CN104387496A - 一种云芝多糖的提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种云芝多糖的提取工艺,其从云芝中提取出水溶性多糖,经脱色后,加入纤维素酶和中性蛋白酶,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%,调节pH6.5,温度45-55℃,时间60-90min,减压浓缩至原体积的70%,抽滤取其清液;而后用无水乙醇洗涤、沉淀,干燥得云芝提取物,其中云芝多糖含量为32%-45%。本发明经过双酶酶解发酵提取云芝提取物,其工艺简单,成本较低,提取率高。特别是通过纤维素酶进行破壁处理,蛋白酶进行去蛋白处理,避免了大分子蛋白带来的溶解度低等缺点,增加了云芝多糖的生物活性,能更好地被人体吸收和利用。
Description
技术领域
本发明涉及一种云芝有效成分的提取方法,具体地说是一种云芝多糖的提取工艺。
背景技术
云芝多糖是从担子菌杂色云芝菌种提取的多糖,也可以从人工培养的菌丝体中分离得到。具有多种生物活性。研究表明云芝多糖具有免疫调节功能,是良好的免疫增强剂,具有增强免疫细胞功能和识别能力,提高IgM的量等作用;云芝多糖同时具有保肝护肝作用,可显著降低血清转氨酶,对肝组织病变和肝坏死有明显的修复作用。相关的多糖制剂已经被广泛应用于临床。传统的云芝多糖的提取方法有热水提取法,其将云芝浸泡在热水中,从云芝中提取出水溶性多糖。但此方法耗时长,多糖的提取率较低,成本高。特别是云芝提取物中大分子蛋白质含量高,因云芝多糖是含蛋白质的葡聚糖,而大分子的蛋白质会影响其溶解性和吸收率,影响其生物活性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足,提供一种工艺简单,提取率高,成本低的云芝多糖的提取工艺。
本发明解决上述技术问题采用的技术方案是:一种云芝多糖的提取工艺,其特征在于:其具体步骤如下:
1)称取一定质量的云芝粉末,按料液比1:20-25加入的水,浸泡60-90min,于50-60℃恒温水浴下回流,浸提两次;
2)将步骤1)所得溶液离心过滤,取其上清液,然后经过树脂吸附脱去颜色,静置24h;
3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%,调节pH6.5,温度45-55℃,时间60-90min,减压浓缩至原体积的70%,抽滤取其清液;
4)将步骤3)得到的清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀,干燥得云芝提取物,其中云芝多糖含量为32%-45%。
进一步,本发明所述步骤3)中上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的5.5%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%,调节pH6.5,温度50℃,时间90min。
本发明经过双酶酶解发酵提取云芝提取物,其中云芝多糖含量为32%-45%。对照现有技术,本发明工艺简单,成本较低,提取率高。特别是通过纤维素酶进行破壁处理,蛋白酶进行去蛋白处理,避免了大分子蛋白带来的溶解度低等缺点,增加了云芝多糖的生物活性,能更好地被人体吸收和利用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
本发明一种云芝多糖的提取工艺,其步骤是:云芝样品烘干—>粉碎(过80目筛)—>水解—>保湿浸提—>离心—>上清液—>大孔树脂吸附—>酶解—>减压浓缩—>醇沉—>烘干。具体步骤为:
1)称取一定质量的云芝粉末,按料液比1:20-25加入的水,浸泡60-90min,于50-60℃恒温水浴下回流,浸提两次。
2)将步骤1)所得溶液离心过滤,取其上清液,然后经过树脂吸附脱去颜色,静置24h。
3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解,其中两种酶浓度均为1.5%,酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%。调节pH6.5,温度45-55℃,时间60-90min,减压浓缩至原体积的70%,抽滤取其清液。利用酶反应具有高度专一性等特性,根据植物药材细胞壁的构成,纤维素酶能将细胞壁的组成成分水解或降解,破坏细胞壁结构,使有效成分充分暴露出来,溶解、混悬或胶溶于溶剂中,从而达到提取细胞内有效成分的目的。中性蛋白酶能进行去蛋白处理,使蛋白质沉淀,减少水溶性多糖中大分子蛋白的残留。
4)将步骤3)得到的清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀,干燥得云芝提取物,其中云芝多糖含量为32%-45%。
本发明从云芝中提取出水溶性多糖,经脱色后,加入纤维素酶和中性蛋白酶。利用酶反应具有高度专一性等特性,根据植物药材细胞壁的构成,纤维素酶能将细胞壁的组成成分水解或降解,破坏细胞壁结构,使有效成分充分暴露出来,溶解、混悬或胶溶于溶剂中,从而达到提取细胞内有效成分的目的。中性蛋白酶能进行去蛋白处理,使蛋白质沉淀,减少水溶性多糖中大分子蛋白的残留。
本发明经过双酶酶解发酵提取云芝提取物,其中云芝多糖含量为32%-45%。其工艺简单,成本较低,提取率高。特别是通过纤维素酶进行破壁处理,蛋白酶进行去蛋白处理,避免了大分子蛋白带来的溶解度低等缺点,增加了云芝多糖的生物活性,能更好地被人体吸收和利用。
实施例1:一种云芝多糖提取工艺,其具体步骤为:
1)称取处理的云芝粉末200g,加入4000ml的水,浸泡90min,于50℃恒温水浴下回流,浸提两次。
2)将步骤1)所得溶液离心过滤取其上清液,然后经过大孔树脂吸附脱去颜色,静置24h。
3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和蛋白酶,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的5.5%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%,调节pH6.5,温度50℃,时间90min,减压浓缩至原体积的70%,抽滤取其清液。
4)将步骤3)清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀,干燥得白色粉末云芝提取物24g。经测定,其中云芝多糖含量为45%。
云芝多糖含量测定方法是:称取干燥恒重的葡萄糖50g,置250ml容量瓶中加水溶解后稀释成母液。分别吸取母液5.0、10.0、15.0、20.0、25.0ml加水稀释成50ml。取各浓度的标准液1ml于试管中加入5%苯酚溶液0.3ml,再加浓硫酸3ml,摇匀,放置20min,以蒸馏水为空白,在490nm处测吸光度。并绘制标准曲线。然后称取上述制备的云芝多糖提取物250mg加蒸馏水适量使溶解,置10ml量瓶中加蒸馏水定容至刻度线。然后再取1ml用蒸馏水定容至50ml,摇匀,测其吸光值。测定其中云芝多糖含量为45%。
实施例2:一种云芝多糖提取工艺,其具体步骤为:
1)称取处理的云芝粉末100g,加入2000ml的水,浸泡60min,于55℃恒温水浴下回流,浸提两次。
2)将步骤1)所得溶液离心过滤取其上清液,然后经过大孔树脂吸附脱去颜色,静置24h。
3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和蛋白酶,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的4%,调节pH6.5,温度45℃,时间60min,减压浓缩至原体积的70%,抽滤取其清液。
4)将步骤3)清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀,干燥得白色粉末云芝提取物10.5g,经测定,其中云芝多糖含量为32%。
实施例3:一种云芝多糖提取工艺,其具体步骤为:
1)称取处理的云芝粉末200g,加入5000ml的水,浸泡80min,于60℃恒温水浴下回流,浸提两次。
2)将步骤1)所得溶液离心过滤取其上清液,然后经过大孔树脂吸附脱去颜色,静置24h。
3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和蛋白酶,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的6%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2%,调节pH6.5,温度55℃,时间80min,减压浓缩至原体积的70%,抽滤取其清液。
4)将步骤3)清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀,干燥得白色粉末云芝提取物25g,经测定,其中云芝多糖含量为38%。
通过对实施例1-3进行云芝多糖含量测定,结合含量和云芝提取物得率,确定实施例1为优化工艺。
Claims (2)
1.一种云芝多糖的提取工艺,其特征在于:其具体步骤如下:
1)称取一定质量的云芝粉末,按料液比1:20-25加入的水,浸泡60-90min,于50-60℃恒温水浴下回流,浸提两次;
2)将步骤1)所得溶液离心过滤,取其上清液,然后经过树脂吸附脱去颜色,静置24h;
3)将步骤2)得到的上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的4-6%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的2-4%,调节pH6.5,温度45-55℃,时间60-90min,减压浓缩至原体积的70%,抽滤取其清液;
4)将步骤3)得到的清液用四倍体积的无水乙醇洗涤、沉淀,干燥得云芝提取物,其中云芝多糖含量为32%-45%。
2.根据权利要求1所述的云芝多糖的提取工艺,其特征在于:所述步骤3)中上清液加入纤维素酶和中性蛋白酶进行酶解,其中酶浓度为1.5%的纤维素酶的加入量是上清液的5.5%,酶浓度为1.5%的蛋白酶的加入量是上清液的3%,调节pH6.5,温度50℃,时间90min。
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