CN104087562A - 一种超氧化物歧化酶的提取方法 - Google Patents

一种超氧化物歧化酶的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物提取技术领域，特别涉及一种超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步骤：取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:6-10，浸泡液pH为7.3-7.8，浸泡温度为45-55℃；浸泡36-40h后，将浸泡物离心，得到上清液；将上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品。本发明提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜叶子破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到固态超氧化物歧化酶，整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶无任何有机溶剂，品质高；降低了20-30％的成本。

Description

一种超氧化物歧化酶的提取方法
技术领域
本发明涉及生物提取技术领域，具体而言，涉及一种超氧化物歧化酶的提取方法。
背景技术
超氧化物歧化酶(SOD，super oxide dismutase)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质，具有抗衰老的特殊功效。它在大自然中普遍存在，不仅在需氧代谢细胞中存在，甚至在厌氧细菌中也有发现。SOD是人体内最重要的酶之一，它是一种极其有效的抗氧化剂，能抵御超氧阴离子自由基对细胞的破坏，能有效控制超氧阴离子自由基，保持人体细胞膜处于年青、柔软和健康的状态。但是，SOD也像其它存在于人体内的保护性成分一样，随着年龄的增加而减少，这样就使细胞更易受到氧化剂的攻击，从而引起老化和疾病。
银杏叶中富含SOD，能催化超氧负离子发生歧化反应，是一种具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射和消炎作用的金属酶,在临床医学、药学等领域得到广泛应用。
目前，银杏叶中SOD采用有机溶剂进行提取，工艺生产过程中需要用到蒸煮、二次浓缩和烘干共计四道耗汽单元操作，整体能源消耗高，工艺生产流程复杂；有机溶剂使用种类和数量较大，有乙醇、正己烷等，容易在终产品中残留，影响产品质量；并且制得的产品成本较高，不利于产品推广与发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种超氧化物歧化酶的提取方法，以解决上述的问题。
在本发明的实施例中提供了一种超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步骤：
(a)、取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；
(b)、所述叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，所述叶子浆料与所述缓冲溶液的质量比为1:6-10，浸泡液pH为7.3-7.8，浸泡温度为45-55℃；
(c)、浸泡36-40h后，将浸泡物离心，得到上清液；
(d)、将所述上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品。
优选地，所述新鲜叶子包括甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中的任意一种或多种。
优选地，所述新鲜叶子为新鲜嫩叶。
优选地，在所述步骤(a)中，破碎的粒度大于4目。
优选地，在所述步骤(b)中，所述缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％-40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8-1.2：0.8-1.2。
优选地，在所述步骤(b)中，浸泡罐内含有的物质占其体积的1/3-2/3。
优选地，在所述步骤(b)中，浸泡过程中进行搅拌，搅拌速度为25-30转/分钟。
优选地，在所述步骤(c)中，离心速度为3000-3500转/分钟。
优选地，在所述步骤(c)中，所述上清液的浊度小于8NTU。
优选地，在所述步骤(d)中，浓缩的倍数为4-4.5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶产品的水分含量为3-4％。
优选地，在所述步骤(d)中，采用四效真空降膜错流蒸发对所述上清液浓缩，采用喷雾干燥进行干燥。
本发明实施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜叶子破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到固态超氧化物歧化酶，整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶无任何有机溶剂，品质高；降低了20-30％的成本。
具体实施方式
下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。
本发明的实施例中提供了一种超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步骤：
(a)、取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；
(b)、所述叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，所述叶子浆料与所述缓冲溶液的质量比为1:6-10，浸泡液pH为7.3-7.8，浸泡温度为45-55℃；
(c)、浸泡36-40h后，将浸泡物离心，得到上清液；
(d)、将所述上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品。
本发明实施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜叶子破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到固态超氧化物歧化酶，整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶无任何有机溶剂，品质高；降低了20-30％的成本。
甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中富含SOD，优选地，所述新鲜叶子包括甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中的任意一种或多种。
新鲜嫩叶含有较为丰富的SOD，其他杂质少，纤维少，发酵后易于提取，优选地，所述新鲜叶子为新鲜嫩叶。新鲜嫩叶一般选自植株的最上面几片。
后续浸泡过程中搅拌，叶子破碎的粒度就不需要太小，优选地，在所述步骤(a)中，破碎的粒度大于4目。这样破碎的叶子既节省破碎的工序，后续浸泡过程效果好，得到的SOD含量高。
根据缓冲溶液的pH可以算出需要加入的KH2PO4与K2HPO4的摩尔比，以及总溶液的质量。优选地，在所述步骤(b)中，所述缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％-40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8-1.2：0.8-1.2。该缓冲溶液浸泡叶子浆料，pH为7.4-7.6，该pH条件下，SOD活性好，且得到的浸泡效果好，提取得到的SOD含量高。
浸泡罐内放置太多原料，容易浸泡效果不均一，并且容易生成有害代谢产物；而放置太少的原料，会造成效率低下；优选地，在所述步骤(b)中，浸泡罐内含有的物质占其体积的1/3-2/3。该浸泡罐内盛放的原料，浸泡物之间相互融合反应，浸出物得率高，且得到的浸出物活性成分活性好。
在浸泡过程中，为了浸泡的更为均匀，增加叶子中的物质浸出，优选地，在所述步骤(b)中，浸泡过程中进行搅拌，搅拌速度为25-30转/分钟。
为了将浸泡物中的SOD更好的分离出来，优选地，在所述步骤(c)中，离心速度为3000-3500转/分钟。
为了使得到的SOD含量高，纯度好，进一步地，在所述步骤(c)中，所述上清液的浊度小于8NTU。
为了使得到的SOD易于保藏，优选地，在所述步骤(d)中，浓缩的倍数为4-4.5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶产品的水分含量为3-4％。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为80％-90％，同时含有其它有益美容的蛋白质，含量合计为7％-20％。产品保存环境为干燥、25℃以下、避光(包括紫外线照射等)，产品保存期为1.5年。
进一步地，在所述步骤(d)中，采用四效真空降膜错流蒸发对所述上清液浓缩，采用喷雾干燥进行干燥。采用四效真空降膜错流蒸发对上清液浓缩，料液加热时间非常短，较大的保存了食品的营养成份；加热均匀，料液为液膜式流动蒸发，传热效率高，加热时间短，节能；得到的浓缩液中无泡沫；自动化操作，提高了效率，节约了人力。喷雾干燥是系统化技术应用于物料干燥的一种方法，于干燥室中将稀料经雾化后，在与热空气的接触中，水分迅速汽化，即得到干燥产品，该法能直接使溶液、乳浊液干燥成粉状或颗粒状制品，可省去蒸发、粉碎等工序。
实施例1
取新鲜甘薯嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:6，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.9：1，浸泡液pH为7.3，浸泡温度为45℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为25转/分钟；
浸泡36h后，将浸泡物离心，离心速度为3000转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液浓缩4倍，干燥至含水量为3％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为85％，其他成分为12％，以新鲜甘薯嫩叶计，SOD产品的收率为8％。
实施例2
取新鲜银杏嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:7，缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为1：1，浸泡液pH为7.6，浸泡温度为50℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为30转/分钟；
浸泡38h后，将浸泡物离心，离心速度为3200转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液采用四效真空降膜错流蒸发浓缩4.5倍，喷雾干燥至含水量为3.5％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为90％，其他成分为6.5％，以新鲜银杏嫩叶计，SOD产品的收率为12％。
实施例3
取新鲜串叶松香草嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:8，缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8：1.2，浸泡液pH为7.5，浸泡温度为48℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为28转/分钟；
浸泡40h后，将浸泡物离心，离心速度为3500转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液采用四效真空降膜错流蒸发浓缩4.2倍，喷雾干燥至含水量为3.5％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为85％，其他成分为11.5％，以新鲜串叶松香草嫩叶计，SOD产品的收率为8％。
实施例4
取新鲜金心黄杨嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:10，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为1.2：0.8，浸泡液pH为7.8，浸泡温度为55℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为27转/分钟；
浸泡37h后，将浸泡物离心，离心速度为3000转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液采用四效真空降膜错流蒸发浓缩4.4倍，喷雾干燥至含水量为4％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为80％，其他成分为16％，以新鲜金心黄杨嫩叶计，SOD产品的收率为10％。
本发明实施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜嫩叶破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到超氧化物歧化酶产品。整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶产品为白色粉状，SOD含量为80％-90％，同时含有其他易于被人体吸收的活性蛋白成分，含量合计为7％-20％，产品无任何有机溶剂，得到的超氧化物歧化酶产品品质高；得到的SOD产品易于保存，保存环境为干燥、25℃以下、避光(包括紫外线照射等)，产品保存期为2年；生产成本低，降低了20-30％的成本。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)、取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；
(b)、所述叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，所述叶子浆料与所述缓冲溶液的质量比为1:6-10，浸泡液pH为7.3-7.8，浸泡温度为45-55℃；
(c)、浸泡36-40h后，将浸泡物离心，得到上清液；
(d)、将所述上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品。
2.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，所述新鲜叶子包括甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中的任意一种或多种。
3.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，所述新鲜叶子为新鲜嫩叶。
4.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(a)中，破碎的粒度大于4目。
5.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(b)中，所述缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％-40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8-1.2：0.8-1.2。
6.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(b)中，浸泡过程中进行搅拌，搅拌速度为25-30转/分钟。
7.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，离心速度为3000-3500转/分钟。
8.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，所述上清液的浊度小于8NTU。
9.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(d)中，浓缩的倍数为4-4.5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶产品的水分含量为3-4％。
10.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(d)中，采用四效真空降膜错流蒸发对所述上清液浓缩，采用喷雾干燥进行干燥。
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