CN110923331B - 一种引物对及其在鉴定参环毛蚓中的应用 - Google Patents

一种引物对及其在鉴定参环毛蚓中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明实施例提供了一种引物对，使用所述引物对鉴定参环毛蚓的方法，以及用于鉴定参环毛蚓的试剂盒。采用本发明实施例提供的引物对及方法，能够特异性扩增参环毛蚓中的DNA片段，从而能够用于准确鉴别参环毛蚓。

Description

一种引物对及其在鉴定参环毛蚓中的应用
技术领域
本发明涉及参环毛蚓鉴定技术领域，特别是涉及一种引物对及其在鉴定参环毛蚓中的应用。
背景技术
地龙是常用的动物类药材，据2015年版《中国药典》规定，地龙为钜蚓科动物参环毛蚓Amynthas aspergillum、通俗环毛蚓Pheretimav-ulgarisChen、威廉环毛蚓Pheretimaguillelmi(Michaelsen)或栉盲环毛蚓Pheretimapectinifera Michaelsen的干燥体。参环毛蚓主产于广西，也称为广地龙，由于加工精细讲究，临床疗效确切，在地龙中药材中被公认品质最优，价格最高。地龙中药材基源动物品种较多，市场上地龙药材品种混杂，加之参环毛蚓野生资源日益减少，造成参环毛蚓品种混杂和掺假现象较为普遍。然而目前鉴别参环毛蚓大多依靠个人经验，故而亟需一种能够快速准确鉴定参环毛蚓的方法。
发明内容
本发明的实施例提供了一种引物对，采用所述引物对，以待测样品的总DNA为模板进行PCR扩增，通过检测扩增结果可实现对参环毛蚓的准确鉴定。具体技术方案如下：
本发明第一方面提供了一种引物对，包括正向引物和反向引物，所述正向引物的序列如SEQ ID NO:1所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO:2所示。
本发明第二方面提供了本发明第一方面的引物对在鉴定参环毛蚓中的用途。
本发明第三方面提供了一种利用PCR扩增技术鉴定参环毛蚓的方法，采用本发明第一方面所提供的引物对。
在本发明第三方面的一些实施方式中，利用PCR扩增技术鉴定参环毛蚓的方法包括以下步骤：
1)分别提取待测样品的总DNA；
2)采用所述引物对，分别以各待测样品的总DNA为模板进行PCR扩增；扩增结果为阳性的待测样品为参环毛蚓。
在本发明第三方面的一些实施方式中，每25μL PCR扩增体系中包括：
Figure BDA0002301104930000021
在本发明第三方面的一些实施方式中，步骤2)中，PCR扩增的条件为：
预变性95℃5分钟；变性95℃5s，退火55℃15s，延伸68℃10s，30个循环；完成循环后继续68℃延伸10分钟。
在本发明第三方面的一些实施方式中，采用核酸荧光染料对扩增结果进行检测。
本发明第四方面提供了一种用于鉴定参环毛蚓的试剂盒，所述试剂盒中包本发明第一方面所提供的引物对。
在本发明第四方面的一些实施方式中，所述试剂盒中还包括PCR缓冲液、DEPC水、DNA聚合酶、dNTPs，及操作说明书。
采用本发明实施例提供的引物对，能够特异性扩增参环毛蚓中的DNA片段，从而能够用于准确鉴别参环毛蚓。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为采用本发明引物对对样品编号为1-18的待测样品进行PCR扩增的凝胶电泳结果图；
图2为采用本发明引物对对样品编号为19-25的待测样品进行PCR扩增的凝胶电泳结果图；
图3为采用本发明引物对,以不同浓度的总DNA为模板进行PCR扩增的凝胶电泳结果图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明第一方面提供了一种引物对，包括正向引物和反向引物，其中正向引物的序列为5’-GGCTGTTGAAAAGGGAG-3’(SEQ ID NO:1)，反向引物的序列为5’-GAAGCGACAATAGTAGAAGT-3’(SEQ ID NO:2)。
其中，正向引物命名为dl301F，反向引物命名为dl551R；本发明的引物对是一种利用参环毛蚓的SNP位点设计的特异性引物对，采用所述引物对，利用PCR技术，可以特异性地扩增在所述SNP位点具有某种特异性点突变的DNA片段，本发明中，采用所述引物对扩增的DNA片段长度为251bp，序列如SEQ ID No:3所示：
5’-GGCTGTTGAAAAGGGGGCTGGCACCGGATGAACAGTCTACCCCCCTTTAGCAAGAAACATGGCACATGCAGGTCCCTCTGTAGACCTTGCAATTTTCTCACTACATTTAGCGGGTGCCTCATCAATTTTAGGTGCCATTAACTTTATCACTACAGTAATTAACATGCGATGATCGGGGCTACGCTTAGAACGAATTCCACTATTTGTTTGAGCCGTAGTAATTACTGTAGTACTTCTACTATTGTCGCTTC-3’(SEQ ID No:3)
本发明第二方面提供了本发明第一方面的引物对在鉴定参环毛蚓中的用途。由于所述引物对能够特异性扩增含有参环毛蚓特有的点突变的DNA片段，因此可用于特异性鉴定参环毛蚓。
本发明第三方面提供了一种利用PCR扩增技术鉴定参环毛蚓的方法，采用本发明第一方面所提供的引物对。
在本发明第三方面的一些实施方式中，利用PCR扩增技术鉴定参环毛蚓的方法包括以下步骤：
1)分别提取待测样品的总DNA；
所述待测样品可以理解为有待鉴定的地龙组织样品，例如地龙的肌肉组织，在本发明第四方面的一些实施方式中，提取待测样品的总DNA后，对总DNA的浓度进行测定，例如采用Nanodrop2000微量核酸定量分析仪对总DNA浓度进行测定，并根据吸光度A260/A280，A260/A230的值判断其DNA纯度，此为本领域常用技术手段，本发明在此不做限定。
2)采用所述引物对，分别以各待测样品的总DNA为模板进行PCR扩增；扩增结果为阳性的待测样品为参环毛蚓。
所述“阳性”结果可以理解为扩增结果可检测到，例如采用琼脂糖凝胶电泳检测，可观察的到条带，无条带即为阴性结果；采用核酸荧光染料染色，在紫外光下可观察到荧光即为阳性结果。在本发明第三方面的一些实施方式中，采用核酸荧光染料对扩增结果进行检测。采用核酸荧光染料对扩增结果进行检测具有很高的灵敏度，因此对引物的特异性具有很高的要求，否则可能会出现假阳性结果；正是由于本申请的引物对对参环毛蚓具有高度特异性，因此结合核酸荧光染料检测能够快速准确地鉴定参环毛蚓。所述核酸荧光染料为本领域常用试剂，例如SYBR Green I核酸染料，阳性结果在紫外光下呈绿色，阴性结果为橙色；本领域技术人员也可根据实际情况选择其他核酸荧光染料，本发明在此不做限定。
在本发明第三方面的一些实施方式中，每25μL PCR扩增体系中包括：
Figure BDA0002301104930000041
Figure BDA0002301104930000051
余量以DEPC水补齐，此为本领域常用技术手段，本发明在此不做赘述。
本发明中所采用的DNA聚合酶具有扩增速度快，高保真的特性，例如SpeedSTARTMHS DNA聚合酶，本领域技术人员可根据实际需要具体选择，本发明在此不做限定。
在本发明第三方面的一些实施方式中，步骤2)中，PCR扩增的条件为：
预变性95℃5分钟；变性95℃5s，退火55℃15s，延伸68℃10s，30个循环；完成循环后继续68℃延伸10分钟。
需要说明的是，本发明中所使用的特异性引物dl301F和dl551R由生工生物工程(上海)股份有限公司合成，PCR体系中除模板和引物之外的试剂以及琼脂糖凝胶电泳所需的试剂均市售可得，此为本领域常规试剂，本发明在此不做限定。
本发明第四方面提供了一种用于鉴定参环毛蚓的试剂盒，所述试剂盒中包本发明第一方面所提供的引物对。
在本发明第四方面的一些实施方式中，所述试剂盒中还包括PCR缓冲液、DEPC水、DNA聚合酶、dNTPs，及操作说明书。
实施例
一、试剂
COⅠ通用引物LCO1490和HCO2198以及特异性引物dl301F和dl551R由生工生物工程(上海)股份有限公司合成；SpeedSTARTMHS DNA聚合酶(TaKaRa，批号RR070A)；10×FastBuffer I(TaKaRa公司)；dNTP Mixture(即dNTPs)(TaKaRa公司)；DEPC水(Biosharp)；琼脂糖(Lonza)；无水乙醇(天津市大茂化学试剂厂)；6×Loading Buffer(TaKaRa公司)；10000×SYBR GreenI核酸染料(北京索莱宝科技有限公司)；DuRed核酸染料(北京泛博生物化学有限公司)；D2000 DNA Marker(北京天根生化科技有限公司)；TAE(50×)(合肥志宏生物技术有限公司)；Tks Gflex DNA聚合酶以及2×Gflex PCRBuffer(2×Gflex PCRBuffer中包含dNTPs)(TaKaRa)。
二待测样品物种鉴定
1、采集不同产地的地龙样品25份(即待测样品)，如表1所示。
表1
Figure BDA0002301104930000061
Figure BDA0002301104930000071
2、待测样品肌肉组织提取
剪取各地龙样品(待测样品)肌肉组织约30mg，按照动物组织基因组DNA提取试剂盒(TIANGEN,DP304-03)说明书提取总DNA，采用Nanodrop 2000微量核酸定量分析仪测定DNA浓度约为100ng/μL，并吸光度A260/A280≥1.8，A260/A230＞2.0，-20℃保存备用。
3、待测样品COⅠDNA片段获取
采用COⅠ通用引物LCO1490和HCO2198，分别以各待测样品总DNA为模板，进行PCR扩增，其中，LCO1490核苷酸序列为5’-GGTCAACAAATCATAAAGATATTGG-3’(SEQ ID No:4)；HCO2198核苷酸序列为5’-TAAACTTCAGGGTGACCAAAAAATCA-3’(SEQ ID No:5)。
扩增体系为：
Figure BDA0002301104930000072
扩增条件为：预变性98℃1分钟；变性98℃10s，退火52℃15s，延伸68℃30s，40个循环；完成循环后继续68℃延伸5分钟，获得待测样品COⅠDNA片段，产物长度658bp。
4、通过Sanger测序对待测样品进行鉴定
对引物LCO1490和HCO2198扩增后的产物，进行Sanger测序，测序工作由北京华大基因完成。测序结果在NCBI上进行Blast鉴定物种，鉴定结果见表2。
表2
Figure BDA0002301104930000081
Figure BDA0002301104930000091
5、采用本发明引物对对待测样品进行鉴定
分别以提取的待测样品总DNA片段为模板，采用本申请的引物对对其进行PCR扩增，扩增体系为：
Figure BDA0002301104930000092
Figure BDA0002301104930000101
扩增条件为：预变性95℃5分钟；变性95℃5s，退火55℃15s，延伸68℃10s，30个循环；完成循环后继续68℃延伸10分钟。
反应产物中加入6×Loading buffer 5μL(Takara公司)，混匀后于DURed核酸染料染色的1.5％琼脂糖凝胶电泳检测，经凝胶成像系统成像，结果如图1和图2所示。图1和图2中最左侧条带分别为marker(分子量标记物)，标号1-25分别为样品编号为1-25的待测样品，N1、N2分别为阴性对照(DEPC水)。从图1、图2中可以看出，标号1、2、5、6、7、10、12、13、14、17、18、19、20、22、25所对应的样品可观察到条带，即为阳性结果，说明这些样品编号对应的待测样品为参环毛蚓，此结果与一代测序结果一致，说明本发明的引物对能够准确鉴定参环毛蚓。
实施例三引物灵敏度考察
模板DNA的浓度是特异性PCR扩增中重要的影响因素，模板浓度低则对引物灵敏度要求高。本实施例针对待测样品1，通过改变反应体系中DNA模板的用量，考察本发明的引物对的灵敏度。调整DNA模板用量分别为25ng，5ng，1ng，0.2ng，0.04ng，采用本发明的引物对及扩增体系进行PCR反应。PCR反应条件与实施例二中相同。PCR扩增结果见图3。图3中1-5泳道分别对应模板用量为25ng，5ng，1ng，0.2ng，0.04ng，从结果中可以看出，模板DNA用量在25-0.04ng时均能扩增出条带，证明本发明的引物对可适用于较宽范围的模板用量，0.04ng模板仍能扩增出条带，说明本发明的引物对具有较高的灵敏度。
本说明书中的各个实施例均采用相关的方式描述，各个实施例之间相同相似的部分互相参见即可，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处。尤其，对于系统实施例而言，由于其基本相似于方法实施例，所以描述的比较简单，相关之处参见方法实施例的部分说明即可。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。
序列表
<110> 牡丹江友搏药业有限责任公司
天津中医药大学
<120> 一种引物对及其在鉴定参环毛蚓中的应用
<130> PP192835
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ggctgttgaa aagggag 17
<210> 2
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gaagcgacaa tagtagaagt 20
<210> 3
<211> 251
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ggctgttgaa aagggggctg gcaccggatg aacagtctac ccccctttag caagaaacat 60
ggcacatgca ggtccctctg tagaccttgc aattttctca ctacatttag cgggtgcctc 120
atcaatttta ggtgccatta actttatcac tacagtaatt aacatgcgat gatcggggct 180
acgcttagaa cgaattccac tatttgtttg agccgtagta attactgtag tacttctact 240
attgtcgctt c 251
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ggtcaacaaa tcataaagat attgg 25
<210> 5
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
taaacttcag ggtgaccaaa aaatca 26

Claims (9)

1.一种引物对，其特征在于，包括正向引物和反向引物，所述正向引物的序列如SEQ IDNO:1所示，所述反向引物的序列如SEQ ID NO:2所示。
2.权利要求1所述的引物对在鉴定参环毛蚓中的用途。
3.一种利用PCR扩增技术鉴定参环毛蚓的方法，其特征在于，采用权利要求1所述的引物对。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)分别提取待测样品的总DNA；
2)采用所述引物对，分别以各待测样品的总DNA为模板进行PCR扩增；扩增结果为阳性的待测样品为参环毛蚓。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，每25μL PCR扩增体系中包括：
Figure FDA0002301104920000011
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤2)中，PCR扩增的条件为：
预变性95℃5分钟；变性95℃5s，退火55℃15s，延伸68℃10s，30个循环；完成循环后继续68℃延伸10分钟。
7.如权利要求4所述的方法，其特征在于，采用核酸荧光染料对扩增结果进行检测。
8.一种用于鉴定参环毛蚓的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中包含权利要求1所述的引物对。
9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中还包括PCR缓冲液、DEPC水、DNA聚合酶、dNTPs，及操作说明书。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114277156A (zh) * 2021-12-21 2022-04-05 华润三九医药股份有限公司 一种鉴定广地龙配方颗粒的特异性引物对及其应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103898234A (zh) * 2014-04-21 2014-07-02 牡丹江友搏药业股份有限公司 一种地龙的dna条形码分子鉴定方法
CN105506103A (zh) * 2015-12-28 2016-04-20 天津中医药大学 线粒体基因组扩增的通用引物混合物及其设计和扩增方法
CN109136383A (zh) * 2017-06-26 2019-01-04 临沂市科学技术合作与应用研究院 中药材广地龙dna检测试剂盒及其鉴定方法
CN109182536A (zh) * 2018-09-25 2019-01-11 广东省生物资源应用研究所 一种广地龙的环介导等温扩增检测引物及基于lamp技术鉴定广地龙的方法
CN109295170A (zh) * 2018-09-25 2019-02-01 广东省生物资源应用研究所 一种基于pcr-rflp技术鉴定广地龙的方法
CN110066878A (zh) * 2019-03-20 2019-07-30 中山大学 一种脑心通制剂中地龙药材的dna分子鉴别方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103898234A (zh) * 2014-04-21 2014-07-02 牡丹江友搏药业股份有限公司 一种地龙的dna条形码分子鉴定方法
CN106834467A (zh) * 2014-04-21 2017-06-13 牡丹江友搏药业有限责任公司 一种地龙的dna条形码分子鉴定方法
CN105506103A (zh) * 2015-12-28 2016-04-20 天津中医药大学 线粒体基因组扩增的通用引物混合物及其设计和扩增方法
CN109136383A (zh) * 2017-06-26 2019-01-04 临沂市科学技术合作与应用研究院 中药材广地龙dna检测试剂盒及其鉴定方法
CN109182536A (zh) * 2018-09-25 2019-01-11 广东省生物资源应用研究所 一种广地龙的环介导等温扩增检测引物及基于lamp技术鉴定广地龙的方法
CN109295170A (zh) * 2018-09-25 2019-02-01 广东省生物资源应用研究所 一种基于pcr-rflp技术鉴定广地龙的方法
CN110066878A (zh) * 2019-03-20 2019-07-30 中山大学 一种脑心通制剂中地龙药材的dna分子鉴别方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Ekgachai Jeratthitikul等.DNA barcoding of the Thai species of terrestrial earthworms in the genera Amynthas and Metaphire (Haplotaxida: Megascolecidae).《European Journal of Soil Biology》.2017,第39-47页. *
Qing Huang等.Specific and rapid identification of the Pheretima aspergillum by loop-mediated isothermal amplification.《Biosci Rep》.2019,BSR20181943. *
地龙类药材DNA条形码分子鉴定的研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）医药卫生科技辑》.2015,E057-6. *
田娜 等.地龙的多重位点特异性PCR鉴别.《中国实验方剂学杂志》.2019,第124-129页. *
马梅.中药广地龙高特异性PCR鉴别的研究.《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）医药卫生科技辑》.2018,E057-7. *

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