CN110057933B - 一种多种维生素矿物质复方制剂中维生素k2的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明具体涉及一种多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测方法及其应用。该方法首先利用有机溶剂对多种维生素矿物质组合物中的维生素K2进行超声提取，再进行液相检测。该方法具有精确度高、重复性好，而且简单易操作的特点。目前尚无适用于多种维生素矿物质组合物中维生素K2的国标检验方法，已经公开的相关专利、文献提供的方法都存在一定缺陷，并不能真正满足多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测，这就为维矿类功能食品、药品的开发及质量控制带来了障碍与不便。基于以上原因，本发明提供了一种多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测方法，填补了该项空白，为维矿类功能食品、药品的开发及质量控制提供了保障。

Description

一种多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测方法
(一)技术领域
本发明涉及一种多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测方法，属于分析化学领域。
(二)背景技术
维生素K2是一种脂溶性维生素，具有叶绿醌生物活性的萘醌基团的衍生物，是人体中不可缺少的重要维生素之一，是维生素K唯一具有生物活性的形式，多用于加速凝血、维持凝血时间、治疗维生素K缺乏引起的出血症。
维生素K2遇光、遇碱不稳定，易分解，但是耐酸、耐热。根据这一特性，目前的维生素K2都是通过微囊包埋技术处理，增加其稳定性。包埋的外壳为高分子材料，而维生素K2为脂溶性维生素，所以检测时，首先要用溶剂将微囊外壳溶解，然后再用有机溶剂进行提取，整个过程要避免光、碱对维生素K2的降解。目前单一原料中维生素K2的检测方法，如汤臣倍健的发明专利《一种从维生素K2包埋剂中提取维生素K2的方法及检测维生素K2的方法》(申请号201510671369.X)；卫计委公告2016 年第8号维生素K2原料的检测方法；期刊报道的维生素K2测定(孙家慧.高效液相色谱法快速测定维生素K2[J].天津化工,2011,25(6):55-56.)。以上方法只适用于原料中维生素K2的检测，并不适用于复方制剂，特别是多种维生素矿物质复方制剂。
复方制剂中维生素K2的检测方法研究的较少，公开的有威海百合生物的发明专利《一种维生素K2含量的检测方法》(申请号201711066601.2)；江苏艾兰得营养食品有限公司的发明专利《一种维生素K2(MK-7)含量的测定方法》(申请号 201410755707.3)。但上述专利提到的方法只是一种简单复方制剂中维生素K2的检测，并不适用于复杂配方，特别是多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测；其前处理只是普通定容、恒温水浴振荡处理，对于钙等不溶性成分含量较高的样品来说，难以维生素K2提取完全，并保证提取液的准确定量；另外流动相较为复杂。
此外，还有济南英盛生物技术有限公司的发明专利《一种同时检测血液样品中多种脂溶性维生素的方法》(申请号201510581956.X)，只是适用于血液样品中脂溶性维生素的检测，并不适用于多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测。
综上所述，目前尚无适用于多种维生素矿物质组合物中维生素K2的国标检测方法，已经公开的相关专利、论文提供的方法都存在一定缺陷，并不能真正满足多种维生素矿物质组合物(特别是钙、镁等不溶性成分含量较高的组合物)中维生素K2的检测，这就为维矿类功能食品、药品的开发及质量控制带来了障碍与不便。基于以上原因，本发明提供了一种多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检验方法，填补了该项空白，为维矿类功能食品、药品的开发及质量控制提供了保障。
(三)发明内容
针对目前维生素K2检测方法现状及存在的空白，本发明提供一种多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测方法。
本发明采用的技术方案为：
本发明提供一种多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测方法，所述方法按如下步骤进行：
(1)将多种维生素矿物质复方制剂粉碎(优选用中药粉碎机粉碎)至40～ 80目，作为试样；
(2)取试样于棕色容量瓶中，加入HCl浓度为1～5mol/L(优选3mol/L)的盐酸-异丙醇，摇匀(不需要定容)，常温(25～30℃)下置于频率35～50Hz、功率 0.5～1.5W的条件下超声振荡提取10～30min，超声结束后，离心(优选于常温、4000～ 6000r/min条件下，离心10～30min，更优选5000r/min条件下离心10min)，取上清液，过滤(优选用0.45μm的滤膜)，滤液用高效液相色谱测定维生素K2峰面积；用 HCl浓度为1～5mol/L(优选3mol/L)的盐酸-异丙醇配制浓度为20μg/mL的维生素 K2标准品溶液，同样条件下测定维生素K2峰面积；根据公式(1)计算试样中维生素K2含量；所述盐酸-异丙醇体积用量以试样重量计为1～5ml/g；
Figure BDA0002045246620000021
公式(1)中：
A—试样中维生素K2(七烯甲萘醌)相对峰面积；
A0—标准品中维生素K2(七烯甲萘醌)相对峰面积；
c0—进样标准品溶液中维生素K2(七烯甲萘醌)的浓度，μg/mL；
V—供试样提取所用的盐酸-异丙醇溶液的体积，mL；
m—试样的质量，g。
进一步，步骤(1)多种维生素矿物质复方制剂(维生素K2含量理论值40μg/g) 营养素组成为：钙130mg/g、镁45mg/g、锰1mg/g、铁7mg/g、锌4mg/g、硒32mg/g、铜0.17mg/g、维生素A 125μg/g、维生素D3 4μg/g、维生素E 12mg/g、维生素K2 40μg/g、维生素B1 0.4mg/g、维生素B2 0.4mg/g、维生素B6 0.4mg/g、维生素B12 0.5μg/g、烟酰胺4mg/g、叶酸69μg/g、生物素25μg/g、胆碱60mg/g、维生素C 25mg/g、泛酸2mg/g。
进一步，步骤(2)超声条件为：频率45Hz、功率1W的条件下超声振荡提取 30min。
进一步，步骤(2)高效液相色谱检测条件为：C18ODS柱(150*4.6，5μm)，柱温40～55℃，流动相为甲醇，流速0.5～1.5mL/min，检测波长240～280nm，进样量10μL。
进一步，优选步骤(2)高效液相色谱检测条件为：C18ODS柱(150*4.6，5μm)，柱温50℃，流动相为甲醇，流速1mL/min，检测波长254nm，进样量10μL。
与现有技术相比，本发明有益效果主要体现在：
本发明提供了一种多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测方法，该方法填补了维矿类复方制剂中维生素K2检测方法的空白，其精密度、重复性、稳定性、回收率均优于现有方法。方法学验证结果显示，精密度试验RSD为0.004％；重复性试验RSD为0.004％；稳定性试验RSD为0.0083％；回收率RSD为0.163％，均符合 GB/T 27404《实验室质量控制规范》的要求。另外，方法的定性检出限为0.50153mg/kg，定量限为0.83225mg/kg。以上数据表明，本发明提供的维生素K2的测定科学有效，能满足多种维生素矿物质类功能食品、药品的产品开发及质量控制提供到保障。
(四)附图说明
图1、精密度试验液相图谱，A为第1次测试，B为第2次测试，C为第3次测试，D为第4次测试，E为第5次测试，F为第6次测试。
图2、重复性试验液相图谱，A为第1次测试，B为第2次测试，C为第3次测试，D为第4次测试，E为第5次测试，F为第6次测试。
图3、稳定性试验液相图谱，A为0h，B为1h，C为2h，D为4h，E为8h，F 为12h。
图4、空白试验液相图谱，A加样，B不加样。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
本发明实施例所用多种维生素矿物质复方制剂(维生素K2含量理论值40μg/g) 营养素组成：钙130mg/g、镁45mg/g、锰1mg/g、铁7mg/g、锌4mg/g、硒32mg/g、铜0.17mg/g、维生素A 125μg/g、维生素D3 4μg/g、维生素E 12mg/g、维生素K2 40μg/g、维生素B1 0.4mg/g、维生素B2 0.4mg/g、维生素B6 0.4mg/g、维生素B12 0.5μg/g、烟酰胺4mg/g、叶酸69μg/g、生物素25μg/g、胆碱60mg/g、维生素C 25mg/g、泛酸2mg/g。本发明常温是指25～30℃。
实施例1：
(1)取50片(1g/片)多种维生素矿物质复方制剂，用中药粉碎机粉碎至40 目，作为试样。
(2)精确称取25g试样于200mL棕色容量瓶中，精确量取HCl浓度为1mol/L 的盐酸-异丙醇40mL，摇匀(不需要定容)，置于频率35Hz、功率0.5W的条件下超声振荡10min。超声结束后，于常温、5000r/min条件下，离心10min，取上清液。上清液用0.45μm的滤膜过滤，滤液用高效液相色谱测定试样中维生素K2(七烯甲萘醌) 相对峰面积A，根据公式(1)计算试样中维生素K2含量c，以维生素K2的保留时间定性，峰面积外标法定量，条件为：C18ODS柱(150*4.6，5μm)，柱温40℃，流动相为甲醇，流速0.5mL/min，检测波长240nm，进样量10μL。
(3)用HCl浓度为1mol/L的盐酸-异丙醇，配置浓度为20μg/mL的维生素K2标准品溶液，同步骤(2)滤液的检测条件进行高效液相色谱测定标准品溶液中维生素 K2(七烯甲萘醌)相对峰面积A0。
Figure BDA0002045246620000041
公式(1)中：
c—试样中维生素K2的含量c，单位为微克每克(μg/g)；
A—试样中维生素K2(七烯甲萘醌)相对峰面积；
A0—标准品中维生素K2(七烯甲萘醌)相对峰面积；
c0—进样标准品中维生素K2(七烯甲萘醌)的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；
V—供试样提取所用的盐酸-异丙醇的体积，单位为毫升(mL)；
m—试样的质量，单位为克(g)。
(4)样品重复检测6次，结果如表1所示，测定结果平均值与理论值(40μg/g) 相比，其绝对偏差和相对偏差分别为0.0117和0.0292。
表1测定值与理论值的比较
Figure BDA0002045246620000051
实施例2：
(1)取50片(1g/片)多种维生素矿物质复方制剂，用中药粉碎机粉碎至 60目，作为试样。
(2)精确称取25g试样于200mL棕色容量瓶中，精确量取HCl浓度为3mol/L 的盐酸-异丙醇50mL，摇匀(不需要定容)，置于频率45Hz、功率1W的条件下超声振荡20min。超声结束后，于常温、5000r/min条件下，离心10min，取上清液用0.45μm 的滤膜过滤，滤液用高效液相色谱测定试样中维生素K2(七烯甲萘醌)相对峰面积，采用实施例1公式(1)计算维生素K2的含量c，以保留时间定性，峰面积外标法定量，条件为：C18ODS柱(150*4.6，5μm)，柱温50℃，流动相为甲醇，流速1mL/min，检测波长254nm，进样量10μL。
(3)用HCl浓度为3mol/L盐酸-异丙醇，配置浓度为20μg/mL的维生素K2标准品溶液，其他操作同实施例1。
(4)样品重复检测6次，结果如表2所示，测定结果平均值与理论值(40μg/g) 相比，其绝对偏差和相对偏差分别为0.0084和0.0210。
表2测定值与理论值的比较
Figure BDA0002045246620000052
实施例3：
(1)取50片(1g/片)多种维生素矿物质复方制剂，用中药粉碎机粉碎至80 目，作为试样。
(2)精确称取25g试样于200mL棕色容量瓶中，精确量取HCl浓度为5mol/L 的盐酸-异丙醇60mL，摇匀(不需要定容)，置于频率50Hz、功率1.5W的条件下超声振荡30min。超声结束后，于常温、6000r/min条件下，离心30min，取上清液用0.45μm 的滤膜过滤，滤液用高效液相色谱测定试样中维生素K2(七烯甲萘醌)相对峰面积，采用实施例1公式(1)计算维生素K2的含量c，以保留时间定性，峰面积外标法定量，条件为：C18ODS柱(150*4.6，5μm)，柱温55℃，流动相为甲醇，流速1.5mL/min，检测波长280nm，进样量10μL。
(3)用HCl浓度为5mol/L盐酸-异丙醇，配置浓度为20μg/mL的维生素K2标准品溶液，其他操作同实施例1。
(4)样品重复检测6次，结果如表3所示，测定结果平均值与理论值(40μg/g) 相比，其绝对偏差和相对偏差分别为0.0098和0.0245。
表3测定值与理论值的比较
Figure BDA0002045246620000061
实施例4
将前处理及标准溶液配制中用的“HCl浓度为3mol/L的盐酸-异丙醇50mL”改为“异丙醇”，其他均同实施例2，进行受试样品中维生素K2的测定。样品重复检测6次，结果如表4所示，测定结果平均值与理论值(40μg/g)相比，其绝对偏差和相对偏差分别为0.2754和1.3676。
表4测定值与理论值的比较
Figure BDA0002045246620000062
实施例5：
将流动相“甲醇”换为“乙腈”，其他均同实施例2，进行受试样品中维生素 K2的测定。样品重复检测6次，结果如表5所示，测定结果平均值与理论值(40μg/g) 相比，其绝对偏差和相对偏差分别为0.5071和1.2598。
表5测定值与理论值的比较
Figure BDA0002045246620000063
实施例6
将色谱柱“C18ODS柱(150*4.6，5μm)”改为“JADE-PAK ODS柱(150*4.6mm，5μm)”，其他均同实施例2，进行受试样品中维生素K2的测定。样品重复检测6次，结果如表6所示，测定结果平均值与理论值(40μg/g)相比，其绝对偏差和相对偏差分别为0.2035和0.5074。
表6测定值与理论值的比较
Figure BDA0002045246620000071
实施例7、方法学验证试验
1、精密度试验
(1)试验方法：精确称取1份试样(同实施例2)，按照实施例2方法及色谱条件，进行维生素K2的检测(6个平行)，计算峰面积的RSD。
(2)试验结果：精密度试验图谱见图1，其峰面积及RSD见表7。
表7精密度试验结果
Figure BDA0002045246620000072
(3)试验结论：维生素K2重复检测6次峰面积的RSD为0.0059％，表明本发明提供的方法具有较好的精密度。
分别按照实施例1和实施例3的试样处理方法及色谱条件进行上述检测，实验结果与上述结果接近，无显著性差异(p＞0.05)。表明本发明提供的多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测方法具有较好的精密度。
2、重复性试验
(1)试验方法：精确称取6份试样(同实施例2)，分别按照实施例2的方法及色谱条件测定峰面积，计算RSD。
(2)试验结果：重复性试验图谱见图2，其峰面积及RSD，见表8。
表8重复性试验结果
Figure BDA0002045246620000073
(3)试验结论：6份样品维生素K2测定峰面积的RSD为0.0040％，表明该方法有较好的重复性，符合GB/T 27404《实验室质量控制规范》的要求(RSD≤5.3％)。
分别按照实施例1和实施例3的样品处理及色谱条件进行上述检测，实验结果与上述结果接近，无显著性差异(p＞0.05)。表明本发明提供的多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测方法具有较好的重复性。
3、稳定性试验
(1)试验方法：将维生素K2标准品溶液(同实施例2)分别在室温下放置0h、1h、 2h、4h、8h、12h后，按照实施例2的色谱条件测定峰面积，计算其RSD。
(2)试验结果：稳定性试验图谱见图3，其峰面积及RSD见表9。
表9稳定性试验结果
Figure BDA0002045246620000081
(3)试验结论：维生素K2标准品溶液分别在室温下放置0h、1h、2h、4h、8h、12h 后，RSD为0.0083％，表明维生素K2标准品溶液在12h以内的稳定性良好。
分别按照实施例1和实施例3的样品处理及色谱条件进行上述检测，实验结果与上述结果接近，无显著性差异(p＞0.05)。表明本发明提供的多种维生素矿物质组合物中维生素K2的检测方法具有较好的稳定性。
4、空白试验
(1)试验方法：不称取样品，其余处理方法及液相条件均按照实施例2的方法进行，与维生素K2标准品溶液对比出峰时间。
(2)试验结果：空白试验图谱见图4，其中A为实施例2加样品的图谱，B是相同条件下不加样品的空白图谱。
(3)试验结论：A所示图谱，试样在维生素K2的出峰时间处有吸收峰。而如B所示的图谱，相同条件下空白试验在维生素K2的出峰时间处无吸收峰，表明空白对测定结果基本无干扰。
分别按照实施例1和实施例3规定的样品处理及色谱条件进行上述检测，实验结果与上述结果接近，无显著性差异(p＞0.05)。表明利用本发明提供的方法，在检测多种维生素矿物质组合物中维生素K2的含量时，空白对检测结果基本无干扰。
5、检出限与定量试验
按照实施例2的提供的分析方法进行定性检出限和定量检出限由信噪比(S/N)计算。当信噪比(S/N)为3时，检出限为0.250765μg/mL，得到方法的定性检出限为 0.50153mg/kg。当信噪比(S/N)为10时，定量限为0.416125μg/mL，得到方法的定量限为0.83225mg/kg。
6、回收率试验
(1)试验方法(加标)：精确取25g试样9份(同实施例2，已知维生素K2含量： 40μg/g)，分成3组，各组分别精确加入实施例2中维生素K2标准品溶液(20μg/mL)40μL、 60μL、80μL，按照实施例2试样处理方法及色谱条件进行维生素K2的检测。
(2)实验结果：
表10回收率试验结果
Figure BDA0002045246620000091
注：测得加入量＝加标样品测得量-样品测得量；回收率(％)＝测得加入量/加标量。
(3)试验结论：平均回收率为：100.02％，RSD为0.1630％，符合GB/T 27404《实验室质量控制规范》的要求(回收率90％～110％)。
分别按照实施例1和实施例3规定的样品处理及色谱条件进行上述检测，实验结果与上述结果接近，无显著性差异(p＞0.05)。表明利用本发明提供的方法，在检测多种维生素矿物质组合物中维生素K2的含量时回收率良好，平均回收率为100.02％。
对比例1：
以“专利申请201510671369.X”实施例2提供的方法及色谱条件，进行本发明维生素K2精密度、重复性及稳定性试验，与本发明实施例2提供的方法进行对比。
(1)精密度试验：
以“专利申请201510671369.X”实施例2提供的方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测，重复6次，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的精密度试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表11。
表11对比文件精密度试验结果
Figure BDA0002045246620000101
如表11所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.5266，RSD为0.4201％；而本发明实施例2方法的精密度测定的峰面积平均值为32.45221，其RSD为0.0059％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的测定精密度更高，且RSD更小。
(2)重复性试验
精确称取6份试样(同实施例2)，以“专利申请201510671369.X”实施例2提供的方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的重复性试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表12。
表12对比文件重复性试验结果
Figure BDA0002045246620000102
如表12所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.4204，RSD为0.6448％；而本发明实施例2方法的重复性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的重复性更好，且RSD更小。
(3)稳定性试验
将维生素K2标准品溶液(同实施例2)分别在室温下放置0h、1h、2h、4h、8h、 12h后，分别以“专利申请201510671369.X”实施例2提供的方法及色谱条件，进行维生素K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的稳定性试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表13。
表13对比文件稳定性试验结果
Figure BDA0002045246620000103
如表13所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.4486，RSD为0.1104％；而本发明实施例2方法的稳定性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的稳定性更好，且RSD更小。
对比例2：
以“卫计委公告2016年第8号”提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行维生素K2精密度、重复性及稳定性试验，与本发明实施例2提供的方法进行对比。
(1)精密度试验：
精确称取1份试样(同实施例2)，以“卫计委公告2016年第8号”提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测，重复6次计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的精密度试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表14。
表14对比文件精密度试验结果
Figure BDA0002045246620000111
如表14所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.4532，RSD为 0.10027％；而本发明实施例2方法的精密度测定的峰面积平均值为32.45221，其RSD 为0.0059％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的测定精密度更高，且 RSD更小。
(2)重复性试验
精确称取6份试样(同实施例2)，分别以“卫计委公告2016年第8号”提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的重复性试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表15。
表15对比文件重复性试验结果
Figure BDA0002045246620000112
如表15所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.3710，RSD为1.2052％；而本发明实施例2方法的重复性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的重复性更好，且RSD更小。
(3)稳定性试验
将维生素K2标准品溶液(同实施例2)分别在室温下放置0h、1h、2h、4h、8h、 12h后，分别以“卫计委公告2016年第8号”提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行维生素K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的稳定性试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表16。
表16对比文件稳定性试验结果
Figure BDA0002045246620000121
如表16所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.5198，RSD为1.1639％；而本发明实施例2方法的稳定性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的稳定性更好，且RSD更小。
对比例3：
以“专利申请201711066601.2”实施例2提供的维生素K2检测方法及色谱条件，进行维生素K2精密度、重复性及稳定性试验，与本发明实施例2提供的方法进行对比。
(1)精密度试验：
精确称取1份试样(同实施例2)，“专利申请201711066601.2”实施例2提供的维生素K2检测方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测，重复6次计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的精密度试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表17。
表17对比文件精密度试验结果
Figure BDA0002045246620000122
如表17所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.3839，RSD为0.1216％；而本发明实施例2方法的精密度测定的峰面积平均值为32.45221，其RSD为0.0059％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的测定精密度更高，且RSD更小。
(2)重复性试验
精确称取6份试样(同实施例2)，“专利申请201711066601.2”实施例2提供的维生素K2检测方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的重复性试验结果(参见实施例 4)进行比较，结果见表18。
表18对比文件重复性试验结果
Figure BDA0002045246620000123
Figure BDA0002045246620000131
如表18所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.4528，RSD为0.9684％；而本发明实施例2方法的重复性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的重复性更好，且RSD更小。
(3)稳定性试验
将维生素K2标准品溶液(同实施例2)分别在室温下放置0h、1h、2h、4h、8h、 12h后，分别以“专利申请201711066601.2”实施例2提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行维生素K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2 的稳定性试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表19。
表19对比文件稳定性试验结果
Figure BDA0002045246620000132
如表19所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.4528，RSD为0.9684％；而本发明实施例2方法的稳定性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的稳定性更好，且RSD更小。
对比例4：
以“专利申请201410755707.3”实施例2提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行维生素K2精密度、重复性及稳定性试验，与本发明实施例2提供的方法进行对比。
(1)精密度试验：
精确称取1份试样(同实施例2)，以“专利申请201410755707.3”实施例2提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素 K2的检测，重复6次计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的精密度试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表20。
表20对比文件精密度试验结果
Figure BDA0002045246620000133
如表20所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.5162，RSD为0.9476％；而本发明实施例2方法的精密度测定的峰面积平均值为32.45221，其RSD为0.0059％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的测定精密度更高，且RSD更小。
(2)重复性试验
精确称取6份试样(同实施例2)，以“专利申请201410755707.3”实施例2提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行多种维生素矿物质复方制剂中维生素 K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的重复性试验结果(参见
实施例4)进行比较，结果见表21。
表21对比文件重复性试验结果
Figure BDA0002045246620000141
如表21所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.4393，RSD为1.1918％；而本发明实施例2方法的重复性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的重复性更好，且RSD更小。
(3)稳定性试验
将维生素K2标准品溶液(同实施例2)分别在室温下放置0h、1h、2h、4h、8h、 12h后，以“专利申请201410755707.3”实施例2提供的维生素K2的检测方法及色谱条件，进行维生素K2的检测，计算其峰面积的RSD，并与本发明实施例2的稳定性试验结果(参见实施例4)进行比较，结果见表22。
表22对比文件稳定性试验结果
Figure BDA0002045246620000142
如表22所示，对比文件方法测定的峰面积平均值为32.5862，RSD为1.0218％；而本发明实施例2方法的稳定性测定的峰面积平均值为32.45830，其RSD为0.004％。数据对比可以看出，本发明实施例2提供的方法的稳定性更好，且RSD更小。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明前提下，还可以作出一些相应的改进及拓展应用，这些改进和拓展应用也应该视为发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种多种维生素矿物质复方制剂中维生素K2的检测方法，其特征在于所述方法按如下步骤进行：
（1）将多种维生素矿物质复方制剂粉碎至40～80目，作为试样；
（2）取试样加入HCl浓度为1～5mol/L的盐酸-异丙醇，摇匀，常温下置于频率35～50Hz、功率0.5～1.5W的条件下超声振荡提取10～30min，超声结束后，离心，取上清液，过滤，滤液用高效液相色谱测定维生素K2峰面积；用HCl浓度为1～5mol/L的盐酸-异丙醇配制浓度为20μg/mL的维生素K2标准品溶液，同样条件下测定维生素K2峰面积；根据公式（1）计算试样中维生素K2含量；所述盐酸-异丙醇体积用量以试样重量计为1～5ml/g；
Figure 951092DEST_PATH_IMAGE002
公式（1）
公式（1）中：
A—试样中维生素K2相对峰面积；
A0—标准品中维生素K2相对峰面积；
c0—进样标准品溶液中维生素K2的浓度，μg/mL；
V—供试样提取所用的盐酸-异丙醇溶液的体积，mL；
m—试样的质量，g；
步骤（2）所述 高效液相色谱检测条件为：C18ODS柱，柱温40～55℃，流动相为甲醇，流速0.5～1.5mL/min，检测波长240～280nm，进样量10μL；
步骤（1）所述 多种维生素矿物质复方制剂组成为：钙130mg/g、镁45mg/g、锰1mg/g、铁7mg/g、锌4mg/g、硒32mg/g、铜0.17mg/g、维生素A 125μg/g、维生素D3 4μg/g、维生素E12mg/g、维生素K2 40μg/g、维生素B1 0.4mg/g、维生素B2 0.4mg/g、维生素B6 0.4mg/g、维生素B12 0.5μg/g、烟酰胺4mg/g、叶酸69μg/g、生物素25μg/g、胆碱60mg/g、维生素C 25mg/g、泛酸2mg/g。
2.如权利要求1所述检测方法，其特征在于步骤（2）所述超声条件为：频率45Hz、功率1W的条件下超声振荡提取30min。
3.如权利要求1所述检测方法，其特征在于步骤（2）所述离心条件为：于常温、4000～6000r/min条件下，离心10～30min。
4.如权利要求1所述检测方法，其特征在于步骤（2）所述过滤是用0.45μm滤膜过滤。
5.如权利要求1所述检测方法，其特征在于步骤（2）所述高效液相色谱检测条件为：C18ODS柱，柱温50℃，流动相为甲醇，流速1mL/min，检测波长254nm，进样量10μL。
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