CN108451988A - 一种高水溶性银杏叶提取物的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高水溶性银杏叶提取物的制备方法，是以标准银杏叶提取物为原料，采用复合酶解加超微粉碎的处理方法，得到高水溶性银杏叶提取物。因采用复合酶技术加超微粉碎技术，无有害溶剂残留，且加工条件温和，对产品无破坏；产品中有效物质含量完全符合中国药典2015版标准中规定银杏黄酮苷含量大于24％，银杏内酯大于6％，银杏酚酸含量低于5ppm；此外，该高水溶性银杏叶提取物在100ml、25℃常温水的溶解度大于10g。

Description

一种高水溶性银杏叶提取物的制备方法

技术领域

本发明涉及一种高水溶性银杏叶提取物的制备方法，属于保健食品、中药加工技术领域。

背景技术

银杏(Gimkgo biloba)又名白果树，为银杏科，银杏属植物。本世纪60年代以来，由于银杏制剂对防治心脑血管疾病、老年痴呆症、哮喘等作用的发现，国内外后续加大了对银杏化学成分、药理活性及临床应用等方面研究的力度，同时也对银杏有效成分的提取分离工艺做了大量的探索研究。

银杏叶有上述功效，主要是其富含银杏黄酮甙(其甙元分别为山柰酚、槲皮素、异鼠李素)、银杏萜内酯(分别为银杏A、B、C、J、M、白果内酯等)、原花青素、聚异戊烯醇、莽草酸、β-谷甾醇等；其中黄酮类物质是主要活性物质之一，有清除自由基的能力，是优良的氧清除剂和脂质抗氧化剂，具有降低血压、防止动脉硬化和抗衰老作用；银杏内酯是另一类主要活性物质，其对治疗心脑血管疾病、抑郁症等具有显著疗效。

根据《中国药典》规定，目前银杏叶提取物主要采用乙醇水提取、大孔树脂吸附分离制备工艺，提取物中富含黄酮，以及6％以上的银杏内脂等生物活性物质，其偏脂溶性，难以满足市场用量大、产品附加值高的液体制剂，如口服液、注射剂等产品高水溶性加工技术要求，研发人员有必要进行高水溶性银杏叶提取物的开发与应用研究；而国内对水溶性银杏叶提取物研究较少。目前获得知识产权保护的主要专利列举如下：(1)“水溶性银杏叶提取物的制备工艺及水溶性银杏叶提取物”(CN201610149596.0)，其发明水溶性银杏叶提取物的制备工艺特征在于，所述工艺采用脂溶性银杏叶提取物为原料，22-28％的热乙醇为提取溶剂。本发明工艺高效、安全、简捷、经济，其工艺所得的水溶性提取物100％溶于水，但没有具体溶解度。(2)“超低酸水溶性银杏叶提取物的制备方法及产品”(CN201110306111.1)，公开了一种超低酸水溶性银杏叶提取物的制备方法及产品，该方法以水为溶剂对银杏叶进行提取，用絮凝沉淀结合冷藏降低银杏酸的含量，用树脂柱层析纯化、富集银杏黄酮和萜内酯，所得产品银杏酸含量小于0.1ppm，冷水溶解度大于5g/100ml。(3)“一种水溶性银杏叶提取物的制备工艺”(CN201110275646.7)，涉及一种水溶性银杏叶提取物的制备工艺，以普通银杏叶为原料，经丙酮水混合溶液提取后，经浓缩，加水稀释，冷沉，过滤，滤液经大孔吸附树脂梯度洗脱，并通过高醇度乙醇醇沉和水提冷沉，浓缩，干燥，得到水溶性银杏叶提取物；水溶性≥10％；银杏酚酸≤1ppm，可作为注射用原料。(4)“一种注射制剂用水溶性银杏叶提取物的制备工艺”(CN200810038506.6)，公开了一种注射制剂用的水溶性银杏叶提取物的制备工艺，包括制备0.1-0.3％的药用明胶水溶液、用明胶水溶液溶解银杏叶提取物、超滤、真空干燥制备银杏萜类总内酯及制备银杏总黄酮提取物，然后再根据各自的含量进行总的混合制得成品。(5)“一种水溶性银杏叶提取物的生产工艺”(CN200810060422.2)，将银杏叶粉碎，用乙醇提取2～4次，得浓缩液I；浓缩液I加纯化水稀释，过滤得药液II，滤渣再用纯化水反复多次洗涤，上清液过滤得药液III和药液II合并，加水稀释，过滤得澄清药液IV；将药液IV通过大孔吸附树脂吸附，用纯化水或乙醇预洗，再以乙醇洗脱，得药液V；将药液V浓缩得无醇稠膏VI；取稠膏VI加乙醇提取2～4次，过滤后滤液再浓缩至稠膏VII；也可将普通银杏叶提取物以乙醇使其充分溶解后回收乙醇至稠膏，再加适量乙醇，提取2～4次后过滤，滤液浓缩至稠膏VII；将稠膏VII以纯化水提取2～4次，提取液冷却过滤，浓缩，干燥即得水溶性银杏叶提取物。(6)“一种水溶性银杏叶提取物的生产方法”(CN200510003243.1)，该方法以银杏叶GBE粗品为原料，将GBE粗品放入浸提设备中用纯净水或用溶剂搅拌提取，静置，过滤，加明胶水溶液进行沉淀，再静置，过滤，真空浓缩至干，再加无水乙醇溶解，过滤，真空浓缩并干燥，粉碎即得银杏叶第五代GBE。(7)“水溶性银杏叶提取物的生产工艺”(CN02113533.9)，公开了一种水溶性不含银杏酸的银杏叶提取物的生产工艺，将银杏叶用酒精加热反复浸提获得的浓缩液加水后静置，然后取上清液过大孔树脂柱，收集过柱后的流出液，然后利用现有技术进行处理，得到银杏叶粗提物，再用酒精溶解这些银杏叶粗提物，然后将液体过大孔树脂柱，然后利用现有技术对得到的液体进行处理得到水溶性不含银杏酸的银杏叶提取物，与现有技术相比：这种工艺从银杏叶上提取银杏叶提取物并直接脱除获得的银杏叶提取物中的银杏酸，也就是说，将原有的两步技术合成为一次就解决问题的方法，这种工艺生产成本低廉，脱酸效果好，获得的产品符合有关国家药品的技术要求，工艺已通过工业化生产试验。

上述专利基本上都为采用化学化工技术来提高银杏叶提取物的水溶性，使用大量溶剂，存在回收溶剂能耗高、环境污染大等不足，为此本发明拟采用生物或物理手段以解决上述难题。

发明内容

本发明旨在提供一种高水溶性银杏叶提取物的制备方法，所要解决的技术问题是提高银杏叶提取物在水中溶解度问题，且银杏黄酮、银杏内酯、银杏酸等物质含量必须符合国家药典2015版规定，为开发保健食品、中药新药提供高质量的原料——高水溶性银杏叶提取物。

本发明以符合国家药典2015版规定的标准银杏叶提取物为原料，将其放入酶解罐中用蒸馏水溶解、搅拌均匀，再添加生物酶进行酶解，过滤，真空浓缩并干燥至含水量6％以下，再进行超微粉碎，即可得到高水溶性银杏叶提取物。

本发明高水溶性银杏叶提取物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：称取标准银杏叶提取物原料倒入酶解罐中，按照固液比1g：10-12mL的比例加水溶解，搅拌均匀后用氨水调pH值至6.8-7.0，向混合液中加入复合酶进行酶解；

步骤2：将步骤1获得的酶解液过120目滤网，然后于真空度0.07-0.09MPa、温度75-80℃下旋蒸浓缩，物料开始挂壁即可停止浓缩，随后进行真空冷冻干燥，粉碎后即得高水溶性银杏叶提取物。

步骤1中，所述标准银杏叶提取物为市购产品，符合中国药典2015版要求，即银杏黄酮苷含量大于24％，银杏总内酯大于6％，银杏酸含量低于5ppm。

步骤1中，所述复合酶由中性蛋白酶与纤维素酶按1:2的质量比混合构成。

步骤1中，复合酶的添加质量为混合液质量的1.2-1.5％。

步骤1中，酶解温度为37-42℃，酶解时间为2.5-3小时。

步骤2中，真空冷冻干燥的参数为：首先于-65℃下预冻3小时；然后置于真空冷冻干燥机中升华干燥20小时，冷阱温度-45℃；最后于25℃解析干燥1.5h。

步骤2中，真空冷冻干燥后物料的含水量≤6％。

步骤2中，所述粉碎的过程为：首先在机械粉碎机中粉碎至60-75微米，机械粉碎机的转速为2000r/min，粉碎时间为5-8min；然后进行气流超微粉碎至粒径达10-15微米即可。

本发明高水溶性银杏叶提取物的制备方法采用生物酶解+超微粉的绿色加工工艺，可获得高水溶性银杏叶提取物，该银杏叶提取物在100ml、25℃常温水的溶解度大于10g(标准银杏叶提取物原料在100ml、25℃常温水的溶解度约为3.1g)；此外，本发明获得的高水溶性银杏叶提取物中银杏黄酮苷含量大于24％，银杏总内酯大于6％，银杏酸含量低于5ppm，表明本发明方法对药典限定的黄酮苷、银杏总内酯、银杏酸等指标几乎不影响。

具体实施方式

实施例1：

本实施例中高水溶性银杏叶提取物的制备方法如下：

1、称取100g标准银杏叶提取物倒入酶解罐中，加入1L水进行溶解，搅拌均匀后用氨水调pH值至6.8，将酶解罐的温度设置为38℃，待酶解罐内物料达到设定温度时向酶解罐中加入13.5g复合酶(中性蛋白酶与纤维素酶比例为1:2)，38℃下酶解2.5小时；

2、将步骤1获得的酶解液过120目滤网，然后于真空度0.08MPa、温度80℃下旋蒸浓缩，物料开始挂壁即可停止浓缩，随后进行真空冷冻干燥，粉碎后即得高水溶性银杏叶提取物。

真空冷冻干燥的参数为：首先于-65℃下预冻3小时；然后置于真空冷冻干燥机中升华干燥20小时，冷阱温度-45℃；最后于25℃解析干燥1.5h，物料含水量为5.8％。

所述粉碎的过程为：首先在机械粉碎机中粉碎至60微米，机械粉碎机的转速为2000r/min，粉碎时间为8min；然后进行气流超微粉碎至粒径达15微米即可。

本实施例获得95.9g高水溶性银杏叶提取物，其在100ml、25℃常温水的溶解度达到10.9g。

实施例2：

本实施例中高水溶性银杏叶提取物的制备方法如下：

1、称取100g标准银杏叶提取物倒入酶解罐中，加入1.2L水进行溶解，搅拌均匀后用氨水调pH值至7.0，将酶解罐的温度设置为41℃，待酶解罐内物料达到设定温度时向酶解罐中加入15g复合酶(中性蛋白酶与纤维素酶比例为1:2)，41℃下酶解3小时；

2、将步骤1获得的酶解液过120目滤网，然后于真空度0.09MPa、温度75℃下旋蒸浓缩，物料开始挂壁即可停止浓缩，随后进行真空冷冻干燥，粉碎后即得高水溶性银杏叶提取物。

真空冷冻干燥的参数为：首先于-65℃下预冻3小时；然后置于真空冷冻干燥机中升华干燥20小时，冷阱温度-45℃；最后于25℃解析干燥1.5h，物料含水量为5.7％。

所述粉碎的过程为：首先在机械粉碎机中粉碎至70微米，机械粉碎机的转速为2000r/min，粉碎时间为7min；然后进行气流超微粉碎至粒径达12微米即可。

本实施例获得96.3g高水溶性银杏叶提取物，其在100ml、25℃常温水的溶解度达到11.1g。

Claims (9)

1.一种高水溶性银杏叶提取物的制备方法，其特征在于：以标准银杏叶提取物为原料，将其放入酶解罐中用蒸馏水溶解、搅拌均匀，再添加生物酶进行酶解，过滤，真空浓缩并干燥至含水量6％以下，再进行超微粉碎，即可得到高水溶性银杏叶提取物。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤1：称取标准银杏叶提取物原料倒入酶解罐中，按照固液比1g：10-12mL的比例加水溶解，搅拌均匀后用氨水调pH值至6.8-7.0，向混合液中加入复合酶进行酶解；

步骤2：将步骤1获得的酶解液过120目滤网，然后于真空度0.07-0.09MPa、温度75-80℃下旋蒸浓缩，物料开始挂壁即可停止浓缩，随后进行真空冷冻干燥，粉碎后即得高水溶性银杏叶提取物。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤1中，所述标准银杏叶提取物为市购产品，符合中国药典2015版要求，即银杏黄酮苷含量大于24％，银杏总内酯大于6％，银杏酸含量低于5ppm。

4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤1中，所述复合酶由中性蛋白酶与纤维素酶按1:2的质量比混合构成。

5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤1中，复合酶的添加质量为混合液质量的1.2-1.5％。

6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤1中，酶解温度为37-42℃，酶解时间为2.5-3小时。

7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤2中，真空冷冻干燥的参数为：首先于-65℃下预冻3小时；然后置于真空冷冻干燥机中升华干燥20小时，冷阱温度-45℃；最后于25℃解析干燥1.5h。

8.根据权利要求2或7所述的制备方法，其特征在于：

步骤2中，真空冷冻干燥后物料的含水量≤6％。

9.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：

步骤2中，所述粉碎的过程为：首先在机械粉碎机中粉碎至60-75微米，机械粉碎机的转速为2000r/min，粉碎时间为5-8min；然后进行气流超微粉碎至粒径达10-15微米即可。