CN110423285A - 一种马齿笕提取多糖的环保方法 - Google Patents
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Abstract
一种马齿苋提取多糖的环保方法，属于植物有效成分提取技术领域。一种马齿苋提取多糖的方法首先将马齿苋洗净打碎成泥加水混匀超声加热过滤得到粗浓缩滤液；再顺次加入木瓜蛋白酶、纤维素酶和木聚糖酶进行酶解，溶液使用细过滤器过滤浓缩后离心过滤和净化得到提取液，最后调节提取液的pH值后加入白酒得到沉淀进行干燥得到马齿苋多糖。本发明马齿苋多糖的提取工艺，采用复合酶进行酶解，使得提取率提高22％，提取率高达57％，清洗和沉淀分别用了食醋和食用酒，为以后的产品应用减轻了毒理实验和污染处理的压力，同时在整个提取过程中用的添加稀释分离提取物均是可以食用的物品，为分离出的多糖环保应用于食品打下了基础。
Description
技术领域
本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种马齿笕提取多糖的环保方法。
背景技术
马齿笕多糖是从马齿笕中分离出的一种具有生理活性的物质，马齿笕多糖可激活SOD酶的活性，清除体内自由基过氧离子自由基，降低体内过氧化物的产生，可增强人体免疫力等多种功效，同时具有抗病毒和抗肿瘤的功能。市场常见的提取果蔬方法具体步骤如下：原料清洗打浆---调pHA酶解----灭活----超声处理---过滤离心—吸附过滤---减压浓缩---去蛋白---醇沉离心---膜过滤---真空浓缩---真空干燥---果蔬多糖。
现有方法的不足之处：多糖的提取工艺较为复杂且得率较低，生产成本较高，难以投入规模化生产，提取多糖的过程不环保，对下一步的直接应用造成了困难。
发明内容
为了克服上述问题，本发明提供了一种马齿笕提取多糖的环保方法，该方法可有效实现提取过程环保，同时具有较高的提取率。
一种马齿笕提取多糖的方法包括以下步骤：
步骤一：漂洗
将筛选的优良马齿笕用清水冲洗约3分钟，用食醋侵泡约5分钟，然后再用清水冲洗2分钟。将漂洗后的马齿苋用打汁机打碎成泥后，加重量为马齿苋碎泥10-15倍的水混匀，进行超声清洗仪中30-50min，后85℃加热20分钟，放置待凉后用负压粗过滤器过滤，再用细过滤器过滤，获得粗提取液，继续85℃加热20-40分钟，获得粗浓缩滤液。
步骤二：
将木瓜蛋白酶加入到步骤一中的浓缩滤液，加入的量为每100ml浓缩滤液加入木瓜蛋白酶0.9-3.2g(即加木瓜蛋白酶0.9-3.2％)，酶解的温度46-55℃，pH值用食醋或小苏打调整至6.3-6.9，加热至70-96℃，酶解0.5-1h，并在90-98℃下酶灭活15-20min，再加纤维素酶，每100ml溶液加入纤维素酶2g，即酶用量2.0％、酶解温度40℃、pH6.0、酶解时间110min，并在90-98℃下灭酶15-20min。每100ml溶液加入木聚糖酶0.6-2g，即木聚糖酶0.6-2.0％，酶解温度40-55℃，pH6-7.9，加热至70-96℃，酶解0.3-0.8h，并在90-98℃下灭酶15-20min，用细过滤器滤细提取液。再用减压蒸发器在浓缩至原体积的一半后冷却备用。
步骤三：离心和净化
把步骤二过滤后的浓缩液进行离心处理，离心15-30min，离心转速为3000-4500rpm，然后取上清液进行G4砂芯漏斗或相应级别过滤器的过滤；在过滤后的上清液中加入0.2-1.7％(W/V)的活性炭，在震荡器中震荡20-30分钟，观察进行色素吸附完成后即完成。
步骤四：
将提取液pH调至7.0，加入2-4倍体积的含酒精50％以上的食用白酒放置12小时，抽滤后所得沉淀在0.3-0.4MPa进行真空7-12h干燥，即为马齿苋多糖。
有益效果：
1.本发明马齿苋多糖的提取工艺，采用复合酶进行酶解，先加入木瓜蛋白酶然后在加入纤维素酶、木聚糖酶，使得提取率提高22％，提取率高达57％。
2.清洗和沉淀分别用了食醋和食用酒，为以后的产品应用减轻了毒理实验和污染处理的压力。
3.配合超声提取一是增加了提取率，二是环保无污染。
4.在整个提取过程中用的添加稀释分离提取物均是可以食用的物品，如食醋、小苏打、食用酒等，为分离出的多糖环保应用于食品打下了基础。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
对照例
步骤一：将筛选的普通马齿笕用清水冲洗约3分钟，用乙酸侵泡约5分钟，然后再用清水冲洗2分钟。将漂洗后的马齿苋用(榨汁机)打碎成泥后，加12倍的水量，混匀，进行超声清洗仪中35min，后用小火85℃加热20分钟，放置待凉后用粗过滤器过滤，再用细过滤器过滤，获取得粗提取液，继续用文火85℃加热26分钟，获得滤液浓缩。
步骤二：
加入3％木瓜蛋白酶生理盐水溶液,酶解的温度59℃，pH值用乙酸或小苏打调整至6.6，加热至80℃，酶解1h,并在95℃下酶灭活15min，并在95℃下灭酶20min。再加纤维素酶，酶用量为2.0％、酶解温度40℃，pH6.0，酶解时间2h，并在100℃下灭酶15min。木聚糖酶0.8％，酶解温度50℃，酶解0.5h，并在95℃下灭酶15min。用细过滤器过滤，得到细提取液。再用减压蒸发器进行浓缩，至原体积的一半后冷却备用。
步骤三：离心和过滤
把上述过滤后的浓缩液进行离心处理，离心20min，离心转速为3500rpm，然后取上清液进行0.45μm的过滤得提取液。
步骤四：
用乙酸和小苏打将提取液pH调至中性，加入4倍体积的90％乙醇放置18小时，抽滤后所得沉淀在0.35MPa进行真空10h干燥，即得到马齿苋多糖。
实施例1
步骤一：将筛选的优良马齿笕用清水冲洗约3分钟，用食醋侵泡约5分钟，然后再用清水冲洗2分钟。将漂洗后的马齿苋用(榨汁机)打碎成泥后，加12倍的水量，混匀，进行超声清洗仪中35min，后用小火85℃加热20分钟，放置待凉后用粗过滤器过滤，再用细过滤器过滤，获取得粗提取液，继续用文火85℃加热26分钟，获得滤液浓缩。
步骤二：
加入3％木瓜蛋白酶生理盐水溶液,酶解的温度59℃，pH值用食醋或小苏打调整至6.6，加热至80℃，酶解1h,并在95℃下酶灭活15min，并在95℃下灭酶20min。再加纤维素酶，酶用量为2.0％、酶解温度40℃，pH6.0，酶解时间2h，并在100℃下灭酶15min。木聚糖酶0.8％，酶解温度50℃，酶解0.5h,并在95℃下灭酶15min。用细过滤器过滤，得到细提取液。再用减压蒸发器进行浓缩，至原体积的一半后冷却备用。
步骤三：离心和净化
把上述过滤后的浓缩液进行离心处理，离心20min,离心转速为3500rpm，然后取上清液进行0.45μm的过滤；在过滤后的上清液中加入1.7％的活性炭，在震荡器中震荡30分钟，观察进行色素吸附完成后即完成。
步骤四：
用食醋和小苏打将提取液pH调至中性，加入4倍体积的50％的食用白酒放置18小时，抽滤后所得沉淀在0.35MPa进行真空10h干燥，即为马齿苋多糖。在整个提取过程中用的添加稀释分离提取物均是可以食用的物品，如食醋、小苏打、食用酒等，为分离出的多糖环保应用于食品打下了基础。
对照例在整个提取过程中，因为用了化学试剂乙酸和90％酒精，对马齿苋的消毒和提取效果经细菌培养和生化检测验证良好。但是，甲醇等其它有害物质超过了食用标准，对得到的马齿苋多糖食用添加，带来了需要进一步提纯去有害杂质的不利影响。实施例1的各项测试指标为pH值7.8、菌落总数10-7cfu/ml、霉菌菌落数0、还原性糖含量0.5％、全氮量0.8％、氨基酸含量2.17g/L，国家标准为pH值7.5～8.0、菌落总数>10-7cfu/ml、霉菌菌落数0、还原性糖含量0.4～0.6％、全氮量0.7～0.9％％、氨基酸含量>2g/L，可知本实施例的结果完全符合国家标准。
上述实施例只是用于对本发明的举例和说明，而非意在将本发明限制于所描述的实施例范围内。此外本领域技术人员可以理解的是，本发明不局限于上述实施例，根据本发明的教导还可以做出更多种的变型和修改，这些变型和修改均落在本发明所要求保护的范围内。
Claims (5)
1.一种马齿笕提取多糖的环保方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
S1.将马齿苋用清水冲洗3分钟后使用食醋浸泡5分钟，再用清水冲洗2分钟后打碎成泥，加入水混匀，混匀的马齿苋超声，超声后加热，待温度降低先后使用负压粗过滤器过滤和负压细过滤器过滤得粗提取液加热得浓缩滤液；
S2.将木瓜蛋白酶加入到步骤S1中的浓缩滤液酶解、灭活，加入纤维素酶酶解、灭活，最后加入木聚糖酶酶解、灭活，用细过滤器过滤得到细提取液，再用加压蒸发器浓缩溶液，直至体积为原溶液体积的一半；
S3.将步骤S2的浓缩液离心、过滤、净化得到提取液；
S4.调节步骤S3中的提取液的pH，加入食用白酒静置后得到沉淀，对沉淀进行干燥得到马齿苋多糖。
2.根据权利要求1所述的一种马齿笕提取多糖的环保方法，其特征在于，步骤S1中马齿苋打碎成泥后加入的水的重量为马齿苋碎泥重量10-15倍，超声时间为30-50min，加热温度和时间分别为85℃和20分钟，得到的浓缩液的加热温度为85℃，加热时间为20-40分钟。
3.根据权利要求1所述的一种马齿笕提取多糖的环保方法，其特征在于，步骤S2中木瓜蛋白酶加入的量为每100ml浓缩滤液加入木瓜蛋白酶0.9-3.2g，酶解的温度46-55℃，pH值用食醋或小苏打调整至6.3-6.9，加热至70-96℃，酶解0.5-1h，并在90-98℃下酶灭活15-20min；纤维素酶加入的量为每100ml溶液加入纤维素酶2g，酶解温度40℃、pH6.0、酶解时间110min，并在90-98℃下灭酶15-20min；木聚糖酶为每100ml溶液加入木聚糖酶0.6-2g，酶解温度40-55℃，pH6-7.9，加热至70-96℃，酶解0.3-0.8h，并在90-98℃下灭酶15-20min。
4.根据权利要求1所述的一种马齿笕提取多糖的环保方法，其特征在于，步骤S3中浓缩液离心时间为15-30min，离心转速为3000-4500rpm，过滤使用G4砂芯漏斗同级别过滤器过滤，过滤后的上清液中加入0.2-1.7％(W/V)的活性炭，在震荡器中震荡20-30分钟。
5.根据权利要求1所述的一种马齿笕提取多糖的环保方法，其特征在于，步骤S4中将提取液的pH值调至7，加入体积为提取液体积2-4倍酒精含量50％以上的食用白酒放置12小时，抽滤后所得沉淀在0.3-0.4MPa进行真空7-12h干燥。
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