CN110776582A - 一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种绣球菌中β‑葡聚糖的提取方法，该方法通过物理研磨和破壁酶剂的添加来实现绣球菌的前处理，有效破坏细胞壁，使内容物溶出，提高了葡聚糖的提取率；通过高压微波处理后，进一步的实现葡聚糖与细胞组织的分离，进而实现游离，最终被提取获得；通过除杂酶剂和硫酸铵的添加可以有效除去淀粉、蛋白以及其他多糖，从而大大的提高了葡聚糖的纯度。
Description
技术领域
本发明涉及葡聚糖提取技术领域，具体涉及一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法。
背景技术
绣球菌，又名绣球蕈、对花菌、干巴菌、椰菜菌、蜂窝菌等，拉丁学名为Sparassiscrispa，是非褶孔菌目、绣球菌科、绣球菌属。子实体中等至大形，肉质，由一个粗壮的柄上发出许多分枝，枝端形成无数曲折的瓣片，形似巨大的绣球而得名。因其具有超高的激活免疫能力，在日本有“梦幻神奇菇”之称。普通蘑菇生长在阴面，而绣球菇每天需要10h以上的照射，是世界上唯一的“阳光蘑菇”。在欧美、日本极为畅销，价格昂贵。绣球菌还因为含有大量的β葡聚糖，抗氧化物质，维生素C、维生素E，做为美容产品的有效成分，对祛除黑色素沉淀等肌肤问题具有良好的功效。
绣球菌含有大量β葡聚糖 绣球菌的最大特点是含有大量β葡聚糖。根据日本食品分析中心的分析，每100 g绣球菌含有β-葡聚糖高达43.6g，比灵芝和姬松茸高出3~4倍。可以说，绣球菌所含的β-葡聚糖为菇类之最。葡聚糖是由葡萄糖单体聚合而成的多糖，分为α型和β型，α型葡聚糖如淀粉等，是机体能量的主要来源，不具备生物活性。β型葡聚糖是一种生物活性物质，经医学研究证实，具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗氧化、抗辐射、降血糖、降血脂、保肝等多种功能。研究还发现，大多数具有抗肿瘤活性的多糖都是带有β（1-6）糖苷键分支的β（1-3）D葡聚糖。有研究证明，来自真菌的β（1-3）D葡聚糖通常具有抑制的肿瘤作用。绣球菌中的葡聚糖70%以上是β（1-3）D葡聚糖，具有良好的抗肿瘤、免疫调节以及提高造血功能等功效。
所以，目前对绣球菌中葡聚糖的开发越来越受到关注和研究，现阶段行业内还是大多采用酸提、碱提、酸碱混合提的方法，进行绣球菌中葡聚糖的提取提纯，但是这些方法在实际操作中引入的大多为强酸、强碱，不仅无法保证葡聚糖的提取纯度和收率，而且还会出现一定的试剂残留，影响葡聚糖后序保健品和食品的质量安全。
发明内容
本发明的目的在于，针对上述现有技术的不足，提出一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，可以高纯度、高收率的获得具有一定质量保证的葡聚糖。
本发明提出一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，包括以下步骤：
S1：将绣球菌进行干燥、粉碎、研磨处理，得到超微粉；
S2：向超微粉中加入破壁酶剂，超声酶解后，得到游离液体；
S3：将游离液体加入至高压微波罐中，进行强压微波提取，过滤后，得到提取液；
S4：向提取液中加入除杂酶剂，搅拌后静置，再离心处理，得到上清液；
S5：向上清液中加入硫酸铵，待其溶解后，再加入乙醇，离心处理，收集沉淀物，得到粗提物；
S6：将粗提物溶解，干燥，即得到β-葡聚糖。
进一步地，S1中的超微粉需要过80-100目的筛网。
进一步地，S2中所述破壁酶剂包括纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶和果胶酶的加入量分别为1200-2000U/g和800-1300U/g。
进一步地，S3中的强压微波提取的微波功率为900-960W，压力为0.8-0.9MPa，时间为4-6min。
进一步地，S4中的除杂酶剂包括淀粉酶和蛋白酶，所述淀粉酶和蛋白酶的加入量分别为200-600U/g和3000-5000U/g。
更进一步地，所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
进一步地，S4中的除杂酶剂的加入方法为：先加入淀粉酶，酶解反应20-40min；再加入蛋白酶，酶解10-30min。
进一步地，S5中加入硫酸铵时需要不断的搅拌，并在沸水浴中进行。
进一步地，S5中加入上清液中的硫酸铵质量浓度为10-16g/L，乙醇的体积浓度为45-65ml/L。
进一步地，S6中采用真空冷冻干燥进行提纯收集。
本发明的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，该方法通过物理研磨和破壁酶剂的添加来实现绣球菌的前处理，有效破坏细胞壁，使内容物溶出，提高了葡聚糖的提取率；通过高压微波处理后，进一步的实现葡聚糖与细胞组织的分离，进而实现游离，最终被提取获得；通过除杂酶剂和硫酸铵的添加可以有效除去淀粉、蛋白以及其他多糖，从而大大的提高了葡聚糖的纯度。
具体实施方式
为下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外，本领域技术人员对本发明所做的各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所要求保护的范围内。本发明实施例中的配比均为以重量计。
实施例1
S1：将绣球菌进行干燥、粉碎、研磨处理，得到超微粉，超微粉需要过80目的筛网；
S2：向超微粉中加入破壁酶剂，所述纤维素酶和果胶酶的加入量分别为1200U/g和800U/g，超声酶解后，得到游离液体；
S3：将游离液体加入至高压微波罐中，进行强压微波提取，强压微波提取的微波功率为900W，压力为0.8MPa，时间为4min，过滤后，得到提取液；
S4：向提取液中先加入淀粉酶，酶解反应20min；再加入蛋白酶，酶解10min，所述淀粉酶和木瓜蛋白酶的加入量分别为200U/g和3000U/g，搅拌后静置，再离心处理，得到上清液；
S5：向上清液中加入硫酸铵，加入硫酸铵时需要不断的搅拌，并在沸水浴中进行，待其溶解后，再加入乙醇，加入上清液中的硫酸铵质量浓度为10g/L，乙醇的体积浓度为45ml/L，离心处理，收集沉淀物，得到粗提物；
S6：将粗提物溶解，采用真空冷冻干燥，即得到β-葡聚糖。
实施例2
S1：将绣球菌进行干燥、粉碎、研磨处理，得到超微粉，超微粉需要过100目的筛网；
S2：向超微粉中加入破壁酶剂，所述纤维素酶和果胶酶的加入量分别为1600U/g和1000U/g，超声酶解后，得到游离液体；
S3：将游离液体加入至高压微波罐中，进行强压微波提取，强压微波提取的微波功率为930W，压力为0.9MPa，时间为5min，过滤后，得到提取液；
S4：向提取液中先加入淀粉酶，酶解反应30min；再加入蛋白酶，酶解20min，所述淀粉酶和木瓜蛋白酶的加入量分别为400U/g和4000U/g，搅拌后静置，再离心处理，得到上清液；
S5：向上清液中加入硫酸铵，加入硫酸铵时需要不断的搅拌，并在沸水浴中进行，待其溶解后，再加入乙醇，加入上清液中的硫酸铵质量浓度为13g/L，乙醇的体积浓度为55ml/L，离心处理，收集沉淀物，得到粗提物；
S6：将粗提物溶解，采用真空冷冻干燥，即得到β-葡聚糖。
实施例3
S1：将绣球菌进行干燥、粉碎、研磨处理，得到超微粉，超微粉需要过100目的筛网；
S2：向超微粉中加入破壁酶剂，所述纤维素酶和果胶酶的加入量分别为2000U/g和1300U/g，超声酶解后，得到游离液体；
S3：将游离液体加入至高压微波罐中，进行强压微波提取，强压微波提取的微波功率为960W，压力为0.9MPa，时间为6min，过滤后，得到提取液；
S4：向提取液中先加入淀粉酶，酶解反应40min；再加入蛋白酶，酶解30min，所述淀粉酶和木瓜蛋白酶的加入量分别为600U/g和5000U/g，搅拌后静置，再离心处理，得到上清液；
S5：向上清液中加入硫酸铵，加入硫酸铵时需要不断的搅拌，并在沸水浴中进行，待其溶解后，再加入乙醇，加入上清液中的硫酸铵质量浓度为16g/L，乙醇的体积浓度为65ml/L，离心处理，收集沉淀物，得到粗提物；
S6：将粗提物溶解，采用真空冷冻干燥，即得到β-葡聚糖。
评价：
取上述实施例1、实施例2和实施例3的制得的β-葡聚糖的纯度和收率与，与传统酸提法和碱提法进行数据比对。β-葡聚糖的收率公式为：Y（%）=A/B*100%；纯度公式为：X（%）=C/A*100%，其中B为绣球菌原料重量、A为β-葡聚糖的重量、C为粗提物的重量；本发明具体实施例采用的检测采用紫外可见分光光度计进行检测，检测波长为510nm。测试评价结果如表1。
由以上表1可知，本发明制得的β-葡聚糖的纯度和收率均明显高于传统酸提法和碱提法，充分说明本发明较优异的进步。
以上对本发明的实施例进行了示例性说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依据本发明申请范围的均等变化与改进等，均应归属于本发明的专利涵盖范围之内。
Claims (10)
1.一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1：将绣球菌进行干燥、粉碎、研磨处理，得到超微粉；
S2：向超微粉中加入破壁酶剂，超声酶解后，得到游离液体；
S3：将游离液体加入至高压微波罐中，进行强压微波提取，过滤后，得到提取液；
S4：向提取液中加入除杂酶剂，搅拌后静置，再离心处理，得到上清液；
S5：向上清液中加入硫酸铵，待其溶解后，再加入乙醇，离心处理，收集沉淀物，得到粗提物；
S6：将粗提物溶解，干燥，即得到β-葡聚糖。
2.如权利要求1所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S1中的超微粉需要过80-100目的筛网。
3.如权利要求1所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S2中所述破壁酶剂包括纤维素酶和果胶酶，所述纤维素酶和果胶酶的加入量分别为1200-2000U/g和800-1300U/g。
4.如权利要求1所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S3中的强压微波提取的微波功率为900-960W，压力为0.8-0.9MPa，时间为4-6min。
5.如权利要求1所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S4中的除杂酶剂包括淀粉酶和蛋白酶，所述淀粉酶和蛋白酶的加入量分别为200-600U/g和3000-5000U/g。
6.如权利要求5所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：所述蛋白酶为木瓜蛋白酶。
7.如权利要求5所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S4中的除杂酶剂的加入方法为：先加入淀粉酶，酶解反应20-40min；再加入蛋白酶，酶解10-30min。
8.如权利要求1所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S5中加入硫酸铵时需要不断的搅拌，并在沸水浴中进行。
9.如权利要求1所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S5中加入上清液中的硫酸铵质量浓度为10-16g/L，乙醇的体积浓度为45-65ml/L。
10.如权利要求1所述的一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法，其特征在于：S6中采用真空冷冻干燥进行提纯收集。
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