CN1108378C - 一种超氧化物歧化酶的生产方法 - Google Patents
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Abstract
一种超氧化物歧化酶的生产方法，其工艺过程为将动物血抗凝剂抗凝，以大容量连续分离机分离血浆和血球，以生理盐水清洗血球，在血球中加入血球的3-7倍量重蒸水，匀浆，以分子膜超滤截流32000道尔顿，二次截流30000以上道尔顿，由此收集到30000-32000道尔顿分子量，同时浓缩；通过径向蛋白层析柱纯化SOD精品，再经分子膜除菌、脱盐、分装，冷冻干燥而成。该方法为物理生产方法，实现了无化学反应剂生产，产品无毒、适合人用。且该方法工艺简单、加工能力大、成本低、产品纯、达到电泳纯级。
Description
本发明涉及一种超氧化物歧化酶(SOD)的工业生产方法。
超氧化物歧化酶(SOD)制剂是近年来我国广泛研究开发的一种氧自由基清除剂，在医学上有抗缺氧、增强机体免疫，并有治疗糖尿病的作用。在食品及化妆品领域也有广泛应用。SOD制剂的制备方法很多，与本发明相关的方法主要由(1)热变性处理，(2)中孔纤维超滤，(3)层析柱吸附处理等步骤组成，此类方法存在如下缺陷：其一、是在热变性处理过程中，由于溶液中大量杂蛋白被凝固，同时也有相当数量的SOD分子被卷入凝固团中沉淀，造成SOD分子损失；其二，是用中孔纤维超滤截流SOD6000-20000道尔顿的分子量，与人体有生理活性的SOD31200道尔顿分子量不相适应，它不能作为临床用药；其三、在层析步骤所配用的锂盐、硫酸铜、氯化铜、磷酸铜和醋酸铜都能与SOD起化学反应，增加了SOD的毒性；其四、生产周期长，一般需24小时以上才能得到产品，生产规模小，不能直接放大生产。
本发明的目的是要提供一种纯物理方法生产，不添加化学反应剂，产品无毒性，品质高适合人体使用，并且工艺简单、科学，加工处理能力大，成本低，得率高的超氧化物歧化酶的生产方法。
本发明的技术方案是：其特点在于该方法的工艺过程是将动物血液加抗凝剂抗凝，以大容量连续流分离机分离血浆和血球，然后以生理盐水清洗血球，在血球中加入血球的3-7倍量重蒸水，匀浆；以分子膜超滤截流32000道尔顿，二次截流30000以上道尔顿，由此收集到30000-32000道尔顿分子量，同时浓缩，通过径向蛋白层析柱纯化SOD精品，再经分子膜除菌和脱盐，然后分装、冷冻干燥而成。上述超滤工艺是在超滤柱内，用高速循环流动方式来完成。
本发明的优点及效果是：首先由于本方法为物理生产方法，实现了无化学反应剂生产，因而所得产品无毒性，完全适合人体使用，达到了医用标准；同时，由于本方法收集的分子量为30000-32000道尔顿的SOD与人体有生理活性的SOD31200道尔顿分子量相应适应，所以可以作为临床用药；其次，该方法工艺简单、处理能力大，能在几小时内完成1000Kg以上的原血加工，而且还可以线性放大生产规模；再次，该方法在生产过程中基本无浪费，所以生产成本亦低。最后，该方法生产出的产品纯，可达到电泳纯级产品。
实施例1取10升牦牛全血，加入10％的抗凝剂柠檬酸钠，连续分离得红血球，以1∶1加生理盐水5.5升洗血球，再加33升重蒸水匀浆30分钟，用分子膜超滤柱超滤截流32000的分子量，换膜再超滤，截流30000以上分子量，浓缩得浓缩液约3.3升，酶活(连苯三酚自氧化法)7000单位/毫升，再经径向蛋白层析柱纯化后，酶的比活可达10500单位/毫克蛋白，再经分子膜除菌脱盐、分装、冷冻干燥。
实施例2取1吨牦牛全血，加入10％的抗凝剂枸橼酸钠，连续分离得红血球，以1∶1加生理盐水550公斤洗血球，再加3300升重蒸水匀浆30分钟，用分子膜超滤柱超滤截流32000的分子量，换膜再超滤截流30000道尔顿以上分子量，浓缩，得浓缩液约330升，酶活(连苯三酚自氧化法)7000单位/毫升，再经径向蛋白层析柱纯化后，酶的比活可达10500单位/毫克蛋白；经分子膜除菌、脱盐、分装、冷冻干燥而成。产品达电泳级纯。
实施例3取猪全血10公斤，加入10％抗凝剂柠檬酸钠，连续分离得红血球，以1∶1加生理盐水4.5公斤洗血球，再加27公斤重蒸水匀浆，用分子膜超滤柱超滤截流32000的分子量，换膜再超滤截流30000道尔顿以上分子量，浓缩，得浓缩液约3.3公斤，酶活(连苯三酚自氧化法)15000单位/毫升，再经径向蛋白层析柱纯化后，酶的比活可达17000单位/毫克蛋白，经分子膜除菌脱盐、分装、冷冻干燥而成。
Claims (2)
1.一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于其工艺过程是：将动物血液加抗凝剂抗凝，以大容量连续流分离机分离血浆和血球，然后以生理盐水清洗血球，在血球中加入血球的3-7倍量重蒸水，匀浆；以分子膜超滤截流32000道尔顿，二次截流30000以上道尔顿，由此收集到30000-32000道尔顿分子量，同时浓缩；通过径向蛋白层析柱纯化SOD精品，再经分子膜除菌和脱盐，然后分装、冷冻干燥而成。
2.如权利要求1所述的一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于所述的超滤工艺是在超滤柱内，用高速循环流动方式来完成。
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