CN102628036A - 一种生产超氧化物歧化酶sod的除杂纯化新工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开超氧化物歧化酶SOD除杂纯化新工艺，主要步骤包括动物新鲜血液经抗凝处理后，离心分离得到血球液，经溶血，热变性，超滤浓缩，乙醇分级沉淀得SOD粗品。粗品再经阴离子交换树脂、分子筛层析纯化后冷冻干燥得SOD精品。本方法没有使用任何对人体有害的有机试剂，不仅有效地避免了SOD产品中有毒、有害有机试剂的残留，提高了产品的安全性和使用范围，而且降低了生产成本。本发明方法操作工序简单，生产成本低廉，适于用工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于生物工程领域，特别涉及一种超氧化物歧化酶SOD除杂纯化新工艺，本工艺方法操作简单易行，适用于大规模生产。
背景技术
超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase)简称SOD，是生物体内重要的抗氧化酶，广泛存在于微生物和动植物中。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。由于现代生活压力，环境污染，各种辐射和超量运动都会造成氧自由基大量的形成，现代医学已经证实：由自由基引发的疾病多达一百多种，严重地威胁着我们的健康与长寿。目前，SOD已广泛应用于医药、食品、保健品、化妆品等行业，市场前景十分广阔。
目前，从动物血球液中提取超氧化物歧化酶的方法主要是收集新鲜血，抗凝，溶血，氯仿乙醇沉淀血红蛋白，丙酮沉淀，再经过离子交换层析和分子筛层析进行纯化。该方法存在下列缺陷：第一，氯仿-乙醇沉淀去除血红蛋白，可以得到粗酶液，但血红蛋白被严重污染，无法综合利用，造成资源浪费，同时有机溶剂成本较高；第二，用丙酮沉淀可以得到SOD粗酶液，但丙酮不仅对SOD的活力破坏比较大，还会残留在SOD终产品中，影响产品的安全性。
发明内容
本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的不足，而提供一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，该工艺简单、成本低廉、高安全性，适合于工业化生产的新工艺。
如上构思，本发明的技术方案是：一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，包括以下几个步骤：
(1)在新鲜的动物血液中加入食品级柠檬酸钠做抗凝处理，添加量为3.5-5g/Kg动物血，离心收集红细胞，然后加入红细胞体积1-3倍的去离子水，不断搅拌，使红细胞破碎，得溶血液；
(2)向溶血液中加入单价金属盐，至单价金属盐终浓度为0.07M～4M，调节PH值到4.0-7.0，加热至55-75℃，保温反应30-100min，离心取上清，即得超氧化物歧化酶粗提液；
(3)在超氧化物歧化酶粗提液中加入可溶性铜盐，至铜离子终浓度为3mM～16mM，加热至55～80℃，保温反应15～60min后，离心去渣，上清液用中空纤维超滤装置进行超滤浓缩得超氧化物歧化酶浓缩液；
(4)在超氧化物歧化酶浓缩液中，加入预冷乙醇进行沉淀，离心取沉淀，沉淀用去离子水溶解后，离心去不溶物，上清液通过阴离子交换树脂层析柱和分子筛进行纯化，冷冻干燥，制得超氧化物歧化酶精品冻干粉；
本发明使用的中空纤维超滤装置选择截留分子量为4K-15K的膜组件，保持回流压0.04-0.1MPa。
本发明中的预冷乙醇沉淀是分两步进行的，首先加入浓缩液体积0.4-1倍体积的预冷乙醇，离心取上清；在上清液中继续加入预冷乙醇，两次加入的乙醇总体积为原浓缩液体积的1.1～2.0倍。
本发明中使用的单价金属盐采用氯化钠。
本发明中使用的可溶性铜盐采用氯化铜。
本发明的优点是：
(1)生产中没有使用氯仿、丙酮等有毒有害溶剂，大大降低了生产成本，改善了工作环境，减少了对操作人员的毒害，同时提高了产品的安全性；
(2)反应中得到的血红蛋白沉淀没有受到污染，可以进一步利用，加工成血粉等产品；
(3)引入超滤浓缩装置，既能有效的对SOD进行纯化，又极大的压缩了浓缩液的体积，使得乙醇的用量减少，操作起来方便快捷，适合大规模工业化生产。
具体实施方式
一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，包括以下几个步骤：
(1)采集新鲜猪血175L加入7L浓度为10％的柠檬酸钠抗凝，用管式离心机连续分离得70L血球和112L血浆。血浆经喷雾干燥成血浆蛋白粉，血球液泵入反应罐中，同时加入90L的去离子水搅拌70min使血球破碎，制得溶血液160L；
(2)继续搅拌下，向溶血液中加入氯化钠4.86Kg，然后用10％的盐酸调节PH值至6.0，加热到62℃并保温40min，迅速水冷至室温，管式离心机离心收集上清液得SOD粗提液120L；
(3)在SOD粗提液中加入氯化铜160.5g，加热至70℃，保温反应30min后，迅速水冷至室温，离心去渣得SOD粗提液100L，将上清液用截留分子量为6K的中空纤维膜超滤浓缩至1L；
(4)在浓缩液在边搅拌边加入0.5L的经预冷乙醇，离心收集上清液；继续在上清液中边搅拌边加入0.7L的预冷乙醇，离心去沉淀；
(6)沉淀用200mL的pH6.8的2.5mM的磷酸缓冲液溶解，溶解液上DEAE阴离子交换层析柱进行纯化，上样后用pH6.8的5mM的磷酸缓冲液洗脱，收集SOD活力峰，得200mLSOD溶液。SOD溶液上Sephadex G25柱层析脱盐，用蒸馏水洗脱，收集SOD活力峰，得200mLSOD液，冷冻干燥得浅蓝色的SOD精品冻干粉3.86g，比活力6100U/mg，密封包装于-20℃冷冻保存。
以下通过具体实施例对本发明进行阐释，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚，以下实施例涉及到的SOD活性检测使用GB/T 5009.171-2003第一法。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但是这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，包括以下几个步骤：
(1)在新鲜的动物血液中加入食品级柠檬酸钠做抗凝处理，添加量为3.5-5g/Kg动物血，离心收集红细胞，然后加入红细胞体积1-3倍的去离子水，不断搅拌，使红细胞破碎，得溶血液；
(2)向溶血液中加入单价金属盐，至单价金属盐终浓度为0.07M～4M，调节PH值到4.0-7.0，加热至55-75℃，保温反应30-100min，离心取上清，即得超氧化物歧化酶粗提液；
(3)在超氧化物歧化酶粗提液中加入可溶性铜盐，至铜离子终浓度为3mM～16mM，加热至55～80℃，保温反应15～60min后，离心去渣，上清液用中空纤维超滤装置进行超滤浓缩得超氧化物歧化酶浓缩液；
(4)在超氧化物歧化酶浓缩液中，加入预冷乙醇进行沉淀，离心取沉淀，沉淀用去离子水溶解后，离心去不溶物，上清液通过阴离子交换树脂层析柱和分子筛进行纯化，冷冻干燥，制得超氧化物歧化酶精品冻干粉；
2.根据权利要求1所述的一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，其特征在于：上述中空纤维超滤装置选择截留分子量为4K-15K的膜组件，保持回流压0.04-0.1MPa。
3.根据权利要求1所述的一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，其特征在于：上述预冷乙醇沉淀是分两步进行的，首先加入浓缩液体积0.4-1倍体积的预冷乙醇，离心取上清；在上清液中继续加入预冷乙醇，两次加入的乙醇总体积为原浓缩液体积的1.1～2.0倍。
4.根据权利要求1所述的一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，其特征在于：上述单价金属盐采用氯化钠。
5.根据权利要求1所述的一种生产超氧化物歧化酶SOD的除杂纯化新工艺，其特征在于：上述可溶性铜盐采用氯化铜。
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Cited By (4)
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|---|---|---|---|---|
| CN103436500A (zh) * | 2013-08-22 | 2013-12-11 | 慈溪市迈康生物科技有限公司 | 一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法 |
| CN103627683A (zh) * | 2012-08-30 | 2014-03-12 | 山东博奥克生物科技有限公司 | 一种重组人源超氧化物歧化酶的生产方法 |
| CN106399271A (zh) * | 2016-11-01 | 2017-02-15 | 湖北宝迪农业科技有限公司 | 从猪血中提取超氧化物歧化酶的方法及该超氧化物歧化酶 |
| CN117126821A (zh) * | 2023-08-31 | 2023-11-28 | 广州蕊特生物科技有限公司 | 一种牛血Cu-Zn超氧化物歧化酶的分离提取方法 |
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103627683A (zh) * | 2012-08-30 | 2014-03-12 | 山东博奥克生物科技有限公司 | 一种重组人源超氧化物歧化酶的生产方法 |
| CN103436500A (zh) * | 2013-08-22 | 2013-12-11 | 慈溪市迈康生物科技有限公司 | 一种从动物血液中提取超氧化物歧化酶的方法 |
| CN106399271A (zh) * | 2016-11-01 | 2017-02-15 | 湖北宝迪农业科技有限公司 | 从猪血中提取超氧化物歧化酶的方法及该超氧化物歧化酶 |
| CN106399271B (zh) * | 2016-11-01 | 2020-02-18 | 湖北宝迪农业科技有限公司 | 从猪血中提取超氧化物歧化酶的方法及该超氧化物歧化酶 |
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