CN104087562B - 一种超氧化物歧化酶的提取方法 - Google Patents

一种超氧化物歧化酶的提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN104087562B
CN104087562B CN201410357344.8A CN201410357344A CN104087562B CN 104087562 B CN104087562 B CN 104087562B CN 201410357344 A CN201410357344 A CN 201410357344A CN 104087562 B CN104087562 B CN 104087562B
Authority
CN
China
Prior art keywords
leaf
superoxide dismutase
supernatant
soak
extracting method
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201410357344.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN104087562A (zh
Inventor
黄海军
王若林
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BEIJING HANRUO BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
BEIJING HANRUO BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by BEIJING HANRUO BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical BEIJING HANRUO BIOLOGICAL SCIENCE & TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201410357344.8A priority Critical patent/CN104087562B/zh
Publication of CN104087562A publication Critical patent/CN104087562A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN104087562B publication Critical patent/CN104087562B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0089—Oxidoreductases (1.) acting on superoxide as acceptor (1.15)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y115/00—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15)
    • C12Y115/01—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15) with NAD or NADP as acceptor (1.15.1)
    • C12Y115/01001—Superoxide dismutase (1.15.1.1)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及生物提取技术领域，特别涉及一种超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步骤：取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4‑K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:6‑10，浸泡液pH为7.3‑7.8，浸泡温度为45‑55℃；浸泡36‑40h后，将浸泡物离心，得到上清液；将上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品。本发明提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜叶子破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到固态超氧化物歧化酶，整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶无任何有机溶剂，品质高；降低了20‑30％的成本。

Description

一种超氧化物歧化酶的提取方法
技术领域
本发明涉及生物提取技术领域，具体而言，涉及一种超氧化物歧化酶的提取方法。
背景技术
超氧化物歧化酶(SOD，super oxide dismutase)是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质，具有抗衰老的特殊功效。它在大自然中普遍存在，不仅在需氧代谢细胞中存在，甚至在厌氧细菌中也有发现。SOD是人体内最重要的酶之一，它是一种极其有效的抗氧化剂，能抵御超氧阴离子自由基对细胞的破坏，能有效控制超氧阴离子自由基，保持人体细胞膜处于年青、柔软和健康的状态。但是，SOD也像其它存在于人体内的保护性成分一样，随着年龄的增加而减少，这样就使细胞更易受到氧化剂的攻击，从而引起老化和疾病。
银杏叶中富含SOD，能催化超氧负离子发生歧化反应，是一种具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射和消炎作用的金属酶,在临床医学、药学等领域得到广泛应用。
目前，银杏叶中SOD采用有机溶剂进行提取，工艺生产过程中需要用到蒸煮、二次浓缩和烘干共计四道耗汽单元操作，整体能源消耗高，工艺生产流程复杂；有机溶剂使用种类和数量较大，有乙醇、正己烷等，容易在终产品中残留，影响产品质量；并且制得的产品成本较高，不利于产品推广与发展。
发明内容
本发明的目的在于提供一种超氧化物歧化酶的提取方法，以解决上述的问题。
在本发明的实施例中提供了一种超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步骤：
(a)、取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；
(b)、所述叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，所述叶子浆料与所述缓冲溶液的质量比为1:6-10，浸泡液pH为7.3-7.8，浸泡温度为45-55℃；
(c)、浸泡36-40h后，将浸泡物离心，得到上清液；
(d)、将所述上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品。
优选地，所述新鲜叶子包括甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中的任意一种或多种。
优选地，所述新鲜叶子为新鲜嫩叶。
优选地，在所述步骤(a)中，破碎的粒度大于4目。
优选地，在所述步骤(b)中，所述缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％-40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8-1.2：0.8-1.2。
优选地，在所述步骤(b)中，浸泡罐内含有的物质占其体积的1/3-2/3。
优选地，在所述步骤(b)中，浸泡过程中进行搅拌，搅拌速度为25-30转/分钟。
优选地，在所述步骤(c)中，离心速度为3000-3500转/分钟。
优选地，在所述步骤(c)中，所述上清液的浊度小于8NTU。
优选地，在所述步骤(d)中，浓缩的倍数为4-4.5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶产品的水分含量为3-4％。
优选地，在所述步骤(d)中，采用四效真空降膜错流蒸发对所述上清液浓缩，采用喷雾干燥进行干燥。
本发明实施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜叶子破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到固态超氧化物歧化酶，整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶无任何有机溶剂，品质高；降低了20-30％的成本。
具体实施方式
下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。
本发明的实施例中提供了一种超氧化物歧化酶的提取方法，包括以下步骤：
(a)、取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；
(b)、所述叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，所述叶子浆料与所述缓冲溶液的质量比为1:6-10，浸泡液pH为7.3-7.8，浸泡温度为45-55℃；
(c)、浸泡36-40h后，将浸泡物离心，得到上清液；
(d)、将所述上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品。
本发明实施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜叶子破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到固态超氧化物歧化酶，整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶无任何有机溶剂，品质高；降低了20-30％的成本。
甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中富含SOD，优选地，所述新鲜叶子包括甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中的任意一种或多种。
新鲜嫩叶含有较为丰富的SOD，其他杂质少，纤维少，发酵后易于提取，优选地，所述新鲜叶子为新鲜嫩叶。新鲜嫩叶一般选自植株的最上面几片。
后续浸泡过程中搅拌，叶子破碎的粒度就不需要太小，优选地，在所述步骤(a)中，破碎的粒度大于4目。这样破碎的叶子既节省破碎的工序，后续浸泡过程效果好，得到的SOD含量高。
根据缓冲溶液的pH可以算出需要加入的KH2PO4与K2HPO4的摩尔比，以及总溶液的质量。优选地，在所述步骤(b)中，所述缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％-40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8-1.2：0.8-1.2。该缓冲溶液浸泡叶子浆料，pH为7.4-7.6，该pH条件下，SOD活性好，且得到的浸泡效果好，提取得到的SOD含量高。
浸泡罐内放置太多原料，容易浸泡效果不均一，并且容易生成有害代谢产物；而放置太少的原料，会造成效率低下；优选地，在所述步骤(b)中，浸泡罐内含有的物质占其体积的1/3-2/3。该浸泡罐内盛放的原料，浸泡物之间相互融合反应，浸出物得率高，且得到的浸出物活性成分活性好。
在浸泡过程中，为了浸泡的更为均匀，增加叶子中的物质浸出，优选地，在所述步骤(b)中，浸泡过程中进行搅拌，搅拌速度为25-30转/分钟。
为了将浸泡物中的SOD更好的分离出来，优选地，在所述步骤(c)中，离心速度为3000-3500转/分钟。
为了使得到的SOD含量高，纯度好，进一步地，在所述步骤(c)中，所述上清液的浊度小于8NTU。
为了使得到的SOD易于保藏，优选地，在所述步骤(d)中，浓缩的倍数为4-4.5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶产品的水分含量为3-4％。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为80％-90％，同时含有其它有益美容的蛋白质，含量合计为7％-20％。产品保存环境为干燥、25℃以下、避光(包括紫外线照射等)，产品保存期为1.5年。
进一步地，在所述步骤(d)中，采用四效真空降膜错流蒸发对所述上清液浓缩，采用喷雾干燥进行干燥。采用四效真空降膜错流蒸发对上清液浓缩，料液加热时间非常短，较大的保存了食品的营养成份；加热均匀，料液为液膜式流动蒸发，传热效率高，加热时间短，节能；得到的浓缩液中无泡沫；自动化操作，提高了效率，节约了人力。喷雾干燥是系统化技术应用于物料干燥的一种方法，于干燥室中将稀料经雾化后，在与热空气的接触中，水分迅速汽化，即得到干燥产品，该法能直接使溶液、乳浊液干燥成粉状或颗粒状制品，可省去蒸发、粉碎等工序。
实施例1
取新鲜甘薯嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:6，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.9：1，浸泡液pH为7.3，浸泡温度为45℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为25转/分钟；
浸泡36h后，将浸泡物离心，离心速度为3000转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液浓缩4倍，干燥至含水量为3％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为85％，其他成分为12％，以新鲜甘薯嫩叶计，SOD产品的收率为8％。
实施例2
取新鲜银杏嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:7，缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为1：1，浸泡液pH为7.6，浸泡温度为50℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为30转/分钟；
浸泡38h后，将浸泡物离心，离心速度为3200转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液采用四效真空降膜错流蒸发浓缩4.5倍，喷雾干燥至含水量为3.5％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为90％，其他成分为6.5％，以新鲜银杏嫩叶计，SOD产品的收率为12％。
实施例3
取新鲜串叶松香草嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:8，缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8：1.2，浸泡液pH为7.5，浸泡温度为48℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为28转/分钟；
浸泡40h后，将浸泡物离心，离心速度为3500转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液采用四效真空降膜错流蒸发浓缩4.2倍，喷雾干燥至含水量为3.5％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为85％，其他成分为11.5％，以新鲜串叶松香草嫩叶计，SOD产品的收率为8％。
实施例4
取新鲜金心黄杨嫩叶，打浆破碎得到叶子浆料，破碎的粒度大于4目；
叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，叶子浆料与缓冲溶液的质量比为1:10，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为1.2：0.8，浸泡液pH为7.8，浸泡温度为55℃，浸泡过程中搅拌，搅拌速度为27转/分钟；
浸泡37h后，将浸泡物离心，离心速度为3000转/分钟，得到上清液，上清液的浊度小于8NTU；
将上清液采用四效真空降膜错流蒸发浓缩4.4倍，喷雾干燥至含水量为4％，得到超氧化物歧化酶产品。得到的SOD产品为白色粉状，SOD含量为80％，其他成分为16％，以新鲜金心黄杨嫩叶计，SOD产品的收率为10％。
本发明实施例提供的超氧化物歧化酶的提取方法，是将新鲜嫩叶破碎后浸泡，然后离心得到上清液，对上清液进行浓缩和干燥，得到超氧化物歧化酶产品。整个提取过程简单易行，能耗低，且得到的超氧化物歧化酶产品为白色粉状，SOD含量为80％-90％，同时含有其他易于被人体吸收的活性蛋白成分，含量合计为7％-20％，产品无任何有机溶剂，得到的超氧化物歧化酶产品品质高；得到的SOD产品易于保存，保存环境为干燥、25℃以下、避光(包括紫外线照射等)，产品保存期为2年；生产成本低，降低了20-30％的成本。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(a)、取新鲜叶子，打浆破碎得到叶子浆料；
(b)、所述叶子浆料采用缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4浸泡，所述叶子浆料与所述缓冲溶液的质量比为1:6-10，浸泡液pH为7.4-7.6，浸泡温度为45-55℃；
(c)、浸泡36-40h后，将浸泡物离心，得到上清液；
(d)、将所述上清液浓缩，干燥，得到超氧化物歧化酶产品；
所述新鲜叶子为新鲜嫩叶；
在所述步骤(b)中，所述缓冲溶液KH2PO4-K2HPO4的质量浓度为30％-40％，KH2PO4与K2HPO4的摩尔数比为0.8-1.2：0.8-1.2；
在所述步骤(b)中，浸泡过程中进行搅拌，搅拌速度为25-30转/分钟；
在所述步骤(c)中，所述上清液的浊度小于8NTU；
在所述步骤(d)中，采用四效真空降膜错流蒸发对所述上清液浓缩，采用喷雾干燥进行干燥。
2.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，所述新鲜叶子包括甘薯叶、山楂叶、银杏叶、串叶松香草叶、北海道黄杨叶、大叶黄杨叶、金心黄杨叶中的任意一种或多种。
3.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(a)中，破碎的粒度大于4目。
4.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(c)中，离心速度为3000-3500转/分钟。
5.根据权利要求1所述的超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于，在所述步骤(d)中，浓缩的倍数为4-4.5倍，干燥至所述超氧化物歧化酶产品的水分含量为3-4％。
CN201410357344.8A 2014-07-24 2014-07-24 一种超氧化物歧化酶的提取方法 Active CN104087562B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410357344.8A CN104087562B (zh) 2014-07-24 2014-07-24 一种超氧化物歧化酶的提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201410357344.8A CN104087562B (zh) 2014-07-24 2014-07-24 一种超氧化物歧化酶的提取方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN104087562A CN104087562A (zh) 2014-10-08
CN104087562B true CN104087562B (zh) 2016-08-24

Family

ID=51635323

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201410357344.8A Active CN104087562B (zh) 2014-07-24 2014-07-24 一种超氧化物歧化酶的提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN104087562B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113462663A (zh) * 2021-08-05 2021-10-01 贵州百穗农特产品有限公司 一种超氧化物歧化酶的生产方法
CN114183999A (zh) * 2021-12-16 2022-03-15 徐峰 富超氧歧化酶水的提取方法及设备
CN116462548B (zh) * 2023-04-13 2024-05-24 山东清檬农业科技有限公司 一种串叶松香草植物营养液及其制备方法和在肥料中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1076727A (zh) * 1993-03-26 1993-09-29 沈阳市东华实业公司 一种用植物提取超氧化物歧化酶的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1076727A (zh) * 1993-03-26 1993-09-29 沈阳市东华实业公司 一种用植物提取超氧化物歧化酶的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN104087562A (zh) 2014-10-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104872674A (zh) 一种枸杞、红枣酵素及其制备方法
CN102058067A (zh) 用大麦或小麦的种子制备功能食品所用原料的方法
CN106562431A (zh) 一种有机糙米果蔬保健酵素的制备方法
CN104087562B (zh) 一种超氧化物歧化酶的提取方法
CN106336991A (zh) 一种富含硒和白藜芦醇的大麦苗酒的制备方法
CN106617047A (zh) 一种桑椹酵素及其生产工艺
CN109042790A (zh) 一种木糖醇桑叶饼干的制备方法
CN107950826A (zh) 一种具有保健功效的sod小分子固体饮料及其制备方法
CN103435421A (zh) 一种大球盖菇栽培料配伍及此栽培料的制作方法
CN109006179A (zh) 一种香菇栽培基质的生产方法
CN107969585A (zh) 一种具有防辐射抗氧化功效的饮料及其制备工艺
CN106701404A (zh) 一种辣木叶燕麦营养酒及其制备方法
CN108220046A (zh) 荞香型苦荞酒的生产工艺
CN101427833B (zh) 糜米低醇饮料的制作方法
CN106472910A (zh) 柚子速溶粉的生产方法
CN104970328A (zh) 一种刺梨发酵果干
CN108633962A (zh) 一种富硒螺旋藻面包及其制备方法
CN102161959A (zh) 野生沙梨酒及其制作工艺
CN108718912A (zh) 一种香菇种植培养料
CN108165426A (zh) 一种保健酒酿制方法
CN106721153A (zh) 一种纯天然有机无抗羊养殖饲料及其制备方法
CN106967578A (zh) 一种核桃粕糯米营养醋粉的制备方法
CN106367260A (zh) 一种虫草稠酒的制备方法
CN108395967A (zh) 一种葵盘清风酒的酿制方法
CN105110957A (zh) 一种大球盖菇用高生物活性高效培养基及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant