CN104448014A - 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 - Google Patents
一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN104448014A CN104448014A CN201410659420.0A CN201410659420A CN104448014A CN 104448014 A CN104448014 A CN 104448014A CN 201410659420 A CN201410659420 A CN 201410659420A CN 104448014 A CN104448014 A CN 104448014A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- alkali
- molten
- sparassis crispa
- polysaccharide
- soluble polysaccharides
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用，属于生物化学领域。所述方法通过将绣球菌子实体粉末先经稀碱提取粗多糖，再用蒸馏水配制成5％糖液，加入10％三氯乙酸调节其pH值后静置离心、醇析、洗涤后得到去蛋白碱溶多糖。本发明通过绣球菌碱溶多糖对果蝇寿命的影响的研究，表明不同浓度的绣球菌碱溶粗多糖与去蛋白碱溶多糖对果蝇的寿命均有延长作用，具有抗衰老的作用，而且对雄果蝇寿命延长的效果高于雌性。
Description
技术领域
本发明涉及生物化学领域，特别涉及一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用。
背景技术
绣球菌(Sparassis crispa Fr.)，属无隔担子菌亚纲、无褶菌目、绣球菌科、绣球菌属，其子实体肉质洁白细嫩，鲜美可口，营养丰富，是一种非常珍稀名贵的食、药用菌。多糖是绣球菌重要的活性成分，具有免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂等药理活性，对于绣球菌碱溶多糖抗衰老活性的研究却很少见。
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明实施例提供了一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用。所述技术方案如下：
一方面，提供了一种绣球菌碱溶多糖的提取方法，所述方法包括以下步骤：
(1)碱溶粗多糖提取
将绣球菌子实体粉末经加水溶胀过夜、水浴提取3次每次2h后离心，所得残渣经细胞破碎仪破壁10min、0.1mol/mL氢氧化钠提取3次每次2h后再次离心，合并上清液，用0.1mol/mL盐酸中和后浓缩至10mL，将浓缩液用3倍体积无水乙醇进行醇沉过夜离心，向沉淀中添加无水乙醇、乙醚进行洗涤，待离心后将沉淀进行干燥，即得碱溶粗多糖。
(2)碱溶粗多糖纯化
精确称量碱溶粗多糖，用蒸馏水配制成5％糖液，加入10％三氯乙酸调节其pH值至3，静置过夜，以5000r/min离心10min，在上清液中加入4倍体积的95％乙醇再静置过夜，离心，向沉淀中添加无水乙醇、乙醚洗涤，洗涤过后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白碱溶多糖。
另一方面，提供了一种绣球菌碱溶多糖抗衰老活性的应用，所述应用为绣球菌碱溶多糖对果蝇寿命的影响，具体方法包括：将成熟果蝇装入含有基础培养基的50mL三角瓶内交配产卵，形成蛹时除去亲本蝇，收取10h内羽化的果蝇，用乙醚将其麻醉后，分出雌雄，挑取体型大小相近的果蝇进行分组；将选取好的雌雄果蝇平均置入基本培养瓶和含有质量浓度为0.2～5.0g/L的绣球菌碱溶多糖的培养瓶中，每个培养瓶放入15只果蝇，雌雄分瓶培养，以基本培养瓶为空白对照组，以多糖组为试验组；多糖组的果蝇在基础培养基中培养到第14天后，转到含不同浓度多糖提取物的培养基中培养直至其全部死亡，其中每隔4d更换新鲜的培养基。
所述培养瓶中绣球菌碱溶多糖的质量浓度为0.2g/L。
有益效果：本发明不同浓度的绣球菌碱溶粗多糖与去蛋白碱溶多糖对果蝇的寿命均有延长作用，具有抗衰老的作用，而且对雄果蝇寿命延长的效果高于雌性。
具体实施方式
实施例
一、绣球菌碱溶多糖的提取方法
所述方法包括以下步骤：
(1)碱溶粗多糖提取
将绣球菌子实体粉末经加水溶胀过夜、水浴提取3次每次2h后离心，所得残渣经细胞破碎仪破壁10min、0.1mol/mL氢氧化钠提取3次每次2h后再次离心，合并上清液，用0.1mol/mL盐酸中和后浓缩至10mL，将浓缩液用3倍体积无水乙醇进行醇沉过夜离心，继续向沉淀中添加无水乙醇、乙醚进行洗涤，待离心后将沉淀进行干燥，即得；
(2)碱溶粗多糖纯化
精确称量碱溶粗多糖，用蒸馏水配制成5％糖液，加入10％三氯乙酸调节其pH值至3，静置过夜，以5000r/min离心10min，在上清液中加入4倍体积的95％乙醇再静置过夜，离心，向沉淀中添加无水乙醇、乙醚洗涤，洗涤过后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白碱溶多糖。
二、多糖含量测定-苯酚-硫酸法
多糖含量的测定方法：精确称量水溶、碱溶和酸溶多糖5μg，分别定容至50mL容量瓶中备用。各取1mL于相应的试管中，采用苯酚-硫酸法，在490nm波长处测定吸光度，用回归方程计算出样品中多糖含量和得率，计算方法如下：
多糖得率＝粗多糖含量/原料重量×100％
本实施例中精确称取10g绣球菌粉末，采用碱提法提取绣球菌碱溶多糖。通过三氯乙酸法脱蛋白后，得到去蛋白碱溶多糖。根据苯酚-硫酸法，得葡萄糖回归方程为：A＝0.0094C+0.019(R2＝0.9975)。计算多糖含量和得率见表1。由表1可以得知，绣球菌碱溶多糖含量随着三氯乙酸法脱蛋白后有所增加，而多糖得率却减少。
表1绣球菌碱溶多糖含量与得率的测定
三、绣球菌碱溶多糖的抗衰老活性的应用
(1)果蝇培养基的配置
先将琼脂加热溶解，再溶入蔗糖，然后慢慢加入玉米粉，边加边搅拌，成为糊状后停火，待温度稍微下降后，加入丙酸，充分搅拌后立即分装于洁净的培养瓶中，待培养瓶瓶壁晾干后在培养基表面撒一层酵母待用，培养温度为25℃，即得基础培养基。将提取到的粗多糖和纯多糖分别以不同的浓度置入基本培养基中，代替蔗糖，其他方法同上，制备多糖培养基，每个批次做三个重复。
(2)绣球菌碱溶多糖对果蝇寿命的影响
将成熟果蝇转移含有基础培养基的50mL三角瓶内交配产卵，形成蛹时除去亲本蝇，收取10h内羽化的果蝇，用乙醚将其麻醉后，分出雌雄，挑取体型大小相近的果蝇进行分组；将选取好的雌雄果蝇平均置入基本培养瓶和含有质量浓度为0.2～5.0g/L绣球菌碱溶多糖的培养瓶中，每个培养瓶放入15只果蝇，雌雄分瓶培养，以基本培养瓶为空白对照组，多糖组为试验组；多糖组的果蝇在基础培养基中培养到第14天后，转到含不同浓度多糖提取物的培养基中培养直至其全部死亡。实验在温度(25±1)℃、相对湿度50％～70％的培养箱内进行，每隔4d更换新鲜的培养基。每天定时统计果蝇死亡数直至果蝇全部死亡。实验结束后计算每组的平均寿命、半数死亡时间和最高寿命。数据用SPSS软件统计，采用单因素方差分析。通过研究绣球菌碱溶多糖对果蝇寿命的影响见表2和3。
表2绣球菌碱溶多糖对雄果蝇寿命的影响
注：与空白对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01
由表2可知，不同浓度的碱溶粗多糖与去蛋白碱溶多糖对雄果蝇寿命的影响不同的。与空白对照组相比，绣球菌碱溶多糖在0.2～5.0g/L时，均能延长雄性果蝇的寿命和半数死亡时间。当绣球菌碱溶粗多糖在0.2g/L时，雄果蝇平均寿命延长31.4％，半数死亡时间为45.9±1.6，最高寿命为54.1±2.2，雌果蝇的寿命延长率最大；但随着绣球菌碱溶多糖浓度的升高对雄果蝇寿命的影响呈下降的趋势。
表3绣球菌碱溶多糖对雌果蝇寿命的影响
注：与空白对照组比较，*p＜0.05；**p＜0.01
由表3可知，不同浓度的碱溶粗多糖与去蛋白碱溶多糖对雌果蝇寿命的影响不同的。与空白对照组相比，绣球菌碱溶多糖在0.2～5.0g/L时，均能延长雌性果蝇的寿命和半数死亡时间。当绣球菌去蛋白碱溶多糖在0.2g/L时，雌性果蝇的平均寿命为49.2±2.7，平均寿命延长为21.6％；半数死亡时间为46.2±1.4，最高寿命为57.0±2.45，雌果蝇的寿命延长率最大；但随着绣球菌碱溶多糖浓度的增加，雌果蝇的寿命的延长率呈下降趋势。
综上所述不同浓度的绣球菌碱溶粗多糖与去蛋白碱溶多糖对果蝇的寿命均有延长作用，绣球菌碱溶多糖对雄果蝇寿命延长的效果高于雌性，这可能与动物的寿命存在差异有关。研究发现，绣球菌碱溶多糖浓度为0.2g/L的情况下对果蝇寿命延长效果最佳，碱溶粗多糖对雄性果蝇的半数死亡率延长效果最好，去蛋白碱溶多糖对雌性果蝇的半数死亡率延长效果最好；并且随着多糖浓度的增加，延长果蝇寿命的效果呈下降趋势。因此，绣球菌碱溶多糖对果蝇具有抗衰老的作用。
以上所述仅为本发明较佳的实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明保护范围之内。
Claims (3)
1.一种绣球菌碱溶多糖的提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)碱溶粗多糖提取
将绣球菌子实体粉末经加水溶胀过夜、水浴提取3次每次2h后离心，所得残渣经细胞破碎仪破壁10min、0.1mol/mL氢氧化钠提取3次每次2h后再次离心，合并上清液，用0.1mol/mL盐酸中和后浓缩至10mL，将浓缩液用3倍体积无水乙醇进行醇沉过夜离心，向沉淀中添加无水乙醇、乙醚进行洗涤，离心后将沉淀进行干燥，即得碱溶粗多糖。
(2)碱溶粗多糖纯化
精确称量碱溶粗多糖，用蒸馏水配制成5％糖液，加入10％三氯乙酸调节其pH值至3，静置过夜，以5000r/min离心10min，在上清液中加入4倍体积的95％乙醇再静置过夜，离心，向沉淀中添加无水乙醇、乙醚洗涤，洗涤过后于真空干燥器中干燥，即得去蛋白碱溶多糖。
2.一种绣球菌碱溶多糖的抗衰老活性的应用，其特征在于，所述应用为绣球菌碱溶多糖对果蝇寿命的影响，具体方法包括：将成熟果蝇装入含有基础培养基的50mL三角瓶内交配产卵，形成蛹时除去亲本蝇，收取10h内羽化的果蝇，用乙醚将其麻醉后，分出雌雄，挑取体型大小相近的果蝇进行分组；将选取好的雌雄果蝇平均置入基本培养瓶和含有质量浓度为0.2～5.0g/L绣球菌碱溶多糖的培养瓶中，每个培养瓶放入15只果蝇，雌雄分瓶培养，以基本培养瓶为空白对照组，以多糖组为试验组；多糖组的果蝇在基础培养基中培养到第14天后，转到含不同浓度多糖提取物的培养基中培养直至其全部死亡，其中每隔4d更换新鲜的培养基。
3.根据权利要求2所述的绣球菌碱溶多糖的抗衰老活性的应用，其特征在于，所述培养瓶中绣球菌碱溶多糖的质量浓度为0.2g/L。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410659420.0A CN104448014A (zh) | 2014-11-07 | 2014-11-07 | 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201410659420.0A CN104448014A (zh) | 2014-11-07 | 2014-11-07 | 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN104448014A true CN104448014A (zh) | 2015-03-25 |
Family
ID=52894814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201410659420.0A Pending CN104448014A (zh) | 2014-11-07 | 2014-11-07 | 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN104448014A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105384842A (zh) * | 2015-12-17 | 2016-03-09 | 黑龙江众生生物工程有限公司 | 一种从绣球菌子实体中提取水溶性β葡聚糖的方法 |
| CN106188333A (zh) * | 2016-09-18 | 2016-12-07 | 广西大学 | 一种绣球菌多糖的提取方法 |
| CN110776582A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-02-11 | 福清市火麒麟食用菌技术开发有限公司 | 一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法 |
| CN110835380A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-02-25 | 福建万菇生物科技有限公司 | 一种微波辅助法提取绣球菌多糖的工艺 |
| CN110981987A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-04-10 | 福建万菇生物科技有限公司 | 一种超声辅助法提取绣球菌多糖的工艺 |
| CN111040046A (zh) * | 2019-12-16 | 2020-04-21 | 浙江省农业科学院 | 一种绣球菌多糖的高效制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560268A (zh) * | 2009-05-31 | 2009-10-21 | 江西济民可信集团有限公司 | 一种Cs-4发酵菌丝体多糖及其制备方法与用途 |
| CN102731666A (zh) * | 2011-04-07 | 2012-10-17 | 大连工业大学 | 一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法 |
-
2014
- 2014-11-07 CN CN201410659420.0A patent/CN104448014A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101560268A (zh) * | 2009-05-31 | 2009-10-21 | 江西济民可信集团有限公司 | 一种Cs-4发酵菌丝体多糖及其制备方法与用途 |
| CN102731666A (zh) * | 2011-04-07 | 2012-10-17 | 大连工业大学 | 一种从蛹虫草培养基中提取多糖的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 李颖等: "绣球菌多糖的提取及对果蝇寿命的影响", 《安徽农业科学》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105384842A (zh) * | 2015-12-17 | 2016-03-09 | 黑龙江众生生物工程有限公司 | 一种从绣球菌子实体中提取水溶性β葡聚糖的方法 |
| CN106188333A (zh) * | 2016-09-18 | 2016-12-07 | 广西大学 | 一种绣球菌多糖的提取方法 |
| CN110776582A (zh) * | 2019-11-25 | 2020-02-11 | 福清市火麒麟食用菌技术开发有限公司 | 一种绣球菌中β-葡聚糖的提取方法 |
| CN110835380A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-02-25 | 福建万菇生物科技有限公司 | 一种微波辅助法提取绣球菌多糖的工艺 |
| CN110981987A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-04-10 | 福建万菇生物科技有限公司 | 一种超声辅助法提取绣球菌多糖的工艺 |
| CN110981987B (zh) * | 2019-12-12 | 2021-08-20 | 福建万菇生物科技有限公司 | 一种超声辅助法提取绣球菌多糖的工艺 |
| CN111040046A (zh) * | 2019-12-16 | 2020-04-21 | 浙江省农业科学院 | 一种绣球菌多糖的高效制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104448014A (zh) | 一种绣球菌碱溶多糖的提取方法及其抗衰老活性的应用 | |
| CN101972004B (zh) | 牡蛎酶解物的制备方法及应用 | |
| CN104304830B (zh) | 一种去除淡水鱼土腥味的饲料添加剂及其应用 | |
| CN106282028B (zh) | 冬虫夏草的培养方法 | |
| CN104120160A (zh) | 一种小球藻抗氧化肽的制备方法 | |
| CN106222234A (zh) | 一种检测胶基型烟草制品对人口腔微生物体外影响的方法 | |
| CN106614157B (zh) | 一种蚂蟥室内人工冬眠方法 | |
| CN105191993B (zh) | 一种植物源抑藻剂及其制备方法 | |
| CN106397629A (zh) | 从鲟鱼鱼骨中提取硫酸软骨素的方法、由该方法提取的硫酸软骨素及应用 | |
| CN105002251A (zh) | 一种芝麻抗菌肽制备方法 | |
| CN107389852A (zh) | 一种通过酶解法检测双壳类生物软组织中微塑料含量的方法 | |
| CN103614411A (zh) | 西洋参发状根诱导及植株再生研究方法 | |
| Fenner et al. | Nature’s most fruitful threesome: The relationship between yeasts, insects, and angiosperms | |
| CN104762211A (zh) | 雨生红球藻的破壁方法 | |
| CN106666101A (zh) | 一种发酵茶渣制备的饲料添加剂及其应用 | |
| CN100408642C (zh) | 扁藻胞内活性物质的集成提取方法 | |
| CN104694532A (zh) | 一种橡胶树白粉病菌rna的提取方法 | |
| CN108175040A (zh) | 一种小米燕麦牛樟芝菌质保健食品的制备方法 | |
| CN109880750A (zh) | 一种提高干巴菌菌丝体和多糖产量的方法及干巴菌多糖的应用 | |
| CN106367359A (zh) | 一种黑曲霉及其在发酵橡实制备柠檬酸中的应用 | |
| CN103013950B (zh) | 一种脂肪酶 | |
| CN105866352B (zh) | 评价转基因植物花粉对蜜蜂毒理学效应的方法和花粉提取液及其制备方法 | |
| CN107041488B (zh) | 一种水蚤专用高硒饲料及其使用方法 | |
| CN106479883A (zh) | 喷淋式小球藻繁育用气流搅拌培养罐 | |
| CN101586141A (zh) | 一种高通量快速筛选刺参免疫增强剂的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20150325 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |