钠溶液10ml，120℃加热4-6小时，放冷后用盐酸调节pH值2-3，移至离心管中，离心，弃去上清液，沉淀加甲苯5ml充分搅拌，离心，分取上清液，沉淀再同法操作2次，合并上清液，置水浴上蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：另取猪去氧胆酸，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；
阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除猪胆粉以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；
吸取上述供试品溶液5-10μl，对照品溶液3-5μl，阴性供试品溶液5-10μl分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为8-12:5:5:3:1的异辛烷、乙醚、冰醋酸、正丁醇和水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以质量分数为10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；
鉴别护肝滴丸处方中含有猪胆粉的条件为：置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；，表明供试品中含有猪胆粉成分；
（3）茵陈的鉴别
供试品溶液的制备：取护肝滴丸10-30丸，加丙酮20-40ml，超声处理3-40分钟，冷藏12小时，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用水5-6ml分两次转移至预先处理的D101型大孔树脂柱（柱长15cm，内径1cm）上，用水50ml洗脱，弃去水洗液，再用体积分数为20%的乙醇40-60ml洗脱，流速为每分钟0.5ml，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣用甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备：取绿原酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.3mg的溶液，作为对照品溶液；
阴性供试品溶液的制备：按《中华人民共和国药典》一部护肝片处方的配比称取除茵陈以外的其他药材，按照护肝滴丸的制备方法制成滴丸，按“供试品溶液的制备”方法制备成阴性供试品溶液；
吸取上述对照品溶液1-3μl、供试品溶液2-5μl与阴性供试品溶液2-5μl分别点于同一聚酰胺薄膜（5cm×7cm）上，以冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干；
鉴别护肝滴丸处方中含有茵陈的条件为：置365nm的紫外光灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰；，表明供试品中含有茵陈成分。
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