CN113462663A - 一种超氧化物歧化酶的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种超氧化物歧化酶的生产方法，涉及农产品生物化学领域，该生产方法主要将新鲜果叶破碎成浆料之后加入缓冲液混合，经过搅拌、静置、离心工序之后得到上清液，采用生物超滤膜进行过滤得到高纯度歧化酶液，后经低温干燥得到歧化酶干粉。本发明公开的歧化酶的生产方法制备得到的歧化酶纯度高，工艺简单，且所选用的材料成本低，原料广泛，易于推广。
Description
技术领域
本发明属于农产品生物化学领域，尤其是涉及一种超氧化物歧化酶的生产方法。
背景技术
超氧化物歧化酶（SOD），是生物体内重要的抗氧化酶，广泛分布于各种生物体内，如动物，植物，微生物等。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内的水平高低意味着衰老与死亡的直观指标；现已证实，由氧自由基引发的疾病多达60多种。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的对细胞伤害。
SOD 在蔬菜水果中含量较高，如香蕉、山楂、刺梨、猕猴桃、大蒜等，SOD 的活性在果皮中高于果肉，在新鲜水果中高于放置后的水果。然而目前市场上存在的大多是用果肉进行SOD的提取，因为从果叶中提取SOD需要大量的有机溶剂，但容易残留较多的有机溶剂，且工艺复杂，提取量低。
发明内容
针对上述背景技术中存在的问题，本发明提供一种超氧化物歧化酶的生产方法，主要是利用果叶进行SOD的提取，其技术方案是这样的：
一种超氧化物歧化酶的生产方法，包括以下步骤：
S1:取新鲜的果叶，用破碎机将果叶作破碎处理，形成果叶浆料；
S2：取出果叶浆料加入缓冲液，果叶浆料和缓冲液的重量比例按1:5-8混合，将混合液的pH值控制在6.8-8间，将混合液倒入搅拌机中匀速搅拌，搅拌速度在20-40rad/min,搅拌温度控制在20℃-28℃之间，搅拌时间30-50分钟；
S3：搅拌完成之后将混合液倒出，置于恒温在20℃-28℃的环境中静置15-20h，静置结束后将混合液置于离心机中作离心处理，得到上清液，滤除沉淀物；
S4：将离心得到的上清液用生物超滤膜进行过滤，过滤时在常温中进行，pH值控制在6.8-8间，滤除液即为高纯度超氧化物歧化酶（SOD）溶液；
S5：将得到的高纯度超氧化物歧化酶（SOD）溶液在低温下干燥处理得到超氧化物歧化酶的干粉，干燥的温度控制在2-5℃间干燥8-12小时。
进一步的，所述的新鲜果叶包括银杏叶、甘薯叶、豆叶、山楂叶、马铃薯叶、杨树叶、香蕉叶、大蒜叶、苹果叶等。
进一步的，所述的新鲜果叶破碎的粒度在3-6目。
进一步的，所述的缓冲液由浓度为25%-35%的氯化钠溶液和10%-20%的磷酸盐溶液按质量1:1.2-1.5的比例溶和。
进一步的，所述的S3中离心机的离心转速在3000-4000rad/min。
进一步的，所述的S4中生物超滤膜自网络中购买所得。
进一步的，所述的S4中上清液的浊度小于6NTU。
本发明的有益效果是：
1.采用的是原材料是新鲜果叶，是含有SOD最多的部位，且原料广泛成本低。
2.采用的生物膜超滤得到的超氧化物歧化酶（SOD）纯度高达94%，相比较传统的工艺盐析法的80%要高出很多。
附图说明
图1是本发明的工艺流程图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方式对本发明的内容做进一步的详细描述。
一种超氧化物歧化酶的生产方法，包括以下步骤：
S1:取新鲜的果叶，用破碎机将果叶作破碎处理，形成果叶浆料；
S2：取出果叶浆料加入缓冲液，果叶浆料和缓冲液的重量比例按1:5-8混合，将混合液的pH值控制在6.8-8间，将混合液倒入搅拌机中匀速搅拌，搅拌速度在20-40rad/min,搅拌温度控制在20℃-28℃之间，搅拌时间30-50分钟；
S3：搅拌完成之后将混合液倒出，置于恒温在20℃-28℃的环境中静置15-20h，静置结束后将混合液置于离心机中作离心处理，得到上清液，滤除沉淀物；
S4：将离心得到的上清液用生物超滤膜进行过滤，过滤时在常温中进行，pH值控制在6.8-8间，滤除液即为高纯度超氧化物歧化酶（SOD）溶液；
S5：将得到的高纯度超氧化物歧化酶（SOD）溶液在低温下干燥处理得到超氧化物歧化酶的干粉，干燥的温度控制在2-5℃间干燥8-12小时。
为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的新鲜果叶包括银杏叶、甘薯叶、豆叶、山楂叶、马铃薯叶、杨树叶、香蕉叶、大蒜叶、苹果叶等，优选山楂叶和大蒜叶，山楂叶和大蒜叶是SOD含量最高的果叶，故优选。
为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的新鲜果叶破碎的粒度在4目，这样可以在提高后续与混合缓冲液的效果。
为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的缓冲液由浓度为25%-35%的氯化钠溶液和10%-20%的磷酸盐溶液按质量1:1.2-1.5的比例溶和。
为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的S3中离心机的离心转速在3000-4000rad/min。
为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的S4中生物超滤膜自网络中购买所得。
为了提高超氧化物歧化酶的纯度及含量，进一步的，所述的S4中上清液的浊度小于6NTU。
实施例1
选用新鲜山楂叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为5目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:7混合，缓冲液由30%的氯化钠溶液和15%的磷酸钾溶液按1:1.3的比例进行溶和，pH值控制在7-7.5之间，搅拌机的搅拌速度在30rad/min，搅拌温度控制在24℃，搅拌40分钟后置于24℃的环境中静置18小时，在离心速率在3000转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在pH值控制在7-7.5之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在2℃的环境中干燥10小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
实施例2
选用新鲜大蒜叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为4目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:8混合，缓冲液由25%的氯化钠溶液和20%的磷酸钾溶液按1:1.2的比例进行溶和，pH值控制在6.8-7.2之间，搅拌机的搅拌速度在40rad/min，搅拌温度控制在23℃，搅拌40分钟后置于24℃的环境中静置18小时，在离心速率在3500转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在pH值控制在6.8-7.2之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在3℃的环境中干燥12小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
实施例3
选用新鲜大蒜叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为3目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:6混合，缓冲液由30%的氯化钠溶液和15%的磷酸钾溶液按1:1.4的比例进行溶和，pH值控制在7-7.5之间，搅拌机的搅拌速度在40rad/min，搅拌温度控制在23℃，搅拌40分钟后置于22℃的环境中静置16小时，在离心速率在4000转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在pH值控制在7-7.5之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在2℃的环境中干燥10小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
实施例4
选用新鲜苹果叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为5目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:8混合，缓冲液由27%的氯化钠溶液和18%的磷酸钾溶液按1:1.3的比例进行溶和，pH值控制在6.8-7.3之间，搅拌机的搅拌速度在35rad/min，搅拌温度控制在25℃，搅拌35分钟后置于24℃的环境中静置15小时，在离心速率在3500转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在pH值控制在6.8-7.3之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在4℃的环境中干燥12小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
实施例5
选用新鲜杨树叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为4目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:7混合，缓冲液由24%的氯化钠溶液和15%的磷酸钾溶液按1:1.2的比例进行溶和，pH值控制在7-7.2之间，搅拌机的搅拌速度在35rad/min，搅拌温度控制在25℃，搅拌35分钟后置于22℃的环境中静置14小时，在离心速率在3200转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在pH值控制在7-7.2之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在3℃的环境中干燥10小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
实施例6
选用新鲜大蒜叶作为破碎果叶，粉碎的粒度为4目，果叶浆料与缓冲液的重量比按1:8混合，缓冲液由25%的氯化钠溶液和20%的磷酸钾溶液按1:1.3的比例进行溶和，pH值控制在6.8-7.3之间，搅拌机的搅拌速度在40rad/min，搅拌温度控制在24℃，搅拌40分钟后置于24℃的环境中静置15小时，在离心速率在3500转/分钟下离心得到上清液，用生物超滤膜进行过滤，在pH值控制在6.8-7.3之间常温中进行，得到高纯度超氧化物歧化酶，后在2℃的环境中干燥12小时得到超氧化物歧化酶的干粉。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种超氧化物歧化酶的生产方法，包括以下步骤：
S1:取新鲜的果叶，用破碎机将果叶作破碎处理，形成果叶浆料；
S2：取出果叶浆料加入缓冲液，果叶浆料和缓冲液的重量比例按1:5-8混合，将混合液的pH值控制在6.8-8间，将混合液倒入搅拌机中匀速搅拌，搅拌速度在20-40rad/min,搅拌温度控制在20℃-28℃之间，搅拌时间30-50分钟；
S3：搅拌完成之后将混合液倒出，置于恒温在20℃-28℃的环境中静置15-20h，静置结束后将混合液置于离心机中作离心处理，得到上清液，滤除沉淀物；
S4：将离心得到的上清液用生物超滤膜进行过滤，过滤时在常温中进行，pH值控制在6.8-8间，滤除液即为高纯度超氧化物歧化酶（SOD）溶液；
S5：将得到的高纯度超氧化物歧化酶（SOD）溶液在低温下干燥处理得到超氧化物歧化酶的干粉，干燥的温度控制在2-5℃间干燥8-12小时。
2.根据权利要求1所述的一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于所述的新鲜果叶包括银杏叶、甘薯叶、豆叶、山楂叶、马铃薯叶、杨树叶、香蕉叶、大蒜叶、苹果叶等，优选为山楂叶和大蒜叶。
3.根据权利要求1所述的一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于所述的新鲜果叶破碎的粒度在3-6目。
4.根据权利要求1所述的一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于所述的缓冲液由浓度为25%-35%的氯化钠溶液和10%-20%的磷酸盐溶液按质量1:1.2-1.5的比例溶和。
5.根据权利要求1所述的一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于所述的S3中离心机的离心转速在3000-4000rad/min。
6.根据权利要求1所述的一种超氧化物歧化酶的生产方法，其特征在于所述的S4中上清液的浊度小于6NTU。
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