CN102086449A - 一种从甘薯块根中提取超氧化物歧化酶的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从甘薯块根中提取超氧化物岐化酶的方法。采用甘薯为原料，经清洁、热激诱导、粉碎、匀浆，以预冷的磷酸钾缓冲液抽提、过滤、离心，上清液经选择性酸碱变性处理，硫酸铵沉淀，得到粗酶制剂。本发明所得甘薯SOD无有害物质，纯度高，得率高，原料成本低，来源丰富，适合大规模生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种提取超氧化物歧化酶的方法，特别是一种从甘薯块根中提取超氧化物歧化酶的方法。
背景技术
超氧化物歧化酶广泛存在于生物体内，其功能为清除对生物体有强烈毒性的超氧自由基，过多的自由基被认为是使细胞衰老到死亡的主要原因之一。近年来，发展了一些提取SOD的方法，并将其用于医药、保健、食品、化妆品和日用化学品等领域，取得了很好的效果，特别是对消炎、抗衰老、抗辐射损伤和抑制肿瘤生长等均有较好的作用。
目前，SOD制剂大多从动物血液或组织中提取制备，使得原材料不易收集、运输、储存和清洗，而且极易携带病原微生物，极不安全。已有一些SOD制品是从谷物包括玉米、大豆等作物种提取制备的，这些原料虽然来源广泛，生产的SOD也安全，但是利用粮食作物生产SOD不利于我国的粮食安全。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，提供了一种从非粮食作物甘薯的块根中大量提取SOD的方法。该方法原料来源广泛，成本极低廉，经特殊的热激处理，SOD得率高，纯度高，适合大量生产。
本发明方法具有如下步骤：
a、将甘薯块根洗净，置于38℃热激48小时，诱导大量超氧化物歧化酶的产生；
b、将诱导的甘薯块根粉碎并加入4℃下预冷的0.05M磷酸钾缓冲液匀浆抽提；
c、过滤，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；
d、上清液加入2M醋酸，调节pH值为4.0，再次常温2500rpm离心，取上清液；
e、上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7.5，常温2500rpm离心，收集上清液；
f、上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80％，4℃沉淀；
g、常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。
具体的，本发明方法可按如下步骤实施：
1.将甘薯块根洗净，置于38℃热激48小时，热激可诱导甘薯产生大量超氧化物歧化酶，利于提高产率；
2.将诱导的甘薯块根粉碎，一边搅拌一边加入1∶1(重量体积比)4℃下预冷的0.05M磷酸钾缓冲液匀浆抽提；
3.过滤匀浆，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；
4.上清液加入2M醋酸，调节pH值为4.0，再次常温2500rpm离心，取上清液；
5.上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7.5，常温2500rpm离心，收集上清液；
6.上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80％，4℃沉淀；
7.常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。
本发明具有如下优点：本发明工艺简单，操作方便，原料来源特别丰富，成本极其低廉，适宜大规模生产。副产品主要为淀粉，同样具有较大经济价值。通过将甘薯块根热激处理，可诱导SOD大量产生，大大提高了SOD的得率，一般可达到15U/gfw。
具体实施方式
实施例一使用本发明方法提取甘薯超氧化物歧化酶SOD
1、原料浸提
称取甘薯块根500g，洗净，置于38℃温箱热激处理48小时。取出块根粉碎成小块，加入300ml 4℃预冷的0.05M磷酸钾缓冲液，边加边匀浆抽提；匀浆后用140目尼龙布过滤，残渣加200ml4℃预冷的0.05M磷酸钾缓冲液，再次匀浆抽提；过滤抽提液，收集并合并两次的抽提液。滤液在室温下于2500rpm离心15min，去上清液。
2、选择性酸碱变性
于上述上清液中加入2M醋酸，调节pH至4.0，室温下于2500rpm离心15min，除去碱性蛋白，收集上清；上清液中加入2M氢氧化钠，调节pH至7.5，室温下于2500rpm离心15min，除去酸性蛋白，收集上清。
3、粗酶制备
上清液中加入固体硫酸铵，边加边搅拌至饱和度达到80％，置于4℃下3-4小时，使蛋白沉淀。常温下于5000-6000rpm离心20min，收集沉淀既得甘薯SOD粗酶制剂。
经测定，由本发明方法提取的甘薯超氧化物歧化酶SOD比活力达到了216v/mg，活力回收达到了51.6％，500g甘薯产酶455mg。
表1分离纯化结果
| 步骤 | 总体积(ml) | 总蛋白(mg) | 总活性(v) | 比活性(v/mg) | 回收率(％) |
| 提取液 | 900 | 5450 | 190885 | 35 | |
| 酸碱变性 | 920 | 790 | 155890 | 197 | 81.7 |
| 硫铵沉淀 | 95 | 455 | 98520 | 216 | 51.6 |
Claims (1)
1.一种从甘薯块根中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征是具有如下步骤：
a、将甘薯块根洗净，置于38℃热激48小时，诱导大量超氧化物歧化酶的产生；
b、将诱导的甘薯块根粉碎并加入4℃下预冷的0.05M磷酸钾缓冲液匀浆抽提；
c、过滤，弃残渣，滤液在常温下2500rpm离心取上清液；
d、上清液加入2M醋酸，调节pH值为4.0，再次常温2500rpm离心，取上清液；
e、上清液加入2M氢氧化钠调整pH至7.5，常温2500rpm离心，收集上清液；
f、上清液中加入固体硫酸铵是上清液饱和度达到80％，4℃沉淀；
g、常温下，5000-6000rpm离心，收集沉淀，既得粗酶制剂。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110551706A (zh) * | 2019-09-27 | 2019-12-10 | 秦春国 | 一种植物根系及果实促进生长用蛋白酶生产方法 |
| CN113462663A (zh) * | 2021-08-05 | 2021-10-01 | 贵州百穗农特产品有限公司 | 一种超氧化物歧化酶的生产方法 |
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2009
- 2009-12-02 CN CN2009102164876A patent/CN102086449A/zh active Pending
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| DD01 | Delivery of document by public notice |
Addressee: Huang Xiaochuan Document name: Notification of Passing Preliminary Examination of the Application for Invention |
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| PB01 | Publication | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
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