CN103864944A - 一种滑菇多糖粗品的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种滑菇多糖粗品的制备方法，涉及抗肿瘤药物领域，其具体工艺过程如下：粉碎、筛分→微波处理→浸提→酶解→膜过滤→提取→脱色→干燥八个步骤完成；本发明的优点在于：1、纯度高，纯度为70~75%高纯度的可溶性滑菇多糖。2、生产工艺简单，避免了传统真菌多糖提取工艺中大量使用有机溶剂、工艺过程复杂的缺点，简化了生产工艺。3、产率高，本发明制备滑菇多糖的产率高，一般为2~3%，均高于其他食用菌制备真菌多糖的产率。

Description

一种滑菇多糖粗品的制备方法

一、技术领域

本发明涉及抗肿瘤药物领域，尤其涉及一种滑菇多糖粗品的制备方法。

二、背景技术

由于肿瘤细胞与人体某些正常细胞有高度的相似性，能直接杀伤癌细胞的化疗药大多也能杀伤那些正常细胞，这正是大多数化疗药产生毒副作用的原因所在。由于肿瘤的发生和发展与机体免疫能力密切相关，因此，有专家提出“肿瘤免疫法”的概念：在正常人体内存在着多种免疫因子，它们可对癌细胞实施有效攻击，例如香菇多糖、云芝多糖、滑菇多糖具有广泛免疫调剂和抗肿瘤活性，现已批准成为临床常用的抗癌药物。这种通过提高自身免疫力的疗法不失为治疗肿瘤的有效途径之一，肿瘤免疫疗法确有其独具的潜力和实用价值。

滑菇（Pholiota nameko）,又名珍珠菇、滑子蘑，担子菌纲，伞菌目，盖球菇科，磷伞属。台湾称为珍珠菇，日本称为纳美菇。滑菇属低温结实型菇类，菌丝体生长的温度范围为4～32℃，子实体生长的温度范围为5～20℃，能耐酸性，适合其生长的pH范围一般为4.0～8.0；菇伞直径3～8cm，菇柄长2～5cm，菇伞呈茶褐色或橙褐色，也有的呈黄色或锈橙色。由于子实体表面附有粘液，手摸粘滑，故以滑菇得名。它是一种木材腐生菌，营养丰富。含氨基酸15.78%、粗脂肪4%，并含有多种矿物质元素。滑子菇菇体小、长势丛集、表面有半透明黏胶质、生长旺盛、耐寒性强、味道鲜美、营养丰富，是汤料的美好添加品。滑子菇原产于日本，上世纪80年代在东北引种成功。近年来研究表明，滑菇能提高机体免疫功能、增进智力、改善视力、提高耐力；尤其是滑菇中多糖物质，对肿瘤具有抑制作用，并可预防葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎杆菌、结核杆菌的感染。松本保久研究发现，热水提取的滑菇多糖（PNP）对小白鼠肉瘤180的抑制率达86.5%，此外，滑菇子实体的热水提取物对小鼠S-180的抑制率为60%，氢氧化钠溶液提取物对小白鼠肉瘤180的抑制率达90%，对艾氏腹水癌的抑制率达70%。

三、发明内容

本发明的目的在于提供一种滑菇多糖粗品的制备方法；其具体工艺过程如下：一种滑菇多糖粗品的制备方法，是由以下步骤完成：

步骤一：粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用10～20目筛网筛分，筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的8～15倍的水；

步骤二：微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w,处理时间为3～5分钟；

步骤三：浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至90～100℃，时间2～4小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用60～80目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8～15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；

步骤四：酶解，将步骤三得到的上清液加热至40～60℃，保温，加入上清液重量的0.25%～0.5%的中性蛋白酶，PH值为6.0～8.0，间歇搅拌，酶解2～4小时后将酶解液升温至90～100℃，保温25～35分钟，保温结束后，用60～100目滤布过滤酶解液；

步骤五：膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为5000～10000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1～2倍的重量；

步骤六：提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3～4倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置24～28小时，2000～3500rpm离心机分离8～12 分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1～2倍的重量水中，重复上述步骤2次；

步骤七：脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1～2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02～0.1倍重量浓度为10～11%的双氧水，于40～60℃搅拌2～3小时，至溶液变白；

步骤八：干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至90～100℃，保温15分钟，55℃～105℃喷雾干燥，使水份除到5～8%，得到滑菇多糖粗品产物；

本发明具有如下有益效果：1、纯度高，本发明以新鲜滑菇子实体为原料，采用微波辅助热水浸提、蛋白酶水解、超滤膜过滤、乙醇沉淀的方式，使滑菇中的胶体、鞣质和蛋白质被去除，再采用双氧水进行脱色，使滑菇多糖色泽鲜白，最后经干燥得到品质好、纯度为70~75%高纯度的可溶性滑菇多糖。2、生产工艺简单，本发明利用现代生物技术，采用蛋白酶水解、超滤膜过滤的方式，大量的去除蛋白、色素等杂质，避免了传统真菌多糖提取工艺中大量使用有机溶剂、工艺过程复杂的缺点，简化了生产工艺。3、产率高，本发明制备滑菇多糖的产率高，一般为2~3%。

四、具体实施方式

实施例1：一种滑菇多糖粗品的制备方法，其是由以下步骤完成：

步骤一：粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用10目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的8倍的水；

步骤二：微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w,处理时间为3分钟；

步骤三：浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至90℃，时间2小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用60目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；

步骤四：酶解，将步骤三得到的上清液加热至40℃，保温，加入上清液重量的0.25%的中性蛋白酶，PH值为6.0，间歇搅拌，酶解2小时后将酶解液升温至90℃，保温25分钟，保温结束后，用60目滤布过滤酶解液；

步骤五：膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为5000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1倍的重量；

步骤六：提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置24小时，2000rpm离心机分离8 分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1倍的重量水中，重复上述步骤2次；

步骤七：脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02倍重量浓度为10%的双氧水，于40℃搅拌2～3小时，至溶液变白；

步骤八：干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至90℃，保温15分钟，55℃喷雾干燥，使水份除到8%，得到0.458kg滑菇多糖粗品产物，滑菇粗多糖的纯度为71.8%，产率为2.29%。

实施例2：一种滑菇多糖粗品的制备方法，其是由以下步骤完成：

步骤一：粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用12目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的10倍的水；

步骤二：微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w,处理时间为3.5分钟；

步骤三：浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至93℃，时间2.5小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用65目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入10倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；

步骤四：酶解，将步骤三得到的上清液加热至45℃，保温，加入上清液重量的0.30%的中性蛋白酶，PH值为6.5，间歇搅拌，酶解2.5小时后将酶解液升温至95℃，保温28分钟，保温结束后，用70目滤布过滤酶解液；

步骤五：膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为6500D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1.2倍的重量；

步骤六：提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3.2倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置25小时，2500rpm离心机分离9 分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1.2倍的重量水中，重复上述步骤2次；

步骤七：脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1.2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.04倍重量浓度为10.2%的双氧水，于45℃搅拌2.2小时，至溶液变白；

步骤八：干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至92℃，保温15分钟，65℃℃喷雾干燥，使水份除到7%，得到0.47kg滑菇多糖粗品产物，滑菇粗多糖的纯度为73.5%，产率为2.37%。

实施例3：一种滑菇多糖粗品的制备方法，其由以下步骤完成：

步骤一：粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用15目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的11倍的水；

步骤二：微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w,处理时间为4分钟；

步骤三：浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至95℃，时间3小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用70目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8～15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；

步骤四：酶解，将步骤三得到的上清液加热至50℃，保温，加入上清液重量的0.33%的中性蛋白酶，PH值为7.0，间歇搅拌，酶解3小时后将酶解液升温至95℃，保温30分钟，保温结束后，用80目滤布过滤酶解液；

步骤五：膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为7500D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1.5倍的重量；

步骤六：提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3.5倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置26小时，2750rpm离心机分离10 分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1.5倍的重量水中，重复上述步骤2次；

步骤七：脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1.5倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.06倍重量浓度为10.5%的双氧水，于50℃搅拌2.5小时，至溶液变白；

步骤八：干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至95℃，保温15分钟，85℃喷雾干燥，使水份除到6%，得到0.578kg滑菇多糖粗品产物；滑菇粗多糖的纯度为78.6%，产率为2.89%。

实施例4：一种滑菇多糖粗品的制备方法，其特征是：是由以下步骤完成：

步骤一：粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用17目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的14倍的水；

步骤二：微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w,处理时间为4.5分钟；

步骤三：浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至97℃，时间3.5小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用75目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入14倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；

步骤四：酶解，将步骤三得到的上清液加热至55℃，保温，加入上清液重量的0.45%的中性蛋白酶，PH值为7.5，间歇搅拌，酶解3.5小时后将酶解液升温至98℃，保温32分钟，保温结束后，用90目滤布过滤酶解液；

步骤五：膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为8500D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1～2倍的重量；

步骤六：提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3.8倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置27小时，3000rpm离心机分离11分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1.8倍的重量水中，重复上述步骤2次；

步骤七：脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1.8倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.08倍重量浓度为10.8%的双氧水，于55℃搅拌2.8小时，至溶液变白；

步骤八：干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至98℃，保温15分钟，95℃喷雾干燥，使水份除到5.5%，得到0.526kg滑菇多糖粗品产物，滑菇粗多糖的纯度为75.1%，产率为2.63%。

实施例5：一种滑菇多糖粗品的制备方法，其特征是：是由以下步骤完成：

步骤一：粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用20目筛网筛分，将20kg筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的15倍的水；

步骤二：微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w,处理时间为5分钟；

步骤三：浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至100℃，时间4小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用80目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；

步骤四：酶解，将步骤三得到的上清液加热至60℃，保温，加入上清液重量的0.5%的中性蛋白酶，PH值为8.0，间歇搅拌，酶解4小时后将酶解液升温至100℃，保温35分钟，保温结束后，用100目滤布过滤酶解液；

步骤五：膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为10000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉2倍的重量；

步骤六：提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入4倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置28小时， 3500rpm离心机分离12 分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉2倍的重量水中，重复上述步骤2次；

步骤七：脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.1倍重量浓度为11%的双氧水，于60℃搅拌3小时，至溶液变白；

步骤八：干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至100℃，保温15分钟，105℃喷雾干燥，使水份除到5%，得到0.494kg滑菇多糖粗品产物；滑菇粗多糖的纯度为74.5%，产率为2.47%。

Claims (1)

1.一种滑菇多糖粗品的制备方法，其特征是：是由以下步骤完成：

步骤一：粉碎、筛分，将滑菇子实体在粉碎机里粉碎，粉碎的粉末过用10～20目筛网筛分，筛下物加入到容器中，并加入筛下物重量的8～15倍的水；

步骤二：微波处理，微波波长为2450MHz，功率为800w,处理时间为3～5分钟；

步骤三：浸提，将步骤二微波处理过的溶液加热至90～100℃，时间2～4小时，间歇搅拌，并加水保持容器内液面高度不变，煎煮液用60～80目滤布过滤，得提取液，滤渣继续加入8～15倍重量的水，重复步骤二、步骤三，除去残渣，合并两次提取的上清液；

步骤四：酶解，将步骤三得到的上清液加热至40～60℃，保温，加入上清液重量的0.25%～0.5%的中性蛋白酶，PH值为6.0～8.0，间歇搅拌，酶解2～4小时后将酶解液升温至90～100℃，保温25～35分钟，保温结束后，用60～100目滤布过滤酶解液；

步骤五：膜过滤，将步骤四得到的过滤酶解液用截留分子量为5000～10000D的超滤膜过滤，收集截流液，将截留液浓缩至滑菇子实体粉1～2倍的重量；

步骤六：提取，再向步骤五得到的浓缩液中加入3～4倍重量的浓度为95%的乙醇，边加边搅拌，室温放置24～28小时，2000～3500rpm离心机分离8～12 分钟，收集沉淀物，将沉淀物再溶于滑菇子实体粉1～2倍的重量水中，重复上述步骤2次；

步骤七：脱色，将步骤六得到的沉淀物溶于滑菇子实体1～2倍的重量的水中，水溶液里加入溶液0.02～0.1倍重量浓度为10～11%的双氧水，于40～60℃搅拌2～3小时，至溶液变白；

步骤八：干燥，将步骤七得到的白色水溶液加热升温至90～100℃，保温15分钟，55℃～105℃喷雾干燥，使水份除到5～8%，得到滑菇多糖粗品产物。