CN110749679B - 一种三甲基吡嗪残留的检测方法 - Google Patents

一种三甲基吡嗪残留的检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种三甲基吡嗪残留的检测方法，包括：利用无水乙醇提取待测样品中的三甲基吡嗪，制备待测溶液；使用气相色谱对待测溶液进行检测；基于检测结果计算所述待测样品中三甲基吡嗪的残留量。本发明所述的三甲基吡嗪残留的检测方法操作简单，响应灵敏，能够用于检测透明质酸中微量的三甲基吡嗪残留。

Description

一种三甲基吡嗪残留的检测方法
技术领域
本申请涉及透明质酸的检测领域，且更为具体地涉及一种三甲基吡嗪残留的检测方法。
背景技术
透明质酸(Hyaluronic acid，简称HA)又名玻璃酸，是由(1-3)-2-乙酸氨基-2-脱氧-D-葡萄糖(1-4)-D-D-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖。1934年由Meyer等人从牛玻璃球眼中首次提取获得。
透明质酸由于拥有独特的分子结构和理化性质因此在机体内显示出多种重要的生理功能，如润滑关节，调节血管壁的通透性，调节蛋白质，水电解质扩散及运转，促进创伤愈合等。尤为重要的是，透明质酸具有特殊的保水作用，是目前发现的自然界中保湿性最好的物质，被称为理想的天然保湿因子，由于HA具有良好的保湿性、粘弹性、渗透性和延展性，同时无任何免疫原性和毒性，被广泛应用于化妆品、食品、医药和临床治疗等行业领域。
透明质酸因为本来就存在皮肤中，作为天然的保湿因子有很强的保湿效果，透明质酸在化妆品、医药等领域的应用也越来越广泛，比如作为眼用制剂的媒介广泛应用于眼用制剂中，也是皮下填充注射的热门材料。
透明质酸在发酵过程中会由美拉德反应生成少量三甲基吡嗪，由于三甲基吡嗪具有烤土豆、炒花生、核桃、坚果、壤香、发酵霉香的香气，风味阈值低且具有一定的毒性，在应用透明质酸时为了良好地表现其特性以及对人体的安全性，需要保证其纯度和质量。
目前，有关吡嗪类化合物的检测方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、气质(GC-MS)和气质离子扫描联用法(GC-MS-SIM)。例如在专利文献1中公开了一种烟气中吡嗪类化合物的检测方法，其中使用的是气相色谱-质谱联用检测。另外，目前国家标准GB 1886.292-2016(食品安全国家标准食品添加剂2,3,5-三甲基吡嗪)中只规定了三甲基吡嗪原料的纯度测定方法，未涉及某产品中三甲基吡嗪残留的测定方法。
专利文献
专利文献1:CN 105842374 A。
发明内容
如上所述，透明质酸在应用于医美和医疗器械领域时例如应用于面膜、皮下注射和眼科手术等领域时，非常少量的杂质混入都会对终端产品的安全性以及产品质量带来很大风险。并且由于三甲基吡嗪具有烤土豆、炒花生、核桃、坚果、壤香、发酵霉香的香气，风味阈值低且具有一定的毒性，因此微量的三甲基吡嗪在透明质酸中的检测是非常有必要的。为了解决上述技术问题，提出了本申请。本发明根据透明质酸和三甲基吡嗪的溶解特性，开发了一种适合检测透明质酸中三甲基吡嗪的方法，本方法操作简单，检测成本低，准确度高，检测限可达到0.4ppm。
透明质酸中的三甲基吡嗪是在透明质酸发酵生产过程中由美拉德反应生成，经干燥吸附于透明质酸中，被测的透明质酸中三甲基吡嗪的含量很少，其通常含量估算在0.1～2.0mg/kg范围之间，在这样的低含量条件下，无法简单通过对透明质酸进行加热的方式来测试试样中的三甲基吡嗪。如果高于0.4ppm的检测限会造成测量结果出现较大偏差甚至无法测出。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。
本发明提供一种三甲基吡嗪残留的检测方法，包括：
利用无水乙醇提取待测样品中的三甲基吡嗪，制备待测溶液；
使用气相色谱对待测溶液进行检测；
基于检测结果计算所述待测样品中三甲基吡嗪的残留量。
在一个具体实施方式中，所述三甲基吡嗪为2,3,5-三甲基吡嗪。
在一个具体实施方式中，所述待测样品中包含有透明质酸。
在一个具体实施方式中，所述待测溶液的制备中，向每10g所述待测样品中加入50～100ml的所述无水乙醇。
在一个具体实施方式中，所述待测溶液的制备中，当所述待测样品加入到所述无水乙醇中后，得到的混合溶液进行超声、过滤处理之后取滤液置于培养皿中，然后使用氮气吹干得到浓缩后的含三甲基吡嗪的乙醇浓缩液，将乙醇浓缩液转移至容量瓶中并用无水乙醇将乙醇浓缩液在容量瓶中定容，得到待测溶液；
所述超声处理的时间为0.16～1h。
在一个具体实施方式中，所述气相色谱的色谱柱为DB-624。
在一个具体实施方式中，所述气相色谱的色谱柱的固定相为6％氰丙基苯和94％二甲基硅氧烷。
在一个具体实施方式中，所述气相色谱的流动相为氮气。
在一个具体实施方式中，所述流动相的流速为1.0～5.0ml/min；
分流比为10:1～25:1；
进样量为0.5～2.0μL。
在一个具体实施方式中，所述色谱柱的柱温：初始温度为35～60℃，保持10min，以30℃/min的速率升至180～220℃，保持3min；
进样口的温度为180～250℃；检测器温度为180～350℃。
在一个具体实施方式中，使用外标法来计算所述待测样品中的三甲基吡嗪的残留量。
本发明所述的透明质酸中三甲基吡嗪残留的检测方法操作简单，响应灵敏，能够用于检测透明质酸中微量的三甲基吡嗪残留。
本发明的检测方法采用无水乙醇直接提取透明质酸中的三甲基吡嗪，该方法可将透明质酸中的三甲基吡嗪充分提取，经浓缩后直接经气相色谱检测，不需使用质谱，降低了检测成本，缩短了样品的前处理过程。且利用该检测方法可使检测限降低至0.4ppm。
附图说明
图1为实施例1中的对照品溶液的色谱图。
图2为实施例1中的空白溶液的色谱图。
图3为实施例1中的待测溶液的色谱图。
发明的具体实施方式
在本说明书的上下文中，色谱法(chromatography)又称“色谱分析”、“色谱分析法”、“层析法”，是一种分离和分析方法，在分析化学、有机化学、生物化学等领域有着非常广泛的应用。色谱法利用不同物质在不同相态的选择性分配，以流动相对固定相中的混合物进行洗脱，混合物中不同的物质会以不同的速度沿固定相移动，最终达到分离的效果。
气相色谱简称GC，是一种新的分离、分析技术，它在工业、农业、国防、建设、科学研究中都得到了广泛应用。气相色谱可分为气固色谱和气液色谱。气固色谱指流动相是气体，固定相是固体物质的色谱分离方法。例如活性炭、硅胶等作固定相。
无水乙醇为无色澄清液体，有特殊香味，易流动，极易从空气中吸收水分，能与水和氯仿、乙醚等多种有机溶剂以任意比例互溶。能与水形成共沸混合物(含水4.43％)，共沸点78.15℃。熔点-114.1℃。沸点78.5℃。
三甲基吡嗪在25℃下密度为0.979g/mL、沸点为170°左右的危险性化学物质，具有烤土豆、炒花生、核桃、坚果、壤香、发酵霉香的香气，风味阈值低且具有一定的毒性。
外标法是仪器分析常用的方法之一，是比较法的一种。与内标法相比，外标法不是把标准物质加入到被测样品中，而是在与被测样品相同的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰面积与被测组分的色谱峰面积进行比较求得被测组分的含量。外标物与被测组分同为一种物质但要求它有一定的纯度，分析时外标物的浓度应与被测物浓度相接近，以利于定量分析的准确性。
以下将对本发明做以详细说明。
根据本发明的一个方面提供一种三甲基吡嗪残留的检测方法，包括：
利用无水乙醇提取待测样品中的三甲基吡嗪，进行过滤、浓缩制备待测溶液；利用无水乙醇和三甲基吡嗪对照品，经过过滤，制备三甲基吡嗪的对照品溶液；利用无水乙醇经过滤作为空白溶液；然后再使用气相色谱检测所得到的待测溶液、对照品溶液和空白溶液，最后基于色谱检测结果使用外标法确定所述待测样品中的三甲基吡嗪的残留量。
目前国家标准GB 1886.292-2016(食品安全国家标准食品添加剂2,3,5-三甲基吡嗪)中没有明确规定三甲基吡嗪试样的详细制备步骤，在国家标准GB-T 11538-2006和GB-T14454.1-2008中对香料试样在室温下的状态有所规定，要求香料试样在室温下为液体或加热至适当温度时呈液体状态。透明质酸中的三甲基吡嗪是在透明质酸发酵生产过程中由美拉德反应生成，经干燥吸附于透明质酸中，被测的透明质酸中三甲基吡嗪的含量很少，其通常含量估算在0.1～2.0mg/kg范围之间，在这样的低含量条件下，无法简单通过对透明质酸进行加热的方式来测试试样中的三甲基吡嗪。由于透明质酸溶液特别粘稠，为凝胶状物质，即使1％的透明质酸溶液也会很粘稠，无法进行过滤和萃取，如果降低透明质酸浓度得到适当粘度溶液，会造成检测限大幅度提升，无法满足检测要求。本发明采用无水乙醇萃取透明质酸中三甲基吡嗪并浓缩的制样方法可以解决以上问题并保证达到较低的检测限。
本发明的检测方法采用无水乙醇直接提取透明质酸中的三甲基吡嗪，该方法通过无水乙醇可将透明质酸中的三甲基吡嗪充分提取，经浓缩后直接经气相色谱检测，不需使用质谱，降低了检测成本，缩短了样品的前处理过程。且利用该检测方法可使检测限降低至0.4ppm。
在本申请中检测限是当信噪比(所述信噪比为描述信号中有效成分与噪声成分的比例关系参数，所述信噪比从所述气相色谱的谱图中可读出)约为3时对应的溶液浓度为该组分检测限。
在本发明的实施方式中，所述三甲基吡嗪为2,3,5-三甲基吡嗪(2,3,5-Trimethylpyrazine)。
在本发明的实施方式中，所述待测样品中包含有透明质酸。所述待测样品主要成分为透明质酸，本发明的目的是在于检测透明质酸中三甲基吡嗪的残余量。
本方法采用无水乙醇直接萃取透明质酸粉末中的三甲基吡嗪，由于透明质酸不溶于乙醇，因此本方法可以避免透明质酸对三甲基吡嗪检测的不利影响。
在本发明的实施方式中，所述待测溶液的制备中，每10g待测样品中加入50～100ml的无水乙醇。其中，“无水乙醇”是指乙醇(酒精)含有为99.5％以上的乙醇。通过使用无水乙醇而不是其他有机溶剂来提取透明质酸中的三甲基吡嗪，能够将透明质酸样品中的三甲基吡嗪更充分地提取出来，使得检测更加准确。而且避免对透明质酸本身的影响。
在本发明的实施方式中，所述待测溶液的制备中，当所述待测样品加入到所述无水乙醇中后，得到的混合溶液进行超声、过滤处理之后取滤液置于培养皿中，然后使用氮气吹干得到浓缩后的含三甲基吡嗪的乙醇浓缩液，将乙醇浓缩液转移至容量瓶中并用无水乙醇将乙醇浓缩液在容量瓶中定容，得到待测溶液。
超声处理的时间例如为0.16～1h，优选为15min～30min，特别优选为20min。
本发明中超声处理为超声波萃取，超声波萃取利用超声波辐射压强产生的强烈空化应效应、机械振动、扰动效应、高的加速度、乳化、扩散、击碎和搅拌作用等多级效应，增大物质分子运动频率和速度，增加溶剂穿透力，从而加速目标成分进入溶剂，促进提取的进行。
所述超声处理的时间会影响三甲基吡嗪的提取效果，当超声处理时间较短时，会导致三甲基吡嗪的提取不完全。超声时间的确定：通过进行5min、10min、30min、60min超声处理的对比试验，得出结论：三甲基吡嗪在超声处理时间在前10min浓度上升明显，超声时间在10min～60min时三甲基吡嗪浓度变化不大，在20min左右时达到峰值。
在本发明的实施方式中，所述气相色谱的色谱柱为DB-624，尺寸为0.45mm×30m，膜厚2.55μm，是安捷伦公司生产的一款聚硅氧烷毛细管色谱柱，用于分析挥发性的优先污染物和残留溶剂。所述气相色谱的色谱柱固定相为6％氰丙基苯和94％二甲基硅氧烷。所述气相色谱的流动相为氮气。
在本发明的实施方式中，采用的色谱条件为：所述流动相的流速为1.0～5.0ml/min，优选范围为2.0～5.0ml/min，特别优选为2.5ml/min；检测器为氢火焰检测器(FID)；柱温：初始温度35～60℃，优选范围40～50℃，特别优选为40℃，保持10min，以30℃/min的速率升至180～220℃，优选范围200～220℃，特别优选为220℃，保持3min；进样口温度为180～250℃，优选范围180～210℃，特别优选为200℃；检测器温度为180～350℃，优选范围250～350℃，特别优选为280℃；分流比为10:1～25:1，优选范围15:1～25:1，特别优选为20:1；进样量为0.5～2.0μL，优选范围1.0～2.0μL，特别优选为1.0μL。通过在该色谱条件下，检测透明质酸中的三甲基吡嗪，能够更加准确，其检测精度可低至0.4ppm。由于透明质酸溶液特别粘稠，为凝胶状物质，即使1％的透明质酸溶液也会很粘稠，无法进行过滤和萃取，如果降低透明质酸浓度得到适当粘度溶液，会造成检测限大幅度提升，无法满足检测要求。本发明采用无水乙醇萃取透明质酸中三甲基吡嗪并浓缩的制样方法可以解决以上问题并保证达到较低的检测限。
在本发明的实施方式中，使用外标法来计算所述待测样品中的三甲基吡嗪的残留量。
本发明的检测方法采用无水乙醇直接提取透明质酸中的三甲基吡嗪，该方法可将透明质酸中的三甲基吡嗪充分提取，经浓缩后直接经气相色谱检测，实施例中通过控制气相色谱的色谱条件中的载气(流动相)的流速、柱温的初始温度、最终稳定、进样口温度、检测器温度、分流比以及进样量等参数来测定透明质酸中的三甲基吡嗪的含量，结果表明采用气相色谱的色谱条件为：载气流速为1.0～5.0ml/min，分流比为10:1～25:1；进样量为0.5～2.0μL，柱温：初始温度为35～60℃，保持10min，以30℃/min的速率升至180～220℃，保持3min，进样口的温度为180～250℃，检测器为氢火焰检测器(FID)，检测器温度为180～350℃时，检测限可低至0.4～0.9，当所述流动相的流速为2.0～5.0ml/min，分流比为15:1～25:1，进样量为1.0～2.0μL，检测器为氢火焰检测器(FID)；柱温：初始温度40～50℃，保持10min，以30℃/min的速率升至200～220℃，保持3min；进样口温度为180～210℃时，检测器温度为250～350℃时，检测限可低至0.4～0.6。另外由于三甲基吡嗪的沸点在170℃左右，与乙醇沸点差异较大，因此提取后的无水乙醇可以进一步浓缩。
本发明的以下实施例仅用来说明实现本发明的具体实施方式，这些实施方式不能理解为是对本发明的限制。其他的任何在未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均视为等效的置换方式，落在本发明的保护范围之内。
实施例
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
1.仪器试剂
安捷伦7697A气相色谱仪、分析天平：梅特勒托利多AL104
超纯水、无水乙醇(色谱纯)、超纯氮气
三甲基吡嗪对照品(99.9％)
2.色谱条件
色谱柱:DB-624(0.45mm×30m，膜厚2.55μm)
载气(流动相)：N2
流速:2.5ml/min
检测器：氢火焰检测器(FID)；
柱温：初始温度40℃，保持10min，以30℃/min的速率升至220℃，保持3min；
进样口温度：200℃；
检测器温度：280℃；
分流比：20:1；
进样量：1μL；
3.溶液配制
对照品溶液：精密称取三甲基吡嗪对照品20mg至100mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，混匀。将上述溶液稀释10倍，得到对照品溶液。
待测溶液：称取透明质酸待测样品10g至50mL容量瓶中，加无水乙醇浸泡溶解，超声处理20min，然后在容量瓶中加入无水乙醇定容，有机滤膜过滤，取滤液20mL置于培养皿中，氮气吹干并用无水乙醇定容到2mL容量瓶中，得到待测溶液。
空白溶液：无水乙醇经有机膜过滤作为空白溶液。
4.测定
分别取空白溶液、对照品溶液、待测溶液1μL进样，按照上述色谱条件进行检测，以外标法峰面积计算待测样品溶液中三甲基吡嗪的残留含量。
5.计算
按以下公式计算待测样品中的三甲基吡嗪的含量(Ci)：
Figure BDA0002265387890000081
Cs——对照品溶液浓度(mg/L)
Z——对照品三甲基吡嗪含量(％)
Ws——三甲基吡嗪对照品质量(mg)
Figure BDA0002265387890000082
Ci——待测样品中三甲基吡嗪的含量(mg/kg)
Ai——待测样品中三甲基吡嗪的峰面积
Cs——对照品溶液浓度(mg/L)
As——对照品中三甲基吡嗪的峰面积
Wi——待测样品的质量(g)
6.结果
将待测样品中三甲基吡嗪残留量检测结果如表1所示。色谱图如图1～3所示。
表1为实施例1的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000091
实施例2
将实施例1中的待测样品更换为另一批次，其它条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表2。
表2实施例2的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000092
实施例3
将实施例1中的进样量1μL改为2μL，其它条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表3。
表3实施例3的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000093
实施例4
将实施例1中的载气流速改为5.0ml/min，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表4。
表4实施例4的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000101
实施例5
将实施例1中的载气流速改为2.0ml/min，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表5。
表5实施例5的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000102
实施例6
将实施例1中的色谱的进样口温度改变为180℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表6。
表6实施例6的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000103
实施例7
将实施例1中的色谱的进样口温度改变为210℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表7。
表7实施例7的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000104
Figure BDA0002265387890000111
实施例8
将实施例1中的初始柱温改变为35℃，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表8。
表8实施例8的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000112
实施例9
将实施例1中的初始柱温改变为50℃，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表9。
表9实施例9的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000113
实施例10
将实施例1中的最终柱温改变为180℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表10。
表10实施例10的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000114
Figure BDA0002265387890000121
实施例11
将实施例1中的检测器温度改变为350℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表11。
表11实施例11的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000122
实施例12
将实施例1中的检测器温度改变为250℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表12。
表12实施例12的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000123
实施例13
将实施例1中的分流比改变为25:1，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表13。
表13实施例13的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000124
实施例14
将实施例1中的分流比改变为15:1，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表14。
表14实施例14的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000131
实施例15
将实施例1中的各种参数做变化，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表15。
表15实施例15的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000132
实施例16
将实施例1中的载气流速改为1.5ml/min，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表16。
表16实施例16的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000133
实施例17
将实施例1中的载气流速改为3.0ml/min，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表17。
表17实施例17的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000141
实施例18
将实施例1中的载气流速改为3.5ml/min，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表18。
表18实施例18的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000142
实施例19
将实施例1中的载气流速改为4.0ml/min，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表19。
表19实施例19的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000143
实施例20
将实施例1中的载气流速改为4.5ml/min，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表20。
表20实施例20的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000151
实施例21
将实施例1中的进样口温度改为190℃，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表21。
表21实施例21的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000152
实施例22
将实施例1中的进样口温度改为220℃，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表22。
表22实施例22的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000153
实施例23
将实施例1中的进样口温度改为230℃，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表23。
表23实施例23的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000154
Figure BDA0002265387890000161
实施例24
将实施例1中的进样口温度改为240℃，其他条件与实施例1相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量，详情见表24。
表24实施例24的待测样品的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000162
对比例1
将实施例1中的无水乙醇替换成甲醇，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量。甲醇也可将透明质酸钠中的三甲基吡嗪提取，但相比于乙醇，甲醇的挥发性及毒性更高，长期使用损害操作人员健康。
表25对比例1的待测样品中的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000163
对比例2
将实施例1中的初始柱温改为70℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量。提高初始柱温后，三甲基吡嗪的出峰时间提前，受到乙醇中的杂质峰干扰，峰面积计算误差较大。
表26对比例2的待测样品中的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000164
Figure BDA0002265387890000171
对比例3
将实施例1中的最终柱温改为230℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量。提高最终柱温后，三甲基吡嗪的出峰时间提前，受到乙醇中的杂质峰干扰，结果计算误差较大。
表27对比例3的待测样品中的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000172
对比例4
将实施例1中的进样口温度改变成160℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量。在此条件下，三甲基吡嗪气化不完全，色谱峰展宽拖尾，结果计算误差较大。
表28对比例4的待测样品中的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000173
对比例5
将实施例1中的检测器温度改变成140℃，其他条件与实施例1相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量。在此条件下，FID检测灵敏度下降，检测误差较大，另外，燃烧不完全也会明显影响增加检测器的污染概率。
表29对比例5的待测样品中的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000174
Figure BDA0002265387890000181
对比例6
将实施例1中的分流比改变成40:1，其余与实施例1的相同，测定透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量。在此条件下，进入色谱柱的样品量过少，导致待测样品中的色谱分析结果误差较大。
表30对比例6的待测样品中的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000182
对比例7
将实施例1中的载气流速改变成6ml/min，其余与实施例1的相同，测定待测样品溶液中透明质酸钠中三甲基吡嗪的含量。在此条件下，载气流速过快导致成分保留差，检测误差变大。
表31对比例7的待测样品中的色谱分析结果
Figure BDA0002265387890000183
表32实施例的运行效果比较
Figure BDA0002265387890000184
Figure BDA0002265387890000191

Claims (8)

1.一种三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，包括：
利用无水乙醇提取待测样品中的三甲基吡嗪，制备待测溶液；
使用气相色谱对待测溶液进行检测；
基于检测结果计算所述待测样品中三甲基吡嗪的残留量；
所述气相色谱的色谱柱为DB-624；
所述气相色谱的流动相为氮气，所述流动相的流速为1.0～5.0ml/min；分流比为10:1～25:1；所述色谱柱的柱温：初始温度为35～60℃，保持10min，以30℃/min的速率升至180～220℃，保持3min；
进样口的温度为180～250℃；检测器温度为180～350℃；
所述待测样品为透明质酸。
2.根据权利要求1所述的三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，所述三甲基吡嗪为2,3,5-三甲基吡嗪。
3.根据权利要求1所述的三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，向每10g所述待测样品中加入50～100ml的所述无水乙醇。
4.根据权利要求1所述的三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，所述待测溶液的制备中，当所述待测样品加入到所述无水乙醇中后，将得到的混合溶液进行超声、过滤处理之后取滤液置于培养皿中，然后使用氮气吹干得到浓缩后的含三甲基吡嗪的乙醇浓缩液，将乙醇浓缩液转移至容量瓶中并用无水乙醇将乙醇浓缩液在容量瓶中定容，得到待测溶液。
5.根据权利要求4所述的三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，所述超声处理的时间为0.16～1h。
6.根据权利要求1所述的三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，所述气相色谱的色谱柱的固定相为6％氰丙基苯和94％二甲基硅氧烷。
7.根据权利要求1所述的三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，所述气相色谱的进样量为0.5～2.0μL。
8.根据权利要求1所述的三甲基吡嗪残留的检测方法，其特征在于，使用外标法来计算所述待测样品中的三甲基吡嗪的残留量。
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