JP5030586B2 - アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 - Google Patents
アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5030586B2 JP5030586B2 JP2006513925A JP2006513925A JP5030586B2 JP 5030586 B2 JP5030586 B2 JP 5030586B2 JP 2006513925 A JP2006513925 A JP 2006513925A JP 2006513925 A JP2006513925 A JP 2006513925A JP 5030586 B2 JP5030586 B2 JP 5030586B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- derivatives
- acid
- amino
- derivative
- functional compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 193
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 43
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 100
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 claims description 79
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 46
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 32
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 32
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 27
- -1 β-shi Anoalanine Chemical compound 0.000 claims description 26
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 claims description 25
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 claims description 22
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 21
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 21
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 claims description 15
- RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N anthranilic acid Chemical class NC1=CC=CC=C1C(O)=O RWZYAGGXGHYGMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 14
- UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N beta-alanine Chemical class NCCC(O)=O UCMIRNVEIXFBKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 14
- OQEBBZSWEGYTPG-UHFFFAOYSA-N 3-aminobutanoic acid Chemical class CC(N)CC(O)=O OQEBBZSWEGYTPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 13
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical class C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 150000003335 secondary amines Chemical class 0.000 claims description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 13
- QCHPKSFMDHPSNR-UHFFFAOYSA-N 3-aminoisobutyric acid Chemical class NCC(C)C(O)=O QCHPKSFMDHPSNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- VZXPDPZARILFQX-BYPYZUCNSA-N O-acetyl-L-serine Chemical class CC(=O)OC[C@H]([NH3+])C([O-])=O VZXPDPZARILFQX-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 11
- 150000003587 threonine derivatives Chemical class 0.000 claims description 11
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical class CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- BADANQBWOZJJJH-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-hydroxy-3-oxopentanoic acid Chemical compound CCC(=O)C(N)(O)C(O)=O BADANQBWOZJJJH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims description 10
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical class NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 150000002306 glutamic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 10
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 claims description 10
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 claims description 10
- JJMDCOVWQOJGCB-UHFFFAOYSA-N 5-aminopentanoic acid Chemical class [NH3+]CCCCC([O-])=O JJMDCOVWQOJGCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- KDZOASGQNOPSCU-WDSKDSINSA-N Argininosuccinic acid Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CCC\N=C(/N)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O KDZOASGQNOPSCU-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 9
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical class CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 9
- BRMWTNUJHUMWMS-LURJTMIESA-N N(tele)-methyl-L-histidine Chemical class CN1C=NC(C[C@H](N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 9
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N alpha-aminobutyric acid Chemical class CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N cadaverine Chemical class NCCCCCN VHRGRCVQAFMJIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N cysteic acid Chemical class OC(=O)C(N)CS(O)(=O)=O XVOYSCVBGLVSOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N putrescine Chemical class NCCCCN KIDHWZJUCRJVML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N tryptamine Chemical class C1=CC=C2C(CCN)=CNC2=C1 APJYDQYYACXCRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N tyramine Chemical class NCCC1=CC=C(O)C=C1 DZGWFCGJZKJUFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical class O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 claims description 8
- UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N L-homoserine Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 8
- DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N phenyl isocyanate Chemical compound O=C=NC1=CC=CC=C1 DGTNSSLYPYDJGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FMUMEWVNYMUECA-LURJTMIESA-N (2s)-2-azaniumyl-5-methylhexanoate Chemical class CC(C)CC[C@H](N)C(O)=O FMUMEWVNYMUECA-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 7
- YYLQUHNPNCGKJQ-NHYDCYSISA-N (3R)-3-hydroxy-L-aspartic acid Chemical class OC(=O)[C@@H](N)[C@@H](O)C(O)=O YYLQUHNPNCGKJQ-NHYDCYSISA-N 0.000 claims description 7
- ADVPTQAUNPRNPO-REOHCLBHSA-N 3-sulfino-L-alanine Chemical class OC(=O)[C@@H](N)C[S@@](O)=O ADVPTQAUNPRNPO-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 7
- SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 6-aminohexanoic acid Chemical compound NCCCCCC(O)=O SLXKOJJOQWFEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- CCLQKVKJOGVQLU-QMMMGPOBSA-N L-homocarnosine Chemical class NCCCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CNC=N1 CCLQKVKJOGVQLU-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 7
- MBEPFGPQVBIIES-WDSKDSINSA-N L-homolanthionine Chemical class OC(=O)[C@@H](N)CCSCC[C@H](N)C(O)=O MBEPFGPQVBIIES-WDSKDSINSA-N 0.000 claims description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 7
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical class C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 claims description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N Phenethylamine Chemical class NCCC1=CC=CC=C1 BHHGXPLMPWCGHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 150000001294 alanine derivatives Chemical class 0.000 claims description 7
- MYYIAHXIVFADCU-QMMMGPOBSA-N anserine Chemical class CN1C=NC=C1C[C@H](NC(=O)CC[NH3+])C([O-])=O MYYIAHXIVFADCU-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 7
- 150000001717 carbocyclic compounds Chemical group 0.000 claims description 7
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 7
- OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N cystamine Chemical class CCSSCCN OOTFVKOQINZBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N cysteamine Chemical class NCCS UFULAYFCSOUIOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 7
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 7
- 150000002391 heterocyclic compounds Chemical group 0.000 claims description 7
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 7
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- ZDGJAHTZVHVLOT-YUMQZZPRSA-N L-saccharopine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCN[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O ZDGJAHTZVHVLOT-YUMQZZPRSA-N 0.000 claims description 6
- SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N O-phosphoethanolamine Chemical compound NCCOP(O)(O)=O SUHOOTKUPISOBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 6
- 150000002519 isoleucine derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- 150000002613 leucine derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 150000003679 valine derivatives Chemical class 0.000 claims description 6
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 5
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 5
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 5
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 150000001483 arginine derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000001509 aspartic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000002410 histidine derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000002668 lysine derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000001570 methylene group Chemical group [H]C([H])([*:1])[*:2] 0.000 claims description 5
- 150000002993 phenylalanine derivatives Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000005418 4-aminobenzoic acid derivatives Chemical class 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 229940000635 beta-alanine Drugs 0.000 claims description 4
- WSDQIHATCCOMLH-UHFFFAOYSA-N phenyl n-(3,5-dichlorophenyl)carbamate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC(NC(=O)OC=2C=CC=CC=2)=C1 WSDQIHATCCOMLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 4
- LUTLAXLNPLZCOF-UHFFFAOYSA-N 1-Methylhistidine Natural products OC(=O)C(N)(C)CC1=NC=CN1 LUTLAXLNPLZCOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- YPWSLBHSMIKTPR-UHFFFAOYSA-N Cystathionine Natural products OC(=O)C(N)CCSSCC(N)C(O)=O YPWSLBHSMIKTPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ILRYLPWNYFXEMH-UHFFFAOYSA-N D-cystathionine Natural products OC(=O)C(N)CCSCC(N)C(O)=O ILRYLPWNYFXEMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- ZDGJAHTZVHVLOT-UHFFFAOYSA-N L-Saccharopine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(C(O)=O)CCC(O)=O ZDGJAHTZVHVLOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 3
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- ILRYLPWNYFXEMH-WHFBIAKZSA-N L-cystathionine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CCSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O ILRYLPWNYFXEMH-WHFBIAKZSA-N 0.000 claims description 3
- XIGSAGMEBXLVJJ-YFKPBYRVSA-N L-homocitrulline Chemical compound NC(=O)NCCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O XIGSAGMEBXLVJJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N L-homocysteine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCS FFFHZYDWPBMWHY-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 3
- QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N L-methionine (R)-S-oxide Chemical compound C[S@@](=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O QEFRNWWLZKMPFJ-ZXPFJRLXSA-N 0.000 claims description 3
- QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N L-methionine sulphoxide Natural products CS(=O)CCC(N)C(O)=O QEFRNWWLZKMPFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N L-pipecolic acid Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]1CCCC[NH2+]1 HXEACLLIILLPRG-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 3
- GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N L-thialysine Chemical compound NCCSC[C@H](N)C(O)=O GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 3
- JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N N(pros)-methyl-L-histidine Chemical compound CN1C=NC=C1C[C@H](N)C(O)=O JDHILDINMRGULE-LURJTMIESA-N 0.000 claims description 3
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 claims description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 3
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 claims description 3
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 claims description 3
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- ZTVZLYBCZNMWCF-UHFFFAOYSA-N homocystine Chemical compound [O-]C(=O)C([NH3+])CCSSCCC([NH3+])C([O-])=O ZTVZLYBCZNMWCF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims description 3
- HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N l-pipecolic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCCCN1 HXEACLLIILLPRG-RXMQYKEDSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 3
- 229940043230 sarcosine Drugs 0.000 claims description 3
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 claims description 3
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000003947 ethylamines Chemical class 0.000 claims description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 2,4-diaminobutyric acid Chemical compound NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 2,6-diaminopimelic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(N)C(O)=O GMKMEZVLHJARHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- JUQLUIFNNFIIKC-UHFFFAOYSA-N 2-aminopimelic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCCC(O)=O JUQLUIFNNFIIKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- WJXSWCUQABXPFS-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxyanthranilic acid Chemical compound NC1=C(O)C=CC=C1C(O)=O WJXSWCUQABXPFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- VCKPUUFAIGNJHC-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxykynurenine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(=O)C1=CC=CC(O)=C1N VCKPUUFAIGNJHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N Dimethylamine Chemical compound CNC ROSDSFDQCJNGOL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N Histamine Chemical compound NCCC1=CN=CN1 NTYJJOPFIAHURM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N N(5)-ethyl-L-glutamine Chemical compound CCNC(=O)CC[C@H]([NH3+])C([O-])=O DATAGRPVKZEWHA-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 4
- YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N kynurenine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(=O)C1=CC=CC=C1N YGPSJZOEDVAXAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 4
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 2
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 2
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 claims 2
- UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N -2-Amino-4-hydroxybutanoic acid Natural products OC(=O)C(N)CCO UKAUYVFTDYCKQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 2-amino-2-deoxy-D-galactopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-GASJEMHNSA-N 0.000 claims 2
- BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 3-Methylhistidine Natural products CN1C=NC(CC(N)C(O)=O)=C1 BRMWTNUJHUMWMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ALYNCZNDIQEVRV-PZFLKRBQSA-N 4-amino-3,5-ditritiobenzoic acid Chemical compound [3H]c1cc(cc([3H])c1N)C(O)=O ALYNCZNDIQEVRV-PZFLKRBQSA-N 0.000 claims 2
- LDCYZAJDBXYCGN-VIFPVBQESA-N 5-hydroxy-L-tryptophan Chemical compound C1=C(O)C=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 LDCYZAJDBXYCGN-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 2
- 229940000681 5-hydroxytryptophan Drugs 0.000 claims 2
- 108010085443 Anserine Proteins 0.000 claims 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N Carnosic acid Natural products CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C(O)=O)C1=C2C=C(C(C)C)C(O)=C1O QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N 0.000 claims 2
- 108010087806 Carnosine Proteins 0.000 claims 2
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 claims 2
- UJVHVMNGOZXSOZ-UHFFFAOYSA-N DL-alpha-amino-beta-methylaminopropionic acid Natural products CNCC(N)C(O)=O UJVHVMNGOZXSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims 2
- UJVHVMNGOZXSOZ-VKHMYHEASA-N L-BMAA Chemical compound CNC[C@H](N)C(O)=O UJVHVMNGOZXSOZ-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 2
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 2
- WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N L-DOPA Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C(O)=C1 WTDRDQBEARUVNC-LURJTMIESA-N 0.000 claims 2
- ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N L-Histidinol Natural products OCC(N)CC1=CN=CN1 ZQISRDCJNBUVMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims 2
- SLRNWACWRVGMKD-UHFFFAOYSA-N L-anserine Natural products CN1C=NC(CC(NC(=O)CCN)C(O)=O)=C1 SLRNWACWRVGMKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims 2
- GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N L-ethionine Chemical compound CCSCC[C@H](N)C(O)=O GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims 2
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 2
- ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N L-histidinol Chemical compound OC[C@@H](N)CC1=CNC=N1 ZQISRDCJNBUVMM-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 2
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 2
- DWPCPZJAHOETAG-IMJSIDKUSA-N L-lanthionine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CSC[C@H](N)C(O)=O DWPCPZJAHOETAG-IMJSIDKUSA-N 0.000 claims 2
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 2
- UCUNFLYVYCGDHP-BYPYZUCNSA-N L-methionine sulfone Chemical compound CS(=O)(=O)CC[C@H](N)C(O)=O UCUNFLYVYCGDHP-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 2
- VLJNHYLEOZPXFW-BYPYZUCNSA-N L-prolinamide Chemical compound NC(=O)[C@@H]1CCCN1 VLJNHYLEOZPXFW-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims 2
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 claims 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims 2
- FHQDWPCFSJMNCT-UHFFFAOYSA-N N(tele)-methylhistamine Chemical compound CN1C=NC(CCN)=C1 FHQDWPCFSJMNCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- MXNRLFUSFKVQSK-QMMMGPOBSA-N N-6-Trimethyllysine Chemical compound C[N+](C)(C)CCCC[C@H](N)C([O-])=O MXNRLFUSFKVQSK-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims 2
- CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N N-beta-alanyl-L-histidine Natural products NCCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- OPKOKAMJFNKNAS-UHFFFAOYSA-N N-methylethanolamine Chemical compound CNCCO OPKOKAMJFNKNAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 241000210053 Potentilla elegans Species 0.000 claims 2
- 239000005700 Putrescine Substances 0.000 claims 2
- ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N S-Adenosylhomocysteine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSCC[C@H](N)C(O)=O)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 ZJUKTBDSGOFHSH-WFMPWKQPSA-N 0.000 claims 2
- GHBAYRBVXCRIHT-VIFPVBQESA-N S-benzyl-L-cysteine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CSCC1=CC=CC=C1 GHBAYRBVXCRIHT-VIFPVBQESA-N 0.000 claims 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims 2
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 2
- ADVPTQAUNPRNPO-UHFFFAOYSA-N alpha-amino-beta-sulfino-propionic acid Natural products OC(=O)C(N)CS(O)=O ADVPTQAUNPRNPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims 2
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims 2
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N carnosine Chemical compound [NH3+]CCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC=N1 CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N 0.000 claims 2
- 229940044199 carnosine Drugs 0.000 claims 2
- 229940099500 cystamine Drugs 0.000 claims 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 claims 2
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 claims 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 claims 2
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims 2
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 claims 2
- 229960001340 histamine Drugs 0.000 claims 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 108700002498 homocarnosine Proteins 0.000 claims 2
- VVIUBCNYACGLLV-UHFFFAOYSA-N hypotaurine Chemical compound [NH3+]CCS([O-])=O VVIUBCNYACGLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229960004502 levodopa Drugs 0.000 claims 2
- 229960003151 mercaptamine Drugs 0.000 claims 2
- DWPCPZJAHOETAG-UHFFFAOYSA-N meso-lanthionine Natural products OC(=O)C(N)CSCC(N)C(O)=O DWPCPZJAHOETAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims 2
- VEYYWZRYIYDQJM-UHFFFAOYSA-N n-α-acetyllysine Chemical compound CC(=O)NC(C(O)=O)CCCCN VEYYWZRYIYDQJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 claims 2
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N oxidized gamma-L-glutamyl-L-cysteinylglycine Natural products OC(=O)C(N)CCC(=O)NC(C(=O)NCC(O)=O)CSSCC(C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CCC(N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- LDCYZAJDBXYCGN-UHFFFAOYSA-N oxitriptan Natural products C1=C(O)C=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 LDCYZAJDBXYCGN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 claims 2
- 229940026510 theanine Drugs 0.000 claims 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 claims 2
- 229960003732 tyramine Drugs 0.000 claims 2
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 claims 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 44
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 44
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 43
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 25
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 18
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 9
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 9
- 238000002553 single reaction monitoring Methods 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 7
- 125000001624 naphthyl group Chemical group 0.000 description 7
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 7
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 6
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 5
- 210000000692 cap cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000001360 collision-induced dissociation Methods 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 5
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000000065 atmospheric pressure chemical ionisation Methods 0.000 description 4
- 150000005693 branched-chain amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 4
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 125000001622 2-naphthyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C(*)C([H])=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 3
- OVCWIANTUTZFIY-UHFFFAOYSA-N 3-(6-aminoquinolin-2-yl)-1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione;carbamic acid Chemical compound NC(O)=O.C1=CC2=CC(N)=CC=C2N=C1C1CC(=O)N(O)C1=O OVCWIANTUTZFIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N Carbamic acid Chemical group NC(O)=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 125000002837 carbocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 125000004663 dialkyl amino group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 3
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 238000002541 precursor ion scan Methods 0.000 description 3
- 150000003141 primary amines Chemical class 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 125000000542 sulfonic acid group Chemical group 0.000 description 3
- 125000005208 trialkylammonium group Chemical group 0.000 description 3
- 125000003349 3-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([*])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 125000000339 4-pyridyl group Chemical group N1=C([H])C([H])=C([*])C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical group [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000029751 Amino acid metabolism disease Diseases 0.000 description 2
- WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N Bromine atom Chemical group [Br] WKBOTKDWSSQWDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N Butyric acid Chemical compound CCCC(O)=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 125000005428 anthryl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C2C([H])=C3C(*)=C([H])C([H])=C([H])C3=C([H])C2=C1[H] 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N dimethylselenoniopropionate Natural products CCC(O)=O XBDQKXXYIPTUBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 2
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 2
- 229910052731 fluorine Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 2
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 2
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005040 ion trap Methods 0.000 description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 2
- 238000000816 matrix-assisted laser desorption--ionisation Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000002545 neutral loss scan Methods 0.000 description 2
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 238000001121 post-column derivatisation Methods 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 125000005412 pyrazyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000004076 pyridyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 125000005493 quinolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000000376 reactant Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000002098 selective ion monitoring Methods 0.000 description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 2
- GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N trimethylamine Chemical compound CN(C)C GETQZCLCWQTVFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 0 *C(C(O)=O)[n]1c([*+])c(cccc2)c2c1 Chemical compound *C(C(O)=O)[n]1c([*+])c(cccc2)c2c1 0.000 description 1
- LRMSQVBRUNSOJL-UHFFFAOYSA-N 2,2,3,3,3-pentafluoropropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)F LRMSQVBRUNSOJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DDRLBMPTYVXCLK-UHFFFAOYSA-N 3-(9-aminoacridin-1-yl)-1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione;carbamic acid Chemical compound NC(O)=O.C=12C(N)=C3C=CC=CC3=NC2=CC=CC=1C1CC(=O)N(O)C1=O DDRLBMPTYVXCLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000005422 4-hydroxybenzoic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 88755TAZ87 Chemical compound NCC(=O)CCC(O)=O ZGXJTSGNIOSYLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000007788 Acute Liver Failure Diseases 0.000 description 1
- KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M Carbamate Chemical compound NC([O-])=O KXDHJXZQYSOELW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N Hydroxylysine Natural products NCC(O)CC(N)CC(O)=O LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N L-allo-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 208000001940 Massive Hepatic Necrosis Diseases 0.000 description 1
- DGNQDGWOFYYMJV-UHFFFAOYSA-N NC(ON(C(CC1O)=O)C1=O)=O.I Chemical compound NC(ON(C(CC1O)=O)C1=O)=O.I DGNQDGWOFYYMJV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical group OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002777 acetyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003862 amino acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960002749 aminolevulinic acid Drugs 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 125000003236 benzoyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 150000004657 carbamic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 1
- 229940126540 compound 41 Drugs 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 125000000664 diazo group Chemical group [N-]=[N+]=[*] 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000002309 gasification Methods 0.000 description 1
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-L-lysine Natural products NCCCCC(NO)C(O)=O QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001841 imino group Chemical group [H]N=* 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 238000000752 ionisation method Methods 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N lnp023 Chemical compound C1([C@H]2N(CC=3C=4C=CNC=4C(C)=CC=3OC)CC[C@@H](C2)OCC)=CC=C(C(O)=O)C=C1 RENRQMCACQEWFC-UGKGYDQZSA-N 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 235000003715 nutritional status Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- YPJUNDFVDDCYIH-UHFFFAOYSA-N perfluorobutyric acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F YPJUNDFVDDCYIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 229920000768 polyamine Polymers 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 235000019260 propionic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N quinbolone Chemical compound O([C@H]1CC[C@H]2[C@H]3[C@@H]([C@]4(C=CC(=O)C=C4CC3)C)CC[C@@]21C)C1=CCCC1 IUVKMZGDUIUOCP-BTNSXGMBSA-N 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N tributylamine Chemical compound CCCCN(CCCC)CCCC IMFACGCPASFAPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004417 unsaturated alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
- G01N33/6806—Determination of free amino acids
- G01N33/6809—Determination of free amino acids involving fluorescent derivatizing reagents reacting non-specifically with all amino acids
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
- G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
- G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
- G01N2030/8818—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving amino acids
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/145555—Hetero-N
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/24—Nuclear magnetic resonance, electron spin resonance or other spin effects or mass spectrometry
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
本発明は、アミノ酸、ペプチド、及びアミノ酸類似物質等のアミノ官能性化合物を、液体クロマトグラフィー／質量分析法（ＬＣ／ＭＳ）により迅速、簡便且つ高感度に分析する方法、及びそのための装置等に関する。
生体内のアミノ酸は、アミノ酸代謝異常症等の疾患の鑑別に有用である。例えば、先天的アミノ酸代謝異常症の診断、肝機能不全の重症度判定や治療の指標、及び栄養状態不良の患者の病態把握などに用いられる。最も有名な例としては、バリン、ロイシン、イソロイシンは分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡＡ）と呼ばれ、劇症肝炎や肝不全などの重症肝疾患において合成が低下する。一方、芳香族アミノ酸（ＡＡＡ）であるフェニルアラニンは主として肝臓で代謝を受けるため、代謝が阻害されると血中濃度が上昇する。この結果、両者の比であるＢＣＡＡ／ＡＡＡ比は低値となり、その程度は肝疾患の重症度を反映する。ＢＣＡＡ／ＡＡＡ比は一般にフィッシャー比（Fischer比）と呼ばれ、従来から肝疾患の重症度の判定に用いられてきた（例えば、非特許文献１参照）。また、糖尿病ではフェニルアラニン、チロシン、イソロイシン、ロイシン、バリンが上昇し、アラニンが減少することが知られている（例えば、非特許文献２参照）。
アミノ酸の分析法については、ポストカラム誘導体化を原理とするアミノ酸分析計を用いる場合が多い。この方法は、通常、陽イオン交換カラムによりアミノ酸を分離した後、ニンヒドリン発色を行なうが、分析時間が長いことが短所である。最近の研究では、分離カラムや緩衝液の流速等を工夫することにより、タンパク質加水分解物アミノ酸約２０種類を対象とした標準分析法の分析時間は約２０分となっている（例えば、特許文献１参照）。一方、プレカラム誘導体化反応に基づくアミノ酸分析法もさかんに研究されている。タンパク質構成アミノ酸であれば、フェニルイソチオシアネートを試薬とするプレカラム誘導体化法により、約４．５分で分析が可能である。また、本発明者らによって開発された分析試薬を用いるＬＣ−ＭＳ法では、２０種類のアミノ酸を２．８分で分析可能であることが示されているが（例えば、特許文献２参照）、この例ではロイシンとイソロイシンは分離せず、それぞれを同時に分析することはできない。
生体内には、タンパク質構成アミノ酸だけでなく、数多くのアミノ酸類似物質が存在する。代表的なものに、タウリン、Ｏ−ホスホエタノールアミン、ヒドロキシプロリン、メチオニンスルホキシド、ザルコシン、α−アミノアジピン酸、シトルリン、α−アミノ−ｎ−酪酸、ピペコリン酸、ホモシステイン、ホモシトルリン、アロイソロイシン、サッカロピン、シスタチオニン、アルギニノコハク酸、システイン−ホモシステイン、β−アラニン、アミノレブリン酸、β−アミノイソ酪酸（β−ＡｉＢＡ）、γ−アミノ−ｎ−酪酸（ＧＡＢＡ）、ホモシスチン（Ｈｃｙｓ２）、アルギニノコハク酸アンヒドライド、ヒドロキシリジン、アミノエチルシステイン、オルニチン、１−メチルヒスチジン、３−メチルヒルチジンなどであり、生体液に含まれるこれらのアミノ酸類似物質には、様々な生理機能が発見或いは解明されつつある。陽イオン交換カラムによりアミノ酸及びアミノ酸類似物質（これらを総称してアミノ官能性化合物と呼ぶ。）を分離し、ニンヒドリン発色を行なうポストカラム誘導体化を原理とする分析法によれば、これらアミノ官能性化合物４１成分の分析時間は最短でも６０分であり、また、５３成分では１４８分である。（例えば、特許文献３参照。）このような分析時間の長さは、アミノ酸の生理機能研究を妨げる大きな要因の一つとなっている。また、アミノ酸と健康や疾病を関連付ける新たな知見が発見されたとしても、このような処理能力では、その情報を有効に使うことはできない。
本発明は、生体内に含まれる多種類のアミノ酸及びその誘導体、並びにアミノ酸類似物質を含むアミノ官能性化合物を、従来法よりも極めて迅速、簡便且つ高感度に分析する方法及び装置を提供することを目的とする。
上記課題を解決するために、本発明者らはＬＣ／ＭＳ法によるアミノ官能性化合物の分析方法について種々の改良及び最適化を行った。すなわち、質量分析法において質量が同一であるために分離して検出することが困難な複数のアミノ官能性化合物を液体クロマトグラフィーによって予め分離、溶出し、続いて質量分析法により分離、検出することによって極めて迅速、簡便且つ高感度に多種類のアミノ官能性化合物を同時に分析できることを見出して本発明を完成するに至った。
従って、第１の視点において、アミノ官能性化合物を含む試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて下記一般式（ＩＩ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成せしめる工程、
前記アミノ官能性化合物誘導体を段階的な濃度勾配溶出手段を用いる液体クロマトグラフィーにより溶出する工程、及び
前記液体クロマトグラフィーにより溶出されたアミノ官能性化合物誘導体を質量分析法により検出する工程を含み、
前記誘導体化試薬がｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド、フェニルイソシアネート、又は３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートであり、
前記段階的な濃度勾配溶出手段が、有機溶媒濃度が段階的に上昇するように有機溶媒の割合を少なくとも２回変化させて最高濃度に達した後に、有機溶媒濃度が低下するように有機溶媒の割合を少なくとも１回変化させ、その後に前記アミノ官能性化合物誘導体のうち少なくとも１つが溶出されるものであり、
前記液体クロマトグラフィーによる溶出工程は、ヒスチジン誘導体、アスパラギン酸誘導体、アルギニン誘導体、ヒドロキシプロリン誘導体、グルタミン酸誘導体、アルギニノコハク酸誘導体、システインスルフィン酸誘導体、システイン酸誘導体、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸誘導体の中で最も溶出時間の短いアミノ官能性化合物誘導体とトリプトファン誘導体、リジン誘導体、フェニルアラニン誘導体、１，５−ジアミノペンタン誘導体、ホモロイシン誘導体、トリプタミン誘導体、ホモランチオニン誘導体、チラミン誘導体、システアミン誘導体、プトレシン誘導体、シスタミン誘導体及び２−フェニルエチルアミン誘導体の中で最も溶出時間の長い該誘導体との溶出時間の差が３〜１０分の間にあり、
前記液体クロマトグラフィーは、分離カラムが逆相カラムであり、移動相がギ酸、酢酸、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムの水溶液でｐＨを２．５〜７．５に調整した溶液から選択され、移動相に用いられる有機溶媒がアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びこれらと水の混合溶液から選択され、
前記質量分析法による検出工程は、以下の（ａ）群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体、及び（ｂ）〜（ｉ）の少なくとも１つの群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出する
ことを特徴とするアミノ官能性化合物の分析方法が提供される。
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−アミノ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
前記アミノ官能性化合物誘導体を段階的な濃度勾配溶出手段を用いる液体クロマトグラフィーにより溶出する工程、及び
前記液体クロマトグラフィーにより溶出されたアミノ官能性化合物誘導体を質量分析法により検出する工程を含み、
前記誘導体化試薬がｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド、フェニルイソシアネート、又は３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートであり、
前記段階的な濃度勾配溶出手段が、有機溶媒濃度が段階的に上昇するように有機溶媒の割合を少なくとも２回変化させて最高濃度に達した後に、有機溶媒濃度が低下するように有機溶媒の割合を少なくとも１回変化させ、その後に前記アミノ官能性化合物誘導体のうち少なくとも１つが溶出されるものであり、
前記液体クロマトグラフィーによる溶出工程は、ヒスチジン誘導体、アスパラギン酸誘導体、アルギニン誘導体、ヒドロキシプロリン誘導体、グルタミン酸誘導体、アルギニノコハク酸誘導体、システインスルフィン酸誘導体、システイン酸誘導体、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸誘導体の中で最も溶出時間の短いアミノ官能性化合物誘導体とトリプトファン誘導体、リジン誘導体、フェニルアラニン誘導体、１，５−ジアミノペンタン誘導体、ホモロイシン誘導体、トリプタミン誘導体、ホモランチオニン誘導体、チラミン誘導体、システアミン誘導体、プトレシン誘導体、シスタミン誘導体及び２−フェニルエチルアミン誘導体の中で最も溶出時間の長い該誘導体との溶出時間の差が３〜１０分の間にあり、
前記液体クロマトグラフィーは、分離カラムが逆相カラムであり、移動相がギ酸、酢酸、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムの水溶液でｐＨを２．５〜７．５に調整した溶液から選択され、移動相に用いられる有機溶媒がアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びこれらと水の混合溶液から選択され、
前記質量分析法による検出工程は、以下の（ａ）群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体、及び（ｂ）〜（ｉ）の少なくとも１つの群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出する
ことを特徴とするアミノ官能性化合物の分析方法が提供される。
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−アミノ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
また、第２の視点において、アミノ官能性化合物の分析装置であって、
試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて上記一般式（ＩＩ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成させる反応部と、
前記アミノ官能性化合物誘導体を溶出するクロマトグラフ部と、
前記クロマトグラフ部からの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体を検出する質量分析部とを備え、
前記誘導体化試薬がｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド、フェニルイソシアネート、又は３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートであり、
前記クロマトグラフ部が、分離カラム及び当該カラムに段階的な濃度勾配を有する溶出液を供給する送液系を備え、前記分離カラムが逆相カラムであり、
前記クロマトグラフ部は、移動相がギ酸、酢酸、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムの水溶液でｐＨを２．５〜７．５に調整した溶液から選択され、移動相に用いられる有機溶媒がアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びこれらと水の混合溶液から選択され、有機溶媒濃度が段階的に上昇するように有機溶媒の割合を少なくとも２回変化させて最高濃度に達した後に、有機溶媒濃度が低下するように有機溶媒の割合を少なくとも１回変化させ、その後に前記アミノ官能性化合物誘導体のうち少なくとも１つが溶出されるように設定され、
前記クロマトグラフ部は、ヒスチジン誘導体、アスパラギン酸誘導体、アルギニン誘導体、ヒドロキシプロリン誘導体、グルタミン酸誘導体、アルギニノコハク酸誘導体、システインスルフィン酸誘導体、システイン酸誘導体、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸誘導体の中で最も溶出時間の短いアミノ官能性化合物誘導体とトリプトファン誘導体、リジン誘導体、フェニルアラニン誘導体、１，５−ジアミノペンタン誘導体、ホモロイシン誘導体、トリプタミン誘導体、ホモランチオニン誘導体、チラミン誘導体、システアミン誘導体、プトレシン誘導体、シスタミン誘導体及び２−フェニルエチルアミン誘導体の中で最も溶出時間の長い該誘導体との溶出時間の差が３〜１０分の間に設定され、
前記質量分析部が、以下の（ａ）群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体、及び（ｂ）〜（ｉ）の少なくとも１つの群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出する
ことを特徴とする分析装置が提供される。
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−アミノ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて上記一般式（ＩＩ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成させる反応部と、
前記アミノ官能性化合物誘導体を溶出するクロマトグラフ部と、
前記クロマトグラフ部からの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体を検出する質量分析部とを備え、
前記誘導体化試薬がｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド、フェニルイソシアネート、又は３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートであり、
前記クロマトグラフ部が、分離カラム及び当該カラムに段階的な濃度勾配を有する溶出液を供給する送液系を備え、前記分離カラムが逆相カラムであり、
前記クロマトグラフ部は、移動相がギ酸、酢酸、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムの水溶液でｐＨを２．５〜７．５に調整した溶液から選択され、移動相に用いられる有機溶媒がアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びこれらと水の混合溶液から選択され、有機溶媒濃度が段階的に上昇するように有機溶媒の割合を少なくとも２回変化させて最高濃度に達した後に、有機溶媒濃度が低下するように有機溶媒の割合を少なくとも１回変化させ、その後に前記アミノ官能性化合物誘導体のうち少なくとも１つが溶出されるように設定され、
前記クロマトグラフ部は、ヒスチジン誘導体、アスパラギン酸誘導体、アルギニン誘導体、ヒドロキシプロリン誘導体、グルタミン酸誘導体、アルギニノコハク酸誘導体、システインスルフィン酸誘導体、システイン酸誘導体、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸誘導体の中で最も溶出時間の短いアミノ官能性化合物誘導体とトリプトファン誘導体、リジン誘導体、フェニルアラニン誘導体、１，５−ジアミノペンタン誘導体、ホモロイシン誘導体、トリプタミン誘導体、ホモランチオニン誘導体、チラミン誘導体、システアミン誘導体、プトレシン誘導体、シスタミン誘導体及び２−フェニルエチルアミン誘導体の中で最も溶出時間の長い該誘導体との溶出時間の差が３〜１０分の間に設定され、
前記質量分析部が、以下の（ａ）群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体、及び（ｂ）〜（ｉ）の少なくとも１つの群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出する
ことを特徴とする分析装置が提供される。
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−アミノ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
本発明の他の好ましい実施形態は、以下の発明を実施するための最良の形態において詳細に示される。
本発明の方法によれば、代表的な生体アミノ官能性化合物約４０種類を短時間で、例えば、１０分以内で分析することができ、従来のアミノ酸分析計に比べて分析時間を著しく短縮することができる。従来は、ロイシンやイソロイシンのような質量の同じアミノ酸については質量分析法のみでは同時分析は困難であったが、本発明の方法により、これらの生体アミノ酸を含む１００種類以上のアミノ官能性化合物を同時に、且つ極めて短時間に分析することが可能となる。
１０ 反応部
２０ クロマトグラフ部
２１ 分離カラム
２２ インジェクションバルブ
２３ａ、２３ｂ ポンプ
２４ａ、２４ｂ 溶離液
２０ クロマトグラフ部
２１ 分離カラム
２２ インジェクションバルブ
２３ａ、２３ｂ ポンプ
２４ａ、２４ｂ 溶離液
（定義）
本発明において、「アミノ官能性化合物」とは、分子内に第１級アミン及び／又は第２級アミンを有する化合物（塩の形態でもよい。）を意味し、これらの第１級アミンや第２級アミンは１個でも複数でもよい。また、試料中に存在するアミノ官能性化合物は１種でも複数種の混合物でもよい。当該アミノ官能性化合物としては、アミン類（第１級アミン、第２級アミン等）、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ポリアミン等を挙げることができ、具体的には、下記の表１に示したものが含まれる。このような化合物を複数種含んでいてもよい。例えば、アミノ酸の複数種混合物、アミノ酸１種以上とペプチド１種以上の混合物、アミノ酸１種以上とアミン１種以上の混合物等を挙げることができる。
本発明において、「アミノ官能性化合物」とは、分子内に第１級アミン及び／又は第２級アミンを有する化合物（塩の形態でもよい。）を意味し、これらの第１級アミンや第２級アミンは１個でも複数でもよい。また、試料中に存在するアミノ官能性化合物は１種でも複数種の混合物でもよい。当該アミノ官能性化合物としては、アミン類（第１級アミン、第２級アミン等）、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、ポリアミン等を挙げることができ、具体的には、下記の表１に示したものが含まれる。このような化合物を複数種含んでいてもよい。例えば、アミノ酸の複数種混合物、アミノ酸１種以上とペプチド１種以上の混合物、アミノ酸１種以上とアミン１種以上の混合物等を挙げることができる。
「誘導体化試薬」とは、上記アミノ官能性化合物と反応させて下記一般式（Ｉ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成することができる試薬をいう。
本発明の好ましい実施形態において、上記アミノ官能性化合物誘導体は、下記一般式（ＩＩ）で示される化合物である。
従って、一つの実施形態において、上記アミノ官能性化合物誘導体は、フェニルカルバミルアミノ官能性化合物、３−ピリジルカルバミルアミノ官能性化合物、フェニルチオカルバミルアミノ官能性化合物、３−ピリジルチオカルバミルアミノ官能性化合物、ｐ−トリメチルアンモニウムアニリルカルバミルアミノ官能性化合物、又はｐ−ジメチルアンモニウムアニリルカルバミルアミノ官能性化合物である。
このようなアミノ官能性化合物誘導体を生成せしめるための誘導体化試薬としては種々のものが使用されるが、好ましくは下記一般式（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）で示される置換イソチオシアネート芳香族化合物、置換イソシアネート芳香族化合物、置換スクシンイミジルカルバメート芳香族化合物、置換カルバモイルハライド芳香族化合物、又は置換カルバモイルアルコキシ芳香族化合物が挙げられる。
より具体的には、例えば、以下の表２に示したようなアミノ基と反応性の高い公知の化合物を用いることができる。
或いは、本発明の特に好ましい実施形態として、本発明者らによって上記特許文献２に報告されている下記一般式（Ｖ）で示されるカルバメート化合物を含有する誘導体化試薬が挙げられる。
当該式（Ｖ）において、Ａｒ２に関し、炭素環化合物残基としてそれぞれ置換基を有していてもよいフェニル基、ナフチル基（１−及び２−ナフチル基）、アントリル基（１−、２−及び５−アントリル基）等を、また、複素環化合物残基としてそれぞれ置換基を有していてもよいピリジル基（２−、３−及び４−ピリジル基）、ピラジル基、キノリル基（２〜８−キノリル基）、アクリジル基（１〜４−及び９−アクリジル基）、クマリル基（５〜８−クマリル基）等を挙げることができる。当該基は芳香環に置換基を一つ以上有することができる。置換基として、炭素数１〜５のアルキル基、ナフチル基、フェニル基等の芳香族基、塩素原子、臭素原子、フッ素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子、カルボキシル基、水酸基、ニトロ基、ジアゾ基、シアノ基、炭素数１〜５のアルコキシ基、炭素数２〜７のアシル基（アセチル基、ベンゾイル基等）、スルホン酸基、リン酸基、グアニジル基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアンモニウム基等を挙げることができる。アミノ官能性化合物を高感度で検出するためには、中でも、極性置換基、特に溶液中でイオン化し易い置換基を有することが好ましく、例えばスルホン酸基、リン酸基、グアニジル基、ジアルキルアミノ基、トリアルキルアンモニウム基等を挙げることができる。
Ａｒ２の具体な例として、下記の基を挙げることができる：
フェニル基、ナフチル基（１−及び２−ナフチル基）、アントリル基（１−、２−及び５−アントリル基）、ピリジル基（２−、３−及び４−ピリジル基）、ピラジル基、キノリル基（３−、６−及び８−キノリル基）、９−アクリジル基、６−クマリル基、ｐ−ジアルキルアミノフェニル基、ｐ−トリアルキルアンモニウムフェニル基、１−（３−トリアルキルアンモニウム）ナフチル基、１−（５−トリアルキルアンモニウム）ナフチル基、１−（３−ジアルキルアミノ）ナフチル基、１−（５−ジアルキルアミノ）ナフチル基、ｐ−スルホフェニル基、１−（３−スルホ）ナフチル基、１−（５−スルホ）ナフチル基、ｐ−ホスホフェニル基、１−（３−ホスホ）ナフチル基、１−（５−ホスホ）ナフチル基、ｐ−グアニジノフェニル基、１−（３−グアニジノ）ナフチル基、１−（５−グアニジノ）ナフチル基等。上記ジアルキルアミノ基及びトリアルキルアンモニウム基のアルキル基はそれぞれ独立的に、炭素数１〜５のアルキル基を表すことができる。これらの誘導体化試薬の調製方法及びそれらを用いたアミノ酸の標識方法は、上記特許文献２に詳細に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。
フェニル基、ナフチル基（１−及び２−ナフチル基）、アントリル基（１−、２−及び５−アントリル基）、ピリジル基（２−、３−及び４−ピリジル基）、ピラジル基、キノリル基（３−、６−及び８−キノリル基）、９−アクリジル基、６−クマリル基、ｐ−ジアルキルアミノフェニル基、ｐ−トリアルキルアンモニウムフェニル基、１−（３−トリアルキルアンモニウム）ナフチル基、１−（５−トリアルキルアンモニウム）ナフチル基、１−（３−ジアルキルアミノ）ナフチル基、１−（５−ジアルキルアミノ）ナフチル基、ｐ−スルホフェニル基、１−（３−スルホ）ナフチル基、１−（５−スルホ）ナフチル基、ｐ−ホスホフェニル基、１−（３−ホスホ）ナフチル基、１−（５−ホスホ）ナフチル基、ｐ−グアニジノフェニル基、１−（３−グアニジノ）ナフチル基、１−（５−グアニジノ）ナフチル基等。上記ジアルキルアミノ基及びトリアルキルアンモニウム基のアルキル基はそれぞれ独立的に、炭素数１〜５のアルキル基を表すことができる。これらの誘導体化試薬の調製方法及びそれらを用いたアミノ酸の標識方法は、上記特許文献２に詳細に記載されており、参照により本明細書に組み込まれる。
（本発明の分析方法）
本発明の分析方法における上記アミノ官能性化合物と誘導体化試薬との反応（標識化反応）には特に困難は無い。反応条件は、このような試薬を用いて標識する場合の一般的な条件（Iwaki, K., Yoshida, S., Nimura, N., Kinoshita, T., Takeda, K., and Ogura, H., Chromatographia 23 899 (1987)参照。）を用いればよいが、好ましくはアミノ官能性化合物をｐＨ値８〜１０程度の環境下で、アルコール類を除く適当な有機溶媒で溶解した溶液と誘導体化試薬とを混合した後、６０℃程度に加熱する等の条件を好適に採用することができる。誘導体化試薬の使用量については、アミノ官能性化合物の量、特にその中に含まれる全第１級アミン及び第２級アミンの量を考慮して、アミノ官能性化合物に対し、１０〜１０００倍モル（当量）程度、好ましくは１００〜１０００倍モル（当量）程度使用し、全てのアミノ基、イミノ基に対して標識できるようにする。
本発明の分析方法における上記アミノ官能性化合物と誘導体化試薬との反応（標識化反応）には特に困難は無い。反応条件は、このような試薬を用いて標識する場合の一般的な条件（Iwaki, K., Yoshida, S., Nimura, N., Kinoshita, T., Takeda, K., and Ogura, H., Chromatographia 23 899 (1987)参照。）を用いればよいが、好ましくはアミノ官能性化合物をｐＨ値８〜１０程度の環境下で、アルコール類を除く適当な有機溶媒で溶解した溶液と誘導体化試薬とを混合した後、６０℃程度に加熱する等の条件を好適に採用することができる。誘導体化試薬の使用量については、アミノ官能性化合物の量、特にその中に含まれる全第１級アミン及び第２級アミンの量を考慮して、アミノ官能性化合物に対し、１０〜１０００倍モル（当量）程度、好ましくは１００〜１０００倍モル（当量）程度使用し、全てのアミノ基、イミノ基に対して標識できるようにする。
アミノ官能性化合物、例えばアミノ酸は図１に示したような反応によりアミノ官能性化合物誘導体とすることができる。図１（ａ）の反応式によれば、アミノ酸を異なる誘導体化試薬であるフェニル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＰＡＨＳ）又はフェニルイソシアネート（ＰＩＣ）と反応させた場合にも同一のアミノ官能性化合物誘導体が生成することが示される。同様に、図１（ｂ）では、アミノ酸を３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシニミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）又はピリジルイソシアネート（ＰｙＩＣ）と反応させた場合にも同一のアミノ官能性化合物誘導体が生成することが分かる。従って、本発明の方法は、誘導体化反応の結果生じたアミノ官能性化合物誘導体の構造が上記一般式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される構造である点に特徴を有し、それらの構造を有する限り、どのような誘導体化試薬を用いて反応を行う方法も本発明の範囲に含まれる。
本発明の分析方法における「液体クロマトグラフィー」とは、液体を移動相とするクロマトグラフィーによる分離手法であって、固定相カラムを選択することによって加圧下で操作が可能な高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）として種々の用途に用いられている。分離機構は、分配、吸着、イオン交換、サイズ排除等の種々の機構に分類されるが、最も頻繁に使用されるカラムは逆相固定相で分配によって分離され、試料はより極性の低い固定相に保持され、極性を持つ移動相によって溶出される。
「段階的な濃度勾配溶出手段（ステップワイズグラジエント）」とは、移動相の極性や塩強度などを段階的に変化させることであって、例えば、溶離液に含まれる有機溶媒の割合を図２に示したように変化させることをいう。図２において、溶離液に含まれる有機溶媒の割合は分析時間の経過と共に階段的に変化するが、濃度勾配の無い状態又は緩やかな濃度勾配の状態から、それよりも急激な濃度勾配を有する状態へと非直線的に変化することをいう。好ましくは、有機溶媒の割合を少なくとも２回、より好ましくは３回以上変化させることにより効率的な分離を行うことができる。なお、最適なステップワイズグラジエントは、分析対象となるアミノ官能性化合物誘導体の種類や用いる有機溶媒の種類によって異なる。また、分離能は溶出時間を長くすると改善されるため、直線的な濃度勾配溶出手段（リニアーグラジエント法）を用いた場合にも溶出時間を長くすることによって本発明と同様の効果が得られる場合もある。用いる有機溶媒としてはカラムの充填剤やサイズなどの種類に併せて種々の溶媒を適宜選択することができるが、例えば、逆相カラムを用いたＨＰＬＣの場合には、酸としてはギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、酪酸、ペンタフルオロプロピオン酸、ヘプタフルオロ酪酸を、塩基としては、アンモニア、トリメチルアミン、トリエチルアミン、トリブチルアミンを、また、これらの塩溶液によってｐＨを調製した溶液、望ましくは、ギ酸、酢酸、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムの５〜５０ｍＭ水溶液でｐＨを２．５〜７．５に調整した溶液、また有機溶媒としてはアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びこれらと水の混合溶液を用いることが好ましい。
上記液体クロマトグラフィーによる溶出工程における好ましい実施形態において、ヒスチジン誘導体、アスパラギン酸誘導体、アルギニン誘導体、ヒドロキシプロリン誘導体、グルタミン酸誘導体、アルギニノコハク酸誘導体、システインスルフィン酸誘導体、システイン酸誘導体、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸誘導体の中で最も溶出時間の短いアミノ官能性化合物誘導体とトリプトファン誘導体、リジン誘導体、フェニルアラニン誘導体、１，５−ジアミノペンタン誘導体、ホモロイシン誘導体、トリプタミン誘導体、ホモランチオニン誘導体、チラミン誘導体、システアミン誘導体、プトレシン誘導体、シスタミン誘導体及び２−フェニルエチルアミン誘導体の中で最も溶出時間の長い該誘導体との溶出時間の差が３〜２０分の間、より好ましくは３〜１０分の間に設定することができる。迅速な分析を行うためには、この溶出時間差をできるだけ短くした方がよいが、用いる分離カラムの性能と対象サンプルの種類を考慮して当該溶出時間差を適宜設定することができる。
本発明において使用する質量分析法は、上記液体クロマトグラフィーにより溶出されるアミノ官能性化合物をエレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）、及びソニックスプレーイオン化法（ＳＳＩ）などの方法で正イオンあるいは負イオンにイオン化し、気相で測定する方法である。生じたイオンは四重極型、イオントラップ型、飛行時間型、及び磁場型などの質量分離装置にかけられ、質量と電荷の比により分離される。さらに三連四重極型の装置のように質量分離装置を複数個直列につなぐことにより（ＭＳ／ＭＳ）、選択性の高い測定が可能になる。
例えば、三連四重極装置においては、１番目の四重極でアミノ官能性化合物誘導体の質量を測定した後、注目するアミノ官能性化合物誘導体のみを２番目の四重極に送り込んで、そこで衝突誘起解離（Collision-induced dissociation; CID）によってフラグメント化し、そのフラグメントの質量を３番目の四重極で極めて高感度に測定することができる。
このことを利用して、下記に示す２種類の測定方法、即ち、プリカーサーイオンスキャン法（Precursor Ion Scan）、セレクテッドリアクションモニタリング法（Selected Reaction Monitoring (SRM)法）により、第一のマスアナライザーでアミノ官能性化合物と前記標識試薬との反応体のイオンを、第二のマスアナライザーで試薬由来のフラグメントイオンを検出することで極めて選択性が高く、高感度な分析を達成することができる。
このような方法に用いる誘導体化試薬としては、ｐ−ジメチルアミノアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＤＡＨＳ）、３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）、ｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイド（ＴＡＨＳ）、アミノピラジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート、６−アミノキノリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドカルバメート（ＡＱＣ）、９−アミノアクリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドカルバメート等が挙げられる。
一方、誘導体化試薬に前記カルバメート化合物の中、試薬のイオン性が小さい化合物を選択した場合、ＣＩＤにより同様に選択的な開裂が発生するが、質量分析計内で陽イオンを観測するように設定すると、試薬由来の構造がニュートラルロスし、［アミノ酸＋Ｈ］がフラグメントイオンとして観測される。このことを利用して、コンスタントニュートラルロススキャン法（Constant Neutral Loss Scan）により、質量分析計で陽イオンを観測するように設定することにより、第一のマスアナライザーでアミノ酸と試薬の反応体のイオンを、第二のマスアナライザーで試薬骨格由来の構造がニュートラルロスしたアミノ酸由来のイオンを検出することで、極めて選択性が高く高感度なアミノ酸分析が達成される。このような方法に用いる誘導体化試薬としては、１−ナフチルアミノ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＮＡＨＳ）が挙げられる。
＜好適な質量分析方法＞
本発明において使用する質量分析法には特に制限は無いが、より好ましい例として幾つか紹介する。
<Selected Ion Monitoring>
ＳＩＭでは、あらかじめ選択された特定のｍ／ｚ比のみをモニターすることにより目的の質量をもつ化合物を高い精度で検出することができる。
本発明において使用する質量分析法には特に制限は無いが、より好ましい例として幾つか紹介する。
<Selected Ion Monitoring>
ＳＩＭでは、あらかじめ選択された特定のｍ／ｚ比のみをモニターすることにより目的の質量をもつ化合物を高い精度で検出することができる。
＜Precursor Ion Scan＞
プリカーサーイオンスキャン分析では、第一のマスアナライザー（Ｑ１等）は指定された質量範囲に従ってスキャンされ、この範囲のイオンは、例えばＱ２での衝突誘起解離により解離する。このとき第二のマスアナライザー（Ｑ３等）は、特定のフラグメントイオン（例えば、ＴＡＨＳの場合ｍ／ｚ＝１７７）を選択するように設定する。得られるスペクトルには特定のフラグメントイオンを生成するプリカーサーイオン（親イオン）だけが記録される。
プリカーサーイオンスキャン分析では、第一のマスアナライザー（Ｑ１等）は指定された質量範囲に従ってスキャンされ、この範囲のイオンは、例えばＱ２での衝突誘起解離により解離する。このとき第二のマスアナライザー（Ｑ３等）は、特定のフラグメントイオン（例えば、ＴＡＨＳの場合ｍ／ｚ＝１７７）を選択するように設定する。得られるスペクトルには特定のフラグメントイオンを生成するプリカーサーイオン（親イオン）だけが記録される。
＜Selected Reaction Monitoring (SRM)＞
ＳＲＭ分析では、対象となるイオンを第一のマスアナライザー（Ｑ１等）で選択し、このイオンを衝突セルの中で解離させ、第二のマスアナライザー（Ｑ３等）で特定のフラグメントイオン（例えば、ＴＡＨＳの場合ｍ／ｚ＝１７７）を選択してモニタリングする。この方法により、定量対象化合物と同一の保持時間でかつプリカーサーイオンと同一の質量を有する夾雑成分が存在しても、夾雑成分が定量対象化合物のフラグメントイオンを生じない限り、その影響を排除できるので、感度・選択性が飛躍的に向上する。
ＳＲＭ分析では、対象となるイオンを第一のマスアナライザー（Ｑ１等）で選択し、このイオンを衝突セルの中で解離させ、第二のマスアナライザー（Ｑ３等）で特定のフラグメントイオン（例えば、ＴＡＨＳの場合ｍ／ｚ＝１７７）を選択してモニタリングする。この方法により、定量対象化合物と同一の保持時間でかつプリカーサーイオンと同一の質量を有する夾雑成分が存在しても、夾雑成分が定量対象化合物のフラグメントイオンを生じない限り、その影響を排除できるので、感度・選択性が飛躍的に向上する。
＜Constant Neutral Loss Scan＞
コンスタントニュートラルスキャン分析では、第一のマスアナライザー（Ｑ１等）は指定された質量範囲に従ってスキャンされ、この範囲のイオンは、例えばＱ２での衝突誘起解離により解離する。このとき第二のマスアナライザー（Ｑ３等）は、特定のニュートラルフラグメント（例えば、１−ナフチルアミノ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートの場合ｍ／ｚ＝１７０）を選択するように設定する。得られるスペクトルにはある特定の中性分子が脱離する全てのプリカーサーイオン（親イオン）を検出するスキャン法を採用する。
コンスタントニュートラルスキャン分析では、第一のマスアナライザー（Ｑ１等）は指定された質量範囲に従ってスキャンされ、この範囲のイオンは、例えばＱ２での衝突誘起解離により解離する。このとき第二のマスアナライザー（Ｑ３等）は、特定のニュートラルフラグメント（例えば、１−ナフチルアミノ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートの場合ｍ／ｚ＝１７０）を選択するように設定する。得られるスペクトルにはある特定の中性分子が脱離する全てのプリカーサーイオン（親イオン）を検出するスキャン法を採用する。
質量分析は、その分析対象物質の質量に起因するイオンを検出できるために、極めて選択性の高い検出方法として、広く使用されている。本発明においては、分析対象を規則的な開裂を発生させる誘導体化試薬を設計することで、アミノ官能性化合物のより選択性の高い検出方法が得られる。更に、イオン性の高い誘導体化試薬を設計した場合には、アミノ官能性化合物の高感度分析を達成することができる。
また、一般的に質量分析においては、低分子領域に夾雑物が多く、それがノイズの原因となり、分析対象の検出能を妨げる要因となるが、一つ以上の芳香環を誘導体化試薬に導入することで、分子量を大きくし、ノイズの少ない領域での測定を達成することができる。
アミノ酸の検出限界は、アミノ酸の種類によって異なるが、四重極質量分析計、例えばＡＰＩ３６５タイプの検出器（アプライドバイオシステムズ）を用い、ＳＲＭモードを選択した場合、ｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイド（ＴＡＨＳ）で２〜４０ｆｍｏｌ程度、ｐ−ジメチルアミノアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＤＡＨＳ）で３〜２０００ｆｍｏｌ程度、３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）で３〜１８０ｆｍｏｌ程度、６−アミノキノリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドカルバメート（ＡＱＣ）で２〜２００ｆｍｏｌ程度であり、一般的な蛍光標識試薬を凌ぐことができることが確認される。特に、６−アミノキノリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドカルバメート（ＡＱＣ）は蛍光標識試薬として市販されているものであるが、その検出限界は数百ｆｍｏｌと報告されている。ＳＲＭでの測定では、蛍光法と同等から最大で百倍の感度改善が見られる。
本発明の方法による検出は、誘導体化標識されたアミノ官能性化合物の質量に起因するイオンで行われるため、それ以外の化合物、例えば、標識試薬や標識試薬の加水分解物、その他、標識反応により形成される予期せぬ夾雑物の障害を受けることなく、分析対象を測定することができる。
本発明において、安定同位体を含むアミノ官能性化合物を用いることで測定の精度を向上することができる。例えば、１３Ｃ、２Ｈ（Ｄ）、１５Ｎ及び１８Ｏ等の天然存在比の低い安定同位体、あるいは放射性同位元素を含むアミノ官能性化合物を内部標準物質とする方法や、前記同位体を含む誘導体化試薬を用いてアミノ官能性化合物を誘導体化したものを内部標準物質として用いることで、生体試料分析におけるマトリックス効果やそれに伴うイオン化抑制の影響を低減し、測定精度を上げることができる。分析対象となるアミノ官能性化合物の種類、試料中の濃度及び分析条件により最適な内部標準物質を選択することで定量精度は飛躍的に向上する。好ましくは、分析対象となるアミノ官能性化合物のすべての内部標準物質を用いることが望ましい。
本発明の好ましい実施形態において、上記質量分析法による検出工程は、以下の（ａ）群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体、及び（ｂ）〜（ｉ）の少なくとも１つの群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出することができる。
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−ヒドロキシ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−ヒドロキシ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
上記（ａ）〜（ｉ）の各群には、それぞれ質量が同一のアミノ官能性化合物誘導体が示されるが、本発明の方法によれば、これら各群に含まれるアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出するように溶出工程の条件設定をすることができ、このため多種類のアミノ官能性化合物を含む試料を用いてこれらを同時に分析することが可能となる。従って、本発明の方法は、これら全てのアミノ官能性化合物を含む試料を用いてもよいが、少なくともロイシン、イソロイシン及びノルロイシンから選択される２以上のアミノ官能性化合物を含む試料を用いてこれら複数のアミノ官能性化合物誘導体を同時に分析する方法を含む。
（本発明の分析装置）
本発明の分析装置は、例えば、図３に示したように、上記本発明の分析方法を実施するために必要な構成要素（部分）からなる。これらの構成要素としては、少なくとも、試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させる反応部１０と、前記反応部１０で生成したアミノ官能性化合物誘導体の液体クロマトグラフィーにより溶出するクロマトグラフ部２０と、前記クロマトグラフ部２０からの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体を検出する質量分析部３０とを含む。前記溶出部２０は、分離カラム２１及び当該カラムに段階的な濃度勾配を有する溶出液を供給する溶出系、例えば、溶離液２４ａ（２４ｂ）をカラムに送るためのポンプ２３ａ（２３ｂ）等が含まれる。溶出液に濃度勾配をつけるために複数のポンプ（２３ａ、２３ｂ）を用いることができる。また、クロマトグラフ部２０は、上記反応部１０で生成したアミノ官能性化合物誘導体を導入するためのインジェクションバルブ２２を備える。
本発明の分析装置は、例えば、図３に示したように、上記本発明の分析方法を実施するために必要な構成要素（部分）からなる。これらの構成要素としては、少なくとも、試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させる反応部１０と、前記反応部１０で生成したアミノ官能性化合物誘導体の液体クロマトグラフィーにより溶出するクロマトグラフ部２０と、前記クロマトグラフ部２０からの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体を検出する質量分析部３０とを含む。前記溶出部２０は、分離カラム２１及び当該カラムに段階的な濃度勾配を有する溶出液を供給する溶出系、例えば、溶離液２４ａ（２４ｂ）をカラムに送るためのポンプ２３ａ（２３ｂ）等が含まれる。溶出液に濃度勾配をつけるために複数のポンプ（２３ａ、２３ｂ）を用いることができる。また、クロマトグラフ部２０は、上記反応部１０で生成したアミノ官能性化合物誘導体を導入するためのインジェクションバルブ２２を備える。
クロマトグラフ部２０から溶出されたアミノ官能性化合物誘導体は、質量分析部３０において、まずイオン化される。タンパク質やペプチド等の試料をイオン化するために最も一般的に用いられる技術として、エレクトロスプレーイオン化法（ＥＳＩ）、大気圧化学イオン化法（ＡＰＣＩ）及びマトリクス支援レーザー脱離イオン化法（ＭＡＬＤＩ）、ソニックスプレーイオン化法（ＳＳＩ）などがあるが、本発明の装置において、液体クロマトグラフィーからの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体をイオン化させる方法としてはＥＳＩ法を用いることが好ましい。イオン化のための効率的な熱伝導やガス化方法を備えた多くのシステムが用いられる。
続いて、質量分析部３０は、イオン化した試料から選択された質量対電荷比(m/z)内においてイオンを分離する。質量分析部は分析データの感度や分解能、質量の正確さやマススペクトルデータから得られる情報の豊富さに重要な役割を果たしている。イオンの分離方法としては、現在、６種類の基本的なタイプに分類することができ、それらは、磁場型、電場型、イオントラップ型、飛行時間（ＴＯＦ）型、四重極型、及びフーリエ変換サイクロトロン型である。これらはそれぞれ長所と短所があり、単独で又は互いに連結して用いることができるが、ＥＳＩによるイオン化では通常、四重極質量分析部が用いられる。最新の四重極質量分析計（例えば、ＡＰＩ４０００（アプライドバイオシステムズ））による測定では、ｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイド（TAHS）標識後のアミノ酸の検出限界は殆どのアミノ酸で１ｆｍｏｌ以下となる。
本発明の分析装置は、上記各構成要素（ユニット）を自動的に連結し、反応部１０から質量分析部３０までをオートメーション化することができる。例えば、９６穴のウェルプレートで血漿等の試料を保存するユニットを追加し、これより自動サンプリング装置により所定量の試料を採取して反応部１０へ移送し、更に、誘導体化されたアミノ官能性化合物を液体クロマトグラフィーのオートサンプラー等を用いて自動的にクロマトグラフ部２０へインジェクションすることができる。これにより極めてハイスループットな分析が可能となる。
以下に、実施例を挙げて本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
＜例１：アミノ官能性化合物の誘導体化の具体的な手順１＞
アミノ官能性化合物を含む試料としてアミン標準溶液２０μＬに、硼酸緩衝液（硼酸塩200mM、EDTA5mM）６０μＬを添加した。この混合物に、標識試薬溶液（HPLC等級アセトニトリル1mL中に誘導体化試薬5mg）２０μＬを添加した。得られた混合物を１０分間、５５℃で加熱した。加熱後、得られたアミノ官能性化合物の誘導体化物の混合物を用いて、逆相の液体クロマトグラフィーで分離後、質量分析装置に導入した。その際に、得られた誘導体化物の混合物は液体クロマトグラフィーの移動相Ａで１０倍に希釈しておく。
（１）移動相Ａ：５０ｍＭ酢酸水溶液をアンモニア水でｐＨ６．０に調製した水溶液
（２）移動相Ｂ：１２５ｍＭ酢酸水溶液をアンモニア水でｐＨ６．０に調製した水溶液とメタノールを４：６で混合した溶液
（３）ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００シリーズ
（４）検出器：質量分析装置 Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００
（５）温度：４０℃
アミノ官能性化合物を含む試料としてアミン標準溶液２０μＬに、硼酸緩衝液（硼酸塩200mM、EDTA5mM）６０μＬを添加した。この混合物に、標識試薬溶液（HPLC等級アセトニトリル1mL中に誘導体化試薬5mg）２０μＬを添加した。得られた混合物を１０分間、５５℃で加熱した。加熱後、得られたアミノ官能性化合物の誘導体化物の混合物を用いて、逆相の液体クロマトグラフィーで分離後、質量分析装置に導入した。その際に、得られた誘導体化物の混合物は液体クロマトグラフィーの移動相Ａで１０倍に希釈しておく。
（１）移動相Ａ：５０ｍＭ酢酸水溶液をアンモニア水でｐＨ６．０に調製した水溶液
（２）移動相Ｂ：１２５ｍＭ酢酸水溶液をアンモニア水でｐＨ６．０に調製した水溶液とメタノールを４：６で混合した溶液
（３）ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００シリーズ
（４）検出器：質量分析装置 Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００
（５）温度：４０℃
＜例２：分析例１＞
ｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド（TAHS）により前記例１に記載した反応条件によって調製した４０種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Ion
Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
ｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド（TAHS）により前記例１に記載した反応条件によって調製した４０種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Ion
Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＡＱ 内径２．０ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子径３μｍ（資生堂）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．２５分（３％）、０．２５分から１分（３％から１５％）、１分から１．７５分（１５％）、１．７５分から２．３５分（１５％から３４％）、２．３５分から５分（３４％から３５％）、５．０１分から５．１分（５０％から７０％）、５．１分から５．７分（７０％）、５．７１分から１２分（３％）。なお、メタノール濃度について表したグラジエントパターンを図２の（ａ）に示した。
分析した結果を図４に示す。ＴＩＣ(Total Ion Chromatogram)は、４０種類のアミノ官能性化合物の溶出パターンを連続的に示したものである。抽出イオンクロマトグラム(XIC)は、これら４０種類の化合物を分離して検出したパターンを示す。また、それぞれのアミノ官能性化合物を単独で、又は数種の混合物として検出したパターンをそれらの下に示した。図４から明らかなように、４０種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して約９分間で検出できることが分かる。
＜例３：分析例２＞
ｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド（TAHS）により前記例１に記載した反応条件によって調製した４０種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
ｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド（TAHS）により前記例１に記載した反応条件によって調製した４０種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＡＱ 内径２．０ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子径３μｍ（資生堂）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．２５分（３％）、０．２５分から１分（３％から１５％）、１分から１．７５分（１５％）、１．７５分から２．３５分（１５％から３４％）、２．３５分から５分（３４％から３５％）、５．０１分から５．１分（５０％から７０％）、５．１分から５．７分（７０％）、５．７１分から１２分（３％）。
分析した結果を図５に示す。本分析例においても上記分析例１と同様に約９分間で４０種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して検出できることが分かる。
＜例４：分析例３＞
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Ion Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Ion Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＡＱ 内径２．０ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子径３μｍ（資生堂）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．５分（１３％）、０．５１分から４分（５０％）、４．０１分から６分（８０％）、６．０１分から１２分（１３％）。なお、メタノール濃度について表したグラジエントパターンを図２の（ｂ）に示した。
分析した結果を図６に示す。本分析例においても上記分析例１及び２と同様に約８分間で３９種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して検出できることが分かる。
＜例５：分析例４＞
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＡＱ 内径２．０ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子径３μｍ（資生堂）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．５分（１３％）、０．５１分から４分（５０％）、４．０１分から６分（８０％）、６．０１分から１２分（１３％）。
分析した結果を図７に示す。本分析例においても上記分析例１〜３と同様に約８分間で３９種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して検出できることが分かる。
＜例６：分析例５＞
フェニルイソシアネート（ＰＩＣ）により前記例１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Ion Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
フェニルイソシアネート（ＰＩＣ）により前記例１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣより分離し、Selected Ion Monitoring（ポジティブイオンモード）において検出した。
逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＳｕｐｅｒＯＤＳ 内径２．０ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子径２μｍ（ＴＯＳＯＨ）を用い、流速は０．４ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．０１分（１３％）、０．０１分から２分（６０％）、２．５分から４．５分（１００％）、４．５１分から１０分（１３％）。
分析した結果を図８に示す。本分析例においても上記分析例１〜４と同様に約６分間で３９種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して検出できることが分かる。
＜例７：分析例６＞
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１で記載した反応条件によって調製した１７種のアミノ酸誘導体（ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、ノルロイシン誘導体、ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、アラニン誘導体、γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、β−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、１−メチルヒスチジン誘導体、３−メチルヒスチジン誘導体、ホモセリン誘導体、スレオニン誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体）の混合物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおけるカラムはＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＡＱ 内径２．０ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子径３μｍ（資生堂）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．５分（１３％）、０．５１分から４分（５０％）、４．０１分から６分（８０％）、６．０１分から１２分（１３％）。
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１で記載した反応条件によって調製した１７種のアミノ酸誘導体（ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、ノルロイシン誘導体、ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、アラニン誘導体、γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、β−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、１−メチルヒスチジン誘導体、３−メチルヒスチジン誘導体、ホモセリン誘導体、スレオニン誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体）の混合物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおけるカラムはＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ ＡＱ 内径２．０ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子径３μｍ（資生堂）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．５分（１３％）、０．５１分から４分（５０％）、４．０１分から６分（８０％）、６．０１分から１２分（１３％）。
その結果を図９に示す。図９の各チャートに示したように、質量数が同一の複数のアミノ官能性化合物、例えば、ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体を分離して検出できることが分かる。
＜例８：アミノ官能性化合物の誘導体化の具体的な手順２＞
アミノ官能性化合物を含む試料としてアミノ官能性化合物標準混合溶液２０μＬに、０．２Ｍ硼酸緩衝液（ｐＨ８．８）を添加した。この混合物に、３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート試薬溶液（１０ｍｇの誘導体化試薬をＬＣ／ＭＳ用のアセトニトリル１ｍＬ中に溶解）を２０μＬ添加した。得られた混合物を１０分間、５５℃で加熱した。加熱後、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物を逆相の液体クロマトグラフィーで分離後、質量分析装置に導入した。その際、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物は、０．１％のギ酸水溶液１００μＬで中和後、液体クロマトグラフィーの移動相Ａを３００μＬ加えて希釈しておく。
（１）移動相Ａ：２５ｍＭギ酸水溶液をアンモニア水でｐＨ６．０に調製した水溶液
（２）移動相Ｂ：アセトニトリルと精製水を６：４で混合した溶液
（３）ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００シリーズ
（４）検出器：質量分析装置 Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００
（５）温度：４０℃
アミノ官能性化合物を含む試料としてアミノ官能性化合物標準混合溶液２０μＬに、０．２Ｍ硼酸緩衝液（ｐＨ８．８）を添加した。この混合物に、３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート試薬溶液（１０ｍｇの誘導体化試薬をＬＣ／ＭＳ用のアセトニトリル１ｍＬ中に溶解）を２０μＬ添加した。得られた混合物を１０分間、５５℃で加熱した。加熱後、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物を逆相の液体クロマトグラフィーで分離後、質量分析装置に導入した。その際、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物は、０．１％のギ酸水溶液１００μＬで中和後、液体クロマトグラフィーの移動相Ａを３００μＬ加えて希釈しておく。
（１）移動相Ａ：２５ｍＭギ酸水溶液をアンモニア水でｐＨ６．０に調製した水溶液
（２）移動相Ｂ：アセトニトリルと精製水を６：４で混合した溶液
（３）ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００シリーズ
（４）検出器：質量分析装置 Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００
（５）温度：４０℃
＜例９：分析例７＞
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例８に記載した反応条件によって調製した１０６種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＩｎｅｒｔｓｉｌＣ８−３内径２．１ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子系３μｍ（ジーエルサイエンス）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から１．２５分（４％）、１．２５分から１．２６分（４％から１５％）、１．２６分から５分（１５％から２０％）、５分から５．５分（２０％から５０％）、５．５分から６．５分（５０％から９５％）、６．５分から６．７５分（９５％）、６．７６分から１２分（４％）。
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例８に記載した反応条件によって調製した１０６種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＩｎｅｒｔｓｉｌＣ８−３内径２．１ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子系３μｍ（ジーエルサイエンス）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から１．２５分（４％）、１．２５分から１．２６分（４％から１５％）、１．２６分から５分（１５％から２０％）、５分から５．５分（２０％から５０％）、５．５分から６．５分（５０％から９５％）、６．５分から６．７５分（９５％）、６．７６分から１２分（４％）。
分析した結果を図１０に示す。図１０に示したように、約９分間で１０６種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して検出できることが分かる。
＜例１０：分析例８＞
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例８に記載した反応条件によって調製した３８種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Ion Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＩｎｅｒｔｓｉｌＣ８−３内径２．１ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子系３μｍ（ジーエルサイエンス）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から１．２５分（４％）、１．２５分から１．２６分（４％から１５％）、１．２６分から５分（１５％から２０％）、５分から５．５分（２０％から５０％）、５．５分から５．５１分（５０％から９５％）、５．５１分から６．５分（９５％）、６．５１分から１２分（４％）。
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例８に記載した反応条件によって調製した３８種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Ion Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＩｎｅｒｔｓｉｌＣ８−３内径２．１ｍｍ、長さ５０ｍｍ、粒子系３μｍ（ジーエルサイエンス）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から１．２５分（４％）、１．２５分から１．２６分（４％から１５％）、１．２６分から５分（１５％から２０％）、５分から５．５分（２０％から５０％）、５．５分から５．５１分（５０％から９５％）、５．５１分から６．５分（９５％）、６．５１分から１２分（４％）。
分析した結果を図１１に示す。図１１に示したように、約８分間で３８種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して検出できることが分かる。
＜例１１：アミノ官能性化合物の誘導体化の具体的な手順３＞
アミノ官能性化合物を含む試料としてアミノ官能性化合物標準混合溶液２０μＬに、０．２Ｍ硼酸緩衝液（ｐＨ８．８）を添加した。この混合物に、３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート試薬溶液（１０ｍｇの誘導体化試薬をＬＣ／ＭＳ用のアセトニトリル１ｍＬ中に溶解）を２０μＬ添加した。得られた混合物を１０分間、５５℃で加熱した。加熱後、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物を逆相の液体クロマトグラフィーで分離後、質量分析装置に導入した。その際、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物は、０．１％のギ酸水溶液１００μＬで中和後、液体クロマトグラフィーの移動相Ａを３００μＬ加えて希釈しておく。
（１）移動相Ａ：２５ｍＭギ酸水溶液
（２）移動相Ｂ：アセトニトリルと精製水を６：４で混合した溶液
（３）ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００シリーズ
（４）検出器：質量分析装置 Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００
（５）温度：４０℃
アミノ官能性化合物を含む試料としてアミノ官能性化合物標準混合溶液２０μＬに、０．２Ｍ硼酸緩衝液（ｐＨ８．８）を添加した。この混合物に、３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート試薬溶液（１０ｍｇの誘導体化試薬をＬＣ／ＭＳ用のアセトニトリル１ｍＬ中に溶解）を２０μＬ添加した。得られた混合物を１０分間、５５℃で加熱した。加熱後、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物を逆相の液体クロマトグラフィーで分離後、質量分析装置に導入した。その際、得られたアミノ官能性化合物誘導体混合物は、０．１％のギ酸水溶液１００μＬで中和後、液体クロマトグラフィーの移動相Ａを３００μＬ加えて希釈しておく。
（１）移動相Ａ：２５ｍＭギ酸水溶液
（２）移動相Ｂ：アセトニトリルと精製水を６：４で混合した溶液
（３）ＨＰＬＣ：Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰ１１００シリーズ
（４）検出器：質量分析装置 Ｓｃｉｅｘ ＡＰＩ４０００
（５）温度：４０℃
＜例１２：分析例９＞
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＡｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８ 内径２．１ｍｍ、長さ１００ｍｍ、粒子系３μｍ（ウォーターズ）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．５分（０％）、０．５分から２．２５分（０％から１２％）、２．２５分から２．２６分（１２％から１８％）、２．２６分から５．５分（１８％から２２％）、５．５分から６分（２２％から５０％）、６分から６．２５分（５０％から９０％）、６．２５分から６．５分（９０％）、６．５１分から１２分（０％）。
３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメート（ＡＰＤＳ）により前記例１１に記載した反応条件によって調製した３９種のアミノ官能性化合物の混合物の誘導体化物を逆相ＨＰＬＣにより分離し、Selected Reaction Monitoring（ポジティブモード）において検出した。逆相ＨＰＬＣにおける分離カラムはＡｔｌａｎｔｉｓ ｄＣ１８ 内径２．１ｍｍ、長さ１００ｍｍ、粒子系３μｍ（ウォーターズ）を用い、流速は０．３ｍＬ／ｍｉｎで勾配条件は以下の通りである。時間（移動相Ｂの比率）０分から０．５分（０％）、０．５分から２．２５分（０％から１２％）、２．２５分から２．２６分（１２％から１８％）、２．２６分から５．５分（１８％から２２％）、５．５分から６分（２２％から５０％）、６分から６．２５分（５０％から９０％）、６．２５分から６．５分（９０％）、６．５１分から１２分（０％）。
分析した結果を図１２に示す。図１２に示したように、約１０分間で３９種類のアミノ官能性化合物のそれぞれを分離して検出できることが分かる。
本発明は、以下の形態を含む。
アミノ官能性化合物を含む試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて下記一般式（Ｉ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成せしめる工程、前記アミノ官能性化合物誘導体を段階的な濃度勾配溶出手段を用いる液体クロマトグラフィーにより溶出する工程、及び前記液体クロマトグラフィーにより溶出されたアミノ官能性化合物誘導体を質量分析法により検出する工程を含むことを特徴とするアミノ官能性化合物の分析方法。
（式中、Ａｒ １ は置換基を有してもよい炭化水素、又は芳香族性を示す炭素環若しくは複素環を含む置換基を表し、Ｒ １ は水素原子、置換基を有していてもよいアルキル基又は置換基を有していてもよい飽和又は不飽和のアルキル基を表し、Ｒ ２ は置換基を有していてもよいアルキル基を表し、Ａｒ １ とＲ １ 、又はＲ １ とＲ ２ は一緒になって環を形成してもよい。）
試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて上記一般式（Ｉ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成させる反応部と、前記アミノ官能性化合物誘導体を溶出するクロマトグラフ部と、前記クロマトグラフ部からの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体を検出する質量分析部とを備えることを特徴とするアミノ官能性化合物の分析装置。
本発明は、以下の形態を含む。
アミノ官能性化合物を含む試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて下記一般式（Ｉ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成せしめる工程、前記アミノ官能性化合物誘導体を段階的な濃度勾配溶出手段を用いる液体クロマトグラフィーにより溶出する工程、及び前記液体クロマトグラフィーにより溶出されたアミノ官能性化合物誘導体を質量分析法により検出する工程を含むことを特徴とするアミノ官能性化合物の分析方法。
試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて上記一般式（Ｉ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成させる反応部と、前記アミノ官能性化合物誘導体を溶出するクロマトグラフ部と、前記クロマトグラフ部からの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体を検出する質量分析部とを備えることを特徴とするアミノ官能性化合物の分析装置。
本発明の方法によれば、生体アミノ酸を含む１００種類以上のアミノ官能性化合物を極めて短時間に、例えば１０分以内に分析できることから、これらアミノ官能性化合物に関連する食品、医薬品、医療や分析機器の分野において有用である。
Claims (5)
- アミノ官能性化合物を含む試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて下記一般式（ＩＩ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成せしめる工程、
前記アミノ官能性化合物誘導体を段階的な濃度勾配溶出手段を用いる液体クロマトグラフィーにより溶出する工程、及び
前記液体クロマトグラフィーにより溶出されたアミノ官能性化合物誘導体を質量分析法により検出する工程を含み、
前記誘導体化試薬がｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド、フェニルイソシアネート、又は３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートであり、
前記段階的な濃度勾配溶出手段が、有機溶媒濃度が段階的に上昇するように有機溶媒の割合を少なくとも２回変化させて最高濃度に達した後に、有機溶媒濃度が低下するように有機溶媒の割合を少なくとも１回変化させ、その後に前記アミノ官能性化合物誘導体のうち少なくとも１つが溶出されるものであり、
前記液体クロマトグラフィーによる溶出工程は、ヒスチジン誘導体、アスパラギン酸誘導体、アルギニン誘導体、ヒドロキシプロリン誘導体、グルタミン酸誘導体、アルギニノコハク酸誘導体、システインスルフィン酸誘導体、システイン酸誘導体、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸誘導体の中で最も溶出時間の短いアミノ官能性化合物誘導体とトリプトファン誘導体、リジン誘導体、フェニルアラニン誘導体、１，５−ジアミノペンタン誘導体、ホモロイシン誘導体、トリプタミン誘導体、ホモランチオニン誘導体、チラミン誘導体、システアミン誘導体、プトレシン誘導体、シスタミン誘導体及び２−フェニルエチルアミン誘導体の中で最も溶出時間の長い該誘導体との溶出時間の差が３〜１０分の間にあり、
前記液体クロマトグラフィーは、分離カラムが逆相カラムであり、移動相がギ酸、酢酸、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムの水溶液でｐＨを２．５〜７．５に調整した溶液から選択され、移動相に用いられる有機溶媒がアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びこれらと水の混合溶液から選択され、
前記質量分析法による検出工程は、以下の（ａ）群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体、及び（ｂ）〜（ｉ）の少なくとも１つの群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出する
ことを特徴とするアミノ官能性化合物の分析方法。
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−アミノ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
- 前記アミノ官能性化合物誘導体が、フェニルカルバミルアミノ官能性化合物、３−ピリジルカルバミルアミノ官能性化合物、又はｐ−トリメチルアンモニウムアニリルカルバミルアミノ官能性化合物である請求項１に記載の方法。
- 前記アミノ官能性化合物が、アスパラギン、アスパラギン酸、Ｏ−アセチルセリン、Ｎα−アセチルリジン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｓ−アミノエチルシステイン、ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、α−アミノアジピン酸、４−アミノ安息香酸、α−アミノイソ酪酸、β−アミノイソ酪酸、５−アミノ吉草酸、α−アミノピメリン酸、α−アミノ−ｎ−酪酸、β−アミノ−ｎ−酪酸、γ−アミノ−ｎ−酪酸、β−アラニン、アラニン、アルギニノコハク酸、アルギニン、アンセリン、アンスラニル酸、イソロイシン、エタノールアミン、エチオニン、エピネフリン、オルニチン、ガラクトサミン、カルノシン、キヌレニン、グリシン、グルタチオン還元型、グルタチオン酸化型、グルタミン、グルタミン酸、サッカロピン、ザルコシン、β−シアノアラニン、α，ε−ジアミノピメリン酸、１，５−ジアミノペンタン、α，γ−ジアミノ酪酸、ジエンコル酸、シスタチオニン、シスタミン、シスチン、システアミン、システイン、システイン酸、システインスルフィン酸、シトルリン、ジヒドロキシフェニルアラニン、ジメチルアミン、スレオニン、セリン、タウリン、チラミン、チロシン、テアニン、トリプタミン、トリプトファン、Ｎε，Ｎε，Ｎε−トリメチルリジン、ノルエピネフリン、ノルバリン、ノルロイシン、バリン、ヒスタミン、ヒスチジノール、ヒスチジン、β−ヒドロキシアスパラギン酸、３−ヒドロキシアンスラニル酸、３−ヒドロキシキヌレニン、ヒドロキシチラミン、５−ヒドロキシトリプタミン、５−ヒドロキシトリプトファン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、ピペコリン酸、ヒポタウリン、フェニルアラニン、２−フェニルエチルアミン、フェニルグリシン、プトレシン、プロリン、プロリンアミド、Ｓ−ベンジルシステイン、Ｏ−ホスホエタノールアミン、ホモアルギニン、ホモカルノシン、ホモシスチン、ホモシステイン、ホモシトルリン、ホモセリン、ホモランチオニン、ホモロイシン、メチオニン、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、β−Ｎ−メチルアミノアラニン、メチルアミン、１−メチルヒスタミン、１−メチルヒスチジン、３−メチルヒスチジン、モノメチルエタノールアミン、ランチオニン、リジン、及びロイシンの少なくとも１種である請求項１又は２に記載の方法。
- アミノ官能性化合物の分析装置であって、
試料中のアミノ官能性化合物と誘導体化試薬とを反応させて下記一般式（ＩＩ）で示されるアミノ官能性化合物誘導体を生成させる反応部と、
前記アミノ官能性化合物誘導体を溶出するクロマトグラフ部と、
前記クロマトグラフ部からの溶出液に含まれるアミノ官能性化合物誘導体を検出する質量分析部とを備え、
前記誘導体化試薬がｐ−トリメチルアンモニウムアニリル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートアイオダイオド、フェニルイソシアネート、又は３−アミノピリジル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルカルバメートであり、
前記クロマトグラフ部が、分離カラム及び当該カラムに段階的な濃度勾配を有する溶出液を供給する送液系を備え、前記分離カラムが逆相カラムであり、
前記クロマトグラフ部は、移動相がギ酸、酢酸、ギ酸アンモニウム、酢酸アンモニウムの水溶液でｐＨを２．５〜７．５に調整した溶液から選択され、移動相に用いられる有機溶媒がアセトニトリル、メタノール、エタノール、及びこれらと水の混合溶液から選択され、有機溶媒濃度が段階的に上昇するように有機溶媒の割合を少なくとも２回変化させて最高濃度に達した後に、有機溶媒濃度が低下するように有機溶媒の割合を少なくとも１回変化させ、その後に前記アミノ官能性化合物誘導体のうち少なくとも１つが溶出されるように設定され、
前記クロマトグラフ部は、ヒスチジン誘導体、アスパラギン酸誘導体、アルギニン誘導体、ヒドロキシプロリン誘導体、グルタミン酸誘導体、アルギニノコハク酸誘導体、システインスルフィン酸誘導体、システイン酸誘導体、及びβ−ヒドロキシアスパラギン酸誘導体の中で最も溶出時間の短いアミノ官能性化合物誘導体とトリプトファン誘導体、リジン誘導体、フェニルアラニン誘導体、１，５−ジアミノペンタン誘導体、ホモロイシン誘導体、トリプタミン誘導体、ホモランチオニン誘導体、チラミン誘導体、システアミン誘導体、プトレシン誘導体、シスタミン誘導体及び２−フェニルエチルアミン誘導体の中で最も溶出時間の長い該誘導体との溶出時間の差が３〜１０分の間に設定され、
前記質量分析部が、以下の（ａ）群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体、及び（ｂ）〜（ｉ）の少なくとも１つの群より選択される２以上のアミノ官能性化合物誘導体のそれぞれを分離して検出する
ことを特徴とする分析装置。
（ａ）ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、ロイシン誘導体、イソロイシン誘導体、及びノルロイシン誘導体
（ｂ）ザルコシン誘導体、β−アラニン誘導体、及びアラニン誘導体
（ｃ）γ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、β−アミノイソ酪酸誘導体、α−アミノ−ｎ−酪酸誘導体、α−アミノイソ酪酸誘導体、及びβ−アミノ−ｎ−酪酸誘導体
（ｄ）１−メチルヒスチジン誘導体、及び３−メチルヒルチジン誘導体
（ｅ）ホモセリン誘導体、及びスレオニン誘導体
（ｆ）５−アミノ吉草酸誘導体、バリン誘導体、及びノルバリン誘導体
（ｇ）４−アミノ安息香酸誘導体、アンスラニル酸誘導体
（ｈ）グルタミン酸誘導体、Ｏ−アセチルセリン誘導体
（ｉ）アンセリン誘導体、ホモカルノシン誘導体
- 前記アミノ官能性化合物が、アスパラギン、アスパラギン酸、Ｏ−アセチルセリン、Ｎα−アセチルリジン、Ｓ−アデノシルホモシステイン、Ｓ−アミノエチルシステイン、ε−アミノ−ｎ−カプロン酸、α−アミノアジピン酸、４−アミノ安息香酸、α−アミノイソ酪酸、β−アミノイソ酪酸、５−アミノ吉草酸、α−アミノピメリン酸、α−アミノ−ｎ−酪酸、β−アミノ−ｎ−酪酸、γ−アミノ−ｎ−酪酸、β−アラニン、アラニン、アルギニノコハク酸、アルギニン、アンセリン、アンスラニル酸、イソロイシン、エタノールアミン、エチオニン、エピネフリン、オルニチン、ガラクトサミン、カルノシン、キヌレニン、グリシン、グルタチオン還元型、グルタチオン酸化型、グルタミン、グルタミン酸、サッカロピン、ザルコシン、β−シアノアラニン、α，ε−ジアミノピメリン酸、１，５−ジアミノペンタン、α，γ−ジアミノ酪酸、ジエンコル酸、シスタチオニン、シスタミン、シスチン、システアミン、システイン、システイン酸、システインスルフィン酸、シトルリン、ジヒドロキシフェニルアラニン、ジメチルアミン、スレオニン、セリン、タウリン、チラミン、チロシン、テアニン、トリプタミン、トリプトファン、Ｎε，Ｎε，Ｎε−トリメチルリジン、ノルエピネフリン、ノルバリン、ノルロイシン、バリン、ヒスタミン、ヒスチジノール、ヒスチジン、β−ヒドロキシアスパラギン酸、３−ヒドロキシアンスラニル酸、３−ヒドロキシキヌレニン、ヒドロキシチラミン、５−ヒドロキシトリプタミン、５−ヒドロキシトリプトファン、ヒドロキシプロリン、ヒドロキシリジン、ピペコリン酸、ヒポタウリン、フェニルアラニン、２−フェニルエチルアミン、フェニルグリシン、プトレシン、プロリン、プロリンアミド、Ｓ−ベンジルシステイン、Ｏ−ホスホエタノールアミン、ホモアルギニン、ホモカルノシン、ホモシスチン、ホモシステイン、ホモシトルリン、ホモセリン、ホモランチオニン、ホモロイシン、メチオニン、メチオニンスルホキシド、メチオニンスルホン、β−Ｎ−メチルアミノアラニン、メチルアミン、１−メチルヒスタミン、１−メチルヒスチジン、３−メチルヒスチジン、モノメチルエタノールアミン、ランチオニン、リジン、及びロイシンの少なくとも１種である請求項４に記載の分析装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2006513925A JP5030586B2 (ja) | 2004-05-26 | 2005-05-26 | アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2004156714 | 2004-05-26 | ||
| JP2004156714 | 2004-05-26 | ||
| JP2006513925A JP5030586B2 (ja) | 2004-05-26 | 2005-05-26 | アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 |
| PCT/JP2005/009618 WO2005116629A1 (ja) | 2004-05-26 | 2005-05-26 | アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPWO2005116629A1 JPWO2005116629A1 (ja) | 2008-04-03 |
| JP5030586B2 true JP5030586B2 (ja) | 2012-09-19 |
Family
ID=35450995
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2006513925A Active JP5030586B2 (ja) | 2004-05-26 | 2005-05-26 | アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7494815B2 (ja) |
| EP (1) | EP1750126B1 (ja) |
| JP (1) | JP5030586B2 (ja) |
| WO (1) | WO2005116629A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108627605A (zh) * | 2018-05-13 | 2018-10-09 | 桂林理工大学 | 一种发酵肉制品中酪胺含量的检测方法 |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1475632B1 (en) * | 2002-02-14 | 2013-05-22 | Ajinomoto Co., Inc. | Method of analyzing aminofunctional compound and analytical reagent |
| EP1750126B1 (en) | 2004-05-26 | 2015-09-16 | Ajinomoto Co., Inc. | Method and apparatus for analyzing aminofunctional compound |
| US8969089B2 (en) | 2004-10-12 | 2015-03-03 | Quest Diagnostics Investments, Inc. | Analysis of amino acids in body fluid by liquid chromatography-mass spectrometry |
| JP2007163423A (ja) * | 2005-12-16 | 2007-06-28 | Ajinomoto Co Inc | 質量分析計によるアミノ酸分析方法 |
| CN100376894C (zh) * | 2006-01-24 | 2008-03-26 | 李振国 | 一种地龙指纹图谱的建立方法和地龙药材的鉴别方法 |
| JP4907334B2 (ja) * | 2006-03-15 | 2012-03-28 | 公益財団法人野口研究所 | 微量質量分析法 |
| CN101796408B (zh) * | 2007-06-29 | 2014-05-07 | 奎斯特诊断投资公司 | 用液相层析-质谱法分析体液内的氨基酸 |
| JPWO2009054350A1 (ja) | 2007-10-25 | 2011-03-03 | 味の素株式会社 | 耐糖能異常の評価方法、耐糖能異常評価装置、耐糖能異常評価方法、耐糖能異常評価システム、耐糖能異常評価プログラムおよび記録媒体、ならびに耐糖能異常の予防・改善物質の探索方法 |
| JP2011504596A (ja) * | 2007-11-26 | 2011-02-10 | ウオーターズ・テクノロジーズ・コーポレイシヨン | サンプル中の分析物を定量測定する際に使用するための内部標準および方法 |
| CA2777112A1 (en) * | 2009-10-30 | 2011-05-05 | Xellia Pharmaceuticals Aps | Method for purification of colistin and purified colistin components |
| CN106226527B (zh) * | 2011-07-21 | 2018-05-04 | 和光纯药工业株式会社 | 血浆中氨基酸分析用内标液、内标物质及血浆中氨基酸的定量方法 |
| US11352325B2 (en) | 2011-09-28 | 2022-06-07 | Waters Technologies Corporation | Rapid fluorescence tagging of glycans and other biomolecules with enhanced MS signals |
| US10436790B2 (en) | 2011-09-28 | 2019-10-08 | Waters Technologies Corporation | Rapid fluorescence tagging of glycans and other biomolecules with enhanced MS signals |
| US10416166B2 (en) | 2011-09-28 | 2019-09-17 | Waters Technologies Corporation | Rapid fluorescence tagging of glycans and other biomolecules with enhanced MS signals |
| EP2783388A4 (en) | 2011-11-23 | 2015-12-09 | Quest Diagnostics Invest Inc | DETECTION OF KISSPEPTIN-54 BY TANDEM MASS SPECTROMETRY |
| CN102680599A (zh) * | 2012-05-11 | 2012-09-19 | 上海特敏生物医药科技有限公司 | 尿肌氨酸及肌酐测定试剂盒 |
| CN102662013A (zh) * | 2012-05-18 | 2012-09-12 | 上海市徐汇区中心医院 | 一种尿样中肌氨酸的定量检测方法 |
| CN102707011B (zh) * | 2012-07-02 | 2014-03-26 | 涂瑶生 | 冬瓜仁配方颗粒的薄层色谱鉴别方法 |
| CN103869023B (zh) * | 2014-04-03 | 2015-06-03 | 郑州新威营养技术有限公司 | 一种测定蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的方法 |
| CN103926338B (zh) * | 2014-04-28 | 2016-03-02 | 张家港威胜生物医药有限公司 | 一种测定色胺含量的高效液相色谱方法 |
| EP3213056B1 (en) | 2014-10-30 | 2020-08-12 | Waters Technologies Corporation | Methods for the rapid preparation of labeled glycosylamines and for the analysis of glycosylated biomolecules producing the same |
| CN115536714A (zh) | 2014-11-13 | 2022-12-30 | 沃特世科技公司 | 快速标记的n-聚糖的液相色谱校准方法 |
| CN104678044B (zh) * | 2015-03-12 | 2016-03-30 | 安徽农业大学 | 利用反相高效液相色谱检测茶叶中游离氨基酸的方法 |
| CN105181859A (zh) * | 2015-10-12 | 2015-12-23 | 南京天翔医药科技有限公司 | 对乙酰氨基酚注射液中盐酸半胱氨酸及降解产物胱氨酸的测定方法 |
| WO2017115841A1 (ja) | 2015-12-29 | 2017-07-06 | 株式会社アイスティサイエンス | 濃度の大きく異なる複数成分を含有する試料の分析前処理方法 |
| CN109154604B (zh) | 2016-04-24 | 2023-07-21 | 沃特世科技公司 | 用于对用两亲强碱性部分改性的聚糖进行分析的带电表面反相色谱材料方法 |
| EP4234062A3 (en) * | 2016-06-21 | 2023-10-25 | Waters Technologies Corporation | Methods of electrospray ionization of glycans modified with amphipathic, strongly basic moieties |
| EP3472132A4 (en) | 2016-06-21 | 2020-01-15 | Waters Technologies Corporation | FLUORESCENCE LABELING OF GLYCANS AND OTHER BIOMOLECULES BY REDUCING AMINATION FOR IMPROVED MASS SPECTROMETRY SIGNALS |
| CN109690297A (zh) | 2016-07-01 | 2019-04-26 | 沃特世科技公司 | 使用分子量截留过滤和过滤器上去糖基化从复杂基质快速制备标记的葡基胺的方法 |
| CN106053656B (zh) * | 2016-07-01 | 2019-08-16 | 东北制药集团股份有限公司 | 一种采用高效液相色谱检测苯乙胺含量的方法 |
| CN106198661A (zh) * | 2016-07-29 | 2016-12-07 | 仲恺农业工程学院 | 一种苯乙胺的电化学测定方法 |
| EP3519832B1 (en) | 2016-10-03 | 2024-04-03 | Waters Technologies Corporation | Labeled glycan amino acid complexes useful in lc-ms analysis and methods of making the same |
| KR102427923B1 (ko) * | 2016-10-04 | 2022-08-02 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 대장암의 평가 방법, 평가 장치, 평가 프로그램, 평가 시스템, 및 단말 장치 |
| JPWO2018066620A1 (ja) * | 2016-10-04 | 2019-07-18 | 味の素株式会社 | 膵臓癌の評価方法、評価装置、評価プログラム、評価システム、及び端末装置 |
| CN107271578A (zh) * | 2017-03-23 | 2017-10-20 | 浙江奇彩环境科技股份有限公司 | 用于测定样品中胺类物质含量的方法 |
| CN108931598A (zh) * | 2017-05-27 | 2018-12-04 | 广州可力质谱医疗器械有限公司 | 基于lc-ms/ms的血清中40种氨基化合物的检测试剂盒 |
| CN107449841B (zh) * | 2017-07-20 | 2020-07-17 | 上海药明康德新药开发有限公司 | 一种基于衍生化测定单胺类神经递质的检测方法 |
| CN107607638B (zh) * | 2017-08-22 | 2020-06-12 | 杭州谱景柏泰科技有限公司 | 芳香族化合物的检测方法及试剂盒 |
| CN107907618A (zh) * | 2017-10-24 | 2018-04-13 | 重庆医科大学 | 大鼠血浆中高半胱氨酸和半胱氨酸的检测方法 |
| WO2019130920A1 (ja) | 2017-12-28 | 2019-07-04 | 味の素株式会社 | 給餌管理システムおよび給餌管理方法 |
| CN107991415B (zh) * | 2018-01-17 | 2021-04-13 | 南京医科大学康达学院 | 用液相色谱法同时分离测定复方氨基酸注射液18aa中焦谷氨酸和蛋氨酸亚砜杂质的方法 |
| CN108645947B (zh) * | 2018-05-13 | 2021-01-05 | 桂林理工大学 | 一种酱油中酪胺含量的检测方法 |
| CN108680690B (zh) * | 2018-05-13 | 2021-01-05 | 桂林理工大学 | 一种发酵酱类中酪胺含量的检测方法 |
| JP7424297B2 (ja) | 2018-09-26 | 2024-01-30 | 味の素株式会社 | 取得方法、算出方法、評価装置、算出装置、評価プログラム、算出プログラム、記録媒体、評価システム |
| CN109470796A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-03-15 | 江苏国泰超威新材料有限公司 | 一种铝电解电容器电解液中二元羧酸含量的检测方法 |
| CN110208404A (zh) * | 2019-05-30 | 2019-09-06 | 江苏恒生检测有限公司 | 一种丙硫菌唑中杂质的定性分析方法 |
| CN110749679B (zh) * | 2019-11-08 | 2022-11-01 | 华熙生物科技股份有限公司 | 一种三甲基吡嗪残留的检测方法 |
| CN111879860B (zh) * | 2019-11-27 | 2021-09-28 | 江南大学 | 一种精确检测发酵液中戊二胺含量的方法 |
| CN111044642A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-21 | 贵州医科大学 | 一种同时测定五种神经递质含量的方法 |
| CN111505151B (zh) * | 2020-04-30 | 2022-09-02 | 宜昌三峡普诺丁生物制药有限公司 | 高效液相色谱法测定l-缬氨酸原料中其他氨基酸的方法 |
| CN112326817B (zh) * | 2020-10-19 | 2022-04-22 | 秦皇岛海关技术中心 | 一种鉴别茴香蜂蜜的方法 |
| CN113341023B (zh) * | 2021-06-30 | 2022-12-23 | 大连医科大学附属第一医院 | 一种基于液质联用的血清二氨基庚二酸的检测试剂盒及检测方法与应用 |
| CN117074578B (zh) * | 2023-10-16 | 2024-02-09 | 瀚盟测试科技（天津）有限公司 | 一种2-（甲氨基）-乙醇的lc-ms/ms定量检测方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5855754A (ja) * | 1981-09-30 | 1983-04-02 | Hitachi Ltd | アミノ酸分析方法 |
| JPS6444848A (en) * | 1987-08-14 | 1989-02-17 | Hitachi Ltd | Analysis of amino acid |
| WO2003069328A1 (fr) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Procede d'analyse aminofonctionnelle et reactif analytique |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH048031Y2 (ja) | 1987-09-15 | 1992-03-02 | ||
| US5296599A (en) * | 1991-09-19 | 1994-03-22 | Millipore Corporation | Activated carbamates compounds |
| JP3346965B2 (ja) | 1995-09-14 | 2002-11-18 | 株式会社日立製作所 | アミノ酸分析装置 |
| JP3345401B2 (ja) * | 1998-08-25 | 2002-11-18 | ユニバーシティ オブ ワシントン | 複合した混合物中のタンパク質またはタンパク質機能の迅速定量分析 |
| JP3508710B2 (ja) | 2000-09-01 | 2004-03-22 | 株式会社日立製作所 | アミノ酸分析方法および装置 |
| JP3464665B2 (ja) | 2002-01-07 | 2003-11-10 | 株式会社日立製作所 | アミノ酸分析装置 |
| JP4129511B2 (ja) * | 2002-09-26 | 2008-08-06 | 国立大学法人 東京医科歯科大学 | 高速液体クロマトグラフィーによるアミノ酸の分析方法 |
| EP1750126B1 (en) | 2004-05-26 | 2015-09-16 | Ajinomoto Co., Inc. | Method and apparatus for analyzing aminofunctional compound |
-
2005
- 2005-05-26 EP EP05743616.4A patent/EP1750126B1/en active Active
- 2005-05-26 WO PCT/JP2005/009618 patent/WO2005116629A1/ja not_active Application Discontinuation
- 2005-05-26 JP JP2006513925A patent/JP5030586B2/ja active Active
-
2006
- 2006-11-27 US US11/563,324 patent/US7494815B2/en active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5855754A (ja) * | 1981-09-30 | 1983-04-02 | Hitachi Ltd | アミノ酸分析方法 |
| JPS6444848A (en) * | 1987-08-14 | 1989-02-17 | Hitachi Ltd | Analysis of amino acid |
| WO2003069328A1 (fr) * | 2002-02-14 | 2003-08-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Procede d'analyse aminofonctionnelle et reactif analytique |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108627605A (zh) * | 2018-05-13 | 2018-10-09 | 桂林理工大学 | 一种发酵肉制品中酪胺含量的检测方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPWO2005116629A1 (ja) | 2008-04-03 |
| WO2005116629A1 (ja) | 2005-12-08 |
| EP1750126B1 (en) | 2015-09-16 |
| EP1750126A4 (en) | 2010-04-21 |
| US20070269899A1 (en) | 2007-11-22 |
| US7494815B2 (en) | 2009-02-24 |
| EP1750126A1 (en) | 2007-02-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5030586B2 (ja) | アミノ官能性化合物の分析方法及び装置 | |
| JP7069255B2 (ja) | 液体クロマトグラフィー質量分析による体液中のアミノ酸分析 | |
| Armstrong et al. | Analysis of 25 underivatized amino acids in human plasma using ion‐pairing reversed‐phase liquid chromatography/time‐of‐flight mass spectrometry | |
| Tsikas et al. | Mass spectrometry and 3‐nitrotyrosine: strategies, controversies, and our current perspective | |
| US8901484B2 (en) | Quantification of impurities for release testing of peptide products | |
| US11333669B2 (en) | Neutron encoded mass tags for analyte quantification | |
| Shimbo et al. | Precolumn derivatization reagents for high‐speed analysis of amines and amino acids in biological fluid using liquid chromatography/electrospray ionization tandem mass spectrometry | |
| AU2013254728A1 (en) | Quantification of impurities for release testing of peptide products | |
| US7700364B2 (en) | Analysis of amino acids in body fluid by liquid chromatography-mass spectrometry | |
| JP2018163155A (ja) | アミノ酸の分析方法 | |
| JP5276993B2 (ja) | 低分子量ペプチドの高感度定量方法 | |
| Meesters | Bioanalytical LC separation techniques for quantitative analysis of free amino acids in human plasma | |
| Tang et al. | Quantification of amino acids in rat urine by solid-phase extraction and liquid chromatography/electrospray tandem mass spectrometry: application to radiation injury rat model | |
| Prokai et al. | Integration of mass spectrometry into early‐phase discovery and development of central nervous system agents | |
| JP6359365B2 (ja) | アミノ酸のアミノ基及びカルボキシル基を対象としたプレカラム誘導体化ｌｃ−ｍｓ分析法 | |
| Shaheen | Development and Validation of Organic Derivatization Reagents for Chromatographic Analysis | |
| Rubio | Mass Spectrometric Strategies and Applications for High-Efficiency Global Metabolomics | |
| Guo | Development of isotope labeling liquid chromatography mass spectrometry for metabolome analysis | |
| EP2841950A1 (en) | Quantification of impurities for release testing of peptide products |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20080116 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20101130 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20110222 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20110523 |
|
| A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20110629 |
|
| A912 | Re-examination (zenchi) completed and case transferred to appeal board |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A912 Effective date: 20110930 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120522 |
|
| A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
| A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120626 |
|
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5030586 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150706 Year of fee payment: 3 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150706 Year of fee payment: 3 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |