CN105330759A - 一种蘑菇多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种蘑菇多糖的提取方法，包括以下步骤：（1）漂洗：将筛选后的蘑菇用清水冲洗去杂，然后倒入漂洗池中漂洗2分钟；（2）将漂洗后的蘑菇用提取器处理，取得提取液，然后用文火加热1个小时，将滤液浓缩至1.6-1.8g/ml；（3）加入木瓜蛋白酶和木聚糖酶，进行解酶；（4）抽滤，收集滤液，放置冷却；（5）进行震荡提取；（6）将提取后的浓缩液进行离心处理，然后将上清液过滤；（7）在过滤后的上清液中加入活性炭脱色；（8）将上述得到的沉淀进行干燥，得蘑菇多糖；本发明提供了一种具有免疫促进和抗氧化作用，能有效的清除自由基使细胞大分子和膜系统免遭攻击和损伤，可应用于果蔬和保健食品上的蘑菇多糖提取方法。
Description
技术领域
本发明涉及一种蘑菇多糖的提取方法。
背景技术
蘑菇多糖是从蘑菇中分离出的一种具有生理活性的物质，蘑菇多糖可激活SOD酶的活性，清除体内自由基过氧离子自由基，降低体内过氧化物的产生，可增强人体免疫力等多种功效，同时具有抗病毒和抗肿瘤的功能；中国专利申请号200910151176.6公开了“一种提取双孢蘑菇多糖的方法”。具体步骤如下：蘑菇→打浆→调PH值→复合酶解→钝酶→微波处理→保温→过滤→离心→减压浓缩→Sevage法去蛋白→醇沉→离心→膜过滤→树脂吸附→解吸→真空浓缩→真空干燥→蘑菇多糖。该方法的不足之处：蘑菇多糖的提取工艺较为复杂且得率较底，生产成本较高，难以投入规模化生产。
发明内容
为了克服上述问题，本发明提供了一种具有免疫促进和抗氧化作用，能有效的清除自由基使细胞大分子和膜系统免遭攻击和损伤，可应用于果蔬和保健食品上的蘑菇多糖提取方法。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案是：
一种蘑菇多糖的提取方法，包括以下步骤：包括以下步骤：
（1）漂洗：将筛选后的蘑菇用清水冲洗去杂，然后倒入漂洗池中漂洗2分钟；
（2）将漂洗后的蘑菇用提取器处理，取得提取液，然后用文火加热1个小时，将滤液浓缩至1.6-1.8g/ml；
（3）加入木瓜蛋白酶0.7-0.9%，酶解的温度46-47°C，PH值6.0-6.7，加热至96-98°C，解酶0.6-1h，并在95-98°C下灭酶15min，再加入木聚糖酶0.4-0.8%，酶解温度45°C，PH6.2-7.8，加热至94-96°C，酶解0.4-0.7h，并在94-96°C下灭酶10-15min，得酶解液；
（4）在0.09-0.12MPa的条件下抽滤，收集滤液，在0.09-0.13MPa下减压浓缩至原体积的1/4，放置冷却；
（5）在浓缩液中加入0.2-0.5%的NaOH溶液，进行震荡提取，震荡频率为187-190r/min，提取30-45min，提取温度91-93°C；
（6）将提取后的浓缩液进行离心处理，离心23-28min，离心转速为4600-5000rpm，然后将上清液过滤；
（7）在过滤后的上清液中加入0.3-0.5%的活性炭脱色，脱色条件为震荡32-35min；
（8）将上述得到的沉淀进行干燥，在0.2-0.4MPa下干燥10-15h，即得蘑菇多糖。
优选地，步骤（3）中加入木瓜蛋白酶0.8%，酶解的温度46°C，PH值6.3，加热至97°C，解酶0.8h，并在95C下灭酶15min，再加入木聚糖酶0.45%，酶解温度45°C，PH6.7，加热至94°C，酶解0.6h，并在95°C下灭酶10min，得酶解液。
优选地，在所述步骤（4）中0.09MPa的条件下抽滤，收集滤液，在0.1MPa下减压浓缩至原体积的1/4，放置冷却。
优选地，步骤（5）所述浓缩液中加入0.3%的NaOH溶液，进行震荡提取，震荡频率为188r/min，提取30min，提取温度92°C。
优选地，步骤（7）中所述加入的活性炭为0.4%，脱色条件为震荡35min，所述脱色为反复脱色3-4次，直至溶液清亮透彻。
上述技术方案的有益之处在于：
本发明蘑菇多糖的提取工艺，采用复合酶进行酶解，先加入木瓜蛋白酶然后在加入木聚糖酶，使得提取率提高20%，提取率高达55%，纯度提升15%，提纯率高达40%，提取时间为1.2-1.5个小时，最大限度的利用蘑菇；并通过加入活性炭进行脱色，使提取物颜色比较清亮，性质稳定，有利于蘑菇多糖的应用；另外通过该提取方法所得的蘑菇多糖具有免疫促进作用和抗氧化作用，能有效的清除自由基使细胞大分子和膜系统免遭攻击和损伤，实验表明使用该提取物免疫力和抗氧化可提高一倍，通过该方法提取的提取物可应用于果蔬或保健食品上。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
本实施例所述的蘑菇多糖的提取方法，步骤如下：
（1）漂洗：将筛选后的蘑菇用清水冲洗去杂，然后倒入漂洗池中漂洗2分钟；
（2）将漂洗后的蘑菇用提取器处理，取得提取液，然后用文火加热1个小时，将滤液浓缩至1.6g/ml；
（3）加入木瓜蛋白酶0.8%，酶解的温度46°C，PH值6.3，加热至97°C，解酶0.8h，并在95C下灭酶15min，再加入木聚糖酶0.45%，酶解温度45°C，PH6.7，加热至94°C，酶解0.6h，并在95°C下灭酶10min，得酶解液；
（4）在0.09MPa的条件下抽滤，收集滤液，在0.1MPa下减压浓缩至原体积的1/4，放置冷却；
（5）在浓缩液中加入0.3%的NaOH溶液，进行震荡提取，震荡频率为188r/min，提取30min，提取温度92°C；
（6）将提取后的浓缩液进行离心处理，离心23min，离心转速为4600rpm，然后将上清液过滤；
（7）在过滤后的上清液中加入0.4%的活性炭脱色，脱色条件为震荡35min，所述脱色为反复脱色3次，直至溶液清亮透彻；
（8）将上述得到的沉淀进行干燥，在0.2MPa下干燥10h，即得蘑菇多糖。
实施例2
如实施例1所述的蘑菇多糖提取方法，它还可以是以下方法：
（1）漂洗：将筛选后的蘑菇用清水冲洗去杂，然后倒入漂洗池中漂洗2分钟；
（2）将漂洗后的蘑菇用提取器处理，取得提取液，然后用文火加热1个小时，将滤液浓缩至1.8g/ml；
（3）加入木瓜蛋白酶0.7%，酶解的温度46.5°C，PH值6.0，加热至96°C，解酶0.6h，并在97°C下灭酶15min，再加入木聚糖酶0.4%，酶解温度45°C，PH6.2，加热至95°C，酶解0.4h，并在94°C下灭酶12min，得酶解液；
（4）在0.1MPa的条件下抽滤，收集滤液，在0.09MPa下减压浓缩至原体积的1/4，放置冷却；
（5）在浓缩液中加入0.5%的NaOH溶液，进行震荡提取，震荡频率为187r/min，提取40min，提取温度91°C；
（6）将提取后的浓缩液进行离心处理，离心25min，离心转速为4800rpm，然后将上清液过滤；
（7）在过滤后的上清液中加入0.3%的活性炭脱色，脱色条件为震荡32min，所述脱色为反复脱色4次，直至溶液清亮透彻；
（8）将上述得到的沉淀进行干燥，在0.4MPa下干燥15h，即得蘑菇多糖。
实施例3
如实施例1所述的蘑菇多糖提取方法，它还可以是以下方法：
（1）漂洗：将筛选后的蘑菇用清水冲洗去杂，然后倒入漂洗池中漂洗2分钟；
（2）将漂洗后的蘑菇用提取器处理，取得提取液，然后用文火加热1个小时，将滤液浓缩至1.7g/ml；
（3）加入木瓜蛋白酶0.9%，酶解的温度47°C，PH值6.7，加热至98°C，解酶1h，并在98°C下灭酶15min，再加入木聚糖酶0.8%，酶解温度45°C，PH7.8，加热至96°C，酶解0.7h，并在96°C下灭酶15min，得酶解液；
（4）在0.12MPa的条件下抽滤，收集滤液，在0.13MPa下减压浓缩至原体积的1/4，放置冷却；
（5）在浓缩液中加入0.2%的NaOH溶液，进行震荡提取，震荡频率为190r/min，提取45min，提取温度93°C；
（6）将提取后的浓缩液进行离心处理，离心28min，离心转速为5000rpm，然后将上清液过滤，
（7）在过滤后的上清液中加入0.5%的活性炭脱色，脱色条件为震荡33min，所述脱色为反复脱色4次，直至溶液清亮透彻；
（8）将上述得到的沉淀进行干燥，在0.3MPa下干燥13h，即得蘑菇多糖。
试验：
1、蘑菇多糖提取效果测试，如表1：
实验因素水平如上表1所示，单因素试验基本条件设定为：NaOH溶液浓度0.2mol/L，提取温度91℃，料液比1:20(g/mL)，提取时间30Min，提取次数3次，振荡频率为187r/min。在改变一个条件，固定其他条件的情况下，分析NaOH溶液浓度、提取时间、提取次数、提取温度、振荡频率、料液比对提取率的影响。根据上表重复3次实验，结果取平均值。
2、提取蘑菇多糖的提得率，如下表：
3、蘑菇多糖对免疫力低下的实现鼠溶血素及溶血空斑形成的影响如下表：
取体重为20g~23g实验鼠50只，雌雄各半，随机分配为6组，分别灌服不同剂量的多糖水溶液，于给药第1天各组小鼠均腹腔注射4-6%鸡红细胞生理盐水混悬液0.35mL/只，进行免疫。于第7天给药后2.5h，小鼠眼眶取血，并测定溶血素形成细胞情况。将实验鼠脱颈椎处死，解剖取出脾脏，将两个小鼠脾脏放在一起，用匀浆器匀浆，并调整脾细胞混悬液中脾细胞数为5×106个/mL。并测定溶血空斑形成细胞情况，结果如下：
从上表中可以看出，香菇多糖能够显著提高巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数，具有极显著性意义（P<0.01），而对免疫低下小鼠溶血空斑形成，具有显著性意义（P<0.05）。
4、蘑菇多糖的抗氧化活性实验
将实施例1、实施例2和实施例3得到的蘑菇多糖进行DPPH清除效果实验。分别取一定量的蘑菇多糖溶于蒸馏水中，得到100μg/mL、150μg/mL、180μg/mL和200μg/mL浓度的样品溶液，依次添加0.2mMDPPH-95％乙醇水溶液1mL，样品溶液1.5mL，震荡后于室温下放置30min，测定吸光度。并通过DPPH自由基的清除效果公式计算。
DPPH自由基清除效果的值是抗氧化功能评价的一个常用指标，通常值越小表明抗氧化功能越好，一般达到ug级认为抗氧化功能好，从上表可看出，通过本方法提取的多糖具有良好的抗氧化功能。
本发明并不局限于前述的具体实施方式。本发明扩展到任何在本说明书中披露的新特征或任何新的组合，以及披露的任一新的方法或过程的步骤或任何新的组合。
Claims (5)
1.一种蘑菇多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）漂洗：将筛选后的蘑菇用清水冲洗去杂，然后倒入漂洗池中漂洗2分钟；
（2）将漂洗后的蘑菇用提取器处理，取得提取液，然后用文火加热1个小时，将滤液浓缩至1.6-1.8g/ml；
（3）加入木瓜蛋白酶0.7-0.9%，酶解的温度46-47°C，PH值6.0-6.7，加热至96-98°C，解酶0.6-1h，并在95-98°C下灭酶15min，再加入木聚糖酶0.4-0.8%，酶解温度45°C，PH6.2-7.8，加热至94-96°C，酶解0.4-0.7h，并在94-96°C下灭酶10-15min，得酶解液；
（4）在0.09-0.12MPa的条件下抽滤，收集滤液，在0.09-0.13MPa下减压浓缩至原体积的1/4，放置冷却；
（5）在浓缩液中加入0.2-0.5%的NaOH溶液，进行震荡提取，震荡频率为187-190r/min，提取30-45min，提取温度91-93°C；
（6）将提取后的浓缩液进行离心处理，离心23-28min，离心转速为4600-5000rpm，然后将上清液过滤；
（7）在过滤后的上清液中加入0.3-0.5%的活性炭脱色，脱色条件为震荡32-35min；
（8）将上述得到的沉淀进行干燥，在0.2-0.4MPa下干燥10-15h，即得蘑菇多糖。
2.如权利要求1所述的一种蘑菇多糖的提取方法，其特征在于：步骤（3）中加入木瓜蛋白酶0.8%，酶解的温度46°C，PH值6.3，加热至97°C，解酶0.8h，并在95C下灭酶15min，再加入木聚糖酶0.45%，酶解温度45°C，PH6.7，加热至94°C，酶解0.6h，并在95°C下灭酶10min，得酶解液。
3.如权利要求1所述的一种蘑菇多糖的提取方法，其特征在于：在所述步骤（4）中0.09MPa的条件下抽滤，收集滤液，在0.1MPa下减压浓缩至原体积的1/4，放置冷却。
4.权利要求1所述的一种蘑菇多糖的提取方法，其特征在于：步骤（5）所述浓缩液中加入0.3%的NaOH溶液，进行震荡提取，震荡频率为188r/min，提取30min，提取温度92°C。
5.权利要求1所述的一种蘑菇多糖的提取方法，其特征在于：步骤（7）中所述加入的活性炭为0.4%，脱色条件为震荡35min，所述脱色为反复脱色3-4次，直至溶液清亮透彻。
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