CN104231104A

CN104231104A - 一种云芝中多糖的提取方法

Info

Publication number: CN104231104A
Application number: CN201410480711.3A
Authority: CN
Inventors: 刘巴宁; 郑安乔
Original assignee: ZHONGSHAN ANQIAO BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: ZHONGSHAN ANQIAO BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2014-09-19
Filing date: 2014-09-19
Publication date: 2014-12-24

Abstract

本发明涉及一种云芝中多糖的提取方法。所述的方法包括以下步骤：取云芝适量冷冻干燥至恒重，粉碎过筛；取过筛后的样品粉末置入斜面培养基中进行培养；将活化后的菌株置入发酵瓶中进行摇瓶发酵培养，得菌株发酵液；将菌株发酵液加等量的蒸馏水溶解稀释，进行微波提取多次，离心，取上清液旋转蒸发，加入无水乙醇，超声混匀，置于4℃冰箱过液，离心，弃上清，取沉淀干燥至恒重即为云芝多糖。本发明中采用的微波提取法，提取条件进行了严格的优化，提取时间为20-30S，提取功率为260-265W，提取温度为55-60℃，提取3-5次，提取温度为55-60℃，可保证云芝中多糖提取充分，提取率最高，同时也避免了云芝多糖被破坏，与传统方法相比，操作更为简单，操作时间短。

Description

一种云芝中多糖的提取方法

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种云芝中多糖的提取方法。

背景技术

云芝(Coriolusversicolor)又称为采绒革盖菌、千层蘑、彩云革盖菌等, 隶属真菌门、担子菌亚门、多孔菌科、革盖菌属,是一种分布广泛的大型木腐真菌，云芝味甘、淡, 性微寒, 有健脾利湿, 止咳平喘, 清热解毒,抗肿瘤的功效，是我国传统的名贵药材。云芝多糖是云芝的主要有效成分，能激活免设细胞、提高机体免疫功能，抗肿瘤、降血脂及抗菌，此外，云芝多糖对慢性应激引起的学习和记忆障碍等均有显著的改善效果，因此，云芝多糖可作为一种安全有效的活性物质，应用于保健食品中

微波提取技术是利用不同结构的物质在微波场中吸收微波能力的差异使物质中的某些区域或提取体系中的某些组分被选择性加热，从而使这些组分从物质或体系中分离进入介电常数较小微波吸收能力相对差的提取剂中，具有提取速度快、溶剂用量少、操作简单等优点。目前，微波提取技术已被广泛用于天然产物中多种活性成分的提取。云芝胞内糖肽（多糖）的传统提取方法为超声法及高压均质法，但上述方法存在操作繁琐或多糖提取率低等缺点。为此，本发明将微波提取技术用于云芝多糖的提取，以便提高云芝多糖的产率。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中存在的缺陷提供一种云芝中多糖的微波提取方法。

本发明的技术方案如下：

一种云芝中多糖的提取方法，包括以下步骤：

（1）样品预处理：取云芝3-5g冷冻干燥至恒重，粉碎过筛，取筛下样品粉末备用；

（2）菌种培养活化：取步骤（1）中制得的样品粉末置入斜面培养基中进行培养，得到活化的菌株；

（3）摇瓶发酵培养：取步骤（2）中活化的菌株置入发酵瓶中进行摇瓶发酵培养，得菌株发酵液；

（4）多糖提取：将步骤（3）中制得的菌株发酵液加等量的蒸馏水进一步溶解稀释，置入微波炉中提取，反复提取多次，提取结束后，离心，取上清液旋转蒸发至原上清液体积的1/4，加入无水乙醇，超声混匀，置于4℃冰箱过液，离心，弃上清，取沉淀干燥至恒重即为云芝多糖。

优选的，步骤（1）中所述的粉碎过筛为过40-80目筛。

优选的，步骤（2）中所述的斜面培养基的组分为：马铃薯15-25%，葡萄糖1-3%，磷酸二氢钾0.1-0.5%，硫酸镁水合物0.1-0.3%，琼脂1-3%。

优选的，步骤（3）中所述的摇瓶发酵培养基的组分为：马铃薯汁30-50%，葡萄糖1-3%,硫酸镁水合物0.1-0.3%，硫酸钠0.03-0.08%，磷酸二氢钾0.1-0.5%。

优选的，步骤（2）中所述的斜面培养基及步骤（3）中所述的摇瓶种子培养基均为在121℃条件下湿热灭菌30-40min的培养基。

优选的，步骤（2）中所述的培养条件为：培养温度25-28℃，培养时间3-5d。

优选的，步骤（3）中所述的培养条件为：摇床速度200-220r/min，培养温度25-28℃，培养时间3-5d。

优选的，步骤（4）中所述的微波提取的条件为：提取时间20-30s，提取功率为260-265W，提取温度为55-60℃；所述的微波提取采用间歇提取，反复提取次数为3-5次。

优选的，步骤（4）中所述的离心的速度为13000-150000r/min,离心时间为5-10min。

优选的，步骤（4）中所述的超声混匀时间为15-30min。

本发明与现有技术相比，具有以下有益效果：

1.本发明中采用的微波提取法是一种新型的提取方法，微波提取法与热水浸提法在提取真菌胞内糖肽时，多糖提取率相似，均符合国家标准中规定的含量要求，但微波提取法与热水浸提法相比，具有操作更为简单，操作时间短等优点。

2.本发明中参考国内文献，将微波提取的条件进行优化，如将微波提取的时间控制在20-30S，采用间歇提取方法，总共提取次数为3-5次，提取功率为260-265W，提取温度为55-60℃，可保证云芝中多糖提取充分，提取率最高，同时也避免了云芝多糖被破坏。

3.本发明在对云芝中多糖进行提取时，先后对样品进行预处理、斜面培养基培养及摇瓶发酵培养，保证了多糖提取更加充分。

具体实施方式

本发明通过以下具体实施例更详细的说明本发明，可以使本专业技术人员更全面的了解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1

一种云芝中多糖的提取方法，包括以下步骤：

（1）样品预处理：取云芝3g冷冻干燥至恒重，粉碎过40目筛，取筛下样品粉末备用；

（2）菌种培养活化：取步骤（1）中制得的样品粉末置入斜面培养基中进行培养，培养温度25℃，培养时间3d，得到活化的菌株；

（3）摇瓶发酵培养：取步骤（2）中活化的菌株置入发酵瓶中进行摇瓶发酵培养，摇床速度200r/min，培养温度25℃，培养时间3d，得菌株发酵液；

（4）多糖提取：将步骤（3）中制得的菌株发酵液加等量的蒸馏水进一步溶解稀释，置入微波炉中提取，反复提取多次，提取结束后，以13000r/min速度离心5min，取上清液旋转蒸发至原上清液体积的1/4，加入无水乙醇，超声混匀15min，置于4℃冰箱过液，以13000r/min速度离心5min，弃上清，取沉淀干燥至恒重即为云芝多糖。

步骤（2）中所述的斜面培养基的组分为：马铃薯15%，葡萄糖1%，磷酸二氢钾0.1%，硫酸镁水合物0.1%，琼脂1%。

步骤（3）中所述的摇瓶发酵培养基的组分为：马铃薯汁30%，葡萄糖1%,硫酸镁水合物0.1%，硫酸钠0.03%，磷酸二氢钾0.1%。

步骤（2）中所述的斜面培养基及步骤（3）中所述的摇瓶种子培养基均为在121℃条件下湿热灭菌30min的培养基。

步骤（4）中所述的微波提取的条件为：提取时间20s，提取功率为260W，提取温度为55℃；所述的微波提取采用间歇提取，反复提取次数为3次。

实施例2

一种云芝中多糖的提取方法，包括以下步骤：

（1）样品预处理：取云芝5g冷冻干燥至恒重，粉碎过80目筛，取筛下样品粉末备用；

（2）菌种培养活化：取步骤（1）中制得的样品粉末置入斜面培养基中进行培养，培养温度28℃，培养时间5d，得到活化的菌株；

（3）摇瓶发酵培养：取步骤（2）中活化的菌株置入发酵瓶中进行摇瓶发酵培养，摇床速度220r/min，培养温度28℃，培养时间5d，得菌株发酵液；

（4）多糖提取：将步骤（3）中制得的菌株发酵液加等量的蒸馏水进一步溶解稀释，置入微波炉中提取，反复提取多次，提取结束后，以150000r/min速度离心10min，取上清液旋转蒸发至原上清液体积的1/4，加入无水乙醇，超声混匀30min，置于4℃冰箱过液，以150000r/min速度离心10min，弃上清，取沉淀干燥至恒重即为云芝多糖。

步骤（2）中所述的斜面培养基的组分为：马铃薯25%，葡萄糖3%，磷酸二氢钾0.5%，硫酸镁水合物0.3%，琼脂3%。

步骤（3）中所述的摇瓶发酵培养基的组分为：马铃薯汁50%，葡萄糖3%,硫酸镁水合物0.3%，硫酸钠0.08%，磷酸二氢钾0.5%。

步骤（2）中所述的斜面培养基及步骤（3）中所述的摇瓶种子培养基均为在121℃条件下湿热灭菌40min的培养基。

步骤（4）中所述的微波提取的条件为：提取时间20-30s，提取功率为265W，提取温度为60℃；所述的微波提取采用间歇提取，反复提取次数为5次。

实施例3

一种云芝中多糖的提取方法，包括以下步骤：

（1）样品预处理：取云芝4g冷冻干燥至恒重，粉碎过60目筛，取筛下样品粉末备用；

（2）菌种培养活化：取步骤（1）中制得的样品粉末置入斜面培养基中进行培养，培养温度26℃，培养时间4d，得到活化的菌株；

（3）摇瓶发酵培养：取步骤（2）中活化的菌株置入发酵瓶中进行摇瓶发酵培养，摇床速度210r/min，培养温度26℃，培养时间4d，得菌株发酵液；

（4）多糖提取：将步骤（3）中制得的菌株发酵液加等量的蒸馏水进一步溶解稀释，置入微波炉中提取，反复提取多次，提取结束后，以140000r/min速度离心8min，取上清液旋转蒸发至原上清液体积的1/4，加入无水乙醇，超声混匀20min，置于4℃冰箱过液，以140000r/min速度离心8min，弃上清，取沉淀干燥至恒重即为云芝多糖。

步骤（2）中所述的斜面培养基的组分为：马铃薯20%，葡萄糖2%，磷酸二氢钾0.3%，硫酸镁水合物0.2%，琼脂2%。

步骤（3）中所述的摇瓶发酵培养基的组分为：马铃薯汁30-50%，葡萄糖2%,硫酸镁水合物0.2%，硫酸钠0.05%，磷酸二氢钾0.3%。

步骤（2）中所述的斜面培养基及步骤（3）中所述的摇瓶种子培养基均为在121℃条件下湿热灭菌35min的培养基。

步骤（4）中所述的微波提取的条件为：提取时间25s，提取功率为263W，提取温度为58℃；所述的微波提取采用间歇提取，反复提取次数为4次。

以上所述实施例只是本发明的较佳实例，并非来限制本发明实施范围，故凡依本发明申请专利范围所述的构造、特征及原理所做的等效变化或修饰，均应包括本发明专利申请范围内。

Claims

1. 一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（1）中所述的粉碎过筛为过40-80目筛。

3.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（2）中所述的斜面培养基的组分为：马铃薯15-25%，葡萄糖1-3%，磷酸二氢钾0.1-0.5%，硫酸镁水合物0.1-0.3%，琼脂1-3%。

4.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（3）中所述的摇瓶发酵培养基的组分为：马铃薯汁30-50%，葡萄糖1-3%,硫酸镁水合物0.1-0.3%，硫酸钠0.03-0.08%，磷酸二氢钾0.1-0.5%。

5.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（2）中所述的斜面培养基及步骤（3）中所述的摇瓶种子培养基均为在121℃条件下湿热灭菌30-40min的培养基。

6.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（2）中所述的培养条件为：培养温度25-28℃，培养时间3-5d。

7.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（3）中所述的培养条件为：摇床速度200-220r/min，培养温度25-28℃，培养时间3-5d。

8.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征在于，步骤（4）中所述的微波提取的条件为：提取时间20-30s，提取功率为260-265W，提取温度为55-60℃；所述的微波提取采用间歇提取，反复提取次数为3-5次。

9.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（4）中所述的离心的速度为13000-150000r/min,离心时间为5-10min。

10.根据权利要求1所述的一种云芝中多糖的提取方法，其特征于，步骤（4）中所述的超声混匀时间为15-30min。