CN111650309A - 一种含脂配方粉中维生素k1的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，属于配方粉检测技术领域。一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，采用高效液相色谱法对含脂配方粉中维生素K1检测，检测前对含脂配方粉进行超声酶解、正己烷定容、滤膜过滤制得待测样；同时将维生素K1标准品作为标准样，进行溶解、正己烷定容、滤膜过滤，制得不同浓度的标准品溶液，进而检测标准品溶液制备标准曲线。该方法针对于本发明的含脂配方粉中的维生素K1进行检测，无需进行皂化、提取步骤，简化了维生素K1检测步骤，准确，灵敏度高同时提高了检测效率。

Description

一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法
技术领域
本发明属于配方粉检测技术领域，具体涉及一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法。
背景技术
维生素K1是指具有萘醌基的衍生物类脂溶性维生素，它是一些特定蛋白质尤其是血液凝固中必备的蛋白质转译所必须的物质。目前，维生素K1的检测方法有很多种，包括极普法、毛细管电泳法、液相色谱法和液相质谱法。然而，极普法、毛细管电泳法和液相质谱法比较适用于微量分析，不适用于常量分析。GB5009.158-2016标准中维生素K1测试方法的前处理比较复杂，需经过酶解、提取、浓缩等步骤，导致测试时间周期长、回收率低、重复性差，极大地降低了分析效率。
含脂配方粉，是一种营养物质，可以提供人体所需的多种营养素，市面上的含脂配方粉多种多样，成分也多种多样，对于不同的含脂配方粉中的维生素K1的检测方法不尽相同。
专利号CN201810865594.0公开了一种检测配方奶粉中脂溶性维生素含量的方法及其样品前处理方法，首先给待测配方奶粉样品中加入抗坏血酸，无水乙醇以及KOH溶液进行皂化；再向皂化后的溶液中加入正己烷，溶液萃取后离心，收集上清液；将上清液氮吹至干，复溶，过滤，制得待测溶液，检测采用超高效液相色谱-三重四级杆质谱联用技术检测脂溶性维生素含量，这种方法前处理繁琐、检测技术复杂。
专利号CN201911156430.1公开了一种调制乳粉中维生素K1和维生素K2含量的测定方法，采用酶解、皂化、提取、萃取、复溶的方式提取待测调制乳粉中的维生素K1和维生素K2，得到样品提取液；再采用柱后锌粉还原-高效液相色谱-荧光检测方法，对所述样品提取液中维生素K1和维生素K2进行检测，得到液相色谱数据；根据维生素K1和维生素K2的液相色谱标准工作曲线，得到待测调制乳粉中维生素K1和维生素K2的含量。这种方法需对调制乳粉进行酶解、皂化、提取、萃取、复溶步骤，前处理繁琐。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：本发明提供一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，该方法针对于本发明的含脂配方粉中的维生素K1进行检测，无需进行皂化、提取步骤，简化了维生素K1检测步骤，准确，灵敏度高同时提高了检测效率。
本发明解决其技术问题的技术方案是：
一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，采用高效液相色谱法对含脂配方粉中维生素K1检测，检测前对含脂配方粉进行超声酶解、正己烷定容、滤膜过滤制得待测样；同时将维生素K1标准品作为标准样，进行溶解、正己烷定容、滤膜过滤，制得不同浓度的标准品溶液，进而检测标准品溶液制备标准曲线；
所述高效液相色谱仪测试条件为：色谱柱：Poroshell C18柱100*4.6mm，4μm；锌还原柱：500mm*4.6mm，LAAA-0002-01；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测器：荧光检测器；激发波长：243nm；发射波长：430nm；进样量：20μL；流动相：浓度为0.08％的维生素C甲醇溶液；
所述含脂配方粉包括：水解乳清蛋白粉、植物脂肪粉、植物甲萘醌、L-抗坏血酸、葡萄糖酸亚铁、左旋肉碱、罗汉果甜苷。
具体地，在检测过程中，所述流动相为浓度为0.08％的维生素C甲醇溶液，是防止在检测过程中含脂配方粉中的维生素K1被氧化，影响检测结果。
进一步地，所述超声酶解具体为：取含脂配方粉置于容量瓶中，加入酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中超声进行25KHz、20min溶解。
进一步地，所述酶解用酶为国药集团化学试剂有限公司生产的urchem脂肪酶。
进一步地，所述酶与含脂配方粉的质量比为0.2:1-5。
进一步地，所述含脂配方粉与正己烷的比例为(1-2)g：10mL；所述标准样浓度为1000ng/mL。
进一步地，所述滤膜的规格为0.22μm。
本发明的有益效果：本发明提供一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，该方法针对于本发明的含脂配方粉中的维生素K1进行检测，无需进行皂化、提取步骤，简化了维生素K1检测步骤，准确，灵敏度高同时提高了检测效率。
附图说明
图1为本发明的实施例2样1的液相色谱图；
图2为本发明的实施例3样2的液相色谱图；
图3为本发明的实施例4样3的液相色谱图；
图4为本发明的实施例5样4的液相色谱图；
图5为本发明的实施例6样5的液相色谱图；
图6为本发明的实施例1标准样的标准曲线；
图7为本发明的实施例7样6的液相色谱图；
图8为本发明的实施例8样7的液相色谱图；
图9为本发明的实施例9样8的液相色谱图；
图10为本发明的实施例10样9的液相色谱图；
具体实施方式
以下将结合实施例对本申请的构思、具体结构及产生的技术效果进行清楚、完整地描述，以充分地理解本申请的目的、特征和效果。显然，所描述的实施例只是本申请的一部分实施例，而不是全部实施例，基于本申请的实施例，本领域的技术人员在不付出创造性劳动的前提下所获得的其他实施例，均属于本申请保护的范围。
实施例1
称取约100mg维生素K1标准品置于100mL容量瓶中，加入适量正己烷进行25KHz、20min超声使溶解，取出，加入正己烷进行定容至刻度(溶液浓度：1mg/mL)。吸取上述溶液0.1mL至100mL容量瓶中，用正己烷定容至刻度，摇匀，得标准样(1000ng/mL)。将上述标准样-1进行100倍、50倍、20倍、10倍、5倍、2.5倍稀释，得标准样-1、标准样-2、标准样-3、标准样-4、标准样-5、标准样-6，用高效液相色谱仪测定标准样-1到标准样-6的浓度，结果为：标准样-1浓度为9.2179ng/mL，标准样-2浓度为19.2700ng/mL，标准样-3浓度为48.0470ng/mL，标准样-4浓度为96.3851ng/mL，标准样-5浓度为191.7817ng/mL，标准样-6浓度为382.4369ng/mL，以此6个样品点制作标准曲线，如图6。
测试条件为：
色谱柱：Kromasil C18柱100*4.6mm，4μm；锌还原柱：500mm*4.6mm，LAAA-0002-01；流动相：维生素与甲醇比为0.08g/100mL的维生素C甲醇溶液；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测器：荧光检测器；激发波长：243nm；发射波长：430nm；进样量：20μL。
分别取质控样1-5进行检测，质控样为中国检验检疫科学研究院测试评价中心的固体样品，货号：QC-IP-704，证书编号：903IP12043，用来校准标准曲线。
实施例2
称取质量为0.9993g的质控样1置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样1。
实施例3
称取质量为1.0060g的质控样2置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样2。
实施例4
称取质量为0.9899g的质控样3置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样3。
实施例5
称取质量为0.9769g的质控样4置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样4。
实施例6
称取质量为1.0041g的质控样5置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样5。
对样1-样5进行液相色谱测试，测试条件相同，即：色谱柱：Kromasil C18柱100*4.6mm，4μm；锌还原柱：500mm*4.6mm，LAAA-0002-01；流动相：维生素与甲醇比为0.02g/100mL的维生素C甲醇溶液；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测器：荧光检测器；激发波长：243nm；发射波长：430nm；进样量：20μL。测试结果如图1-5。
从图1-5可知，样1中维生素K1的峰面积为35.124，样2中维生素K1的峰面积为36.006，样3中维生素K1的峰面积为34.927，样4中维生素K1的峰面积为34.717，样5中维生素K1的峰面积为35.511，进而通过反向查找法，在图1中可以确定出样1中维生素K1的浓度为93.023ng/mL；样2中维生素K1的浓度为95.377ng/mL；样3中维生素K1的浓度为92.498ng/mL；样4中维生素K1的浓度为91.930ng/mL；样5中维生素K1的浓度为94.058ng/mL。从而，质控样1中维生素K1的含量为93.088μg/100g；质控样2中维生素K1的含量为94.808μg/100g；质控样3中维生素K1的含量为93.442μg/100g；质控样4中维生素K1的含量为94.104μg/100g；质控样5中维生素K1的含量为93.674μg/100g。质控样1-5中维生素K1的含量的相对标准偏差0.7％。
实施例7
含脂配方粉1成分：水解乳清蛋白粉550g、植物脂肪粉150g、植物甲萘醌310μg、L-抗坏血酸20mg、葡萄糖酸亚铁80mg、左旋肉碱700μg、罗汉果甜苷30g、醋酸维生素A 3mg、核黄素150μg、中链甘油三酯粉100g。
称取含脂配方粉11.6780g置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样6；结果如图7所示。
实施例8
含脂配方粉2成分：水解乳清蛋白粉500g、植物脂肪粉120g、植物甲萘醌285μg、L-抗坏血酸18mg、葡萄糖酸亚铁45mg、左旋肉碱800μg、罗汉果甜苷35g、牛磺酸1550μg、亚硒酸钠3g、中链甘油三酯粉120g。
称取含脂配方粉21.6011g置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样7；结果如图8所示。
实施例9
含脂配方粉3成分：水解乳清蛋白粉520g、植物脂肪粉130g、植物甲萘醌305μg、L-抗坏血酸18mg、葡萄糖酸亚铁48mg、柠檬酸钾5g、罗汉果甜苷38g、牛磺酸1580μg、核黄素170μg、中链甘油三酯粉130g。
称取含脂配方粉31.5132g置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样8；结果如图9所示。
实施例10
含脂配方粉4成分：水解乳清蛋白粉540g、植物脂肪粉140g、植物甲萘醌265μg、L-抗坏血酸19mg、葡萄糖酸亚铁50mg、左旋肉碱950μg、罗汉果甜苷40g、牛磺酸1600μg、核黄素180μg、D-生物素130μg。
称取含脂配方粉41.4032g置于10mL容量瓶中，加入0.2g脂肪酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中进行25KHz、20min超声溶解；取出，加入正己烷进行定容，用0.22μm滤膜过滤，得样9；结果如图10所示。
对样6-样9进行液相色谱测试，测试条件相同，即：色谱柱：Kromasil C18柱100*4.6mm，4μm；锌还原柱：500mm*4.6mm，LAAA-0002-01；流动相：维生素与甲醇比为0.08g/100mL的维生素C甲醇溶液；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测器：荧光检测器；激发波长：243nm；发射波长：430nm；进样量：20μL。
实施例1-10所述的脂肪酶为国药集团化学试剂有限公司生产的urchem脂肪酶。
实施例2-10的样品液相色谱测试结果如表1所示。
表1液相色谱测试结果
Figure BDA0002587282310000091
Figure BDA0002587282310000101
本发明的检测方法对于本发明的含脂配方粉检测准确度高，检测简单、方便且效率高。
以上对本申请的较佳实施方式进行了具体说明，但本发明创造并不限于所述实施例，熟悉本领域的技术人员在不违背本申请精神的前提下还可作出种种的等同变型或替换，这些等同的变型或替换均包含在本申请权利要求所限定的范围内。

Claims (6)

1.一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法对含脂配方粉中维生素K1检测，检测前对含脂配方粉进行超声酶解、正己烷定容、滤膜过滤制得待测样；同时将维生素K1标准品作为标准样，进行溶解、正己烷定容、滤膜过滤，制得不同浓度的标准品溶液，进而检测标准品溶液制备标准曲线；
所述高效液相色谱仪测试条件为：色谱柱：Poroshell C18柱100*4.6mm，4μm；锌还原柱：500mm*4.6mm，LAAA-0002-01；流速：1.0mL/min；柱温：35℃；检测器：荧光检测器；激发波长：243nm；发射波长：430nm；进样量：20μL；流动相：浓度为0.08％的维生素C甲醇溶液；
所述含脂配方粉包括：水解乳清蛋白粉、植物脂肪粉、植物甲萘醌、L-抗坏血酸、葡萄糖酸亚铁、左旋肉碱、罗汉果甜苷。
2.如权利要求1所述的一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，其特征在于，所述超声酶解具体为：取含脂配方粉置于容量瓶中，加入酶，再加入适量正己烷后在超声振荡器中超声进行25KHz、20min溶解。
3.如权利要求1或2所述的一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，其特征在于，所述酶解用酶为国药集团化学试剂有限公司生产的urchem脂肪酶。
4.如权利要求2所述的一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，其特征在于，所述酶与含脂配方粉的质量比为0.2:1-5。
5.如权利要求1所述的一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，其特征在于，所述含脂配方粉与正己烷的比例为(1-2)g：10mL；所述标准样浓度为1000ng/mL。
6.如权利要求1所述的一种含脂配方粉中维生素K1的检测方法，其特征在于，所述滤膜的规格为0.22μm。
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