CN1261565C - 玉米超氧化物歧化酶提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及的是以玉米为原料来提取超氧化物歧化酶的一种新型提取方法，该方法提取的超氧化物歧化酶是一种多酶种的复合酶，不仅易于透过细胞膜，而且能抵制胃、胰等多蛋白酶水解作用，其活性稳定，具有耐热性。其提取方法包括玉米籽粒消毒、发芽、打浆、压汁、沉淀离心去渣、滤液超滤、提取活性峰、浓缩升华冻干包装。用本方法提取的SOD其活性高，蛋白含量少，温度适应性广。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种生物酶的制取方法，尤其涉及的是超氧化物歧化酶(SOD)的制取方法。
背景技术
超氧化物歧化酶，又简称SOD，是一种重要的氧自由基的清除剂，具有很强的抗过氧自由基能力，它广泛应用于保健品、药物和化妆品中。目前的SOD从动物血液中提取的，其提取方法不仅步骤繁琐，而且要消耗大量化工原料，产生大量废气污染空气，同时其废液中含有的氯仿、丙酮、磷酸等都是常效的有机物质，无法回收，其排放、渗入地下将直接造成地下水的酸化、碱化污染，而且血液原料中携带病原微生物，国家在法规条例也加以严格地限制。血液提取SOD分子量大，难以透过细胞膜，还容易被胃蛋白或胰蛋白水解，应用中存在活性较弱的缺陷，通常只能在0-4℃温度环境下存活，否则失活。现有技术中虽也公开有以玉米为原料提取SOD的方法，但其方法各异，也存在化工原料消耗量大的弊病。中国专利CN99112607、名称为“玉米超氧化物歧化酶(SOD)复合酶大规模制造方法”，其方法是利用玉米，经发芽、加磷酸盐、打浆、加纤维素酶、打浆、加氯化钙、过渡、加炉化酶、硅藻土过滤、离心、超滤、加维生素C、维生素E、山梨酸钾、冷冻、融解离心一系列过程制取超氧化物歧化酶，该技术方案同样存在工艺复杂、工业原料用量大的技术弊病，仍存在难以大规模生产的技术缺陷。
发明内容
为改变现有仍单纯依赖血液为原料提取超氧化物起化酶提取途径的技术现状，而现有以玉米为原料提取超氧化物起化酶又存在产生大量污染废物的技术缺陷，本发明专利申请提供了一种以玉米为原料提取超氧化物歧化酶的提取方法的技术方案，本技术方案的主要技术内容是，
①玉米籽粒消毒、发芽
调整室温、水温、PH值、湿度、氧气供给量、光照、培养基等至适合玉米籽粒出芽的一个良好的基础及环境；
②打浆、压汁
按发芽籽粒重量加入一倍重量比的无杂质PH值为6-7的去离子水，打浆，然后压榨取浆汁，沉淀、滤去其粗渣；
③沉淀后离心去渣：
向压取的浆汁中加入其体积百分比15％的缓冲剂，搅拌，使细渣和淀粉静置沉淀，取其上清液经离心后，提取清液送入超滤；
④滤液超滤
将清液进行超滤，其清液送入提取塔；
⑤提取活性峰
清液加入促进剂，促使其加速沉淀，送入提取塔，经若干级扩散后，回收沉淀物：
⑥、浓缩升华冻干：
将沉淀物浓缩，将浓缩后的提取物装入冻干盘中冷冻；
其第③步中的缓冲剂为：占去离子水体积量35％的柠檬酸溶液和占稀释水体积量35％的柠檬酸钠溶液混合制成；其第⑤步中的促进剂为丙酮和95％乙醇分别按体积百分比85％∶15％加入以上清液中。
本发明专利申请提供的以玉米为原料提取超氧化物歧化酶的整套提取方法，其原料来源丰富，提取方法简单，更适于大工业生产，而且本方法提取的SOD其分子量仅为血液SOD分子量的1/2，克服了血液SOD分子量大、不易透过细胞膜并容易被胃蛋白、胰蛋白水解的缺陷。该方法所提取的SOD不仅是SOD酵素酶的一种，同时它还存在谷光苷肽、过氧化氢酶、过氧化物酶，它是一种多酶种的复合酶，能够较长地保持SOD的活性，能抵制胃蛋白、胰蛋白酶的水解。由于它产自植物糖线型细胞，所以它含有VE、VB、VC等多种维生素及铜、铁、锌、锰、硒等多种微量元素，而这些元素及维生素又都是人体内不可缺少的物质及营养。它的产成品呈乳白色，少带有粉色。经检测认定，玉米SOD在清除人体内自由基方面，是目前最完全、最彻底的一种酵素酶，是无可替代的。该酶族属于偏酸性蛋白酶族，活性稳定，有耐热性，能够在15-25℃的温度环境下保持其活性，尤其在PH7.6～9时表现极为稳定，在PH6以下或12以上表现不太稳定。与血液SOD相比较：
| 百公斤回收率(g) | 活力(U/mgprot) | 蛋白含量(mgpot/ml) | |
| 血液SOD | 20～25 | 400～500 | 0.541 |
| 玉米SOD | 100～110 | 700～1000 | 0.047 |
玉米提取的SOD产成品为酶制剂。它增强了治疗全身性的红斑狼疮、类风湿性关节炎、皮肤炎、硬皮病、自身免疫性溶血性贫血、血小板减少症、自身免疫性疾病、心肌缺血、缺血再灌注综合症、心血管疾病、肾、肝、心脏等器官的保护和移植、断肢再植、癌症化疗后修复、维护防止癌细胞的扩散和氧化、防止癌细胞的形成、美容、整形等手术过程防氧化、防衰老、防紫外线照射的损伤、外用可达到护肤养颜、祛斑和美容效果。
具体实施方式
下面将详细说明本发明技术的技术内容：
1、玉米提取的SOD主要取自于玉米芽糖的线型细胞核浆，所以其首要问题是玉米的质量和发芽率。其准备步骤过程中，为清除玉米籽粒中未被发现的破碎颗粒和消除其外皮可能携带的菌类，首先要进行清洗和消毒灭菌；然后进行发芽培育：按玉米发芽条件来调整其环境温度、湿度、水的PH值、空气流量、光照和供氧量，由于酵素族均属喜氧菌，调整培养基，达到萌芽期必要的氧供应，同时给予24小时光照，可增加红外线和紫光灯灯具，不但可以有利于出芽发育期的光合作用，同时还可对室空间杀菌作用。直至玉米长出鸭嘴形黄绿色芽体时，便可进行漂洗粉碎。
2、打浆、取压榨汁
按出芽玉米的实际重量加入重量比为1∶1的无杂质去离子水，其去离子水的PH值最好调整在6-6.5之间，然后打成碎浆；将打好的全浆放到压榨机中，用动力液压将汁液全部压挤出来，其压汁送入下一处理步骤；其粗渣可以送入发酵室，供发酵酿酒用。
3、沉淀后离心去渣：
向压取的浆汁中缓慢加入缓冲剂，在搅拌的情况下加入浆汁体积量的15％，其缓冲剂为：占去离子水体积量65％的柠檬酸溶液和占去离子水体积量35％的柠檬酸钠溶液混合制成，同时搅拌，使其活性物呈悬浮状态，然后静置沉淀，其上清液经多少转/分30分钟离心后，提取其清液，并泵送超滤罐中超滤处理。
4、滤液超滤
在超滤装置中经微分筛分液，其分液后经超滤，其超滤清液再送提取塔；
5、提取活性峰液
向清液中加入促进剂，其促进剂为丙酮和95％乙醇分别按体积百分比85％∶15％加入以上清液中，送入提取塔，该提取塔设为四级，扩散去液，回收沉淀物，并将沉淀物送入浓缩罐浓缩。各级提取后放出的清液中所含的丙酮、乙醇均可回收再利用。
6、浓缩升华冻干：
将沉淀物送入浓缩罐进行浓缩处理，浓缩后的半流体装入冻干盘中升华、冻干，得到SOD粗品。
第6步之后的各步骤是为了要制取医疗用SOD精品，所要进行的工艺步骤是：
7、将浓缩后的SOD粗品用去离子水稀释，用水浴和透析将透析液送入离心机离心除液，回收其沉淀物，将沉淀物再浓缩冻干，即得到精品SOD，其冻干包装与SOD粗品是一致的。
Claims (4)
1、一种玉米超氧化物歧化酶的提取方法，其特征在于其提取方法为：
①玉米籽粒消毒、发芽
调整室温、水温、pH值、湿度、氧气供给量、光照、培养基至适合玉米籽粒出芽的一个良好的基础及环境；
②打浆、压汁
按发芽籽粒重量加入一倍重量比的无杂质pH值为6-7的去离子水，打浆，然后压榨取浆汁，沉淀、滤去其粗渣；
③沉淀后离心去渣：
向压取的浆汁中加入其体积百分比15％的缓冲剂，搅拌，使细渣和淀粉静置沉淀，取其上清液经离心后，提取清液送入超滤；
④滤液超滤
将清液进行超滤，其清液送入提取塔；
⑤提取活性峰液
清液加入促进剂，促使其加速沉淀，送入提取塔，经若干级扩散后，回收沉淀物；
⑥、浓缩升华冻干：
将沉淀物浓缩，将浓缩后的提取物装入冻干盘升华、冻干；
其第③步中的缓冲剂为：占去离子水体积量65％的柠檬酸溶液和占去离子水体积量35％的柠檬酸钠溶液混合制成；其第⑤步中的促进剂为丙酮和95％乙醇分别按体积百分比85％∶15％加入以上清液中。
2、根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于所述的第②步用去离子水的pH值为6-6.5。
3、根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于其第④步其清液先经微分筛分液，再进行超滤。
4、根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于为得到精品SOD，第⑥步后将浓缩后的SOD粗品用去离子水稀释，用水浴和透析将透析液送入离心机离心除液，回收其沉淀物，将沉淀物再浓缩冻干、包装。
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