CN110839482A

CN110839482A - 一种双孢蘑菇颗粒原种的培养基及其制备工艺

Info

Publication number: CN110839482A
Application number: CN201911351055.6A
Authority: CN
Inventors: 曾志恒; 戴建清; 曾辉; 卢园萍; 程翊; 杨雷; 陈美元; 廖剑华
Original assignee: Institute Of Edible Fungi Fujian Academy Of Agricultural Sciences (fujian Mushroom Strain Research Promotion Station)
Current assignee: Institute Of Edible Fungi Fujian Academy Of Agricultural Sciences (fujian Mushroom Strain Research Promotion Station)
Priority date: 2019-12-24
Filing date: 2019-12-24
Publication date: 2020-02-28

Abstract

本发明公开了一种双孢蘑菇颗粒原种的培养基及其制备工艺，属于微生物技术领域。所述双孢蘑菇颗粒原种的培养基包括矿物质颗粒、氮源颗粒、二次发酵粪草颗粒、轻质碳酸钙组成。经科学配制培养基，分装，灭菌，冷却，接种，菌块贴壁培养，均质分布培养等工艺流程，制作出松散均一、萌发点多、菌丝活力强、菌丝含量高的双孢蘑菇颗粒原种。本发明的颗粒原种可作为双孢蘑菇透气袋栽培种工厂化生产专用菌种，能解决双孢蘑菇栽培种质量不稳定、菌龄不一致、易长菌被的问题。

Description

一种双孢蘑菇颗粒原种的培养基及其制备工艺

技术领域

本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种双孢蘑菇颗粒原种的培养基及其制备工艺。

背景技术

双孢蘑菇（Agaricus bisporus (J.E. Lange) Imbach），是世界上栽培最广泛的食用菌之一。我国是双孢蘑菇生产大国，年产量已超过世界总产量的60%，因此，我国每年需要消耗大量的双孢蘑菇菌种。双孢蘑菇菌种的生产，是通过母种、原种、栽培种三级扩繁，从而获得大量蘑菇菌丝用于栽培使用。双孢蘑菇原种作为二级菌种，它的质量为制作优质的双孢蘑菇栽培种起关键作用。随着我国菌种研发及栽培技术逐渐提高，双孢蘑菇制种技术也取得了长足的发展。但目前，由于部分双孢蘑菇栽培种生产单位使用的原种配方和制备工艺不合理，导致双孢蘑菇栽培种质量参差不齐，成为制约我国蘑菇工厂化生产发展的瓶颈之一。本专利提供的双孢蘑菇颗粒原种的培养基及其制备工艺，配方原料来源广泛、易得，制备工艺实用、简便，制备出的颗粒原种具有松散均一、萌发点多、菌丝活力强、菌丝含量高等特点，应用于我国双孢蘑菇透气袋栽培种工厂化生产，能解决双孢蘑菇栽培种质量不稳定、菌龄不一致、易长菌被的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双孢蘑菇颗粒原种配方及其制备工艺，以培养出松散均一、萌发点多、菌丝活力强、菌丝含量高的双孢蘑菇颗粒原种，应用于双孢蘑菇透气袋栽培种工厂化生产。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种双孢蘑菇颗粒原种培养基，干原料按质量百分数之和为100%计，包括以下组分：矿物质颗粒 22%~48%，氮源颗粒20% ~50%，二次发酵粪草颗粒12%~27%，轻质碳酸钙3.5%~12.5%；该培养基C/N 7.5~11.5，含水量50%~60%，pH 7.4~8.0。

上述培养基中所述矿物质颗粒包括硅藻岩、沸石、火山岩、珍珠岩中的一种或几种，颗粒大小在20目~200目范围。

上述培养基中所述氮源颗粒包括菜籽粕、花生粕、麸皮中的一种或几种，颗粒大小在10目~100目范围。

上述培养基中所述二次发酵粪草颗粒，颗粒大小在10目~100目范围。

一种双孢蘑菇颗粒原种制备工艺，包括以下具体步骤：

（1）颗粒培养基的配制：按照双孢蘑菇颗粒培养基配方配料：矿物质颗粒 22%~48%，氮源颗粒20% ~50%，二次发酵粪草颗粒12%~27%，轻质碳酸钙3.5%~12.5%，以上干原料质量分数之和为100%；将配料投入搅拌器混合均匀后，再逐渐注入水，继续搅拌混合均匀，培养基含水量50%~60%，pH7.4~8.0；

（2）分装：将步骤（1）的颗粒培养基装入培养容器，装物量为1/2容器体积，封口；

（3）灭菌：颗粒培养基在126℃/0.15MPa下进行高温高压灭菌处理，灭菌时间为120~150min；

（4）冷却：颗粒培养基灭菌后，使其置于洁净度为1000级的接种室冷却至常温待接种；

（5）接种：将冷却的颗粒培养基置于超净工作台紫外灯消毒30min后，进行无菌操作，每个接入4~5块直径为1.0~1.2cm的双孢蘑菇PDA菌块；使菌块均匀贴壁生长，接种后，封口；

（6）菌块贴壁培养：接种好的颗粒培养基在洁净度为1000级的培养室培养，培养温度为22～24℃，避光，培养10～12d；

（7）均质分布培养：在洁净度为100级的层流罩下，将容器中菌块均匀分散，并充分混匀，再置于洁净度为1000级的培养室培养，培养温度为22～24℃，避光，培养10～12d，完成双孢蘑菇颗粒原种的制备。

本发明的显著优点为：

（1）双孢蘑菇菌丝通过均质分布培养，获得的颗粒原种松散均一，可减小因分散结团菌丝块而对菌丝的伤害，使颗粒原种在栽培种培养基萌发时间缩短至10～12h。

（2）颗粒原种萌发点多，结合工厂化生产双孢蘑菇栽培种的制种器，接种量只需要0.1%，从而降低污染风险，提高制种效率。

（3）由于硅藻岩、沸石、火山岩等颗粒具有大量微孔，从而增强培养基的透气性和持水性，且比表面积大，菌丝在培养基里生长更加充分，使颗粒原种菌丝量大，菌丝活力强。

附图说明：

图1双孢蘑菇颗粒原种制备的接种、培养步骤。其中S5 接种，S6菌块贴壁培养，S7均质分布培养，1表示双孢蘑菇PDA菌片，2表示培养皿，3表示透气膜，4表示贴壁生长的菌块，5表示颗粒培养基，6表示透气袋，7表示均匀分布在颗粒培养基的菌丝。

图2不同C/N对颗粒原种菌丝量的影响。图中不同小写字母表示差异达0.05水平。

具体实施方式

实施例1 透气塑料袋双孢蘑菇颗粒原种的制备

（1）颗粒培养基的配制：按照培养基配方：硅藻岩颗粒（100目~200目）20%，火山岩颗粒（20目~100目）15%，菜籽粕颗粒（10目~100目）30%，麸皮颗粒（10目~100目）6%，二次发酵粪草颗粒（10目~100目）20%，轻质碳酸钙9%，以上干原料质量分数之和为100%，将配料投入搅拌器混合均匀后，再逐渐注入水，继续搅拌混合均匀，培养基含水量55%，pH7.6；

（2）分装：将步骤（1）的颗粒培养基装入透气塑料袋，透气塑料袋长宽厚规格为：480 mm×320 mm×1.0 mm，带有1条40mm×50mm透气膜，装培养基含量为1/2容器体积，封口机封口；

（3）灭菌：颗粒培养基在126℃/0.15MPa下进行高温高压灭菌处理，灭菌时间为150min；

（5）接种：将冷却的颗粒培养基置于超净工作台紫外灯消毒30分钟后，进行无菌操作，每个接入5块直径为1.0~1.2cm的双孢蘑菇PDA菌块；使菌块均匀贴壁生长，接种后，封口机封口；

（6）菌块贴壁培养：接种好的颗粒培养基在洁净度为1000级的培养室培养，培养温度为22℃，避光，培养12d；

（7）均质分布培养：在洁净度为100级的层流罩下，将透气塑料袋中菌块均匀分散，并翻袋充分混匀，再置于洁净度为1000级的培养室培养，培养温度为22℃，避光，培养12d，完成双孢蘑菇颗粒原种的制备，步骤示意图见图1。

实施例2 滤芯硅胶塞三角瓶双孢蘑菇颗粒原种的制备

（1）颗粒培养基的配制：按照培养基配方：硅藻岩颗粒（100目~200目）25%，火山岩颗粒（20目~100目）10%，菜籽粕颗粒（10目~100目）28%，麸皮颗粒（10目~100目）8%，二次发酵粪草颗粒（10目~100目）20%，轻质碳酸钙9%，以上干原料质量分数之和为100%，将配料投入搅拌器混合均匀后，再逐渐注入水，继续搅拌混合均匀，培养基含水量55%，pH7.8；

（2）分装：将步骤（1）的颗粒培养基装入1L容量大小的三角瓶，装培养基含量为1/2容器体积，滤芯硅胶塞封口；

（3）灭菌：颗粒培养基在126℃/0.15MPa下进行高温高压灭菌处理，灭菌时间为120min；

（5）接种：将冷却的颗粒培养基置于超净工作台紫外灯消毒30分钟后，进行无菌操作，每个接入4块直径为1.2cm的双孢蘑菇PDA菌块；使菌块均匀贴壁生长，接种后，滤芯硅胶塞封口；

（6）菌块贴壁培养：接种好的颗粒培养基在洁净度为1000级的培养室培养，培养温度为24℃，避光，培养10d；

（7）均质分布培养：在洁净度为100级的层流罩下，将三角瓶中菌块均匀分散，并充分混匀，再置于洁净度为1000级的培养室培养，培养温度为24℃，避光，培养10d，完成双孢蘑菇颗粒原种的制备。

实施例3 不同C/N对双孢蘑菇颗粒原种菌丝量的影响

按照双孢蘑菇颗粒原种培养基配方，分别配制C/N 为7.5、8.5、9.5、10.5、11.5的培养基，按实施例1颗粒原种制备工艺流程，获得5个不同C/N的双孢蘑菇颗粒原种，并分别测量它们的菌丝量，如图2所示，实验结果表明，颗粒培养基配方C/N越小，菌丝量越大，其中C/N为7.5的颗粒原种菌丝量最大，达332.5mg·g^－1，与C/N为8.5、9.5、10.5、11.5的颗粒原种菌丝量呈显著性差异(P <0.05)；C/N为8.5的颗粒原种菌丝量次之，达250.3 mg·g^－1，与C/N为9.5、10.5、11.5的颗粒原种菌丝量呈显著性差异(P <0.05)， C/N为9.5、10.5、11.5的颗粒原种菌丝量分别为195.9 mg·g^－1、184.2 mg·g^－1、160.7 mg·g^－1，但差异不著性 (P >0.05)。

实施例4 颗粒原种与棉籽壳原种菌丝萌发对比试验

按照双孢蘑菇颗粒原种培养基配方：硅藻岩颗粒（100目~200目）35%，珍珠岩颗粒（20目~100目）10%，菜籽粕颗粒（10目~100目）20%，花生粕颗粒（10目~100目）8%，二次发酵粪草颗粒（10目~100目）20%，轻质碳酸钙7%，以上干原料质量分数之和为100%，配制颗粒原种培养基含水量52%，pH7.4。按实施例1颗粒原种制备工艺流程，获得双孢蘑菇颗粒原种，以棉籽壳原种为对照，接种量为1%，转接经高温灭菌的500g小米基质的透气袋中，翻袋均匀后，置于培养室内24℃培养，观察菌丝萌发情况，记录萌发时间和栽培种满袋时间，由表1可知，颗粒原种菌丝平均萌发时间为11h，比棉籽壳原种菌丝平均萌发时间19h，短8h；颗粒原种扩繁小米栽培种平均满袋时间10.4d，短于棉籽壳原种扩繁小米栽培种平均满袋时间16.4d。

表1 颗粒原种与棉籽壳原种在小米基质中的表现

注：数据为5次重复的平均值±标准误

实施例5颗粒原种与棉籽壳原种扩繁麦粒栽培种对比试验

按照双孢蘑菇颗粒原种培养基配方：硅藻岩颗粒（100目~200目）30%，沸石颗粒（20目~100目）15%，菜籽粕颗粒（10目~100目）20%，麸皮颗粒（10目~100目）10%，二次发酵粪草颗粒（10目~100目）15%，轻质碳酸钙10%，以上干原料质量分数之和为100%，配制颗粒原种培养基含水量55%，pH7.6。按实施例1颗粒原种制备工艺流程，获得双孢蘑菇颗粒原种，以棉籽壳原种为对照，进行透气袋麦粒栽培种工厂化生产，接种量为0.1%，转接经高温灭菌的3500g麦粒基质的透气袋中，翻袋均匀后，置于培养室内24℃培养，观察菌丝萌发情况，记录萌发时间和栽培种满袋时间，由表2可知，颗粒原种菌丝平均萌发时间为10.8h，平均满袋时间14.6d；而棉籽壳原种菌丝平均萌发时间为19.2h，平均满袋时间18.8d。

表2 颗粒原种与棉籽壳原种在麦粒基质中的表现

以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。

Claims

1.一种双孢蘑菇颗粒原种培养基，其特征在于：所述培养基，干原料按质量百分数之和为100%计，包括以下组分：矿物质颗粒 22%~48%，氮源颗粒20% ~50%，二次发酵粪草颗粒12%~27%，轻质碳酸钙3.5%~12.5%，该培养基C/N 7.5~11.5，含水量50%~60%，pH 7.4~8.0。

2.根据权利要求1所述的一种双孢蘑菇颗粒原种培养基，其特征在于：所述矿物质颗粒包括硅藻岩、沸石、火山岩、珍珠岩中的一种或几种，颗粒大小在20目~200目范围。

3.根据权利要求1所述的一种双孢蘑菇颗粒原种培养基，其特征在于：所述氮源颗粒包括菜籽粕、花生粕、麸皮中的一种或几种，颗粒大小在10目~100目范围。

4.根据权利要求1所述的一种双孢蘑菇颗粒原种培养基，其特征在于：所述二次发酵粪草颗粒，颗粒大小在10目~100目范围。

5.一种双孢蘑菇颗粒原种的制备工艺，其特征在于，包括以下具体步骤：

（1）颗粒培养基的配制：根据权利要求1所述的培养基配方干原料质量分数，将配料投入搅拌器混合均匀后，再逐渐注入水，继续搅拌混合均匀；

6.根据权利要求5所述的一种双孢蘑菇颗粒原种的制备工艺，其特征在于：所述培养容器是透气塑料袋、滤芯硅胶塞三角瓶、搅拌功能的菌种罐之一。