CN101886062A - 猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法 - Google Patents
猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101886062A CN101886062A CN2009100265745A CN200910026574A CN101886062A CN 101886062 A CN101886062 A CN 101886062A CN 2009100265745 A CN2009100265745 A CN 2009100265745A CN 200910026574 A CN200910026574 A CN 200910026574A CN 101886062 A CN101886062 A CN 101886062A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pig blood
- superoxide dismutase
- scale
- production
- red corpuscle
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法，是用新鲜猪血为原料生产超氧化物歧化酶，具体的工艺过程为，将猪血加入抗凝剂柠檬酸钠溶液后，以大容量连续分离机分离出红细胞、红细胞冷藏、搅拌匀浆、热变性、二级膜分离截流、柱层析、洗脱最后冷冻干燥得超氧化物歧化酶成品。工艺流程的特点，每一过程都采用能够连续化生产的分离技术，使整个生产过程能够规模化；工艺过程不使用有机溶剂，使环境污染降低到最低限度，副产品可进一步加工精深加工。得到的成品其比活力可达到3500-10000U/mg。本发明操作简单，猪血原料充足的地区适合于工业化规模生产。
Description
技术领域
本发明属于生物化工领域，特别是一种超氧化物歧化酶的提取方法。
背景技术
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)简称SOD是广泛存在于好氧微生物和动植物中的金属酶。目前在厌氧生物体内也发现SOD的存在。它催化超氧化物阴离子自由基发生歧化反应，SOD是生物体内主要的氧自由基清除剂，可催化超氧阴离子自由基(O2 -)发生歧化反应：2O2 -+2H+→H2O2+O2
SOD在维持生物体内超氧阴离子自由基产生与消除的动态平衡中起重要作用，它可以防御氧毒性，增强机体抗辐射损伤能力，还可以预防衰老，以及在一些疾病如肿瘤、炎症和自身免疫的治疗中有良好的疗效，日前SOD已进入化妆品、食品和医药等领域。
从猪血中制备SOD的方法比较多，与本发明相关的方法主要有：(1)氯仿-乙醇沉淀除去血红蛋白；(2)丙酮沉淀浓缩收集粗酶；(3)一次膜分离；(4)层析柱吸附洗脱等步骤组成。此类方法存在下列缺陷：第一，氯仿-乙醇沉淀除去血红蛋白，可以得到粗酶液，但血红蛋白被严重污染，无法综合利用，造成资源浪费，同时有机溶剂成本较高，无形中增加了生产的成本；第二，用丙酮沉淀浓缩可得粗酶液，但同时丙酮对酶的活力破坏比较大，会使产品酶活力降低；每三，只用一次膜过滤截流无法对将蛋白质的分子量控制在一个较窄的范围之内；第四，生产工艺复杂，周期较长，规模小，不能直接放大规模化生产，这是此类技术最突出的问题。
发明内容
本发明的目的就是要解决以上问题，提供一种猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法，建立起一种规模化的猪血超氧化物歧化酶的最优化生产技术，尽可能少用或不用各种有机溶剂，以减少有机溶剂对酶稳定性的破坏和带来的毒性，并且使工艺简单易操作，成本低，生产处理量大，使猪血超氧化物歧化酶的生产技术达到工业化生产水平，使最后得到的酶达到电泳纯。
本发明的技术方案是这样得以实现的：一种猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法，其特点是：将猪血加入抗凝剂柠檬酸钠溶液后，以大容量连续分离机-蝶式离心机分离血浆和红细胞，红细胞可保存于4℃的冷库中，时间为5天以内；在红细胞中加入2倍体积的重蒸水，搅拌匀浆；在匀浆液中加入2％的葡萄糖作为保护剂，60℃热变性20分钟；以分子膜进行超滤，一级超滤截流分子量36000道尔顿，二级截流分子量30000道尔顿，并对二级截流液进行浓缩；酶液经层析柱纯化，最后冷冻干燥得超氧化物歧化酶纯品。
本发明的有益效果是：第一，本规模化生产工艺没有使用有机溶剂，彻底革除乙醇和氯仿等有机溶剂，简化工艺过程，降低生产成本；第二，对环境的污染很小，主要原因是没有使用机溶剂；第二，副产品可进一步综合利用，如分离出来的血红蛋白没有受到污染，可进一步利用，如果用有机溶剂分离血红蛋白，则没法进一步加工；第四，膜过滤时采用二次截流，可以减化生产工艺，同时工艺的连续操作性更强；第五，该工艺简单，处理量大，能够在几小时内处理500Kg的猪血，并使生产周期仅为36小时；第六，机器的清洗难度小；第七，生产过程紧凑，无太多浪费，成本低。生产的酶比活达到3500-10000U/mg。
具体实施方式
实施例1
取10Kg猪血，加入7％的柠檬酸钠溶液，用蝶式离心机连续分离得到红细胞，并用10Kg的生理盐水洗涤后，加入20L重蒸水搅拌30分钟，在匀浆液中加入2％的葡萄糖作为保护剂量，60℃热变性20分钟，滤液用超滤柱进行分离，一级超滤截流分子量36000道尔顿，二级截流分子量30000道尔顿，将二级截流液浓缩，再经蛋白层析柱纯化后，用连苯三酚检测法检测得酶的比活力为8600U/mg蛋白，透析脱盐后，进行冷冻干燥得成品。
实施例2
取500Kg猪血，加入7％的柠檬酸钠溶液，用蝶式离心机连续分离得到红细胞，并用10Kg的生理盐水洗涤后，加入20L重蒸水搅拌30分钟，在匀浆液中加入2％的葡萄糖作为保护剂量，60℃热变性20分钟，滤液用超滤柱进行分离，一级超滤截流分子量36000道尔顿，二级截流分子量30000道尔顿，将二级截流液浓缩，再经蛋白层析柱纯化后，用连苯三酚法检测得酶的比活力为7400U/mg蛋白，透析脱盐后，进行冷冻干燥得成品。
Claims (1)
1.一种猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法，其特征在于：将猪血加入抗凝剂柠檬酸钠溶液后，以大容量连续分离机-蝶式离心机分离血浆和红细胞，红细胞可保存于4℃的冷库中，时间为5天以内；在红细胞中加入2倍体积的重蒸水，搅拌匀浆；在匀浆液中加入2％的葡萄糖作为保护剂，60℃热变性20分钟；以分子膜进行超滤，一级超滤截流分子量36000道尔顿，二级截流分子量30000道尔顿，并对二级截流液进行浓缩；酶液经层析柱纯化，最后冷冻干燥得纯品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009100265745A CN101886062A (zh) | 2009-05-13 | 2009-05-13 | 猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009100265745A CN101886062A (zh) | 2009-05-13 | 2009-05-13 | 猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101886062A true CN101886062A (zh) | 2010-11-17 |
Family
ID=43072155
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009100265745A Pending CN101886062A (zh) | 2009-05-13 | 2009-05-13 | 猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101886062A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102250851A (zh) * | 2011-08-10 | 2011-11-23 | 天津宝迪农业科技股份有限公司 | 从动物血球液中提取超氧化物歧化酶sod的新工艺 |
| AU2013290463B2 (en) * | 2012-07-16 | 2016-08-11 | Clemson University Research Foundation | Novel food and feed antioxidants and preservatives based on antioxidant enzymes extracted from animal blood |
-
2009
- 2009-05-13 CN CN2009100265745A patent/CN101886062A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102250851A (zh) * | 2011-08-10 | 2011-11-23 | 天津宝迪农业科技股份有限公司 | 从动物血球液中提取超氧化物歧化酶sod的新工艺 |
| AU2013290463B2 (en) * | 2012-07-16 | 2016-08-11 | Clemson University Research Foundation | Novel food and feed antioxidants and preservatives based on antioxidant enzymes extracted from animal blood |
| EP2877043B1 (en) * | 2012-07-16 | 2018-12-05 | Clemson University Research Foundation | Use of novel food and feed antioxidants as preservatives in food and feed based on antioxidant enzymes extracted from animal blood |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102382177B (zh) | 恩拉霉素的提取分离和纯化方法 | |
| CN101182495B (zh) | 以猪小肠为原料联产生产碱性磷酸酶和肝素钠的联产工艺 | |
| CN106831895A (zh) | 一种纯化n‑乙酰氨基葡萄糖的方法 | |
| CN101544999A (zh) | 高纯度低分子量肝素钠的生产纯化方法 | |
| CN102251003A (zh) | 海洋生物源降压肽的制备工艺 | |
| CN102181411A (zh) | 一种从猪血红细胞中提取超氧化物歧化酶sod的方法 | |
| CN101886062A (zh) | 猪血超氧化物歧化酶的规模化提取方法 | |
| CN107056966A (zh) | 一种肝素钠的精制方法 | |
| CN105837703A (zh) | 一种提取螺旋藻多糖的方法 | |
| CN104387459A (zh) | 一种细菌源抗菌肽的工业化分离纯化方法 | |
| CN110256597B (zh) | 一种膜法降低灵芝多糖中重金属残留的方法 | |
| CN104403026A (zh) | 从动物肺脏中分离硫酸乙酰肝素的方法 | |
| CN102337252A (zh) | 一种从猪血中提取超氧化物歧化酶sod的方法 | |
| CN102617748B (zh) | 一种普鲁兰多糖的纯化方法 | |
| CN103173423A (zh) | 从玉米中高产率提取超氧化物歧化酶的方法 | |
| CN101367883A (zh) | 一种从发酵液中提取灵芝多糖的方法 | |
| CN102628036A (zh) | 一种生产超氧化物歧化酶sod的除杂纯化新工艺 | |
| CN106011091A (zh) | 一种从三角帆蚌的蚌肉中提取纯化sod冻干粉的方法 | |
| CN102584611B (zh) | 一种药用级缬氨酸的生产方法 | |
| CN102250851A (zh) | 从动物血球液中提取超氧化物歧化酶sod的新工艺 | |
| CN1108378C (zh) | 一种超氧化物歧化酶的生产方法 | |
| CN115737550A (zh) | 一种灵孢多糖注射液的制备方法 | |
| CN107011464A (zh) | 一种高效的粗品肝素钠生产工艺 | |
| CN102863433A (zh) | 莫匹罗星的一种纯化方法 | |
| CN107164340B (zh) | 一种鲜猪血中超氧化物歧化酶的提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20101117 |